JPWO2016052073A1 - 抗体結合性ポリペプチド、抗体結合性融合ポリペプチドおよび吸着材料 - Google Patents
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Abstract
配列番号１〜１８のいずれか１つで示される抗体結合性ポリペプチドおよびその抗体結合性ポリペプチドを水不溶性担体に固定化した、抗体または抗体誘導体の吸着材料が提供される。これらの抗体結合性ポリペプチドおよび吸着材料は、抗体結合性および選択性に優れるとともに、アルカリ耐性および経時安定性にも優れる。
Description
本発明は、抗体結合性ポリペプチド、抗体結合性融合ポリペプチドおよび吸着材料に関する。
近年、抗体医薬の開発が活況を呈している。ヒト免疫機能を使う抗体医薬は高い効能が期待できるうえ、副作用も比較的少ないため、今後の医療の中心とみられているからである。抗体医薬の開発・実用化に欠かせない技術が抗体の連続・大量・高速の精製技術である。抗体の精製のために、現在最も一般的に利用されている方法はプロテインＡを用いたアフィニティクロマトグラフィー法である。
プロテインＡは黄色ブドウ球菌の細胞壁に存在する膜タンパク質であり、抗体分子の定常領域（Ｆｃ領域，Ｆｃ＝Ｆｒａｇｍｅｎｔ，ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ（結晶性フラグメント））に強い結合能を持つことが知られている。定常領域には、様々な抗体分子のクラス・サブクラスを超えて共通した構造が保存されていることから、プロテインＡを抗体結合性リガンドとして用いたアフィニティクロマトグラフィーは、抗原の異なる様々な種類の抗体分子の精製に用いることができる。
しかし、プロテインＡは、遺伝子工学的方法を用いて製造されるため、製造工程が煩雑であり、結果的に高コストになるという問題があった。また、プロテインＡは、アルカリ耐性および経時安定性が十分ではなく、カラムのアルカリ洗浄による劣化が激しく寿命が短いため、洗浄を何度も繰り返して使うことができなかった。このため、抗体精製のコストが高くなりがちであった。
このような問題に対して、例えば、非特許文献１には、プロテインＡの模倣リガンドとして、プロテインＡの１３２番目のフェニルアラニンと１３３番目のチロシンからなるジペプチドから、下記式の反応により製造することができる低分子化合物ＡｐＡ（“Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ（人工プロテインＡ）”に由来する。）が記載されている。
Li, R.，Dowd, V.，Steward, D.J.，Burton, S.J.，Lowe, C.R.，1998年，Nature Biotechnology，第16巻，p.190〜195
しかし、後述する実施例に記載するように、本発明者が検討したところによれば、非特許文献１に記載された低分子化合物ＡｐＡは、アルカリ耐性および経時安定性は十分であるものの、抗体結合性および選択性が不十分であり、要求される水準を満たしていなかった。
そこで、本発明は、抗体結合性および選択性に優れるとともに、アルカリ耐性および経時安定性にも優れた、抗体結合性ポリペプチドおよび吸着材料を提供することを課題とする。
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、配列番号１〜１８のいずれか１つで示される抗体結合性ポリペプチドが、プロテインＡに比較して遜色のない抗体結合性および選択性を有するとともに、より優れたアルカリ耐性および経時安定性を有することを知得し、本発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明は以下の（１）〜（１３）を提供する。
（１）配列番号１〜１８のいずれか１つで示される抗体結合性ポリペプチド。
（２）配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチド。
（３）配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、１〜１０個のアミノ酸残基が共有結合した抗体結合性ポリペプチド。
（４）配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、１〜２４個のエチレングリコール単位が共有結合した抗体結合性ポリペプチド。
（５）配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所が修飾された抗体結合性ポリペプチド。
（６）上記（１）〜（３）のいずれか１つに記載の抗体結合性ポリペプチドを１ドメイン単位として、ドメイン単位２〜１０個を共有結合にて融合させた抗体結合性融合ポリペプチド。
