JPWO2016088589A1 - ラクターゼ溶液及びそれを用いた乳製品 - Google Patents
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Abstract
Description
また、Kluyveromyces lactisのラクターゼの遺伝子解析によれば、このラクターゼは1025アミノ酸からなるポリペプチドであり、分子量は117,618と推定されている(非特許文献1)。
〔1〕 SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動による分子量が約120kDaのラクターゼの画分の割合が、20%以上であることを特徴とするラクターゼ溶液;
[2] 前記120kDaのラクターゼの画分の割合と、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動による分子量が約80kDaのラクターゼの画分の割合と、の和が、30%以上であることを特徴とする[1]に記載のラクターゼ溶液;
[3] SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動による分子量が約50kDaのラクターゼの画分の割合が、70%以下であることを特徴とする[1]に記載のラクターゼ溶液;
[4] 前記約120kDaのラクターゼの画分の割合と、前記約80kDaのラクターゼの画分の割合と、の和を、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動による分子量が約50kDaのラクターゼの画分の割合で除した値が、0.5以上であることを特徴とする[1]〜[3]のいずれか一項に記載のラクターゼ溶液;
[5] 乳製品製造用であることを特徴とする[1]〜[4]のいずれか一項に記載のラクターゼ溶液;
[6] [1]〜[5]のいずれか一項に記載のラクターゼ溶液を含有する乳製品;
[7] [1]〜[5]のいずれか一項に記載のラクターゼ溶液を原料乳に添加し、当該原料乳に含まれる乳糖を1〜60℃で分解させることを特徴とする原料乳の処理方法;
[8] 微生物を培養する培養工程と、
前記培養工程により得られた培養物からラクターゼを回収する回収工程と、
前記回収工程により回収したラクターゼを精製する精製工程と
を含むことを特徴とするラクターゼ溶液の製造方法であって、
前記精製工程が、
塩析処理及び脱塩処理を行う工程
を1又は複数回含むことを特徴とするラクターゼ溶液の製造方法;
[9] 前記塩析処理が、
前記回収したラクターゼに、塩析剤を10〜90%飽和させる飽和工程と、
前記飽和工程後に、ラクターゼを4〜40℃で1〜80時間放置する放置工程と
を含むことを特徴とする[8]に記載のラクターゼ溶液の製造方法;
[10] 前記塩析処理が、pH4〜9において行われることを特徴とする[8]又は[9]に記載のラクターゼ溶液の製造方法;
が提供される。
本発明のラクターゼ溶液の製造方法は以下の4つの工程を経る。すなわち、
(1)微生物の培養工程、
(2)微生物からのラクターゼ回収工程、
(3)ラクターゼの精製工程、及び
(4)ラクターゼ活性の調整工程
である。
(1)微生物の培養工程については公知の培地を使用し、公知の菌株を使用すればよい。培養条件も公知であり、必要に応じて適宜選択することができる。
(2)微生物からのラクターゼ回収工程については、細胞内酵素である場合、ラクターゼを抽出する工程を含む必要がある。この抽出工程は、ラクターゼを細胞外に移行させることができる方法であれば特に限定されず、公知の抽出方法を使用することができる。他方、遺伝子導入、変異等によりラクターゼを細胞外に分泌される酵素とすれば、その培養液にラクターゼが含まれることになるため、本抽出工程は不要である。
(3)ラクターゼの精製工程は本発明のラクターゼ溶液を得るために重要である。特許文献1、特許文献2及び特許文献3は、いずれもクロマトグラフィーによってラクターゼ溶液を精製することが共通する。このクロマトグラフィーを行うことによって、ラクターゼの精製が進みラクターゼ活性を向上させることができる。しかし、後述するように、クロマトグラフィー(分配クロマトグラフィー又は分子篩クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー又はイオン交換クロマトグラフィーなど)を使用してラクターゼを精製すると、本来120kDaであるラクターゼが、80kDa及び50kDaのラクターゼにそれぞれ分解されることが判明した。いずれの分子量のラクターゼもラクターゼ活性を有するが、ラクターゼが分解を受けることによって、特に50kDaの画分の割合が増すと、ラクターゼの熱安定性が低下する結果、比較的高い温度で乳糖の分解が進みにくくなる問題が生じるものであった。
