JPWO2016092865A1 - アミロイドβの22位及び23位のターン構造を極めて特異的に認識する抗体 - Google Patents
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Abstract
Description
(1) 22位及び23位のアミノ酸にターン構造を有するAβを極めて特異的に認識するが、他の構造を有するAβは認識しない抗体又はその免疫反応性断片。
(2) 更に、Aβのオリゴマーを認識する、(1)に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
(3) Aβのオリゴマーがダイマーである、(2)に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
(4) AβがAβ42である、(1)〜(3)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
(5) Aβの他の構造が、少なくとも、以下の群から選択される1種類以上の構造を含む、(1)〜(4)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片:Aβの21位及び22位のアミノ酸におけるターン構造、Aβの23位及び24位のアミノ酸におけるターン構造、Aβの24位及び25位のアミノ酸におけるターン構造、Aβの25位及び26位のアミノ酸におけるターン構造、及びAβの35位及び36位のアミノ酸におけるターン構造。
(6) VHが、配列番号4に記載のアミノ酸配列を有し、かつ、VLが配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する抗体が結合するエピトープを極めて特異的に認識するが、VHが、配列番号4に記載のアミノ酸配列を有し、かつ、VLが配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する抗体が結合しないエピトープを認識しない抗体又はその免疫反応性断片。
(7) VHが、配列番号4に記載のアミノ酸配列を有し、かつ、VLが配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する抗体とその抗原との結合を競合阻害するが、VHが、配列番号4に記載のアミノ酸配列を有し、かつ、VLが配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する抗体が結合しないエピトープには結合しない抗体又はその免疫反応性断片。
(8) 重鎖可変領域のCDR1、CDR2、及びCDR3が、それぞれ、配列番号5、配列番号6、及び配列番号7に記載のアミノ酸配列を有する抗体又はその免疫反応性断片。
(9) 更に、軽鎖可変領域のCDR1、CDR2、及びCDR3が、それぞれ、配列番号12、配列番号13、及び配列番号14に記載のアミノ酸配列を有する、(8)に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
(10) 重鎖可変領域のCDR1、CDR2、及びCDR3が、それぞれ、配列番号5、配列番号6、及び配列番号7に記載のアミノ酸配列を有する、(1)〜(7)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
(11) 更に、軽鎖可変領域のCDR1、CDR2、及びCDR3が、それぞれ、配列番号12、配列番号13、及び配列番号14に記載のアミノ酸配列を有する、(10)に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
(12) VHが、配列番号4に記載のアミノ酸配列を有する抗体又はその免疫反応性断片。
(13) 更に、VLが配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する、(12)に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
(14) 配列番号4に記載のアミノ酸配列を有する抗体又はその免疫反応性断片をコードする核酸分子。
(15) 配列番号1の126番目〜479番目のヌクレオチド配列からなる核酸分子である、(14)に記載の核酸分子。
(16) 配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する抗体又はその免疫反応性断片をコードする核酸分子。
(17) 配列番号8の130番目〜465番目のヌクレオチド配列からなる核酸分子である、(16)に記載の核酸分子。
(18) 配列番号4に記載のアミノ酸配列を有する抗体又はその免疫反応性断片、及び/又は、配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する抗体又はその免疫反応性断片を発現可能なベクター。
(19) (14)又は(15)に記載の核酸分子、及び/又は、(16)又は(17)に記載の核酸分子を含有する、(18)に記載のベクター。
(20) (18)又は(19)に記載のベクターを含む宿主細胞。
(21) (1)〜(13)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片を含有する医薬組成物。
(22) ADの予防用、治療用又は改善用である、(21に記載の医薬組成物。
(23) AD患者の認知機能を改善するための、(21に記載の医薬組成物。
(24) AD患者の記憶障害を改善するための、(21に記載の医薬組成物。
(25) (1)〜(13)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片を含有する診断用組成物。
(26) ADの診断に使用するための(25)に記載の診断用組成物。
(27) (1)〜(13)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片を含有する、Aβの毒性コンホマーを測定するためのキット。
(28) (1)〜(13)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片を含有する、Aβの毒性コンホマーの測定に使用するための組成物。
(29) 検体と(1)〜(13)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片とを接触させるステップを備える、検体中におけるAβの毒性コンホマーレベルの測定方法。
(30) 以下のステップを備える、ADの診断方法:
a)被験者由来の試料と、少なくとも1つの(1)〜(13)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片とをin vitroで接触させるステップ、
b)前記抗体又はその免疫反応性断片と結合した抗原のレベルを測定するステップ、並びに、
c)決定された抗原レベルから、前記被験者におけるADの有無又は程度を診断するステップ。
ここで、(1)〜(13)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片に結合する抗原のレベルが健常人由来の試料における同レベルと比較して高い場合には、ADに罹患している可能性が高いと診断される、方法。
