JPWO2020237223A5

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Publication number: JPWO2020237223A5
Application number: JP2022515979A
Authority: JP
Publication date: 2024-01-29

Description

本発明の好ましい実施形態が本明細書において示され、記載されているが、そのような実施形態が単に例として提供されていることは当業者には明白であろう。本発明は、本明細書の中で提供される特定の実施例によって限定されるものではない。本発明は上記の明細に関連して記載されているが、本明細書の実施形態の説明および図表は、限定の意味で解釈されることを意図していない。当業者は、本発明から逸脱することなく多数の変形、変化および置換をすぐに思いつくであろう。さらに、本発明の全ての態様は、種々の条件および変数に依存する本明細書に記載の特定の描写、構成または相対的な割合に限定されないことが理解されるべきである。本明細書に記載の本発明の実施形態に対する種々の代替を、本発明の実施に用いることができることが理解されるべきである。したがって、本発明は、あらゆるそのような代替、改変、変形形態または均等物も包含するものとする。以下の特許請求の範囲により本発明の範囲が規定され、それによりこれらの特許請求の範囲内に入る方法および構造、ならびにそれらの均等物が包含されるものとする。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
綿を生成するための方法であって、
（ａ）複数の綿細胞を含む溶液を含む反応器を提供するステップと、
（ｂ）前記反応器中で、前記溶液を伸長培地と、前記複数の綿細胞のうちの少なくとも一部分の伸長を誘導するために十分な条件下で接触させて、複数の伸長した綿細胞を得、それにより、乾燥質量が１リットル当たり少なくとも１０グラム（ｇ／Ｌ）新鮮重（ＦＷ）である前記綿を生成するステップと
を含み、前記複数の伸長した綿細胞の伸長した細胞の第１の寸法が前記伸長した細胞の第２の寸法よりも大きい、方法。
（項目２）
前記綿の前記乾燥質量が、１リットル当たり少なくとも５０グラム（ｇ／Ｌ）新鮮重（ＦＷ）である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記綿の前記乾燥質量が、１リットル当たり少なくとも１００グラム（ｇ／Ｌ）新鮮重（ＦＷ）である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記綿が、乾燥重量で最大でも１０％の含有夾雑物を含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記綿が、乾燥重量で最大でも５％の含有夾雑物を含む、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記含有夾雑物が、非リント物質である、項目４または項目５に記載の方法。
（項目７）
綿を生成するための方法であって、
（ａ）複数の綿細胞を含む溶液を含む反応器を提供するステップと、
（ｂ）前記反応器中で、前記溶液を伸長培地と、前記複数の綿細胞の少なくともサブセットの伸長を誘導するために十分な条件下で接触させて、複数の伸長した綿細胞を得、それにより、前記綿を生成するステップと
を含み、前記複数の伸長した綿細胞の伸長した細胞の第１の寸法が前記伸長した細胞の第２の寸法よりも大きく、
（ａ）～（ｂ）を最大でも４５日間の期間で実施する、方法。
（項目８）
前記期間が、最大でも３０日間である、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記綿が、乾燥重量で最大でも１０％の含有夾雑物を含む、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記綿が、乾燥重量で最大でも５％の含有夾雑物を含む、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記含有夾雑物が、非リント物質である、項目９または項目１０に記載の方法。
（項目１２）
（ｃ）前記複数の伸長した綿細胞を、前記複数の伸長した綿細胞を成熟させて前記綿を得るために十分な条件に供するステップをさらに含む、項目７に記載の方法。
（項目１３）
（ｃ）が、前記複数の伸長した綿細胞を成熟化培地と、複数の成熟し伸長した綿細胞を得るために十分な条件下で接触させることを含む、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