（７）上記（１）〜（３）のいずれか１つに記載の抗体結合性ポリペプチドを１ドメイン単位として、ドメイン単位２〜１０個を共有結合にて融合させた抗体結合性融合ポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所が修飾された抗体結合性融合ポリペプチド。
（８）上記抗体結合性融合ポリペプチドが、ドメイン単位２〜５個と、さらにドメイン単位間を連結するリンカーとを含む、上記（６）または（７）に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
（９）上記リンカーが、リンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチドリンカー、リンカー１つあたり１〜２４個のエチレングリコール単位からなるＰＥＧ（polyethylene glycol，ポリエチレングリコール）リンカー、ならびにリンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基および１〜２４個のエチレングリコール単位からなる複合リンカーからなる群から選択される少なくとも１つのリンカーである、上記（８）に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
（１０）上記リンカーが、リンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーならびにリンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基および１〜２４個のエチレングリコール単位からなる複合リンカーからなる群から選択される少なくとも１つのリンカーであり、１〜１０個のアミノ酸残基がＧｌｙ（グリシン）、Ａｌａ（アラニン）およびＳｅｒ（セリン）からなる群から選択される少なくとも１種類を少なくとも１個含む、上記（９）に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
（１１）上記リンカーが、リンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーならびにリンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基および１〜２４個のエチレングリコール単位からなる複合リンカーからなる群から選択される少なくとも１つのリンカーであり、１〜１０個のアミノ酸残基がＬｙｓ（リシン）、Ｏｒｎ（オルニチン）およびＣｙｓ（システイン）からなる群から選択される少なくとも１種類を少なくとも１個含む、上記（９）に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
（１２）上記ドメイン単位および上記リンカーに含まれるアミノ酸残基の合計分子量が５０００以下である、上記（９）〜（１１）のいずれか１項に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
（１３）上記（１）〜（５）のいずれか１つに記載の抗体結合性ポリペプチドまたは上記（６）〜（１２）のいずれか１つに記載の抗体結合性融合ポリペプチドを水不溶性担体に固体化した、抗体または抗体誘導体の吸着材料。
（１）配列番号１〜１８のいずれか１つで示される抗体結合性ポリペプチド。
（２）配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチド。
（３）配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、１〜１０個のアミノ酸残基が共有結合した抗体結合性ポリペプチド。
（４）配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、１〜２４個のエチレングリコール単位が共有結合した抗体結合性ポリペプチド。
（５）配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所が修飾された抗体結合性ポリペプチド。
（６）上記（１）〜（３）のいずれか１つに記載の抗体結合性ポリペプチドを１ドメイン単位として、ドメイン単位２〜１０個を共有結合にて融合させた抗体結合性融合ポリペプチド。
（７）上記（１）〜（３）のいずれか１つに記載の抗体結合性ポリペプチドを１ドメイン単位として、ドメイン単位２〜１０個を共有結合にて融合させた抗体結合性融合ポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所が修飾された抗体結合性融合ポリペプチド。
（８）上記抗体結合性融合ポリペプチドが、ドメイン単位２〜５個と、さらにドメイン単位間を連結するリンカーとを含む、上記（６）または（７）に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