(31) 以下のステップを備える、ADの診断方法:
a)被験者由来の試料と、少なくとも1つの(1)〜(13)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片とを接触させるステップ、
b)前記抗体又はその免疫反応性断片と結合した抗原のレベルを測定するステップ、
c)Aβの構造非特異的な抗Aβ抗体と被験者由来の試料とを接触させ、その結合物の量を測定することにより、被験者由来の試料における総Aβ量を測定するステップ、並びに、
d)被験者由来の試料における、(1)〜(13)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片に結合する抗原のレベルと総Aβのレベルの比を計算し、決定された比から、前記被験者におけるADの有無又は程度を判定するステップ、
ここで、総Aβのレベルに対する、(1)〜(13)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片に結合する抗原のレベルが健常人由来の試料における同比と比較して高い場合には、ADに罹患している可能性が高いと判定される、方法。
(32) 検体中のアミロイドβの毒性コンホマーの存否を決定する方法であって、
(a)(1)〜(13)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片と検体とを接触させるステップ、
(b)前記抗体又はその免疫反応性断片へ結合したアミロイドβの毒性コンホマーを検出するステップ;
(c)前記ステップにおいてアミロイドβの毒性コンホマーが検出された場合には、検体中にアミロイドβの毒性コンホマーが存在すると判定し、前記ステップにおいてアミロイドβの毒性コンホマーが検出されなかった場合には、検体中にアミロイドβの毒性コンホマーが存在しないと判定するステップを備える、方法。
(33) 検体中のアミロイドβの毒性コンホマーのレベルを決定する方法であって、
(a)(1)〜(13)のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片と検体とを接触させるステップ、
(b)前記抗体又はその免疫反応性断片へ結合したアミロイドβの毒性コンホマー量を測定するステップ;
(c)前記検出された毒性コンホマー量から、検体中のアミロイドβの毒性コンホマーのレベルを算出するステップを備える、方法。
別の態様において、本発明は、上述の本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドを有する核酸分子に関する。具体的には、本発明の核酸分子は、VHとして配列番号4に記載のアミノ酸をコードするポリヌクレオチドを有する核酸分子、VLとして配列番号11に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを有する核酸分子、又は、VHとして配列番号4に記載のアミノ酸をコードするポリヌクレオチド、及び、VLとして配列番号11に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを有する核酸分子を含む。VHとして配列番号4に記載のアミノ酸をコードするポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号1における126番目から479番目の塩基配列を有するポリヌクレオチドであってもよい。また、VLとして配列番号11に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとしては、配列番号8の130番目から465番目の塩基配列を有するポリヌクレオチドであってもよい。更に、本発明は、前記核酸分子を有するベクターを包含する。このようなベクターとしては、抗体の発現に利用可能なベクターであれば特に制限されるものではなく、適切なプラスミドベクターなどを使用する宿主に応じて選択することができる。別の態様において、本発明は、前記ベクターを含有する宿主細胞に関する。宿主細胞としては、抗体の発現に利用可能な宿主細胞であれば特に制限されるものではなく、哺乳類細胞(マウス細胞、ラット細胞、ウサギ細胞、ヒト細胞など)、酵母、微生物(大腸菌など)を挙げることができる。
また、別の態様において、本発明は、上述の本発明の抗体又はその免疫反応性断片を有効成分として含有する医薬組成物に関する。本発明の医薬組成物の対象疾患としては、ADを挙げることができる。よって、本発明の医薬組成物は、ADの予防薬、治療薬、進行抑制剤又は改善薬とすることができる。あるいは、本発明の医薬組成物は、AD患者における認知障害(短期若しくは長期の記憶障害、見当識障害、学習障害、注意障害、空間認知機能、及び/又は問題解決能力の障害)を改善するための医薬組成物とすることができる。あるいは、本発明は、前記医薬組成物を製造するための、本発明の抗体又はその免疫反応性断片の使用に関する。
また、別の態様において、本発明は、上述の抗体又はその免疫結合性断片を備えるキットに関する。一態様において、本発明のキットは、IBL−102抗体が結合する抗原の検出用又は測定用のキットであり得る。また、別の態様において、本発明の測定用キットは、Aβの毒性コンホマーの検出用又は測定用のキットであり得る。更に別の態様において、本発明のキットは、ADの診断用とすることができる。また、本発明は、このようなキットを製造するための、上述の本発明の抗体又はその免疫反応性断片の使用を含む。
または、本発明のキットは、(i)本発明の抗体又はその免疫反応性断片である第一抗体が固定化した固相、及び、(ii)抗Aβ抗体である第二抗体が固定化したハプテンを含む免疫化学測定のキットとすることができる。また、当該キットは更に、ハプテンと特異的に結合する、標識された物質を含んでいてもよい。また、前記第一抗体をハプテン結合抗体とし、前記第二抗体を固相固定化抗体としてもよい。
あるいは、本発明のキットは、(i)本発明の抗体又はその免疫反応性断片である第一抗体が固定化した不溶性担体、及び、(ii)抗Aβ抗体である第二抗体が固定化した不溶性担体を含む免疫化学測定のキットとすることができる。
別の態様において、本発明は、本発明の抗体又はその免疫反応性断片を含有する、IBL−102抗体が結合する抗原又はAβの毒性コンホマーの検出及び/又は測定に使用するための薬剤又は組成物(以下、「測定用の薬剤又は組成物」という)に関する。本明細書において、測定用の薬剤又は組成物は、ADの診断用途に用いられる物、即ち、ADの診断薬又はADの診断用組成物を含む。あるいは、本発明は、前記診断用組成物を製造するための、本発明の抗体又はその免疫反応性断片の使用に関する。
(抗体の取得)
