JPWO2018151245A1 - インターロイキン−23産生促進用組成物およびインターロイキン−23の産生促進方法 - Google Patents
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Abstract
Description
1.乳酸菌加熱死菌体の調製
先ず、一例として以下の9株の乳酸菌を用意した。
・ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)2038
・ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)MEP201701
・ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)OLL1255(受託番号:NITE BP−76)
・ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)OLL1073R−1(受託番号:FERM BP−10741)
・ラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)OLL2716(受託番号:FERM BP−6999)
・ラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)OLL2809(受託番号:NITE BP−72)
・ラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)OLL2959(NITE BP−224)
・ストレプトコッカス・サーモフィラス(Streptococcus thermophilus)1131
・ストレプトコッカス・サーモフィラス(Streptococcus thermophilus)MEP201702
(1)tsDCの採取
SV40 large T抗原遺伝子を導入したマウスの骨髄からtsDC(ECACC)を採取した。
セルソーター(auto MACS(登録商標)、ミルテニーバイオテク社製)を用いて、8週齢の雄Balb/cマウス(日本SLC社提供)の下肢骨髄から未分化樹状細胞のみを分離した後、その未分化樹状細胞を、granulocyte macrophage colony−stimulating factor(GM-CSF)を含むRPMI培地にて、5%CO2の環境下、37℃で8日間培養して、目的の正常マウスのBMDCを得た。
樹状細胞が1×105セル/ウェルとなり且つその液量が500μLとなるように、24ウェルプレートに樹状細胞を播種し、その翌日、各ウェルに5μLの乳酸菌加熱死菌体を添加した。その後、tsDCを9%CO2環境下、33℃で24時間インキュベートすると共に、BMDCを5%CO2環境下、37℃で24時間インキュベートした。なお、このとき、tsDCおよびBMDCそれぞれにつき3つの試料を調製した。そして、各培養液から上清を回収した。なお、樹状細胞としてtsDCを用いた場合には上記9株の乳酸菌の加熱死菌体全てを使用し、樹状細胞としてBMDCを用いた場合には上記9株の乳酸菌の加熱死菌体のうちラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス2038およびストレプトコッカス・サーモフィラス1131の加熱死菌体のみを使用した。
樹状細胞が1×105セル/ウェルとなり且つその液量が500μLとなるように、24ウェルプレートに樹状細胞を播種し、その翌日、各ウェルに5μLのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を添加した。その後、tsDC樹状細胞を9%CO2環境下、33℃で24時間培養すると共に、BMDCを5%CO2環境下、37℃で24時間インキュベートした。なお、このとき、tsDC樹状細胞およびBMDCそれぞれにつき3つの試料を調製した。そして、各培養液から上清を回収した。
Mouse IL−23 Quantikine ELISA Kit(R&D Systems社製)を用いて樹状細胞培養液上清中に含まれるインターロイキン−23の濃度を測定した。樹状細胞としてtsDCを採用した場合の結果を表1に、樹状細胞としてBMDCを採用した場合の結果を表2に示した。また、表1に記載の結果を棒グラフ化したものを図1に、表2に記載の結果を棒グラフ化したものを図2に示した。表1および表2から明らかなように、樹状細胞を乳酸菌加熱死菌体で刺激することによってインターロイキン−23の分泌が促進されることが明らかとなった。なお、樹状細胞がtsDCである場合、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクスOLL1255、ラクトバチルス・ガセリOLL2959およびストレプトコッカス・サーモフィラス1131が特に顕著な効果を示した。また、樹状細胞がBMDCである場合、ストレプトコッカス・サーモフィラス1131が特に顕著な効果を示した。
1.加熱死菌体の調製
先ず、一例として以下の11株の乳酸菌および2株のビフィズス菌を用意した。
・ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)OLL1073R−1(受託番号:FERM BP−10741)
・ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)OLL1181(受託番号:FERM BP−11269)、
・ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)OLL1255(受託番号:NITE BP−76)
・ラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)OLL2716(受託番号:FERM BP−6999)
・ラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)OLL2809(受託番号:NITE BP−72)
・ラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)MEP201801
・ラクトバチルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)OLL2712(FERM BP−11262)
・ラクトバチルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)MEP201802
・ラクトバチルス・ジョンソニー(Lactobacillus johnsonii)MEP201803
・ラクトバチルス・ジョンソニー(Lactobacillus johnsonii)OLL203565(NITE BP−02003)
・ラクトバチルス・ジョンソニー(Lactobacillus johnsonii)OLL204255(NITE BP−02004)