（９）上記リンカーが、リンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチドリンカー、リンカー１つあたり１〜２４個のエチレングリコール単位からなるＰＥＧ（polyethylene glycol，ポリエチレングリコール）リンカー、ならびにリンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基および１〜２４個のエチレングリコール単位からなる複合リンカーからなる群から選択される少なくとも１つのリンカーである、上記（８）に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
（１０）上記リンカーが、リンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーならびにリンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基および１〜２４個のエチレングリコール単位からなる複合リンカーからなる群から選択される少なくとも１つのリンカーであり、１〜１０個のアミノ酸残基がＧｌｙ（グリシン）、Ａｌａ（アラニン）およびＳｅｒ（セリン）からなる群から選択される少なくとも１種類を少なくとも１個含む、上記（９）に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
（１１）上記リンカーが、リンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーならびにリンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基および１〜２４個のエチレングリコール単位からなる複合リンカーからなる群から選択される少なくとも１つのリンカーであり、１〜１０個のアミノ酸残基がＬｙｓ（リシン）、Ｏｒｎ（オルニチン）およびＣｙｓ（システイン）からなる群から選択される少なくとも１種類を少なくとも１個含む、上記（９）に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
（１２）上記ドメイン単位および上記リンカーに含まれるアミノ酸残基の合計分子量が５０００以下である、上記（９）〜（１１）のいずれか１項に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
（１３）上記（１）〜（５）のいずれか１つに記載の抗体結合性ポリペプチドまたは上記（６）〜（１２）のいずれか１つに記載の抗体結合性融合ポリペプチドを水不溶性担体に固体化した、抗体または抗体誘導体の吸着材料。
本発明によれば、抗体結合性および選択性に優れるとともにアルカリ耐性および経時安定性にも優れた抗体結合性ポリペプチド、ならびに抗体結合性および選択性に優れるとともにアルカリ耐性および経時安定性にも優れた、抗体または抗体誘導体の吸着材料を提供することができる。
また、本発明によれば、プロテインＡに比べてアルカリ等の洗浄を強化することが出来、より堅牢な製造工程を構築することができる。
本発明において、アミノ酸は、原則として、国際純正・応用化学連合と国際生化学・分子生物学連合による共同命名委員会（ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ ＵＮＩＯＮ ＯＦ ＰＵＲＥ ＡＮＤ ＡＰＰＬＩＥＤ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ａｎｄ ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ ＵＮＩＯＮ ＯＦ ＢＩＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ （ＪＣＢＮ））で採用された名称、略号等を用いて表す。また、アミノ酸残基は、そのアミノ酸残基が由来するアミノ酸の略号を用いて表す。なお、アミノ酸残基には、Ｎ末端アミノ酸（Ｎ末端残基）およびＣ末端アミノ酸（Ｃ末端残基）を含む。
さらに、特に明示しない限り、ポリペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列（「１次構造」ともいう。）は、左端から右端にかけてＮ末端からＣ末端となるようにアミノ酸残基を１次元に並べて表す。
さらに、特に明示しない限り、ポリペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列（「１次構造」ともいう。）は、左端から右端にかけてＮ末端からＣ末端となるようにアミノ酸残基を１次元に並べて表す。
１文字略号および３文字略号が公式に認められたアミノ酸の名称および略号（１文字略号、３文字略号）を表１に示す。