本発明の抗体は、Aβ42の22位及び23位のアミノ酸におけるターン構造を備える物質、好ましくは、E22P−Aβ42、Aβ−ラクタム(22K−23E)、又は、P3−Aβ42(特開2006−265189号;K.Murakamiら(2005)J.Am.Chem.Soc.,127:15168−15174)を免疫源として、必要に応じて免疫賦活剤(例えば、鉱油若しくはアルミニウム沈殿物と加熱死菌若しくはリポ多糖体、フロインドの完全アジュバント、または、フロインドの不完全アジュバント等)とともに、非ヒト哺乳動物または鳥類に免疫することにより作製することができる。免疫動物としては、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ラビット、イヌ、サル、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、アヒル等ハイブリドーマを作製することが可能な動物であれば特に限定はないが、好ましくは、マウスまたはラットであり、より好ましくはマウスである。動物への免疫原の投与は、例えば、0.1〜1000μgを1回または適当な間隔をあけて数回(通常1〜6週毎に1回の免疫を合計2〜10回程度)、皮下注射、腹腔内注射、静脈内注射、皮内注射、筋肉内注射または足蹠注射により行うことができる。最後の免疫から1〜2週間後に、免疫した動物の眼窩または尾静脈から採血を行い、その血清を用いて抗体価の測定を行う。本発明の抗体は、十分な抗体価を示す動物の血清から精製することにより得ることができる。
本発明の抗体がヒト型キメラ抗体の場合、Aβの毒性コンホマーを極めて特異的に認識する非ヒト動物モノクローナル抗体(例えば、IBL−102モノクローナル抗体)のVH及びVLをコードするDNAを調製し、これをヒト免疫グロブリンの定常領域cDNAと結合して発現ベクターに組み込み、適当な宿主細胞に当該ベクターを導入して発現させることにより得ることができる(Morrison,S.L.ら,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81,6851−6855,1984)。
本発明の抗体がヒト化抗体の場合は、Aβの毒性コンホマーを特異的に認識する非ヒト動物モノクローナル抗体(例えば、IBL−102モノクローナル抗体)のVH及びVLのCDRをコードするアミノ酸配列をヒト抗体のVH及びVLのFRに移植したV領域をコードするDNAを構築し、構築したDNAをヒト由来免疫グロブリンの定常領域cDNAと結合して発現ベクターに組み込み、適当な宿主細胞に当該ベクターを導入して発現させることにより得ることができる(L.Rieohmannら,Nature,332,323,1988:Kettleborough,C.A.ら,Protein Eng.,4,773−783,1991;Clark M.,Immunol.Today.,21,397−402,2000参照)。非ヒト動物モノクローナル抗体のCDRは、上述の方法によって得られた非ヒト動物モノクローナル抗体のVH及びVLをコードするDNA配列から予測されるアミノ酸配列と、既知の抗体のVH及びVLの全アミノ酸配列とを比較して得ることができる。既知の抗体のアミノ酸配列は、例えば、プロテイン・データ・バンク等のデータベースに登録されている抗体のアミノ酸配列より得ることができる。また、ヒト化抗体のFRとしては、移植後の抗体が本発明の効果を奏するものであれば特に限定は無いが、好ましくは、ヒト化抗体の可変領域(以下、「V領域」という)がCDRが由来する非ヒト動物モノクローナル抗体のV領域と類似の立体構造となるヒト抗体のFR、又は、使用する非ヒト動物モノクローナル抗体のFRのアミノ酸配列と相同性が高いヒト抗体FRである。ヒト化抗体において、ヒト抗体に由来するFRを構成するアミノ酸の一部(特には、立体的にCDRと近接した位置に存在するアミノ酸)は、必要に応じてCDRが由来する非ヒト動物モノクローナル抗体のFR配列に置換されていてもよい(Queenら、米国特許第5585089号参照)。使用するヒト化抗体のV領域をコードするDNA配列は、非ヒト動物モノクローナル抗体のCDRのアミノ酸配列とヒト抗体のFRのアミノ酸配列を結合したアミノ酸配列に対応するDNA配列として設計する。ヒト化抗体のV領域をコードするDNAは、設計したDNA配列を基に、当業者周知の方法によって作製することができる。
ヒト抗体は、例えば、ヒト抗体ファージライブラリー又はヒト抗体産生トランスジェニックマウスを利用することにより得ることができる(富塚ら,Nature Genet.,15,146−156(1997))。ヒト抗体ファージライブラリーを利用する場合、例えば、E22P−Aβ42を固相に固定化し、ファージ抗体ライブラリーを反応させて、非結合のファージを洗浄除去した後、結合したファージを回収することにより、所望のクローンを得ることができる(パンニング)。ヒト抗体産生トランスジェニックマウスは、内因性免疫グロブリン(Ig)遺伝子をノックアウトしたマウスにヒト抗体のIg遺伝子を導入したマウスである。ヒト抗体産生トランスジェニックマウスを免疫動物として、上述の本発明の抗体作製方法に準じて抗原(好ましくは、E22P−Aβ42)を免疫することにより、Aβの毒性コンホマーを特異的に認識するヒト抗体を得ることができる。
例えば、本発明の抗体は、主反応(E22P−Aβ42に対する結合)に対する、A21P−Aβ42、E22V−Aβ42、D23P−Aβ42、V24P−Aβ42、G25P−Aβ42、及びM35P−Aβ42から選択される1種類以上の任意の数(全てを含む)のペプチドへの結合の交差反応率が、5%以下、3%以下、又は1%以下であってよい。あるいは、本発明の抗体は、主反応(E22P−Aβ42に対する結合)に対する、A21P−Aβ42、E22V−Aβ42、D23P−Aβ42、V24P−Aβ42、G25P−Aβ42、及びM35P−Aβ42から選択される1種類以上の任意の数(全てを含む)のペプチドへの結合の交差反応率が、それぞれ順に、0.3%以下、0.3%以下、0.5%以下、0.4%以下、0.6%以下、及び0.7%以下であってもよく、更には、それぞれ順に、それぞれ順に、0.27%以下、0.28%以下、0.50%以下、0.33%以下、0.53%以下、及び0.68%以下であってもよい。
本発明の核酸は、上述において得られた抗体を産生するハイブリドーマからクローニングするか、あるいは、上述において得られた抗体またはその免疫反応性断片のアミノ酸配列を基に、適宜核酸配列を設計することにより得ることができる。本発明のベクターは、得られた核酸を適宜発現に適したベクターに組み込むことにより得ることができる。本発明のベクターは、本発明の核酸の他、発現に必要な領域(プロモーター、エンハンサー、ターミネーター等)を含んでいてもよい。また、本発明の宿主細胞は、本発明のベクターを適切な細胞株(例えば、動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、大腸菌等の微生物)に導入することにより得ることができる。