・ビフィドバクテリウム・ビフィダム(Bifidobacterium bifidum)OLB6378(NITE BP−31)
・ビフィドバクテリウム・ビフィダム(Bifidobacterium bifidum)MEP201804
実施例1の「2.樹状細胞の準備」の「(2)正常マウスの骨髄由来樹状細胞(BMDC)の調製」の欄に記載されている手順と同じ手順に従って目的の正常マウスのBMDCを得た。
実施例1の「3.乳酸菌加熱死菌体による樹状細胞への刺激付与」に記載されている手順と同じ手順に従ってBMDCに上述の11株の乳酸菌加熱死菌体および2株のビフィズス菌加熱死菌体を添加し、BMDCをインキュベートした。
実施例1の「4.対照試料の調製」に記載されている手順と同じ手順に従って対照試料を調製した。
実施例1の「5.樹状細胞培養液上清中に含まれるインターロイキン−23の濃度測定」に記載されている手順と同じ手順に従ってBMDC培養液上清中に含まれるインターロイキン−23の濃度を測定した。その結果を表3に示した。また、表3に記載の結果を棒グラフ化したものを図3に示した。表3から明らかなように、BMDCを乳酸菌加熱死菌体およびビフィズス菌加熱死菌体で刺激することによってインターロイキン−23の分泌が促進されることが明らかとなった。ここでは、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)OLL1255(受託番号:NITE BP−76)、ラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)OLL2809(受託番号:NITE BP−72)、ラクトバチルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)OLL2712(FERM BP−11262)が特に顕著な効果を示した。
FERM BP−10741
FERM BP−11262
FERM BP−11269
NITE BP−31
NITE BP−72
NITE BP−76
NITE BP−224
NITE BP−02003
NITE BP−02004
Claims (12)
- 菌体を有効成分とするインターロイキン−23産生促進用組成物。
- 前記菌体は、死菌体である
請求項1に記載のインターロイキン−23産生促進用組成物。 - 前記死菌体は、加熱死菌体である
請求項2に記載のインターロイキン−23産生促進用組成物。 - 前記菌体は、乳酸菌およびビフィズス菌の少なくとも一方の菌体である
請求項1から3のいずれか1項に記載のインターロイキン−23産生促進用組成物。 - 前記乳酸菌は、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)、ラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)、ストレプトコッカス・サーモフィラス(Streptococcus thermophilus)、ラクトバチルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)およびラクトバチルス・ジョンソニー(Lactobacillus johnsonii)から成る群から選択される少なくとも一つの乳酸菌である
請求項4に記載のインターロイキン−23産生促進用組成物。 - 前記ビフィズス菌は、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(Bifidobacterium bifidum)である
請求項4に記載のインターロイキン−23産生促進用組成物。 - 菌体をインターロイキン−23産生促進剤として使用する方法。
- 請求項1から6のいずれかに記載のインターロイキン−23産生促進用組成物を経口投与することにより生体内のインターロイキン−23の産生を促進する方法(ただし、人を治療する行為を除く。)。
- 樹状細胞に菌体を接触させるインターロイキン−23の産生促進方法。
- インターロイキン−23産生促進剤としての使用のための菌体。
- インターロイキン−23の産生を促進するための組成物の製造のための菌体の使用。
- 樹状細胞に菌体を接触させてインターロイキン−23の産生を促進する方法。
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JP2018568622A Pending JPWO2018151245A1 (ja) | 2017-02-17 | 2018-02-16 | インターロイキン−23産生促進用組成物およびインターロイキン−23の産生促進方法 |
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JP2010099024A (ja) * | 2008-10-24 | 2010-05-06 | Technical Research & Development Institute Ministry Of Defence | 抗炎症効果を有する新規植物性乳酸菌株、該菌株を用いた炎症性腸疾患又は慢性下痢症に対する予防及び治療剤、抑制剤並びに添加剤 |
-
2018
- 2018-02-16 WO PCT/JP2018/005414 patent/WO2018151245A1/ja active Application Filing
- 2018-02-16 JP JP2018568622A patent/JPWO2018151245A1/ja active Pending
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JP2010099024A (ja) * | 2008-10-24 | 2010-05-06 | Technical Research & Development Institute Ministry Of Defence | 抗炎症効果を有する新規植物性乳酸菌株、該菌株を用いた炎症性腸疾患又は慢性下痢症に対する予防及び治療剤、抑制剤並びに添加剤 |
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Title |
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YANAGIHARA S.ET AL.: "Lactobacillus acidophilus L-92 Cells Activate Expression of Immunomodulatory Genes in THP-1 Cells.", BIOSCI. OF MICROBIOTA, FOOD AND HEALTH, vol. 33, no. 4, JPN6018015727, 2014, pages 157 - 164, XP055536928, ISSN: 0004684291, DOI: 10.12938/bmfh.2014-004 * |
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