アミノ酸としては、表１に記載した一般的なアミノ酸の他に、後述の、いわゆる非天然アミノ酸を用いることもできる。
本発明において、「非天然アミノ酸」とは、天然ではｍＲＮＡ上にコード化されていないアミノ酸であり、特に限定されないが、例えば、２，３−ジアミノプロピオン酸（Dpr）、２，４−ジアミノ酪酸（Dbu）、オルニチン（Orn）、３−ヒドロキシプロリン（3Hyp）、４−ヒドロキシプロリン（4Hyp）、２−アミノアジピン酸（Aad）、２−アミノ酪酸（Abu）、２−アミノイソ酪酸（Aib）、２−アミノペンタン酸（ノルバリン；Nva）、２−アミノヘキサン酸（ノルロイシン；Nle）、２−アミノヘプタン酸（Ahe）、２−アミノピメリン酸（Apm）、２，２’−ジアミノピメリン酸（Dpm）、アローヒドロキシリシン（aHyl）、アローイソロイシン（aIle）、６−Ｎ−メチルリシン（MeLys）、テアニン（２−アミノ−４−（エチルカルバモイル）酪酸）、シトルリン（２−アミノ−５−（カルバモイルアミノ）ペンタン酸）、デスモシン（Des）、イソデスモシン（Ide）などが挙げられる。
非天然アミノ酸を用いる場合には、ポリペプチドを担体に結合させるためのリンカー部分または融合ペプチドのドメイン間を結合するリンカー部分に用いるのが好ましい。
本発明において、「非天然アミノ酸」とは、天然ではｍＲＮＡ上にコード化されていないアミノ酸であり、特に限定されないが、例えば、２，３−ジアミノプロピオン酸（Dpr）、２，４−ジアミノ酪酸（Dbu）、オルニチン（Orn）、３−ヒドロキシプロリン（3Hyp）、４−ヒドロキシプロリン（4Hyp）、２−アミノアジピン酸（Aad）、２−アミノ酪酸（Abu）、２−アミノイソ酪酸（Aib）、２−アミノペンタン酸（ノルバリン；Nva）、２−アミノヘキサン酸（ノルロイシン；Nle）、２−アミノヘプタン酸（Ahe）、２−アミノピメリン酸（Apm）、２，２’−ジアミノピメリン酸（Dpm）、アローヒドロキシリシン（aHyl）、アローイソロイシン（aIle）、６−Ｎ−メチルリシン（MeLys）、テアニン（２−アミノ−４−（エチルカルバモイル）酪酸）、シトルリン（２−アミノ−５−（カルバモイルアミノ）ペンタン酸）、デスモシン（Des）、イソデスモシン（Ide）などが挙げられる。
非天然アミノ酸を用いる場合には、ポリペプチドを担体に結合させるためのリンカー部分または融合ペプチドのドメイン間を結合するリンカー部分に用いるのが好ましい。
本発明において、「ドメイン単位」とは、タンパク質またはポリペプチドの高次構造上の単位であり、概ね５から数百のアミノ酸残基配列から構成され、なんらかの物理化学的または生物化学的な機能を発現するに十分なアミノ酸高分子の単位をいう。
本発明において、「融合ポリペプチド」とは、なんらかの物理化学的または生物化学的な機能を有するポリペプチド（ドメイン単位）が２個以上、直接、またはリンカーを介して、連結することにより構成されている高分子化合物をいう。
本発明において、ドメイン単位間を連結するリンカーは特に限定されず、例えば、ペプチド単位（アミノ酸残基）からなるペプチドリンカー、エチレングリコール単位からなるＰＥＧ（polyethylene glycol，ポリエチレングリコール）リンカー、ジスルフィド結合（ＳＳ結合）、これらの組合せ等が挙げられる。
本発明において、ドメイン単位間を連結するリンカーは特に限定されず、例えば、ペプチド単位（アミノ酸残基）からなるペプチドリンカー、エチレングリコール単位からなるＰＥＧ（polyethylene glycol，ポリエチレングリコール）リンカー、ジスルフィド結合（ＳＳ結合）、これらの組合せ等が挙げられる。
本発明において、「抗体」とは、免疫グロブリンまたはその類縁体、フラグメントもしくは融合体をいう。ここで、類縁体とは、免疫グロブリンの構造または機能が少なくとも部分的に保持された、天然の、または人工的に作製された、タンパク質またはタンパク質コンジュゲートをいう。また、フラグメントとは、酵素的な処理または遺伝子工学的な設計によって作製された、免疫グロブリンの部分構造を有するタンパク質をいう。また、融合体とは、各種サイトカイン、サイトカイン受容体等の生物活性を有するタンパク質の機能部分を、免疫グロブリンの全体または一部と遺伝子工学的に融合させて作製したタンパク質をいう。また、抗体としては、モノクローナル抗体または免疫グロブリンのＦｃ領域を有する融合体が好ましく、モノクローナル抗体がより好ましい。なお、本発明において、免疫グロブリンは、ＩｇＧ（Immunoglobulin G；免疫グロブリンＧ）、ＩｇＭ（Immunoglobulin M；免疫グロブリンＭ）、ＩｇＡ（Immunoglobulin A；免疫グロブリンＡ）、ＩｇＤ（Immunoglobulin D；免疫グロブリンＤ）およびＩｇＥ（Immunoglobulin E；免疫グロブリンＥ）の５種類のクラス（アイソタイプ）のいずれでもよいが、ＩｇＧまたはＩｇＭが好ましく、ＩｇＧがより好ましい。