（ｃ）が、前記複数の成熟し伸長した綿細胞を乾燥させて前記綿を得ることをさらに含む、項目１２に記載の方法。
（項目１５）
（ｂ）が、前記複数の伸長した細胞を、前記複数の綿細胞の残りまたはその派生物から分離することをさらに含む、項目７に記載の方法。
（項目１６）
前記分離することが、フィルタリング、ふるい分け、デカンティング、遠心分離、またはこれらの組合せを含む、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記複数の綿細胞の前記残りを除去するステップをさらに含む、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
前記複数の綿細胞の前記残りのうちの少なくとも一部分を再利用するステップをさらに含む、項目１５に記載の方法。
（項目１９）
前記複数の綿細胞の前記残りのうちの綿細胞が、前記第１の寸法よりも小さい寸法を有する、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記伸長培地が、前記複数の綿細胞のうちの少なくとも１つの綿細胞の液胞からのフェノール化合物の放出が容易になるように構成されている、項目７に記載の方法。
（項目２１）
前記伸長培地が、少なくとも２種の植物ホルモンまたは成長調節因子を含む、項目７に記載の方法。
（項目２２）
前記伸長培地の前記少なくとも２種の植物ホルモンまたは成長調節因子が、インドール酢酸（ＩＡＡ）、インドール－３－アクリル酸、４－Ｃｌ－インドール－３－酢酸、インドール－３－アセチルアスパラギン酸、インドール－３－アセトアルデヒド、インドール－３－アセトニトリル、インドール－３－乳酸、インドール－３－プロピオン酸、インドール－３－ピルビン酸、インドール酪酸（ＩＢＡ）、２，４－ジクロロフェノキシ酢酸（２，４－Ｄ）、トリプトファン、フェニル酢酸（ＰＡＡ）、グルコブラシシン、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、ピクロラム（ＰＩＣ）、ジカンバ、エチレン、パラ－クロロフェノキシ酢酸（ｐＣＰＡ）、β－ナフトキシ酢酸（ＮＯＡ）、ベンゾ（ｂ）セレニエニル－３酢酸、２－ベンゾチアゾール酢酸（ＢＴＯＡ）、Ｎ６－（２－イソペンテニル）アデニン（２ｉＰ）、ゼアチン（ＺＥＡ）、ジヒドロ－ゼアチン、ゼアチンリボシド、キネチン（ＫＩＮ）、６－（ベンジルアデニン）－９－（２－テトラヒドロピラニル）－９Ｈ－プリン、２，４，５，－トリクロロフェノキシ酢酸（２，４，５－Ｔ）、６－ベンジルアミノプリン（６ＢＡ）、１，３－ジフェニル尿素、Ｎ－（２－クロロ－４－ピリジル）－Ｎ’－フェニル尿素、（２，６－ジクロロ－４－ピリジル）－Ｎ’－フェニル尿素、Ｎ－フェニル－Ｎ’－１，２，３－チアジアゾール－５－イル尿素、ジベレリンＡ _５、ジベレリンＡ１（ＧＡ１）、ジベレリン酸（ＧＡ３）、ジベレリンＡ４（ＧＡ４）、ジベレリンＡ７（ＧＡ７）、ブラシノライド（ＢＲ）、ジャスモン酸（ＪＡ）、ジベレリンＡ _８、ジベレリンＡ _３２、ジベレリンＡ _９、１５－β－ＯＨ－ジベレリンＡ _３、１５－β－ＯＨ－ジベレリンＡ _５、１２－β－ＯＨ－ジベレリンＡ _５、１２－α－ジベレリンＡ _５、サリチル酸、（－）ジャスモン酸、（＋）－７－イソ－ジャスモン酸、プトレシン、スペルミジン、スペルミン、オリゴサッカリン、およびスチグマステロールからなる群から選択される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記伸長培地の前記少なくとも２種の植物ホルモンまたは成長調節因子が、インドール酢酸（ＩＡＡ）、インドール酪酸（ＩＢＡ）、２，４－ジクロロフェノキシ酢酸（２，４Ｄ）、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、パラ－クロロフェノキシ酢酸（ｐＣＰＡ）、β－ナフトキシ酢酸（ＮＯＡ）、２－ベンゾチアゾール酢酸（ＢＴＯＡ）、ピクロラム（ＰＩＣ）、２，４，５，－トリクロロフェノキシ酢酸（２，４，５－Ｔ）、フェニル酢酸（ＰＡＡ）、キネチン（ＫＩＮ）、６－ベンジルアミノプリン（６ＢＡ）、Ｎ６－（２－イソペンテニル）アデニン（２ｉＰ）、ゼアチン（ＺＥＡ）、ジベレリンＡ１（ＧＡ１）、ジベレリン酸（ＧＡ３）、ジベレリンＡ４（ＧＡ４）、ジベレリンＡ７（ＧＡ７）、エチレン、ブラシノライド（ＢＲ）、ジャスモン酸（ＪＡ）からなる群から選択される、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
