JPWO2020208379A5

JPWO2020208379A5 -

Info

Publication number: JPWO2020208379A5
Application number: JP2021560095A
Authority: JP
Publication date: 2023-04-17

Claims

ヘルパープラスミドおよびベクタープラスミドを含む、２－プラスミドシステムであって、前記ヘルパープラスミドが少なくとも一つの機能的なＲｅｐタンパク質をコードする少なくとも一つのｒｅｐ遺伝子を含み、かつ機能的な一連のＣａｐタンパク質をコードするｃａｐ遺伝子を含まない、２－プラスミドシステム。
前記２－プラスミドシステムがヘルパープラスミドに比べてモル過剰のベクタープラスミドを含む、請求項１の２－プラスミドシステム。
前記ベクタープラスミドに対するヘルパープラスミドの比が、３：１～１：１０、１．５：１～１：９、１．４：１～１：８、１．３：１～１：７；１．２：１～１：６；１．１：１～１：５；１：１～１：４；もしくは１：１．５～１：３である、請求項１または２の２－プラスミドシステム。
前記ベクタープラスミドに対するヘルパープラスミドの比が、１：２～１：４；または約１：３である、請求項１～３のいずれか一項の２－プラスミドシステム。
前記ベクタープラスミドが：
（ａ）少なくとも一つの機能的なＣａｐタンパク質をコードするｃａｐ遺伝子；または
（ｂ）少なくとも一つのｃａｐ遺伝子プロモーター、前記ｃａｐ遺伝子プロモーターに作動可能に結合されたクローニングサイト、および少なくとも一方の側においてＩＴＲにより隣接される発現カセット；
を含み、
前記ベクタープラスミドが、機能的なＲｅｐタンパク質をコードするｒｅｐ遺伝子を含まず、かつ前記発現カセットが、少なくとも一つの調節制御因子に作動可能に結合された導入遺伝子を含む、請求項１～４のいずれか一項の２－プラスミドシステム。
少なくとも一つの機能的なＲｅｐタンパク質をコードするｒｅｐ遺伝子と、少なくとも一つのヘルパーウイルス遺伝子とを含み、該少なくとも一つのヘルパーウイルス遺伝子は機能的な一連のＣａｐタンパク質をコードするｃａｐ遺伝子を含まない、ヘルパープラスミド。
前記少なくとも一つのｒｅｐ遺伝子が、機能的なＲｅｐ５２タンパク質をコードする遺伝子、機能的なＲｅｐ４０タンパク質をコードする少なくとも一つの遺伝子、および機能的なＲｅｐ６８タンパク質をコードする遺伝子を含む、請求項１～５のいずれか一項の２－プラスミドシステムまたは請求項６のヘルパープラスミド。
前記少なくとも一つのｒｅｐ遺伝子が、機能的な内在性のｐ４０プロモーターを含まない、請求項１～５もしくは７のいずれか一項の２－プラスミドシステムまたは請求項６もしくは７のヘルパープラスミド。
（ｉ）前記少なくとも一つのｒｅｐ遺伝子が配列番号１の１８２３の位置に対応する位置においてＣヌクレオチドを含み；
（ｉｉ）前記ヘルパープラスミドが、２５０ヌクレオチド超、１００ヌクレオチド超、もしくは６０ヌクレオチド超の、一続きの専らｃａｐ遺伝子の配列を含まない；および／もしくは
（ｉｉｉ）前記ヘルパープラスミドがｃａｐ遺伝子配列の一部を含み、前記ｃａｐ遺伝子配列の一部が機能的な一連のＣａｐタンパク質をコードしない
請求項１～５、７もしくは８のいずれか一項の２－プラスミドシステムまたは請求項６～８のいずれか一項のヘルパープラスミド。
前記ヘルパープラスミドが少なくとも一つのヘルパーウイルス遺伝子を含み、必要に応じて：
（ｉ）前記少なくとも一つのヘルパーウイルス遺伝子がアデノウイルス遺伝子であり、必要に応じてアデノウイルス５またはアデノウイルス２遺伝子であり；
（ｉｉ）前記少なくとも一つのヘルパーウイルス遺伝子が、機能的なＶＡＲＮＡＩおよびＶＡＲＮＡＩＩをコードするＶＡ核酸、機能的なＥ２Ａタンパク質をコードするＥ２Ａ遺伝子、ならびに機能的なＥ４タンパク質をコードするＥ４遺伝子を含む；
