JPWO2020243706A5

JPWO2020243706A5 -

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Publication number: JPWO2020243706A5
Application number: JP2021570851A
Authority: JP
Publication date: 2023-06-09

Description

ある特定の態様では、方法は、そのようにして産生されたｒＡＡＶを対象に投与するステップの前に、対象ｒＨＳＶベクターおよび相補系を使用する本発明の方法によってｒＡＡＶを産生するステップをさらに含む。
非限定的に、本発明は以下の態様を含む。
［態様１］
ヘルペスウイルス目に由来する組換え複製欠損ウイルスであって、前記ウイルスが、ＩＣＰ２７をコードする遺伝子、またはその機能的等価遺伝子中の欠失によって特徴づけられ、前記欠失が少なくとも１，２００ｂｐ長であり、前記ＩＣＰ２７をコードする遺伝子（配列番号１１）、またはその機能的等価遺伝子の最も３’末端の３００ｂｐ、２５０ｂｐ、２００ｂｐ、１５０ｂｐ、１００ｂｐ、５０ｂｐ、３０ｂｐ、２０ｂｐ、１０ｂｐ、９ｂｐ、８ｂｐ、７ｂｐ、６ｂｐ、５ｂｐ、４ｂｐ、３ｂｐ、２ｂｐ、１ｂｐまたは０ｂｐ以下を残す、前記ウイルス。
［態様２］
非臨床（または実験室）株ウイルスである、または非臨床（または実験室）株ウイルスに由来する、態様１に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様３］
前記欠失が、前記ＩＣＰ２７をコードする遺伝子または前記その機能的等価遺伝子のコード配列（またはＯＲＦ）全体を含む、態様１または２に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様４］
前記欠失が、前記ＩＣＰ２７をコードする遺伝子もしくは前記その機能的等価遺伝子のプロモーター領域全体、または前記プロモーター領域の一部（例えば、最も３’側の約４００ヌクレオチド）をさらに含む、態様１～３のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様５］
前記ＩＣＰ２７をコードする遺伝子が、配列番号１１のポリヌクレオチド配列を有する、態様１～４のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様６］
前記ウイルスが、アロヘルペスウイルス科またはマラコヘルペスウイルス科に由来する、態様１～５のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様７］
前記ウイルスが、ヘルペスウイルス科に由来する、態様１～５のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様８］
前記ウイルスが、アルファヘルペスウイルス亜科、ベータヘルペスウイルス亜科、またはガンマヘルペスウイルス亜科に由来する、態様７に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様９］
前記ウイルスが、ＨＨＶ－１（単純ヘルペスウイルス－１またはＨＳＶ－１）、ＨＨＶ－２（単純ヘルペスウイルス－２またはＨＳＶ－２）、ＨＨＶ－３（水痘帯状疱疹ウイルスまたはＶＺＶ）、ＨＨＶ－４（エプスタインバーウイルスまたはＥＢＶ）、ＨＨＶ－５（サイトメガロウイルスまたはＣＭＶ）、ＨＨＶ－６Ａ／ＨＨＶ－６Ｂ（ロゼオロウイルス、ヘルペスリンパ球向性ウイルス）、ＨＨＶ－７、またはＨＨＶ－８（カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスまたはＫＳＨＶ）に由来する、態様８に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様１０］