抗体又はその免疫反応性断片への標識の結合は当分野において一般的な方法により行うことができる。例えば、タンパク質又はペプチドを蛍光標識する場合、タンパク質又はペプチドをリン酸緩衝液で洗浄した後、DMSO、緩衝液等で調整した色素を加え、混合した後室温で10分間静置することにより結合させることができる。また、市販の標識キットとして、ビオチン標識キット(Biotin Labeling Kit−NH2、Biotin Labeling Kit−SH:株式会社同仁化学研究所)、アルカリフォスファターゼ標識用キット(Alkaline Phosphatase Labeling Kit−NH2、Alkaline Phosphatase Labeling Kit−SH:株式会社同仁化学研究所)、ペルオキシダーゼ標識キット(Peroxidase Labering Kit−NH2、Peroxidase Labering Kit−NH2:株式会社同仁化学研究所)、フィコビリプロテイン標識キット(Allophycocyanin Labeling Kit−NH2、Allophycocyanin Labeling Kit−SH、B−Phycoerythrin Labeling Kit−NH2、B−Phycoerythrin Labeling Kit−SH、R−Phycoerythrin Labeling Kit−NH2、R−Phycoerythrin Labeling Kit−SH:株式会社同仁化学研究所)、蛍光標識キット(Fluorescein Labeling Kit−NH2、HiLyte Fluor(登録商標) 555 Labeling Kit−NH2、HiLyte Fluor(登録商標) 647 Labeling Kit−NH2:株式会社同仁化学研究所)、DyLight547、DyLight647(テクノケミカル株式会社)、Zenon(登録商標)Alexa Fluor(登録商標)抗体標識キット、Qdot(登録商標)抗体標識キット(インビトロゲン社)、EZ−Label Protein Labeling Kit(フナコシ株式会社)等を用いて標識することもできる。また、標識した抗体又はその断片の検出は、適宜標識に適した機器を使用することにより行うことができる。
また、本発明は、上述の本発明の抗体又はその免疫反応性断片を含有する、Aβの毒性コンホマー測定キットに関する。本発明のキットは、上述の方法に従って作製した抗体又はその免疫反応性断片を用いて、目的に応じて当業者に慣用の技術を用いて製造することができる。
別の態様において、本発明は、Aβの毒性コンホマーの検出及び/又は測定方法に関する。本発明のAβの毒性コンホマーの検出及び/又は測定方法は、基本的な構成として、検体と本願発明の抗体又はその免疫反応性断片を接触させるステップ、及び、本願発明の抗体又はその免疫反応性断片に結合したAβの毒性コンホマーを検出及び/又は測定するステップを備える。また、本発明の検出及び/又は測定方法は、in vitro及びin vivoのいずれで行われるものであってもよいが、好ましくは、in vitroで行われる。例えば、本発明の検出及び/又は測定方法は、抗体分子を用いた公知の検出及び/又は測定方法に基づき行うことができる。
(a)Aβの22位及び23位のアミノ酸におけるターン構造を極めて特異的に認識するが、Aβの他の部位におけるターン構造は認識しない抗体又はその免疫反応性断片と検体とを接触させるステップ、
(b)前記抗体又はその免疫反応性断片へ結合したアミロイドβの毒性コンホマーを検出するステップ;
(c)前記ステップにおいてアミロイドβの毒性コンホマーが検出された場合には、検体中にアミロイドβの毒性コンホマーが存在すると判定し、前記ステップにおいてアミロイドβの毒性コンホマーが検出されなかった場合には、検体中にアミロイドβの毒性コンホマーが存在しないと判定するステップを備える、検体中のアミロイドβの毒性コンホマーの存否を決定する方法。
(a)Aβの22位及び23位のアミノ酸におけるターン構造を極めて特異的に認識するが、Aβの他の部位におけるターン構造は認識しない抗体又はその免疫反応性断片と検体とを接触させるステップ;
(b)前記抗体又はその免疫反応性断片へ結合したアミロイドβの毒性コンホマー量を測定するステップ;
(c)前記検出された毒性コンホマー量から、検体中のアミロイドβの毒性コンホマーのレベルを算出するステップを備える、検体中のアミロイドβの毒性コンホマーのレベルを決定する方法。
Aβの毒性コンホマーは、ADの発症及び増悪化と関連する。即ち、従来はAβ40又はAβ42のレベル(総Aβ量)がADの発症及び増悪化と関連すると考えられてきたが、現在では、総Aβ量の増加よりも、これらのAβのうち特定の立体構造(毒性コンホマー)をとるものの増加がAD発症に関与することが示唆されている。Aβは様々な立体構造をとり得ることが知られているが、本発明の抗体及びその免疫反応性断片は、Aβの毒性コンホマーだけを極めて特異的に認識する。よって、本発明の抗体及びその免疫反応性断片は、より正確なADの診断を達成することができる。よって、本発明は、上述の本発明の抗体及びその免疫反応性断片を有効成分として含有する、ADの診断薬を含む。また、本発明は、上述の本発明の抗体又はその免疫反応性断片を用いてAβの毒性コンホマーを測定することを含む、ADの診断方法、ADの診断のための情報を提供する方法、ADの状態又は進行をモニターする方法、及び、候補AD治療薬の治療効果の判定方法(以下、総称して「本発明の診断方法等」という)を含む。本明細書全体に亘って、「ADの診断」及び「ADを診断する」の用語は、そのように解することが不整合である場合を除き、「ADの診断のための情報を提供する」、「ADの状態又は進行のモニター」及び「ADの状態若しくは進行をモニターする」、又は、「候補AD治療薬の治療効果の判定」及び「候補AD治療薬の治療効果を判定する」と読み替えてもよい。別の態様において、本発明は、ADを診断する(又は、ADの状態若しくは進行をモニターする、又は、候補AD治療薬の治療効果を判定する)ための、本発明の抗体又はその免疫反応性断片の使用を含む。あるいは、本発明は、ADを診断する(又は、ADの状態若しくは進行をモニターする、又は、候補AD治療薬の治療効果を判定する)ための薬剤又は組成物を製造するための本発明の抗体又はその免疫反応性断片の使用に関する。
a)少なくとも1つのAβの22位及び23位のアミノ酸におけるターン構造を極めて特異的に認識するが、Aβの他の部位におけるターン構造は認識しない抗体又はその免疫反応性断片と、被験者由来の検体を接触させるステップ、
b)該抗体又はその免疫反応性断片に結合したAβの毒性コンホマーを測定し、測定値からAβの毒性コンホマーのレベルを決定するステップ、並びに、
c)測定されたAβの毒性コンホマーのレベルから、該被験者におけるAD発症の有無又は程度を判定するステップを備える、ADの診断方法、
ここで、Aβの毒性コンホマーのレベルが高い被験者は、ADに罹患している又は罹患の重症度が高いと判定される。
a)少なくとも1つのAβの22位及び23位のアミノ酸におけるターン構造を極めて特異的に認識するが、Aβの他の部位におけるターン構造は認識しない抗体又はその免疫反応性断片と、被験者由来の検体を接触させるステップ、
b)該抗体又はその免疫反応性断片に結合したAβの毒性コンホマーを測定し、測定値からAβの毒性コンホマーのレベルを決定するステップ、並びに、
c)測定されたAβの毒性コンホマーのレベルから、該被験者におけるAD発症の有無又は程度を判定した結果の情報を提供するステップを備える、ADの診断のための情報を提供する方法であって、
ここで、Aβの毒性コンホマーのレベルが高い被験者は、ADに罹患している又は罹患の重症度が高いと判定される。
a)少なくとも1つのAβの22位及び23位のアミノ酸におけるターン構造を極めて特異的に認識するが、Aβの他の部位におけるターン構造は認識しない抗体又はその免疫反応性断片と、被験者由来の検体を接触させるステップ、