（ｂ）を２８℃から４０℃までの温度で実施する、項目７に記載の方法。
（項目２５）
前記綿が、乾燥重量で少なくとも９０％の綿繊維を含む、項目７に記載の方法。
（項目２６）
前記綿繊維が、乾燥重量で最大でも１０％の含有短繊維（ＳＦＣ）を含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記綿繊維の平均繊維長が、１．１センチメートル（ｃｍ）から４．０ｃｍまでである、項目２５に記載の方法。
（項目２８）
前記綿繊維の長さの均一性が、少なくとも７０％である、項目２５に記載の方法。
（項目２９）
前記綿繊維の二次壁の平均厚さが、少なくとも４ミクロン（μｍ）である、項目２５に記載の方法。
（項目３０）
前記綿繊維が、乾燥重量で、８８％～９６％のセルロース、１．１％～１．９％のタンパク質、および０．７％～１．２％のペクチン質を含む、項目２５に記載の方法。
（項目３１）
前記綿繊維が、乾燥重量で、０．７％～１．６％の灰分、０．４％～１．０％の蝋、０．１％～１．０％の糖、および０．５％～１．０％の有機酸をさらに含む、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記セルロースが、Ｘ線回析で測定して、乾燥重量で少なくとも８０％の結晶セルロースを含む、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
前記綿繊維の平均強度が、ゼロゲージＰｒｅｓｓｌｅｙ試験によって測定して少なくとも７０Ｍｐｓｉである、項目２５に記載の方法。
（項目３４）
前記綿繊維の平均強度が、１／８インチゲージＰｒｅｓｓｌｅｙ試験で測定して少なくとも１５ｇ／ｔｅｘである、項目２５に記載の方法。
（項目３５）
前記綿繊維の平均強度が、１／８インチゲージハイボリューム装置（ＨＶＩ）での試験によって測定して少なくとも１５ｇ／ｔｅｘである、項目２５に記載の方法。
（項目３６）
乾燥重量で最大でも１０％の含有夾雑物（ＴＣ）を含む工学的に操作された綿を含む組成物。
（項目３７）
前記工学的に操作された綿が、乾燥重量で最大でも５％の含有夾雑物を含む、項目３６に記載の組成物。
（項目３８）
前記含有夾雑物が、非リント物質である、項目３６または項目３７に記載の組成物。
（項目３９）
前記工学的に操作された綿が、乾燥重量で少なくとも９０％の綿繊維を含む、項目３６に記載の組成物。
（項目４０）
前記綿繊維が、乾燥重量で最大でも１０％の含有短繊維（ＳＦＣ）を含む、項目３９に記載の組成物。
（項目４１）
前記綿繊維の平均繊維長が、１．１センチメートル（ｃｍ）から４．０ｃｍまでである、項目３９に記載の組成物。
（項目４２）
前記綿繊維の長さの均一性が、少なくとも７０％である、項目３９に記載の組成物。
（項目４３）
前記綿繊維の二次壁の平均厚さが、少なくとも４ミクロン（μｍ）である、項目３９に記載の組成物。
（項目４４）
前記綿繊維が、乾燥重量で、８８％～９６％のセルロース、１．１％～１．９％のタンパク質、および０．７％～１．２％のペクチン質を含む、項目３９に記載の組成物。
（項目４５）
前記綿繊維が、乾燥重量で、０．７％～１．６％の灰分、０．４％～１．０％の蝋、０．１％～１．０％の糖、および０．５％～１．０％の有機酸をさらに含む、項目４４に記載の組成物。
（項目４６）
前記セルロースが、Ｘ線回析で測定して、乾燥重量で少なくとも８０％の結晶セルロースを含む、項目４４に記載の組成物。
（項目４７）
前記綿繊維の平均強度が、ゼロゲージＰｒｅｓｓｌｅｙ試験によって測定して少なくとも７０Ｍｐｓｉである、項目３９に記載の組成物。
（項目４８）
前記綿繊維の平均強度が、１／８インチゲージＰｒｅｓｓｌｅｙ試験で測定して少なくとも１５ｇ／ｔｅｘである、項目３９に記載の組成物。
（項目４９）
前記綿繊維の平均強度が、１／８インチゲージハイボリューム装置（ＨＶＩ）での試験によって測定して少なくとも１５ｇ／ｔｅｘである、項目３９に記載の組成物。
（項目５０）
植物細胞組成物を調製するための方法であって、
（ａ）植物カルスをカルス成長培地と、増殖性細胞凝集体を生成するために十分な条件下で接触させるステップと、
（ｂ）前記増殖性細胞凝集体を細胞培養培地と、少なくとも１×１０ ^３個の細胞を含む前記植物細胞組成物を生成するために十分な条件下で接触させるステップと
を含み、前記植物細胞組成物の細胞が、以下の（ｉ）～（ｉｉｉ）：
（ｉ）前記細胞の少なくとも７０％が１００ミクロン（μｍ）以下の細胞サイズを有する；
