JPWO2021147923A5

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Publication number: JPWO2021147923A5
Application number: JP2022569292A
Authority: JP
Publication date: 2024-01-29

Claims

幹細胞又は体細胞である細胞に由来する誘導性小胞がサンプルに存在するかどうかを検出する方法であって、シンタキシン４、アネキシンＶ、フロチリン－１、カドヘリン１１又はインテグリンα５が前記サンプルに存在するかどうかを検出することを含む、方法。
前記細胞は、間葉系幹細胞である、請求項１に記載の方法。
前記間葉系幹細胞は、誘導多能性幹細胞、骨芽細胞系又は骨髄由来間葉系幹細胞である、請求項２に記載の方法。
前記サンプルにおけるアネキシンＶの発現量が前記細胞に由来するエクソソーム、移動体、微小胞又はエクトソームにおいてのアネキシンＶの発現量に対してより高い場合、
前記サンプルにおけるフロチリン－１の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのフロチリン－１の発現量に対してより高い場合、
前記サンプルにおけるカドヘリン１１の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのカドヘリン１１の発現量に対してより高い場合、
前記サンプルにおけるインテグリンα５の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのインテグリンα５の発現量に対してより高い場合、或いは
前記サンプルにおけるシンタキシン４の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのシンタキシン４の発現量に対してより高い場合、
前記誘導性小胞が前記サンプルの中に存在すると判定することをさらに含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
前記サンプルにおけるアネキシンＶの発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのアネキシンＶの発現量に対して１－２倍高い場合、
前記サンプルにおけるフロチリン－１の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのフロチリン－１の発現量に対して２－３倍高い場合、
前記サンプルにおけるカドヘリン１１の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのカドヘリン１１の発現量に対して１－３倍高い場合、
前記サンプルにおけるインテグリンα５の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのインテグリンα５の発現量に対して３－４倍高い場合、或いは
前記サンプルにおけるシンタキシン４の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのシンタキシン４の発現量に対して３－６倍高い場合、
前記誘導性小胞が前記サンプルの中に存在すると判定することをさらに含む、請求項４に記載の方法。
シンタキシン４、アネキシンＶ、フロチリン－１、カドヘリン１１又はインテグリンα５を有する誘導性小胞を含む医薬組成物であって、前記誘導性小胞が幹細胞又は体細胞に由来する、医薬組成物。
被験体の出血性疾患又は前記出血性疾患の合併症を治療、予防又は改善するために用いられる、請求項６に記載の医薬組成物。
前記出血性疾患は、血友病、狼瘡性出血又はチェディアック・東症候群であり、或いは、前記出血性疾患は、血液凝固因子の欠乏、血小板数の減少又は機能障害による出血を含む、請求項７に記載の医薬組成物。
前記出血性疾患は、血友病Ａ、血友病Ｂ又は血友病Ｃである、請求項７又は８に記載の医薬組成物。
前記誘導性小胞におけるアネキシンＶの発現量が前記細胞に由来するエクソソーム、移動体、微小胞又はエクトソームにおいてのアネキシンＶの発現量に対してより高い、
前記誘導性小胞におけるフロチリン－１の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのフロチリン－１の発現量に対してより高い、
前記誘導性小胞におけるカドヘリン１１の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのカドヘリン１１の発現量に対してより高い、
前記誘導性小胞におけるインテグリンα５の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのインテグリンα５の発現量に対してより高い、或いは
前記誘導性小胞におけるシンタキシン４の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのシンタキシン４の発現量に対してより高い、
請求項６から９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記誘導性小胞におけるアネキシンＶの発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのアネキシンＶの発現量に対して１－２倍高い、
前記誘導性小胞におけるフロチリン－１の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのフロチリン－１の発現量に対して２－３倍高い、
前記誘導性小胞におけるカドヘリン１１の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのカドヘリン１１の発現量に対して１－３倍高い、
前記誘導性小胞におけるインテグリンα５の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのインテグリンα５の発現量に対して３－４倍高い、或いは
前記誘導性小胞におけるシンタキシン４の発現量が前記細胞に由来する前記エクソソーム、前記移動体、前記微小胞又は前記エクトソームにおいてのシンタキシン４の発現量に対して３－６倍高い、
請求項１０に記載の医薬組成物。
前記誘導性小胞は、シンタキシン４、アネキシンＶ、フロチリン－１、カドヘリン１１及びインテグリンα５を有する、請求項６から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
請求項６から１２のいずれか１項に記載の医薬組成物を調製する方法であって、
シンタキシン４、アネキシンＶ、フロチリン－１、カドヘリン１１又はインテグリンα５を有する誘導性小胞を調製するステップ１を含み、
前記ステップ１は、
スタウロスポラの添加、紫外線照射、飢餓法及び熱応力法のうちの１種又は複数種の組み合わせにより細胞である幹細胞又は体細胞を誘導するステップ１１、及び／又は、
超遠心分離法により前記誘導性小胞を収集するステップ１２を含み、
前記ステップ１２は、
前記誘導性小胞を有する培養上清を、約５００－１５００ｇで約５－３０分間、１回目遠心分離し、第１上清を収集するステップと、
前記第１上清を、約１０００－３０００ｇで約５－３０分間、２回目遠心分離し、第２上清を収集するステップと、
前記第２上清を、約１００００－３００００ｇで約１５－６０分間、３回目遠心分離し、第１沈殿を収集するステップと、
前記第１沈殿を、約１００００－３００００ｇで約１５－６０分間、４回目遠心分離し、前記誘導性小胞を有する第２沈殿を収集するステップと、
を含む、方法。