ラクターゼを含む溶液に、塩析剤としての硫酸アンモニウムを添加する場合、10〜90%飽和とすることが好ましく、30〜70%飽和とすることがさらに好ましい。他の塩析剤を使用する場合、当該硫酸アンモニウムの添加量に相当する量を使用すればよい。
ラクターゼ溶液中のラクターゼI及びラクターゼIIは、いずれもラクターゼ活性及び耐熱性を有する。ラクターゼIIIはラクターゼ活性を有するが耐熱性が不十分である。いずれの画分であってもラクターゼ活性は同等である。
(実施例1)
コーン・スティープ・リカー7%、ラクトース2%を含有する液体培地を加圧殺菌後(殺菌後のpH5.5)、Kluyveromyces lactisNo.013−2(ATCC 8585株)を植菌し、30℃にて24時間、12000L/minの通気で培養した。培養終了後冷却しながら4時間放置後、タンク上部から上澄液を除き、タンク底部に凝集沈降した菌体1500kgを得た。次いでここに得られた菌体のうち1500gを水道水で洗浄後、トルエン80mlを加え混和後、1500mlの0.05Mリン酸緩衝液(pH7.0)を加え撹拌均一化し、密栓を施して30℃、15時間放置し自己消化せしめた。
この消化液を遠心分離して得た上清2500mlに等容の冷アセトンを加え一夜放置した。生じた沈殿を遠心分離にて集め600mlの水道水に溶かし、濃縮前酵素溶液を得た。
この濃縮前酵素溶液600mlを4℃に冷却しながら、硫酸アンモニウム粉末を60分間かけて少しずつ添加し、50%飽和水溶液を得た。当該水溶液を80時間4℃で放置(静置)しラクターゼを沈殿させた後、濾過によって固液分離し、固体状のラクターゼを回収した。当該ラクターゼを600mlの水道水に再溶解させた後、限外濃縮を行った。脱塩されたラクターゼに水道水を添加し、終濃度が50%となるようにグリセリンを添加し実施例1のラクターゼ溶液(5,000NLU/g)を得た。
(実施例2)
実施例1のラクターゼ溶液と下記比較例1とを、重量比が80:20となるように混合して、実施例2のラクターゼ溶液(5,000NLU/g)を得た。
(実施例3)
実施例1のラクターゼ溶液と下記比較例1とを、重量比が60:40となるように混合して、実施例3のラクターゼ溶液(5,000NLU/g)を得た。
(実施例4)
実施例1のラクターゼ溶液と下記比較例1とを、重量比が40:60となるように混合して、実施例4のラクターゼ溶液(5,000NLU/g)を得た。
(実施例5)
実施例1のラクターゼ溶液と下記比較例1とを、重量比が20:80となるように混合して、実施例5のラクターゼ溶液(5,000NLU/g)を得た。
市販のラクターゼ製剤である商品名「GODO−YNL2SS」(合同酒精社製、5000NLU/g)を比較例1のラクターゼ溶液とした。
(比較例2)
市販のラクターゼ製剤である商品名「MAXILACT LG5000」(DSM社製、5000NLU/g)を比較例2のラクターゼ溶液とした。
(比較例3)
市販のラクターゼ製剤である商品名「MAXILACT LGX5000」(DSM社製、5000NLU/g)を比較例3のラクターゼ溶液とした。
ラクターゼ溶液をミリQ水で10NLU/gに希釈し、SDS−PAGE用Sample Buffer(0.125M Tris-HCl pH6.8、0.0125% ブロモチモールブルー、20% グリセリン、2.5% SDS、2.5% 2-メルカプトエタノール)と1:1に混合し、95℃、5分間の加熱処理により泳動用サンプルを調製した。10%アクリルアミドゲル(4%スタッキングゲル、ゲル厚1mm、泳動距離50mm)に分子量スタンダード及び泳動用サンプルを供し、マリソル産業泳動漕にて、スタッキング10mA定電流、セパレーティング20mAにて泳動前線がゲル下端付近に達するまで泳動した。分子量スタンダード(レーンM)にはBIO−RAD#161−0313(プレステインド)を使用した。泳動後のゲルは、CBB染色液(APRO SP−4010)によるタンパク染色を1時間行った。
ラクターゼ活性を有するのは、約120kDa、約80kDa及び約50kDaのバンドであり、約30kDaのバンドはラクターゼ活性を有するものではなかった。
上述する方法により、泳動後のゲルについて、バンドの定量により割合を算出した。結果を表1に示す。表1は全てのバンドを含む値を記載した。さらに、表2には、主要な4つのバンドのみを全体としたそれぞれのバンドの割合を算出した結果を示した。表1〜表4において、各実施例、比較例等の値を合計しても100にならないのは、得られた測定結果の小数点第2位を四捨五入したためである。