（ｉｉ）前記細胞の少なくとも７０％が、対応する非分裂細胞の細胞質光学濃度よりも高い細胞質光学濃度を有する；および
（ｉｉｉ）前記細胞の少なくとも７０％が３ミクロン（μｍ）～８μｍの寸法を有する液胞を有する
のうちの少なくとも２つによって特徴付けられる、方法。
（項目５１）
前記植物細胞組成物の細胞が、色素分子、風味分子、辛味食品添加物、甘味分子、または果実が派生するように構成される、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記植物細胞組成物の細胞が、トリコーム、毛髪様構造、または繊維が派生するように構成される、項目５０に記載の方法。
（項目５３）
前記植物細胞組成物が、綿植物細胞組成物である、項目５０に記載の方法。
（項目５４）
前記植物細胞組成物が、少なくとも１×１０ ^６個の細胞を含む、項目５０に記載の方法。
（項目５５）
前記植物細胞組成物の前記細胞が、（ｉ）～（ｉｉｉ）の全てによって特徴付けられる、項目５０に記載の方法。
（項目５６）
前記植物細胞組成物が、前記増殖性細胞凝集体よりも狭い細胞サイズの分布を有する、項目５０に記載の方法。
（項目５７）
前記植物細胞組成物が、前記増殖性細胞凝集体よりも狭い細胞質光学濃度の分布を有する、項目５０に記載の方法。
（項目５８）
前記植物細胞組成物が、前記増殖性細胞凝集体よりも狭い細胞液胞サイズの分布を有する、項目５０に記載の方法。
（項目５９）
前記植物細胞組成物が、指数関数的成長期にある、項目５０に記載の方法。
（項目６０）
（ｉ）に関して、前記細胞の前記少なくとも７０％の前記細胞サイズが、８０μｍ以下である、項目５０に記載の方法。
（項目６１）
前記細胞の前記少なくとも７０％の前記細胞サイズが、１０μｍから６０μｍまでである、項目５０に記載の方法。
（項目６２）
前記植物細胞組成物の前記細胞の少なくとも８０％が、１００μｍ以下の細胞サイズを有する、項目５０に記載の方法。
（項目６３）
（ｉｉ）に関して、前記細胞質光学濃度が、０．４から０．６までである、項目５０に記載の方法。
（項目６４）
細胞質光学濃度が、分光光度計により、１８０ナノメートル（ｎｍ）から８００ｎｍまでの波長で決定される、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
前記植物細胞組成物の少なくとも８０％の細胞が、対応する非分裂細胞の細胞質光学濃度よりも高い細胞質光学濃度を有する、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
（ｉｉｉ）に関して、前記植物細胞組成物の前記細胞の少なくとも８０％が、３ミクロン（μｍ）～８μｍの寸法を有する液胞を有する、項目５０に記載の方法。
（項目６７）
前記カルス成長培地が、少なくとも４種の植物ホルモンまたは成長調節因子を含む、項目５０に記載の方法。
（項目６８）
前記カルス成長培地の前記少なくとも４種の植物ホルモンまたは成長調節因子が、インドール酢酸（ＩＡＡ）、インドール－３－アクリル酸、４－Ｃｌ－インドール－３－酢酸、インドール－３－アセチルアスパラギン酸、インドール－３－アセトアルデヒド、インドール－３－アセトニトリル、インドール－３－乳酸、インドール－３－プロピオン酸、インドール－３－ピルビン酸、インドール酪酸（ＩＢＡ）、２，４－ジクロロフェノキシ酢酸（２，４－Ｄ）、トリプトファン、フェニル酢酸（ＰＡＡ）、グルコブラシシン、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、ピクロラム（ＰＩＣ）、ジカンバ、エチレン、パラ－クロロフェノキシ酢酸（ｐＣＰＡ）、β－ナフトキシ酢酸（ＮＯＡ）、ベンゾ（ｂ）セレニエニル－３酢酸、２－ベンゾチアゾール酢酸（ＢＴＯＡ）、Ｎ６－（２－イソペンテニル）アデニン（２ｉＰ）、ゼアチン（ＺＥＡ）、ジヒドロ－ゼアチン、ゼアチンリボシド、キネチン（ＫＩＮ）、６－（ベンジルアデニン）－９－（２－テトラヒドロピラニル）－９Ｈ－プリン、２，４，５，－トリクロロフェノキシ酢酸（２，４，５－Ｔ）、６－ベンジルアミノプリン（６ＢＡ）、１，３－ジフェニル尿素、Ｎ－（２－クロロ－４－ピリジル）－Ｎ’－フェニル尿素、（２，６－ジクロロ－４－ピリジル）－Ｎ’－フェニル尿素、Ｎ－フェニル－Ｎ’－１，２，３－チアジアゾール－５－イル尿素、ジベレリンＡ _５、ジベレリンＡ１（ＧＡ１）、ジベレリン酸（ＧＡ３）、ジベレリンＡ４（ＧＡ４）、ジベレリンＡ７（ＧＡ７）、ブラシノライド（ＢＲ）、ジャスモン酸（ＪＡ）、ジベレリンＡ _８、ジベレリンＡ _３２、ジベレリンＡ _９、１５－β－ＯＨ－ジベレリンＡ _３、１５－β－ＯＨ－ジベレリンＡ _５、１２－β－ＯＨ－ジベレリンＡ _５、１２－α－ジベレリンＡ _５、サリチル酸、（－）ジャスモン酸、（＋）－７－イソ－ジャスモン酸、プトレシン、スペルミジン、スペルミン、オリゴサッカリン、およびスチグマステロールからなる群から選択される、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