（ｉｉｉ）前記少なくとも一つのヘルパーウイルス遺伝子が、機能的なＶＡＲＮＡＩおよびＶＡＲＮＡＩＩをコードするＶＡ核酸、機能的なＥ２Ａタンパク質をコードするＥ２Ａ遺伝子、ならびに機能的なＥ４タンパク質をコードするＥ４遺伝子を含み、前記Ｅ４遺伝子が前記ＶＡ核酸および前記Ｅ２Ａ遺伝子の間には位置せず；
（ｉｖ）前記ヘルパープラスミドが２５０００塩基対の長さより小さく、２００００塩基対の長さより小さく、１５０００塩基対の長さより小さく、１４５００塩基対の長さより小さく、１００００塩基対～２５０００塩基対の長さであり、１００００塩基対～２００００塩基対の長さであり、１２０００塩基対～１５０００塩基対の長さであり、もしくは約１４０２１塩基対の長さである；
（ｖ）前記ヘルパープラスミドおよび／もしくは前記ベクタープラスミドが人工的なＲｅｐ結合サイトを含まず；ならびに／もしくは
（ｖｉ）前記ヘルパープラスミドおよび／もしくは前記ベクタープラスミドがプラスミド骨格を含み、かつ前記プラスミド骨格が人工的なＲｅｐ結合サイトを含まない
請求項１～５もしくは７～９のいずれか一項の２－プラスミドシステムまたは請求項６～９のいずれか一項のヘルパープラスミド。
前記ベクタープラスミドが：
（ａ）少なくとも一つの機能的なＣａｐタンパク質をコードするｃａｐ遺伝子；もしくは
（ｂ）少なくとも一つのｃａｐ遺伝子プロモーター、前記ｃａｐ遺伝子プロモーターに作動可能に結合されたクローニングサイト、および、少なくとも一方の側においてＩＴＲにより隣接される発現カセット；
を含み、
前記ベクタープラスミドが、機能的なＲｅｐタンパク質をコードするｒｅｐ遺伝子を含まず、かつ前記発現カセットが、少なくとも一つの調節制御因子に作動可能に結合された導入遺伝子を含む、
ベクタープラスミド。
前記ベクタープラスミドが、ｃａｐ遺伝子を含み、少なくとも一方の側においてＩＴＲにより隣接される発現カセットをさらに含む、請求項１～５もしくは７～１０のいずれか一項の２－プラスミドシステムまたは請求項１１のベクタープラスミド。
前記ベクタープラスミドがｃａｐ遺伝子を含み、前記ｃａｐ遺伝子が、セロタイプ２、５、８、９、およびＭｕｔＣ（ＷＯ２０１６／１８１１２３からの配列番号３）からなるＡＡＶセロタイプの群から選択されたＣａｐタンパク質をコードする、請求項１～５、７～１０もしくは１２のいずれか一項の２－プラスミドシステムまたは請求項１１もしくは１２のベクタープラスミド。
（ｉ）前記ベクタープラスミドが、必須ではないいかなる翻訳開始コドンも含まない；および／もしくは
（ｉｉ）前記ベクタープラスミドが、必須ではないいかなる翻訳開始コドンも含まず、前記ベクタープラスミドが、１以上のプロモーターを含むプロモーター領域を含み、前記プロモーター領域が、ＡＴＧもしくはＧＴＧコドンを含まず、必要に応じて、前記プロモーター領域が、ｐ５、ｐ１９およびｐ４０プロモーターを含み、配列番号１の（ａ）３２１～３２３、（ｂ）７６６～７６８、（ｃ）９５５～９５７、（ｄ）９９３～９９５ならびに（ｅ）１０１４～１０１６の位置に対応する、１以上の位置にあるＡＴＧまたはＧＴＧコドンが欠失しているか変異している
請求項１～５、７～１０、１２もしくは１３のいずれか一項の２－プラスミドシステムまたは請求項１１～１３のいずれか一項のベクタープラスミド。
請求項１～５、７～１０もしくは１２～１４のいずれか一項で定義される２－プラスミドシステム、請求項６～１０のいずれか一項で定義されるヘルパープラスミド、または請求項１１～１４のいずれか一項で定義されるベクタープラスミドの：
（ａ）全粒子に対する完全な粒子の望ましい比を有する組み換えＡＡＶ調製物を産生するため；および／または
（ｂ）高い、もしくは望ましい収量で組み換えＡＡＶ調製物を産生するため
の使用。
請求項１～１５のいずれか一項で定義される２－プラスミドシステム、ヘルパープラスミドまたはベクタープラスミドの：