前記ウイルスが、オナガザルヘルペスウイルス－１（ＣｅＨＶ－１）またはネズミヘルペスウイルス６８（ＭＨＶ－６８またはＭｕＨＶ－４）に由来する、態様８に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様１１］
前記ウイルスが、クモザルヘルペスウイルス１（Ａｔｅｌｉｎｅｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ１）、クモザルヘルペスウイルス（ｓｐｉｄｅｒｍｏｎｋｅｙｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ）、ブタヘルペスウイルス、ウシヘルペスウイルス２、オナガザルヘルペスウイルス１（ヘルペスＢウイルス）、オオコウモリアルファヘルペスウイルス１、ウサギヘルペスウイルス４、マカクヘルペスウイルス１、カンガルーヘルペスウイルス２、およびヒヒヘルペスウイルス２などのシンプレックスウイルス属に由来する、態様８に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様１２］
前記ウイルスが、ウシヘルペスウイルス１、ウシヘルペスウイルス５、スイギュウヘルペスウイルス１、ヤギヘルペスウイルス１、イヌヘルペスウイルス１、オナガザルヘルペスウイルス９、シカヘルペスウイルス１、シカヘルペスウイルス２、ヘラジカヘルペスウイルス１、ウマヘルペスウイルス１、ウマヘルペスウイルス３、ウマヘルペスウイルス４、ウマヘルペスウイルス８、ウマヘルペスウイルス９、ネコヘルペスウイルス１、およびブタヘルペスウイルス１などのバリセロウイルス属に由来する、態様８に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様１３］
前記ウイルスが、カモヘルペスウイルス１、ハトヘルペスウイルス１、トリヘルペスウイルス２、トリヘルペスウイルス３（ＧａＨＶ－３またはＭＤＶ－２）、シチメンチョウヘルペスウイルス１（ＨＶＴ）、およびクジャクヘルペスウイルス１などのマルディウイルス属に由来する、態様８に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様１４］
前記ウイルスが、トリヘルペスウイルス１、およびオウムヘルペスウイルス１などのイルトウイルス（Ｌｉｔｏｖｉｒｕｓ）属に由来する、態様８に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様１５］
前記ウイルスが、アカウミガメヘルペスウイルス（Ｃａｒｅｔｔａｃａｒｅｔｔａｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ）、ウミガメヘルペスウイルス１、ウミガメヘルペスウイルス２、ウミガメヘルペスウイルス３、ウミガメヘルペスウイルス４、アオウミガメヘルペスウイルス、クーバーヘルペスウイルス（Ｃｏｏｂｅｒｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ）、ヌマガメヘルペスウイルス１、ヌマガメヘルペスウイルス２、線維乳頭腫関連ヘルペスウイルス、カタトカゲヘルペスウイルス１、カタトカゲヘルペスウイルス２、カタトカゲヘルペスウイルス３、モリイシガメ（Ｇｌｙｐｔｅｍｉｓ）ヘルペスウイルス１、モリイシガメヘルペスウイルス２、イグアナヘルペスウイルス１、イグアナヘルペスウイルス２、アカウミガメ口腔皮膚ヘルペスウイルス（Ｌｏｇｇｅｒｈｅａｄｏｒｏｃｕｔａｎｅｏｕｓｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ）、肺－眼－気管関連ヘルペスウイルス、ヨコクビガメヘルペスウイルス１、ミシシッピアカミミガメヘルペスウイルス、アメリカハコガメヘルペスウイルス１、アメリカハコガメヘルペスウイルス２、リクガメヘルペスウイルス１、リクガメヘルペスウイルス２、リクガメヘルペスウイルス３、リクガメヘルペスウイルス４、およびオオトカゲヘルペスウイルス１などの爬虫類アルファヘルペスウイルスに由来する、態様８に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様１６］