前記カルス成長培地の前記少なくとも４種の植物ホルモンまたは成長調節因子が、インドール酢酸（ＩＡＡ）、インドール酪酸（ＩＢＡ）、２，４－ジクロロフェノキシ酢酸（２，４Ｄ）、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、パラ－クロロフェノキシ酢酸（ｐＣＰＡ）、β－ナフトキシ酢酸（ＮＯＡ）、２－ベンゾチアゾール酢酸（ＢＴＯＡ）、ピクロラム（ＰＩＣ）、２，４，５，－トリクロロフェノキシ酢酸（２，４，５－Ｔ）、フェニル酢酸（ＰＡＡ）、キネチン（ＫＩＮ）、６－ベンジルアミノプリン（６ＢＡ）、Ｎ６－（２－イソペンテニル）アデニン（２ｉＰ）、ゼアチン（ＺＥＡ）、ジベレリンＡ１（ＧＡ１）、ジベレリン酸（ＧＡ３）、ジベレリンＡ４（ＧＡ４）、ジベレリンＡ７（ＧＡ７）、エチレン、ブラシノライド（ＢＲ）、およびジャスモン酸（ＪＡ）からなる群から選択される、項目６７に記載の方法。
（項目７０）
前記カルス成長培地が、２５℃で液体ではない、項目６７に記載の方法。
（項目７１）
（ａ）が、前記植物カルスを前記カルス成長培地で少なくとも２回の継代にわたって継代培養することを含む、項目５０に記載の方法。
（項目７２）
（ａ）における前記少なくとも２回の継代のそれぞれを、２２℃から３４℃までの温度で実施する、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
（ａ）における前記少なくとも２回の継代のそれぞれが、１５日間から３２日間までの持続時間を有する、項目７１に記載の方法。
（項目７４）
前記増殖性細胞凝集体の細胞が、前記植物カルス中の残りの細胞の細胞分裂速度よりも大きな速度で分裂する、項目５０に記載の方法。
（項目７５）
（ｂ）が、前記増殖性細胞凝集体を前記細胞培養培地で少なくとも２回の継代にわたって継代培養することを含む、項目５０に記載の方法。
（項目７６）
（ｂ）における前記少なくとも２回の継代のそれぞれを、２８℃から４０℃までの温度で実施する、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
（ｂ）における前記少なくとも２回の継代のそれぞれを、（ａ）における前記少なくとも２回の継代のうちの少なくとも１回の継代を実施する温度よりも高い温度で実施する、項目７５に記載の方法。
（項目７８）
（ｂ）における前記少なくとも２回の継代のそれぞれを、（ａ）における前記少なくとも２回の継代のうちの１回の継代を実施する温度よりも２℃～６℃高い温度で実施する、項目７７に記載の方法。
（項目７９）
（ｂ）における前記少なくとも２回の継代のそれぞれが、１０日間から２５日間までの持続時間を有する、項目７５に記載の方法。
（項目８０）
（ｂ）において、前記細胞培養培地が、前記増殖性細胞凝集体の植物細胞の植物細胞壁を分解する酵素を含む、項目５０に記載の方法。
（項目８１）
前記細胞培養培地のｐＨが、前記カルス成長培地のｐＨと０．２単位未満異なる、項目５０に記載の方法。
（項目８２）
（ｂ）が、前記増殖性細胞凝集体またはその派生物の細胞のふるい分け、フィルタリング、分離、ピペット操作、またはデカンティングを行って前記植物細胞組成物を得ることを含む、項目５０に記載の方法。
（項目８３）
（ａ）の前に、（ｃ）植物外植片をカルス誘導培地と、前記植物カルスの生成に十分な条件下で接触させるステップをさらに含む、項目５０に記載の方法。
（項目８４）
前記植物外植片が、頂端分裂組織、子葉、若芽、胚軸、胚珠、幹、成葉、花、花茎、根、鱗茎、発芽種子、および形成層分裂組織細胞（ＣＭＣ）からなる群から選択される１つまたは複数のメンバーを含む、項目８３に記載の方法。
（項目８５）
前記植物外植片が、形成層分裂組織細胞（ＣＭＣ）を含む、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記カルス誘導培地が、希釈された基本培地を含む、項目８３に記載の方法。
（項目８７）
前記カルス誘導培地が、２５℃で液体ではない、項目８３に記載の方法。

Claims

ｉｎｖｉｔｒｏで綿カルス細胞から綿繊維を生成する方法であって、以下のステップの順序で、