b)該検体中のAβの毒性コンホマーと、該抗体又はその免疫反応性断片との結合を測定し、測定値からAβの毒性コンホマーのレベルを決定するステップ、並びに、
c)決定されたAβの毒性コンホマーのレベルと、当該決定以前に当該決定とは別に同じ方法により決定されたAβの毒性コンホマーのレベルとを比較することにより、該被験者におけるAD発症の変化を判定するステップを備えるADの状態又は進行をモニターする方法であって、
ここで、当該決定以前に当該決定とは別に同じ方法により決定されたAβの毒性コンホマーのレベルと比較して、決定されたAβの毒性コンホマーのレベルが上昇した場合には、ADが進行していると判定される。
a)少なくとも1つのAβの22位及び23位のアミノ酸におけるターン構造を極めて特異的に認識するが、Aβの他の部位におけるターン構造は認識しない抗体又はその免疫反応性断片を投与された被験者について、画像診断装置(例えば、シンチグラフィー、PET又はSPECTモダリティー)を用いて前記抗体又はその免疫反応性断片の一部以上の画像を生成させることにより、生体内における前記抗体又はその免疫反応性断片を検出及び/又は測定するステップ、
b)検出及び/又は測定された前記抗体又はその免疫反応性断片の位置又は値(例えば、強度)から、該被験者の体内におけるAβの毒性コンホマーの存否、局在、及び/又はレベルを決定するステップ、並びに、
c)Aβの毒性コンホマーが存在し若しくはレベルが高いと決定された被験者、脳内においてAβの毒性コンホマーが検出された被験者、又は脳内におけるAβの毒性コンホマーのレベルが高い被験者は、ADに罹患しているか又はADの重症度が高いと判定するステップを備える、ADの診断方法。
以下のステップを備える、ADの診断方法:
a)被験者由来の試料と、少なくとも1つの本発明の抗体又はその免疫反応性断片とを接触させるステップ、
b)前記本発明の抗体又はその免疫反応性断片と結合した、本発明の抗体又はその免疫反応性断片に結合する抗原のレベルを測定するステップ、
c)Aβの構造非特異的な抗Aβ抗体と被験者由来の試料とを接触させ、その結合物の量を測定することにより、被験者由来の試料における総Aβ量を測定するステップ、並びに、
d)被験者由来の試料における、本発明の抗体又はその免疫反応性断片に結合する抗原のレベルと総Aβのレベルの比を計算し、決定された比から、前記被験者におけるADの有無又は程度を判定するステップ、
ここで、総Aβのレベルに対する、本発明の抗体又はその免疫反応性断片に結合する抗原のレベルが健常人由来の試料における同比と比較して高い場合には、ADに罹患している可能性が高いと判定される、方法。
a)少なくとも1つのAβの22位及び23位のアミノ酸におけるターン構造を極めて特異的に認識するが、Aβの他の部位におけるターン構造は認識しない抗体又はその免疫反応性断片と、候補AD治療薬が投与されていない被験者由来の検体、及び/又は、候補AD治療薬が投与された被験者由来の検体とを、それぞれ接触させるステップ、
b)前記抗体又はその免疫反応性断片に結合したAβの毒性コンホマーを測定して、測定値からAβの毒性コンホマーのレベル又は総Aβ量に対するAβの毒性コンホマー量と比を決定するステップ、並びに、
c)候補AD治療薬が投与されていない被験者由来の検体、及び、候補AD治療薬が投与された被験者由来の検体における測定されたAβの毒性コンホマーのレベル又は総Aβ量に対するAβの毒性コンホマー量と比を比較することにより、被験者における候補AD治療薬の奏効性を判定するステップを備える候補AD治療薬の治療効果の判定方法であって、
ここで、候補AD治療薬が投与されていない被験者由来の検体と比較して、候補AD治療薬が投与された被験者由来の検体においてAβの毒性コンホマーのレベル又は総Aβ量に対するAβの毒性コンホマー量と比が低い場合には、候補AD治療薬にAD治療効果があると判定される、
本明細書全体において、「レベル」とは、数値化された存在量に関する指標を意味し、例えば、濃度、量あるいはその代わりとして用いることができる指標を含む。よって、レベルは蛍光強度等の測定値そのものであってもよいし、濃度に換算された値であってもよい。また、レベルは、絶対的な数値(存在量、単位面積当たりの存在量など)であっても良いし、又は必要に応じて設定された比較対照と比較した相対的な数値であってもよい。
上述の全ての本発明の方法において、使用する検体は、本発明の方法においてAβの毒性コンホマーを測定可能な検体であれば特に限定されず、利用目的に応じて適宜選択することができる。例えば、本明細書において、「検体」とは、細胞培養上清、細胞溶解物、生検として被験者から採取した組織試料または液体等を含む。被験者由来の体液としては、例えば、血液、血漿、血清、リンパ液、尿、漿液、髄液、脳脊髄液、関節液、眼房水、涙液、唾液等の体液またはそれらの分画物若しくは処理物を挙げることができる。また、被験者由来の組織試料としては、脳組織、又は脳組織溶解物を挙げることができる。また、本発明の方法において使用する検体は、被験者由来の試料を測定試験に先立ち前処理したものであってもよいし、被験者から採取した試料をそのまま検体として使用してもよい。ここで、被験者とは、ヒト及びヒト以外の動物を含む。また、本発明の方法における分析は、定性的、定量的または半定量的に行うことができる。
抗体分子を用いた公知の測定方法のうち、EIA法を採用する場合、Aβの毒性コンホマーと特異的に結合する抗体又はその免疫結合性断片と検体中のAβの毒性コンホマーとを反応させた後、前記Aβの毒性コンホマーと結合する抗体又はその免疫結合性断片と、当該抗体又はその免疫結合性断片を認識する標識化した抗体とを結合させ、非結合抗体を除去後、標識物質に適した方法で測定して形成された複合体を測定することにより、Aβの毒性コンホマーと特異的に結合する抗体又はその免疫結合性断片と検体中のAβの毒性コンホマーとの結合を測定することができる。定量的な測定を行う場合には、予め濃度の判明している標準物質(E22P−Aβ42)を段階希釈した標準液を利用して検量線を作成し、当該検量線から測定値に該当する濃度を計算することにより決定することができる。
本発明の抗体又はその免疫反応性断片は、必要により精製した後、常法に従って製剤化することにより、医薬組成物(ADの治療薬及び予防薬を含む)又はin vivo検出及び/又は測定用の薬剤又は組成物として用いることができる。また、本発明は、医薬組成物(ADの治療薬及び予防薬を含む)又はin vivo検出及び/又は測定用の薬剤又は組成物を製造するための、本発明の抗体又はその免疫反応性断片の使用を含む。あるいは、本発明は、本発明の抗体又はその免疫反応性断片の、ADの治療若しくは予防又はin vivo検出若しくは測定のための使用を含む。
実施例1の実験において、マウスの維持及び実験は、免疫生物研究所の動物保護委員会の承認を受けたプロトコルに従って行った。G9C,E22P−Aβ9−35及びE22P−Aβ9−35の分子量はMALDI−TOF−MSを用いて確認した(K.Murakamiら(2010)ACS.Chem.Neurosci.,1:747−756)。