前記ウイルスが、アルセラフィンヘルペスウイルス１、アルセラフィンヘルペスウイルス２、クモザルヘルペスウイルス２、ウシヘルペスウイルス４、オナガザルヘルペスウイルス１７、ウマヘルペスウイルス２、ウマヘルペスウイルス５、ウマヘルペスウイルス７、ニホンザルラディノウイルス、ウサギヘルペスウイルス１、およびネズミヘルペスウイルス４（マウスガンマヘルペスウイルス－６８またはＭＨＶ－６８）などのラディノウイルス属に由来する、態様８に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様１７］
前記ウイルスが、ＫＯＳ、ＫＯＳ１．１、ＫＯＳ１．１Ａ、ＫＯＳ６３、ＫＯＳ７９、ＭｃＫｒａｅ、Ｓｔａｉｎ１７、Ｆ１７、またはＭｃＩｎｔｙｒｅなどのＨＳＶ－１の株である、態様９に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様１８］
前記その機能的等価遺伝子が、ＫＳＨＶのＯＲＦ５７、ＥＢＶのＭｔａ／ＳＭ／ＥＢ２、またはヒトＣＭＶのＵＬ６９である、態様１～１７のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様１９］
ＡＡＶＲｅｐおよびＣａｐタンパク質のコード配列、ならびに／またはＡＡＶＩＴＲ配列に隣接する目的の遺伝子（ＧＯＩ）をさらに含む、態様１～１８のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルス。
［態様２０］
前記ＡＡＶＲｅｐおよびＣａｐタンパク質の前記コード配列、ならびに／またはＡＡＶＩＴＲ配列に隣接する前記目的の遺伝子（ＧＯＩ）が、ウイルスの非必須遺伝子（例えば、ウイルス複製に必要とされず、ウイルスパッケージングに必要とされない）に組み込まれる、またはウイルスの非必須遺伝子を置換する、態様１９の組換え複製欠損ウイルス。
［態様２１］
ＩＣＰ２７またはその機能的等価物を宿主細胞で発現させることができる組換えベクターであって、
（１）宿主細胞において前記コード配列の転写を指示することができるプロモーターに作動可能に連結された、前記ＩＣＰ２７または前記その機能的等価物のコード配列と；
（２）コード配列の３’側のポリアデニル化部位と；
（３）場合により、１つまたは複数のマルチクローニング部位とを含み；
態様１～２０のいずれか１項に記載のウイルスの３００ｂｐ、２５０ｂｐ、２００ｂｐ、１５０ｂｐ、１００ｂｐ、５０ｂｐ、３０ｂｐ、２０ｂｐ、１０ｂｐ、９ｂｐ、８ｂｐ、７ｂｐ、または６ｂｐ以下の連続ヌクレオチドを含有する前記ベクター。
［態様２２］
前記ＩＣＰ２７が、配列番号１０のアミノ酸配列を有する、または配列番号１０と少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、９９．２％、９９．４％、９９．６％、もしくは９９．８％同一である、態様２１に記載の組換えベクター。
［態様２３］
プロモーターが少なくとも４００ポリヌクレオチドを含む、態様２１または２２に記載の組換えベクター。
［態様２４］
プロモーターが、配列番号１１のヌクレオチド１～５３８、配列番号１１のヌクレオチド１２７～５３８、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＴ８８７２２４のヌクレオチド１１３，１３９～１１３，５５０、またはＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＴ８８７２２４のヌクレオチド１１３，０１３～１１３，５５０を含む、態様２３に記載の組換えベクター。
［態様２５］
前記コード配列が、哺乳動物宿主細胞での発現のために部分的または完全にコドン最適化されている、態様２１～２４のいずれか１項に記載の組換えベクター。
［態様２６］
コード配列の最も３’側の３００～３５０ヌクレオチドが、哺乳動物宿主細胞での発現のためにコドン最適化されている、態様２５に記載の組換えベクター。