（１）前記カルス細胞の増殖性細胞凝集体を生成するのに十分な条件下で、カルス成長培地中で綿カルス細胞を培養するステップであって、前記カルス細胞が指数関数的成長期におけるものである、ステップと、
（２）前記カルス細胞の前記増殖性細胞凝集体、および増殖培地を、少なくとも１つの増殖バイオリアクターに供給するステップと、
（３）前記カルス細胞の前記増殖性細胞凝集体を、少なくとも１つの増殖バイオリアクター中で、それぞれの継代が５から３０日間の持続時間にわたるものである、少なくとも２回の継代の継代培養にわたって培養して、それにより増殖細胞を得るステップと、
（４）前記増殖細胞、および伸長培地を、１つまたは複数の伸長バイオリアクターに播種するステップと、
（５）前記増殖カルス細胞を、前記１つまたは複数の伸長バイオリアクター中で培養して、それにより伸長した細胞を得るステップと、
（６）複数の成熟し伸長した綿細胞を得るのに十分な条件下で、成熟化培地中で前記伸長した細胞を培養して、それにより前記綿繊維を得るステップと
を含む、方法。
ステップ（２）および（３）が、少なくとも１つのさらなる増殖バイオリアクター中で少なくとも１回繰り返される、請求項１に記載の方法。
ステップ（２）および（４）が、空気、必要に応じて圧縮された空気を供給することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
（７）前記複数の成熟し伸長した綿細胞を乾燥させるステップ
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
伸長した細胞を得た後に、伸長した細胞が伸長していない細胞から分離される、請求項１に記載の方法。
前記分離が、フィルタリング、ふるい分け、デカンティング、遠心分離、またはこれらの組合せを含む、請求項５に記載の方法。
前記綿カルス細胞が、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ種に由来する、請求項１に記載の方法。
前記Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ種が、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍａｒｂｏｒｅｕｍ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍａｎｏｍａｌｕｍ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍａｒｍｏｕｒｉａｎｕｍ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｋｌｏｔｚｃｈｉａｎｕｍ、およびＧｏｓｓｙｐｉｕｍｒａｉｍｏｎｄｉｉからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
前記Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ種が、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍａｒｂｏｒｅｕｍ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｂａｒｂａｄｅｎｓｅ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍａｎｏｍａｌｕｍ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍａｒｍｏｕｒｉａｎｕｍ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｋｌｏｔｚｃｈｉａｎｕｍ、およびＧｏｓｓｙｐｉｕｍｒａｉｍｏｎｄｉｉからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
前記Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ種が、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｂａｒｂａｄｅｎｓｅ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍａｒｂｏｒｅｔｕｍ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｈｅｒｂａｃｅｕｍ、または別の種の綿からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。