表1、2には示していないが、上記実施例1等と同様にして、特許文献1の実施例1を追試することによって得られたA区分及びB区分について、電気泳動を行ったところ、比較例2、3と同様の傾向を示した。
表1
表2
UHT殺菌(130℃、2秒)牛乳(商品名「明治おいしい牛乳」、株式会社明治製)に実施例1のラクターゼ溶液(レーン1及びレーン2)、比較例1(レーン3及びレーン4)、比較例2(レーン5)又は比較例3(レーン6)を、それぞれ終濃度0.05%(W/V)となるように添加し、43℃で2時間乳糖分解反応を行った。反応後の溶液を精製水で20倍(W/V)に希釈して、上記と同様にSDS−PAGE用Sample Bufferと1:1に混合し、95℃、5分間の加熱処理により泳動用サンプルを調製した。10%アクリルアミドゲル2枚に分子量スタンダード及び泳動用サンプルを供し、同時に泳動した。分子量スタンダード(レーンM)はBIO−RAD#161−0313(プレステインド)を使用した。
一次抗体としては以下の様に自家調製した抗ラクターゼポリクローナル抗体を使用した。実施例1で得られたラクターゼ溶液のSDS-PAGEを行い、ゲルより120kDaのバンドを切り出して細かく砕いた後にDifco社製アジュバント コンプリート フロイントと混合してエマルジョン化した。これをBalb-Cマウスの尾部根元に計3回皮下注射し、血清中抗体価の上昇を確認後、採取した全血の遠心分離上清を抗ラクターゼポリクローナル抗体とした。この抗体でラクターゼの120、80、50kDaのバンドが検出可能であった。
上記の抗ラクターゼ抗体をブロックエース希釈液(ブロックエース溶液を精製水で10倍希釈)で1,000倍に希釈した液中で、室温で2時間反応させた。Tween−PBSで4回洗浄した後、2次抗体(Gort a−mouse IgG(H+L)−HRP;SouthernBiotech 1034−05)をブロックエース希釈液で5,000倍に希釈した液中で、室温で2時間反応させた。Tween−PBSで洗浄後、3,3’−ジアミノベンジジン(DAB)による染色を行った。DAB基質はDAB buffer tablets(MERCK 1.02924.0001)を使用した。
UHT殺菌牛乳(130℃、2秒)に実施例1のラクターゼ溶液、比較例1、比較例2及び比較例3をそれぞれ終濃度0.05%(w/v)(2.5NLU/100mL牛乳)となるように添加し、49℃、46℃、43℃、40℃及び37℃で乳糖分解反応を行った。乳糖分解反応前の乳糖の含量と、反応中の乳糖の含量を経時的にHPLC(Transgenomic CARBOSep CHO620カラム)で測定した(Waters Alliance HPLCシステム、カラム温度:85℃、溶媒:H2O、流速:0.5mL/min、検出器:Waters2414RIディテクター)。乳糖分解率は、以下のように算出した。乳糖分解率(%)=100−(各実施例又は各比較例のラクターゼ溶液を用いた乳糖分解反応後の牛乳に含まれる乳糖含量/各実施例又は各比較例のラクターゼ溶液を用いた乳糖分解反応前の牛乳に含まれる乳糖含量)×100)
実施例1のラクターゼ溶液と比較例1のラクターゼ溶液を上述する割合で混合して得たラクターゼ溶液、実施例2〜5について以下検討を行った。
実施例2〜5について、上述した方法により、電気泳動を行った後、各バンドの定量を行った。電気泳動の結果を図4、定量の結果を表3に示す。表3は全てのバンドを含む値を記載した。さらに表4には、主要な4つのバンドのみを全体としたそれぞれのバンドの割合を算出した結果を示した。尚、比較のため、実施例1及び比較例1についても同時に泳動及び定量を行った結果を示した。
表3
表4
実施例1〜5及び比較例1のラクターゼ溶液を用いて、上述した乳糖分解試験の方法により、49℃で乳糖分解反応を行った。得られた結果を図5に示した。
パネルAは乳糖量、パネルBは乳糖分解率の経時変化の結果を示している。約120kDaのバンドが増えるにつれ、乳糖分解が進むことを確認した。
Claims (10)
- SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動による分子量が約120kDaのラクターゼの画分の割合が、20%以上であることを特徴とするラクターゼ溶液。
- 前記120kDaのラクターゼの画分の割合と、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動による分子量が約80kDaのラクターゼの画分の割合と、の和が、30%以上であることを特徴とする請求項1に記載のラクターゼ溶液。
- SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動による分子量が約50kDaのラクターゼの画分の割合が、70%以下であることを特徴とする請求項1に記載のラクターゼ溶液。
- 前記約120kDaのラクターゼの画分の割合と、前記約80kDaのラクターゼの画分の割合と、の和を、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動による分子量が約50kDaのラクターゼの画分の割合で除した値が、0.5以上であることを特徴とする請求項1〜3のいずれか一項に記載のラクターゼ溶液。
- 乳製品製造用であることを特徴とする請求項1〜4のいずれか一項に記載のラクターゼ溶液。
- 請求項1〜5のいずれか一項に記載のラクターゼ溶液を含有する乳製品。
- 請求項1〜5のいずれか一項に記載のラクターゼ溶液を原料乳に添加し、当該原料乳に含まれる乳糖を1〜60℃で分解させることを特徴とする原料乳の処理方法。
- 微生物を培養する培養工程と、
前記培養工程により得られた培養物からラクターゼを回収する回収工程と、
前記回収工程により回収したラクターゼを精製する精製工程と
を含むことを特徴とするラクターゼ溶液の製造方法であって、
前記精製工程が、
塩析処理及び脱塩処理を行う工程
を1又は複数回含むことを特徴とするラクターゼ溶液の製造方法。 - 前記塩析処理が、
前記回収したラクターゼに、塩析剤を10〜90%飽和させる飽和工程と、
前記飽和工程後に、ラクターゼを4〜40℃で1〜80時間放置する放置工程と
を含むことを特徴とする請求項8に記載のラクターゼ溶液の製造方法。 - 前記塩析処理が、pH4〜9において行われることを特徴とする請求項8又は9に記載のラクターゼ溶液の製造方法。
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Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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US9124367B2 (en) * | 2008-03-18 | 2015-09-01 | Telefonaktiebolaget L M Ericsson (Publ) | Methods and arrangements for memory-efficient estimation of noise floor |
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- 2017-06-22 CO CONC2017/0006191A patent/CO2017006191A2/es unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5324094A (en) * | 1976-08-19 | 1978-03-06 | Godo Shiyusei Kk | Microbial preparation of lactase |
WO2013168438A1 (ja) * | 2012-05-10 | 2013-11-14 | 国立大学法人岩手大学 | ラクターゼ活性を有するタンパク質、該タンパク質をコードする遺伝子、該遺伝子を含有する組み換えベクター、形質転換体、及びその製造方法並びに用途 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
KATROLIA P. ET AL.: "Molecular cloning and high-level expression of a beta-galactosidase gene from Paecilomyces aerugineu", J MOL CATAL B: ENZYMATIC, 2011 VOL.69, P.112-119, JPN6016002978 * |
O'CONNELL S. ET AL.: "A novel acid-stable, acid-active beta-galactosidase potentially suited to the alleviation of lactose", APPL MICROBIOL BIOTECHNOL., 2010, VOL.86, NO.2, P.517-524, JPN6016002976 * |
Also Published As
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