［態様２７］
前記ポリアデニル化部位が、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化部位である、態様２１～２６のいずれか１項に記載の組換えベクター。
［態様２８］
前記ＩＣＰ２７のコード配列が、宿主細胞ｐｒｅ－ｍＲＮＡスプライシングの阻害を低減する一方で、ＨＳＶ後期遺伝子発現を可能にする変異を含む、態様２１～２７のいずれか１項に記載の組換えベクター。
［態様２９］
変異が、ｖＢＳ３．３二重変異、ｖＢＳ４．３二重変異、またはｖＢＳ５．３二重変異である、態様２８に記載の組換えベクター。
［態様３０］
宿主細胞が、前記ＩＣＰ２７または前記その機能的等価物を発現することができる、態様２１～２９のいずれか１項に記載の組換えベクターを含む宿主細胞。
［態様３１］
組換えベクターが宿主細胞ゲノムに安定に組み込まれる、態様３０に記載の宿主細胞。
［態様３２］
ＢＨＫ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、またはＨＥＫ２９３細胞である、態様３０または３１に記載の宿主細胞。
［態様３３］
態様１～２０のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルスを増殖／増幅／産生する方法であって、態様３０～３２のいずれか１項に記載の宿主細胞を、態様１～２０のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルスに感染させるステップを含む前記方法。
［態様３４］
態様３０～３２のいずれか１項に記載の感染宿主細胞から、態様１～２０のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルスを回収するステップをさらに含む、態様３３に記載の方法。
［態様３５］
態様１～２０のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルスと、前記ＩＣＰ２７または前記その機能的等価物のコード配列の間に、３００ｂｐ、２５０ｂｐ、２００ｂｐ、１５０ｂｐ、１００ｂｐ、５０ｂｐ、３０ｂｐ、２０ｂｐ、１０ｂｐ、９ｂｐ、８ｂｐ、７ｂｐ、６ｂｐ、５ｂｐ、４ｂｐ、３ｂｐ、または２ｂｐ以下の配列重複がある、態様３３または３４に記載の方法。
［態様３６］
ＡＡＶＩＴＲ配列に隣接する目的の遺伝子（ＧＯＩ）コード配列を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を産生する方法であって、ＡＡＶＲｅｐおよびＣａｐタンパク質のコード配列を含む態様１９または２０に記載の第１の組換え複製欠損ウイルス、ならびにＡＡＶＩＴＲ配列に隣接する目的の遺伝子（ＧＯＩ）を含む態様１９または２０に記載の第２の組換え複製欠損ウイルスに産生宿主細胞を同時感染させるステップを含む前記方法。
［態様３７］
ＡＡＶＩＴＲ配列に隣接する目的の遺伝子（ＧＯＩ）のコード配列を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を産生する方法であって、ＡＡＶＲｅｐおよびＣａｐタンパク質のコード配列を含む態様１９または２０に記載の組換え複製欠損ウイルスに産生宿主細胞を感染させるステップを含み、産生宿主細胞が、（１）ＡＡＶＩＴＲ配列に隣接するＧＯＩコード配列を有する組み込まれたＡＡＶプロウイルスを含み；（２）ＡＡＶＩＴＲ配列に隣接するＧＯＩコード配列を有するベクター（例えば、プラスミド）によってトランスフェクトされ；または（３）ＡＡＶＩＴＲ配列に隣接するＧＯＩコード配列を有するｒＡＡＶに同時感染される、前記方法。
［態様３８］
産生細胞株がＢＨＫ、Ｖｅｒｏ、またはＨＥＫ２９３である、態様３６または３７に記載の方法。
［態様３９］
ＧＯＩが、ジストロフィンの機能的等価物（例えば、機能性マイクロジストロフィンタンパク質をコードするジストロフィンミニ遺伝子）である、態様３６～３８のいずれか１項に記載の方法。