（ａ）組み換えＡＡＶ産生の間に産生される、全粒子に対する完全な粒子の比を調節もしくは最大化する；および／もしくは
（ｂ）組み換えＡＡＶ産生の間に産生される、組み換えＡＡＶの収量を増加、最適化、または最大化する
ための使用。
前記使用が、請求項１～５、７～１０もしくは１２～１４のいずれか一項で定義される２－プラスミドシステム、請求項６～１０のいずれか一項で定義されるヘルパープラスミドまたは請求項１１～１４のいずれか一項で定義されるベクタープラスミドで宿主細胞をトランスフェクトすることおよび組み換えＡＡＶ作製に適切な環境下において宿主細胞を培養することを含む、請求項１５または１６の使用。
組み換えＡＡＶ産生の間に産生される、全粒子に対する完全な粒子の比を調節または最大化するための方法であって：
（ａ）請求項１～５、７～１０もしくは１２～１４のいずれか一項で定義された２－プラスミドシステム、請求項６～１０のいずれか一項で定義されたヘルパープラスミドまたは請求項１１～１４のいずれか一項で定義されたベクタープラスミドを取得すること；
（ｂ）請求項１～５、７～１０もしくは１２～１４のいずれか一項で定義された２－プラスミドシステム、請求項６～１０のいずれか一項で定義されたヘルパープラスミドまたは請求項１１～１４のいずれか一項で定義されたベクタープラスミドで宿主細胞をトランスフェクトすること；および
（ｃ）組み換えＡＡＶ作製に適切な環境下において前記宿主細胞を培養すること
を含む、方法。
全粒子に対する完全な粒子の望ましい比を含む組み換えＡＡＶ調製物を提供するための、組み換えＡＡＶを回収するステップをさらに含む、請求項１８の方法。
前記方法が、高い、もしくは望ましい収量で組み換えＡＡＶ調製物を産生するための方法である、請求項１８または１９の方法。
組み換えＡＡＶ産生の間に産生される、組み換えＡＡＶの収量を増加、最適化、または最大化する方法であって：
（ａ）請求項１～５、７～１０もしくは１２～１４のいずれか一項で定義された２－プラスミドシステム、請求項６～１０のいずれか一項で定義されたヘルパープラスミドまたは請求項１１～１４のいずれか一項で定義されたベクタープラスミドを取得すること；
（ｂ）請求項１～５、７～１０もしくは１２～１４のいずれか一項で定義された２－プラスミドシステム、請求項６～１０のいずれか一項で定義されたヘルパープラスミドまたは請求項１１～１４のいずれか一項で定義されたベクタープラスミドで宿主細胞をトランスフェクトすること；および
（ｃ）組み換えＡＡＶ作製に適切な環境下において前記宿主細胞を培養すること
を含む、方法。
高いか望ましい収量の組み換えＡＡＶを含む、組み換えＡＡＶ調製物を提供するために組み換えＡＡＶを回収するステップをさらに含む、請求項２１の方法。
前記高い、または望ましい収量が、ベクタープラスミドに対するヘルパープラスミドの比が１．８：１である同等の方法を用いて達成される収量よりも、少なくとも２倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、もしくは少なくとも６倍高い収量である、請求項１５、１７、または２０のいずれか一項の使用または方法。
前記全粒子に対する完全な粒子の望ましい比が、ベクタープラスミドに対するヘルパープラスミドの比が１．８：１である同等の方法を用いて達成される全粒子に対する完全な粒子の比の、少なくとも２０％もしくは少なくとも３０％である、全粒子に対する完全な粒子の比である、請求項１５、１７、１９、２０または２３のいずれか一項の使用または方法。
前記ベクタープラスミドに対するヘルパープラスミドの比が、３：１～１：１０、１．５：１～１：９、１．４：１～１：８、１．３：１～１：７；１．２：１～１：６；１．１：１～１：５；１：１～１：４；１：１．５～１：３；１：２～１：４；もしくは約１：３である、請求項１５～２０、２３または２４のいずれか一項の使用または方法。