得られたクローンIBL−102が産生するモノクローナル抗体(以下、IBL−102抗体」という)の、次の各抗原への結合能をエンザイムイムノアッセイにより測定した:22,23ラクタム−Aβ、E22P−Aβ42、E22G−Aβ42、E22G−Aβ40、E22K−Aβ42、E22Q−Aβ40、E22Δ−Aβ42、E22Δ−Aβ40、25,26ラクタム−Aβ、A21P−Aβ42、E22V−Aβ42、D23P−Aβ42、V24P−Aβ42、G25P−Aβ42、M35P−Aβ42、野生型Aβ38、野生型Aβ40、野生型Aβ42、recom.Aβ42、野生型Aβ43、及び野生型Aβ46。具体的には、1μg/ウェルの82E1抗体(Aβ配列の1−16残基(ターン構造部分ではない)を認識する;Y.Horikoshiら(2004)Biochem Biophys Res Commun. 2004 Jul 2;319(3):733−7.参照;以下同じ)を0.1M炭酸緩衝液で固相化(コート)した96穴プレートに、4000,1000,250,62.5pg/mLの前記各抗原、又はコントロールとして0.1%(w/v)BSAを添加した。4℃で一晩静置後、ウェルの反応液を除去し、洗浄した。各ウェルにホースラディッシュパーオキシダーゼ(HRP)標識抗Aβマウスモノクローナル抗体IBL−102を100μL添加した。4℃で60分間静置後、ウェルの反応液を除去し、洗浄した。3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン(TMB)基質液を100μL添加し、遮光して室温で30分間静置後、1N H2SO4を100μL加えて発色反応を停止させた。450nmにおける吸光度を測定した。
得られたモノクローナル抗体IBL−102(以下、IBL−102抗体」という)の、次の各抗原への結合能をエンザイムイムノアッセイにより測定した:E22P−Aβ42、E22V−Aβ42、野生型Aβ42、野生型Aβ40、及びコントロールとしての牛血清アルブミン(BSA)。各抗原を固相用緩衝液(0.lM炭酸緩衝液PH9.5)で50ng/wellの濃度でELISA用96穴プレートに加え、4℃で一晩反応させ固相化させた。PBSで洗浄後、ブロッキング液(1%BSA,0.05%Tween 20/PBS)にてブロッキングした。このようにして各抗原を固相化した後、IBL−102抗体を、1,0.5,0.25,0.125μg/mLの濃度に希釈し、50μL/ウェルで各固相抗原に加える。37℃、30分間の反応後、洗浄し、標識抗体(Anti−Mouse IgG (H+L) Goat Fab’−HRP)を50μL/ウェル加え、37℃、30分間反応後、洗浄した。発色用基質液(o−フェニレンジアミン二塩酸塩;OPD)を加え発色(遮光して室温、15分間)、停止液(1N H2SO4)を加え停止した後、490nmにおける吸光度を測定した。コントロールとしてIBL−101抗体(#10379、Anti−Human Amyloidβ E22P(11A1) Mouse IgG MoAb株式会社免疫生物研究所、日本)も同様に試験した。
京都府立医科大学神経内科を受診した認知症患者で文書による同意を得た上で髄液を採取した患者のうち、その後の臨床経過及び画像診断等によりADと診断された患者をAD患者とした。また、様々な神経疾患の診断の過程で髄液検査を行い、その検体を研究目的で使用することについて文書による同意を得た患者を対照(健常人)とした。髄液サンプルは、以下の方法により採取した。空腹時に腰椎穿刺により脳脊髄液を滅菌個装スピッツ(アジア器材、PPスクリュースピッツ15mL)に直接採取した。
IBL−102抗体がAβ42の細胞毒性を抑制できるか否かを決定するため、ラットプライマリーニューロンでのAβ42誘導神経細胞毒性をMTTアッセイにより評価した(K.Murakamiら(2003)J.Biol.Chem.,278:46179−46187)。培養したラットプライマリーニューロンに、1μMの野生型Aβ42又はE22P−Aβ42を添加して細胞毒性刺激を与えた。細胞毒性刺激非添加群をコントロール(刺激無)とした。Aβ42又はE22P−Aβ42添加後、被検薬剤として、それぞれ0.1mg/mLのIBL−102抗体およびIgG抗体(陰性コントロール)を添加した。抗体非添加群をコントロール(薬剤無)とした。37℃で4日間培養した。使用したAβの濃度は、野生型Aβ42のIC50値に近い10−6Mとした。統計学的な有意差は、一元配置分散分析後のTukey’s testにより評価した。
ADモデルマウスとして、APPトランスジェニックマウス、Tg2576(K.Hsiaoら(1996)Science,274:99−102)にAβ42産生酵素であるPresenilin2を過剰発現させたマウス、PS2,Tg2576(T.Todaら(2011)J.Biomed. Biotech.,2011,617974)を用いた。ジエチルエーテル麻酔下でマウスの脳を摘出し、4%Paraform aldehydeにより固定した。パラフィンにより包埋し、5μmの厚さで薄切することで切片を作製した。。切片は脱パラフィン処理、親水化処理の後、ギ酸により抗原を賦活化し、内因性ペルオキシダーゼを不活性化した後、血清ブロッキングを行った。一次抗体として、1μg/mlまたは5μg/mlの82E1(陽性対照),5μg/mlまたは20μg/mlのIBL−101および5μg/mlまたは20μg/mlのIBL−102を4℃で一晩反応させ、洗浄後、二次抗体としてビオチン化抗マウスIgG抗体を用いて室温で反応させた。アビジンビオチン複合体キットを用いて免疫反応強度を増強し、3,3‘−Diaminobenzidineにより染色した。
ADモデルマウスとして、PS2,Tg2576を使用した。マウス誕生を0日目として、3月目から抗体投与を開始し、6月目に行動試験を行った。投与抗体としては、IgG、IBL−101抗体、及び、IBL−102抗体を用いた(各群n=5〜9)。各抗体は、10mg/kgの投与量で、週1回の頻度で3ヶ月間投与を行った。
IBL−102抗体の遺伝子配列を決定するため、重鎖(以下、「Hc」という)及び軽鎖(以下、「Lc」という)のクローニングを行った。IBL−102抗体を産生するハイブリドーマからmRNAを抽出し、cDNAを作製した。常法に従って、5’−Rapid amplification cDNA end(5’−RACE)を行い、Hc及びLc遺伝子の5’末端の塩基配列を決定した。Hc、Lcに特異的なプライマーを使用して、それぞれの全長cDNAをクローニングした。決定されたHc及びLcの遺伝子配列は図9(配列番号1及び配列番号8)、アミノ酸配列(シグナル配列を含む)は図10(配列番号2及び配列番号9)にそれぞれ記載の通りであった。また、IBL−102抗体のVH及びVLの配列は、それぞれ順に配列番号4及び配列番号11に記載のとおりであった。また、IBL−102抗体のCDRH1、CDRH2,CDRH3,CDRL1,CDRL2及びCDRL3の配列は、それぞれ順に、配列番号5,6,7,12,13,及び14に記載のとおりであった。
IBL−102抗体及びIBL−101抗体について、当該抗体と抗原との解離定数(KD)をBIACORE(GEヘルスケアバイオサイエンス株式会社,BIACORE−X100)を用いて測定した。BIACORE(GEヘルスケアバイオサイエンス株式会社,BIACORE−X100)のマニュアルに従い、SAチップにビオチン化E22P−Aβ42又はビオチン化野生型Aβ42を固定後、IBL−101抗体又はIBL−102抗体を流し、結合速度定数Ka1、解離速度定数Kd1を測定し、bivalentフィッティングを用いて結合定数KD値を決定した。