［態様４０］
ＡＡＶの指向性が骨格筋を含む（例えばＡＡＶ１、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ９、好ましくはＡＡＶ９）、態様３６～３９のいずれか１項に記載の方法。
［態様４１］
目的の遺伝子（ＧＯＩ）には、ＬＧＭＤ２Ｅ（肢帯型筋ジストロフィー２Ｅ型）、ＬＧＭＤ２Ｄ（肢帯型筋ジストロフィー２Ｄ型）、ＬＧＭＤ２Ｃ（肢帯型筋ジストロフィー２Ｃ型）、ＬＧＭＤ２Ｂ（肢帯型筋ジストロフィー２Ｂ型）、ＬＧＭＤ２Ｌ（肢帯型筋ジストロフィー２Ｌ型）、ＬＧＭＤ２Ｉ（肢帯型筋ジストロフィー２Ｉ型）の原因遺伝子／欠損遺伝子、またはＮＡＧＬＵ（α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、サンフィリポ症候群またはムコ多糖症ＩＩＩＢ型（ＭＰＳＩＩＩＢ）に関する）、スルファミダーゼもしくはＳＧＳＨ（ムコ多糖症ＩＩＩＡ型またはＭＰＳＩＩＩＡに関する）、第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、ミオチューブラリン１（ＭＴＭ１）、生存運動ニューロン（ＳＭＮ、脊髄性筋萎縮症またはＳＭＡに関する）、ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼＧＡＬＧＴ２、カルパイン－３（ＣＡＰＮ－３）、酸性アルファグルコシダーゼ（ＧＡＡ、ポンペ病に関する）、アルファ－ガラクトシダーゼＡもしくはＧＬＡ（ファブリー病に関する）、グルコセレブロシダーゼ、ジストロフィンもしくはマイクロジストロフィンの遺伝子もしくはコード配列が挙げられる、態様３６～４０のいずれか１項に記載の方法。
［態様４２］
ＧＯＩがマイクロジストロフィン遺伝子である、態様４１に記載の方法。
［態様４３］
マイクロジストロフィン遺伝子が、ＵＳ７，９０６，１１１；ＵＳ７，００１，７６１；ＵＳ７，５１０，８６７；ＵＳ６，８６９，７７７；ＵＳ８，５０１，９２０；ＵＳ７，８９２，８２４；ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０１３７３３；またはＵＳ１０，１６６，２７２に記載されているものである、態様４２に記載の方法。
［態様４４］
マイクロジストロフィン遺伝子が、完全長ジストロフィンタンパク質のＲ１６およびＲ１７スペクトリン様リピートのコード配列を含む（ＵＳ７，８９２，８２４に記載されているものなど）、態様４３に記載の方法。
［態様４５］
マイクロジストロフィン遺伝子が、完全長ジストロフィンタンパク質のＲ１、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ２３、およびＲ２４スペクトリン様リピートのコード配列を含む（ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０１３７３３に記載されているマイクロジストロフィン遺伝子など）、態様４４に記載の方法。
［態様４６］
筋ジストロフィーの処置を必要とする対象における筋ジストロフィーを処置する方法であって、マイクロジストロフィン遺伝子（態様４３～４５のいずれか１項に記載のものなど）をコードする組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターの治療有効量を対象に投与するステップを含み、前記ｒＡＡＶが、態様３６～４０のいずれか１項に記載の方法によって産生される、前記方法。
［態様４７］
対象にｒＡＡＶを投与するステップの前に、態様３６～４０のいずれか１項に記載の方法によって前記ｒＡＡＶを産生するステップをさらに含む、態様４６に記載の方法。
［態様４８］