Aβは互いに結合してオリゴマーとなることにより毒性を有すると考えられている。IBL−102抗体のAβオリゴマーへの結合を調べるため、次の各抗原への結合能をエンザイムイムノアッセイにより測定した:野生型Aβ42;E22P−Aβ42;E22P,V40L,LDap−Aβ42ダイマー;及び、E22P,A」30L,LDap−Aβ40ダイマー。各抗原を固相用緩衝液(0.lM炭酸緩衝液PH9.5)で50ng/wellの濃度でELISA用96穴プレートに加え、4℃で一晩反応させ固相化させた。PBSで洗浄後、ブロッキング液(1%BSA,0.05%Tween 20/PBS)にてブロッキングした。このようにして各抗原を固相化した後、IBL−102抗体を、1,0.5,0.25,0.125μg/mLの濃度に希釈し、100μL/ウェルで各固相抗原に加える。室温で、60分間の反応後、洗浄し、標識抗体(Anti−Mouse IgG (H+L) Goat Fab’−HRP)を50μL/ウェル加え、室温で60分間反応後、洗浄した。発色用基質液(o−フェニレンジアミン二塩酸塩;OPD)を加え発色(遮光して室温、30分間)、停止液(2N H2SO4)を加え停止した後、492nmにおける吸光度を測定した。コントロールとしてIBL−101抗体及び4G8抗体(Aβ配列の18−22残基(ターン構造部分ではない)にエピトープを有するモノクローナル抗体;H.M.Wisniewskiら(1989)Acta.Neuropathol.,78:22−27)も同様に試験した。
IBL−102抗体の静脈内への単回投与の効果について調べるため、18月齢のADモデルマウスTg2576にIBL−102抗体を投与した。実験のスケジュールを図12に示す。初回抗体投与から1週間間隔で合計2回、IBL−102抗体(10−20mg/kg)又はPBSを交互に投与した。マウスをA群及びB群の2群(各n=7)に分け、A群には、初回:IBL−102抗体、2回目:PBSを投与し、B群には、初回:PBS、2回目:IBL−102抗体を投与した。初回及び2回目投与の前(Pre test)および後(Post test)に行動試験を行い、抗体投与による効果を調べた。行動試験は、新規物体に対する接触時間(匂いをかいでいる時間)を計測し、対照マウス(若齢B6)との比較により好奇心の指標をスコア化した。具体的には、再探索スコア(Re−exploring score)は、IBL−102投与群又はPBS投与群の各個体の(Post testでの接触回数)/(Pre testでの接触回数)を、対照マウス群の(Post testでの接触回数)/(Pre testでの接触回数)の平均値で割って求めた。初回と2回目投与の行動試験では、異なる物体を使用した。
IBL−102抗体とIBL−101抗体の、次の各抗原への結合能をエンザイムイムノアッセイにより測定し、比較した:野生型Aβ40、野生型Aβ42、E22P−Aβ42、E22V−Aβ42、G33P−Aβ42、L34P−Aβ42、L34P−Aβ42、V36P−Aβ42、G37P−Aβ42、G38P−Aβ42、V39P−Aβ42、V40P−Aβ42、I41P−Aβ42。具体的には、1μg/ウェルの82E1抗体(Aβ配列の1−16残基(ターン構造部分ではない)を認識する;Y.Horikoshiら(2004)Biochem Biophys Res Commun. 2004 Jul 2;319(3):733−7.参照;以下同じ)を0.1M炭酸緩衝液で固相化(コート)した96穴プレートに、2.5μg/ウェルの前記各抗原を添加した。室温で2時間静置後、ウェルの反応液を除去し、洗浄した後、4℃で一晩ブロッキングした。各ウェルに抗Aβマウスモノクローナル抗体IBL−101及びHRP標識抗Aβマウスモノクローナル抗体IBL−102を100μL添加した(120,60,30,15ng/mL)。室温で60分間静置後、ウェルの反応液を除去し、洗浄した後、 HRP標識二次抗体を室温で一時間反応させた。o−フェニレンジアミン(OPD)基質液を100μL添加し、遮光して室温で30分間静置後、2M H2SO4を50μL加えて発色反応を停止させた。492nmにおける吸光度を測定した。
IBL−102抗体の静脈内への単回投与の効果について調べるため、16−19カ月齢のADモデルマウスTg2576にIBL−102抗体を投与した。野生型マウスおよびTg2576に対して、2つの非常に類似した物体A1およびA2を1日10分間ずつ3日間記憶させた。その翌日、野生型マウスにはPBSを、Tg2576にはIgGまたはIBL−102(20mg/kg)を投与した。投与の翌日、2つの記憶させた物体A1およびA2のうち、一方(A1)および新規な物体Bの2つに対するマウスの接触回数を計数し、それぞれ、(物体A1への接触回数)/((物体A1への接触回数)+(物体Bへの接触回数))および(物体Bへの接触回数)/((物体A1への接触回数)+(物体Bへの接触回数))を、マウスの記憶力の指標として評価した。
Claims (33)
- 22位及び23位のアミノ酸にターン構造を有するAβを極めて特異的に認識するが、他の構造を有するAβは認識しない抗体又はその免疫反応性断片。
- 更に、Aβのオリゴマーを認識する、請求項1に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
- Aβのオリゴマーがダイマーである、請求項2に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
- AβがAβ42である、請求項1〜請求項3のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
- Aβの他の構造が、少なくとも、以下の群から選択される1種類以上の構造を含む、請求項1〜請求項4のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片:Aβの21位及び22位のアミノ酸におけるターン構造、Aβの23位及び24位のアミノ酸におけるターン構造、Aβの24位及び25位のアミノ酸におけるターン構造、Aβの25位及び26位のアミノ酸におけるターン構造、及びAβの35位及び36位のアミノ酸におけるターン構造。
- VHが、配列番号4に記載のアミノ酸配列を有し、かつ、VLが配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する抗体が結合するエピトープを極めて特異的に認識するが、VHが、配列番号4に記載のアミノ酸配列を有し、かつ、VLが配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する抗体が結合しないエピトープを認識しない抗体又はその免疫反応性断片。
- VHが、配列番号4に記載のアミノ酸配列を有し、かつ、VLが配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する抗体とその抗原との結合を競合阻害するが、VHが、配列番号4に記載のアミノ酸配列を有し、かつ、VLが配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する抗体が結合しないエピトープには結合しない抗体又はその免疫反応性断片。