ウイルスが、ＩＣＰ２７をコードする遺伝子またはその機能的等価遺伝子の中の欠失によって特徴づけられ、前記欠失が少なくとも１，２００ｂｐ長であり、前記ＩＣＰ２７をコードする遺伝子（例えば、配列番号１１）、またはその機能的等価遺伝子の最も３’末端の３００ｂｐ、２５０ｂｐ、２００ｂｐ、１５０ｂｐ、１００ｂｐ、５０ｂｐ、３０ｂｐ、２０ｂｐ、１０ｂｐ、９ｂｐ、８ｂｐ、７ｂｐ、６ｂｐ、５ｂｐ、４ｂｐ、３ｂｐ、２ｂｐ、１ｂｐまたは０ｂｐ以下を残す、ヘルペスウイルス目に由来する組換え複製欠損ウイルスを製造する方法であって、前記ＩＣＰ２７をコードする遺伝子または前記その機能的等価遺伝子の前記欠失を、宿主細胞での相同組換えによって作製するステップを含む前記方法。
［態様４９］
相同組換えが、前記ＩＣＰ２７をコードする遺伝子または前記その機能的等価遺伝子を有する、ヘルペスウイルス目に由来する前記ウイルスのゲノム（例えば、ＨＳＶゲノム）を含む細菌人工染色体（ＢＡＣ）を使用して実行される、態様４８に記載の方法。
［態様５０］
宿主細胞が、大腸菌、または真核細胞、例えば酵母、昆虫細胞（例えば、ＳＦ９）、もしくは哺乳動物細胞（例えば、Ｖｅｒｏ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ヒト肺線維芽細胞ＭＲＣ－５、ヒト包皮線維芽細胞（ＨＦＦ）、ヒト胚性肺線維芽細胞（ＨＥＬＦ）、メイディン－ダービーイヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、メイディン－ダービーウシ腎臓細胞（ＭＤＢＫ）など）である、態様４８または４９に記載の方法。

Claims

組換え複製欠損ウイルスであって、前記ウイルスが、ＩＣＰ２７中の欠失によって特徴づけられる単純ヘルペスウイルス－１（ＨＳＶ－１）であり、
前記欠失が、前記ＨＳＶ－１のＵＬ５５の５’側に対するものであり、
ここにおいて、前記欠失は、前記ＩＣＰ２７のプロモーター領域全体およびコード配列全体（若しくはＯＲＦ）を含み、そして、
前記欠失が少なくとも１，２００ｂｐ長であり、前記ＩＣＰ２７をコードする遺伝子（配列番号１１）の最も３’末端の５０ｂｐ、３０ｂｐ、２０ｂｐ、１０ｂｐ、９ｂｐ、８ｂｐ、７ｂｐ、６ｂｐ、５ｂｐ、４ｂｐ、３ｂｐ、２ｂｐ、１ｂｐまたは０ｂｐ以下を残す、
前記ウイルス。
非臨床（または実験室）株ウイルスである、または非臨床（または実験室）株ウイルスに由来する、請求項１に記載の組換え複製欠損ウイルス。
前記欠失が、配列番号１１のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１または２のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルス。
前記ＨＳＶ－１ウイルスが、ＫＯＳ、ＫＯＳ１．１、ＫＯＳ１．１Ａ、ＫＯＳ６３、ＫＯＳ７９、ＭｃＫｒａｅ、Ｓｔａｉｎ１７、Ｆ１７、またはＭｃＩｎｔｙｒｅから選択されるＨＳＶ－１の株である、請求項１～３のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルス。
ＡＡＶＲｅｐおよびＣａｐタンパク質のコード配列、ならびに／またはＡＡＶＩＴＲ配列に隣接する目的の遺伝子（ＧＯＩ）をさらに含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルス。
前記ＡＡＶＲｅｐおよびＣａｐタンパク質の前記コード配列、ならびに／またはＡＡＶＩＴＲ配列に隣接する前記目的の遺伝子（ＧＯＩ）が、ウイルスの非必須遺伝子（例えば、ウイルス複製に必要とされず、ウイルスパッケージングに必要とされない）に組み込まれる、またはウイルスの非必須遺伝子を置換する、請求項５の組換え複製欠損ウイルス。
ＩＣＰ２７を宿主細胞で発現させることができる組換えベクターであって、
（１）宿主細胞において前記コード配列の転写を指示することができるプロモーターに作動可能に連結された、前記ＩＣＰ２７のコード配列と；
（２）コード配列に作動可能に連結されたポリアデニル化部位と；
（３）場合により、１つまたは複数のマルチクローニング部位とを含み；
請求項１～６のいずれか１項に記載のウイルスの５０ｂｐ、３０ｂｐ、２０ｂｐ、１０ｂｐ、９ｂｐ、８ｂｐ、７ｂｐ、または６ｂｐ以下の連続ヌクレオチドを含有する前記ベクター。
宿主細胞が、前記ＩＣＰ２７または前記その機能的等価物を発現することができる、請求項７に記載の組換えベクターを含む宿主細胞。
組換えベクターが宿主細胞ゲノムに安定に組み込まれる、請求項８に記載の宿主細胞。
ＢＨＫ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、またはＨＥＫ２９３細胞である、請求項８または９に記載の宿主細胞。
請求項１～６のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルスを増殖／増幅／産生する方法であって、請求項８～１０のいずれか１項に記載の宿主細胞を、請求項１～６のいずれか１項に記載の組換え複製欠損ウイルスに感染させるステップを含む前記方法。
ＡＡＶＩＴＲ配列に隣接する目的の遺伝子（ＧＯＩ）コード配列を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を産生する方法であって、
ＡＡＶＲｅｐおよびＣａｐタンパク質のコード配列を含む請求項５または６に記載の第１の組換え複製欠損ウイルス、ならびにＡＡＶＩＴＲ配列に隣接する目的の遺伝子（ＧＯＩ）を含む請求項５または６に記載の第２の組換え複製欠損ウイルスに産生宿主細胞を同時感染させるステップを含む、
前記方法。
ＡＡＶＩＴＲ配列に隣接する目的の遺伝子（ＧＯＩ）のコード配列を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を産生する方法であって、
ＡＡＶＲｅｐおよびＣａｐタンパク質のコード配列を含む請求項５または６に記載の組換え複製欠損ウイルスに産生宿主細胞を感染させるステップを含み、
産生宿主細胞が、（１）ＡＡＶＩＴＲ配列に隣接するＧＯＩコード配列を有する組み込まれたＡＡＶプロウイルスを含み；（２）ＡＡＶＩＴＲ配列に隣接するＧＯＩコード配列を有するベクター（例えば、プラスミド）によってトランスフェクトされ；または（３）ＡＡＶＩＴＲ配列に隣接するＧＯＩコード配列を有するｒＡＡＶに同時感染される、前記方法。
マイクロジストロフィン遺伝子をコードする組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターを含む、筋ジストロフィーの処置を必要とする対象における筋ジストロフィーを処置するための、医薬組成物であって、前記ｒＡＡＶが、請求項１２または１３項に記載の方法によって産生される、前記医薬組成物。
組換え複製欠損ウイルス単純ヘルペスウイルス－１（ＨＳＶ－１）を製造する方法であって、
前記ウイルスが、ＩＣＰ２７中の欠失によって特徴づけられ、
前記欠失が、前記ＨＳＶ－１のＵＬ５５の５’側に対するものであり、
ここにおいて、前記欠失は、前記ＩＣＰ２７のプロモーター領域全体およびコード配列全体（若しくはＯＲＦ）を含み、そして、
前記欠失が少なくとも１，２００ｂｐ長であり、前記ＩＣＰ２７をコードする遺伝子（例えば、配列番号１１）の最も３’末端の５０ｂｐ、３０ｂｐ、２０ｂｐ、１０ｂｐ、９ｂｐ、８ｂｐ、７ｂｐ、６ｂｐ、５ｂｐ、４ｂｐ、３ｂｐ、２ｂｐ、１ｂｐまたは０ｂｐ以下を残す、
前記ＩＣＰ２７の前記欠失を、宿主細胞での相同組換えによって作製するステップを含む、
前記方法。
相同組換えが、前記ＩＣＰ２７をコードする遺伝子を有する、前記ＨＳＶ－１のゲノムを含む細菌人工染色体（ＢＡＣ）を使用して実行される、請求項１５に記載の方法。
宿主細胞が、大腸菌、または真核細胞、例えば酵母、昆虫細胞（例えば、ＳＦ９）、もしくは哺乳動物細胞（例えば、Ｖｅｒｏ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ヒト肺線維芽細胞ＭＲＣ－５、ヒト包皮線維芽細胞（ＨＦＦ）、ヒト胚性肺線維芽細胞（ＨＥＬＦ）、メイディン－ダービーイヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、メイディン－ダービーウシ腎臓細胞（ＭＤＢＫ）など）である、請求項１５または１６に記載の方法。