- 重鎖可変領域のCDR1、CDR2、及びCDR3が、それぞれ、配列番号5、配列番号6、及び配列番号7に記載のアミノ酸配列を有する抗体又はその免疫反応性断片。
- 更に、軽鎖可変領域のCDR1、CDR2、及びCDR3が、それぞれ、配列番号12、配列番号13、及び配列番号14に記載のアミノ酸配列を有する、請求項8に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
- 重鎖可変領域のCDR1、CDR2、及びCDR3が、それぞれ、配列番号5、配列番号6、及び配列番号7に記載のアミノ酸配列を有する、請求項1〜請求項7のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
- 更に、軽鎖可変領域のCDR1、CDR2、及びCDR3が、それぞれ、配列番号12、配列番号13、及び配列番号14に記載のアミノ酸配列を有する、請求項10に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
- VHが、配列番号4に記載のアミノ酸配列を有する抗体又はその免疫反応性断片。
- 更に、VLが配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する、請求項12に記載の抗体又はその免疫反応性断片。
- 配列番号4に記載のアミノ酸配列を有する抗体又はその免疫反応性断片をコードする核酸分子。
- 配列番号1の126番目〜479番目のヌクレオチド配列からなる核酸分子である、請求項14に記載の核酸分子。
- 配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する抗体又はその免疫反応性断片をコードする核酸分子。
- 配列番号8の130番目〜465番目のヌクレオチド配列からなる核酸分子である、請求項16に記載の核酸分子。
- 配列番号4に記載のアミノ酸配列を有する抗体又はその免疫反応性断片、及び/又は、配列番号11に記載のアミノ酸配列を有する抗体又はその免疫反応性断片を発現可能なベクター。
- 請求項14又は請求項15に記載の核酸分子、及び/又は、請求項16又は請求項17に記載の核酸分子を含有する、請求項18に記載のベクター。
- 請求項18又は請求項19に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 請求項1〜請求項13のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片を含有する医薬組成物。
- ADの予防用、治療用又は改善用である、請求項21に記載の医薬組成物。
- AD患者の認知機能を改善するための、請求項21に記載の医薬組成物。
- AD患者の記憶障害を改善するための、請求項21に記載の医薬組成物。
- 請求項1〜請求項13のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片を含有する診断用組成物。
- ADの診断に使用するための請求項25に記載の診断用組成物。
- 請求項1〜請求項13のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片を含有する、Aβの毒性コンホマーを測定するためのキット。
- 請求項1〜請求項13のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片を含有する、Aβの毒性コンホマーの測定に使用するための組成物。
- 検体と請求項1〜請求項13のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片とを接触させるステップを備える、検体中におけるAβの毒性コンホマーレベルの測定方法。
- 以下のステップを備える、ADの診断方法:
a)被験者由来の試料と、少なくとも1つの請求項1〜請求項13のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片とをin vitroで接触させるステップ、
b)前記抗体又はその免疫反応性断片と結合した抗原のレベルを測定するステップ、並びに、
c)決定された抗原レベルから、前記被験者におけるADの有無又は程度を診断するステップ。
ここで、請求項1〜請求項13のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片に結合する抗原のレベルが健常人由来の試料における同レベルと比較して高い場合には、ADに罹患している可能性が高いと診断される、方法。 - 以下のステップを備える、ADの診断方法:
a)被験者由来の試料と、少なくとも1つの請求項1〜請求項13のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片とを接触させるステップ、
b)前記抗体又はその免疫反応性断片と結合した抗原のレベルを測定するステップ、
c)Aβの構造非特異的な抗Aβ抗体と被験者由来の試料とを接触させ、その結合物の量を測定することにより、被験者由来の試料における総Aβ量を測定するステップ、並びに、
d)被験者由来の試料における、請求項1〜請求項13のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片に結合する抗原のレベルと総Aβのレベルの比を計算し、決定された比から、前記被験者におけるADの有無又は程度を判定するステップ、
ここで、総Aβのレベルに対する、請求項1〜請求項13のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片に結合する抗原のレベルが健常人由来の試料における同比と比較して高い場合には、ADに罹患している可能性が高いと判定される、方法。 - 検体中のアミロイドβの毒性コンホマーの存否を決定する方法であって、
(a)請求項1〜請求項13のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片と検体とを接触させるステップ、
(b)前記抗体又はその免疫反応性断片へ結合したアミロイドβの毒性コンホマーを検出するステップ、
(c)前記ステップにおいてアミロイドβの毒性コンホマーが検出された場合には、検体中にアミロイドβの毒性コンホマーが存在すると判定し、前記ステップにおいてアミロイドβの毒性コンホマーが検出されなかった場合には、検体中にアミロイドβの毒性コンホマーが存在しないと判定するステップを備える、方法。 - 検体中のアミロイドβの毒性コンホマーのレベルを決定する方法であって、
(a)請求項1〜請求項13のいずれか1項に記載の抗体又はその免疫反応性断片と検体とを接触させるステップ、
(b)前記抗体又はその免疫反応性断片へ結合したアミロイドβの毒性コンホマー量を測定するステップ、
(c)前記検出された毒性コンホマー量から、検体中のアミロイドβの毒性コンホマーのレベルを算出するステップを備える、方法。
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