本発明において、「抗体誘導体」とは、ヒト免疫グロブリンのＦｃ領域と非ヒト哺乳動物免疫グロブリンのＦａｂ領域とを融合させたキメラ抗体、ヒト免疫グロブリンのいくつかのＦｃ領域と非ヒト哺乳動物免疫グロブリンのいくつかのＦｖ領域とを融合させたキメラ抗体、ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ（Complementarity Determining Region，相補性決定領域）部分を除いた残余の部分と非ヒト哺乳動物免疫グロブリンＣＤＲ部分とを融合させたヒト型化抗体、非ヒト哺乳動物免疫グロブリンのＦｃ領域とヒト免疫グロブリンのＦａｂ領域とを融合させたキメラ抗体、非ヒト哺乳動物免疫グロブリンのいくつかのＦｃ領域とヒト免疫グロブリンのいくつかのＦｖ領域とを融合させたキメラ抗体、ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ部分を除いた残余の部分と非ヒト哺乳動物免疫グロブリンのＣＤＲ部分とを融合させた非ヒト哺乳動物化抗体、非ヒト哺乳動物免疫グロブリンのＦｃ領域と非ヒト哺乳動物免疫グロブリンのＦａｂ領域とを融合させたキメラ抗体、非ヒト哺乳動物グロブリンのいくつかのＦｃ領域と非ヒト哺乳動物免疫グロブリンのいくつかのＦｖ領域とを融合させたキメラ抗体、非ヒト哺乳動物免疫グロブリンのＣＤＲ（相補性決定領域）部分を除いた残余の部分と非ヒト哺乳動物免疫グロブリンＣＤＲ部分とを融合させた非ヒト哺乳動物型抗体、およびこれらの化学的修飾を加えたタンパク質であってＦｃ領域を保持するタンパク質をいう。
本発明において、「抗体結合性」とは、抗体または抗体誘導体と、ある親和性をもって結合することをいう。抗体または抗体誘導体との結合は、抗原抗体反応による結合が好ましく、結合する部位としては、抗体または抗体誘導体の定常領域（Ｆｃ領域、ＣＬ領域、ＣＨ領域）が好ましい。
本発明において、「リガンド」とは、特定の物質と、ある親和性をもって、結合する分子をいう。このような分子は、タンパク質、ポリペプチド、低分子量化合物等であり得る。また、本発明において、「抗体結合性リガンド」とは、抗体結合性を有するリガンド、すなわち、抗体または抗体誘導体と、ある親和性をもって結合するリガンドをいう。本発明においては、抗体結合性リガンドは、抗体または抗体誘導体と、特異的な分子間の親和力が働く抗原抗体反応にて結合するものが好ましく、結合する部位としては、抗体または抗体誘導体の定常領域（Ｆｃ領域、ＣＬ領域（軽鎖の定常領域）、ＣＨ領域（重鎖の定常領域））が汎用性の観点から好ましい。
［抗体結合性ポリペプチド］
本発明は、配列番号１〜１８のいずれか１つで示される抗体結合性ポリペプチドを提供する。この抗体結合性ポリペプチドは、抗体または抗体誘導体に、ある程度の親和性をもって結合するポリペプチドであり、抗体または抗体誘導体の定常領域（Ｆｃ領域）に結合する。
本発明は、配列番号１〜１８のいずれか１つで示される抗体結合性ポリペプチドを提供する。この抗体結合性ポリペプチドは、抗体または抗体誘導体に、ある程度の親和性をもって結合するポリペプチドであり、抗体または抗体誘導体の定常領域（Ｆｃ領域）に結合する。
また、本発明は、配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上、好ましくは８７％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドを提供する。
ここで、２つのアミノ酸配列の配列相同性は、次のようにして求める。
（１）２つのアミノ酸配列のアラインメントを行う
一致（マッチ）は＋１、不一致（ミスマッチ）は−１、ギャップは−１のスコアを与え、アラインメント・スコアが最大となるようにアラインメントを行う。
（２）配列相同性を計算する
得られたアラインメントに基づいて、次式により配列相同性を計算する。
配列相同性［％］＝（一致ポジション数／全ポジション数）×１００［％］
全ポジション数はアラインメントの長さであり、一致ポジション数はアミノ酸の種類が一致するポジションの数である。
ここで、アミノ酸残基の種類が一致するか否かの判断は、そのアミノ酸残基の元になるアミノ酸の側鎖（アミノ酸側鎖）の構造が同一であるか否かによるものとする。なお、エナンチオマーの関係にあるアミノ酸の側鎖の構造は同一ではない。
（３）配列相同性の計算例
例えば、次のアミノ酸配列を考える。
配列Ａ ＥＱＱＮＡＦＹ
配列Ｂ ＫＥＱＱＳＡＦＹ
これを、上記した条件の下でアラインメントすると、次のようになる。ここで、配列Ａ、Ｂ間でアミノ酸（残基）の種類が一致する箇所には、見やすくするため、ホモロジー・ストリング「｜」を付けている。また、「−」はギャップである。
配列Ａ −ＥＱＱＮＡＦＹ
｜｜｜ ｜｜｜
配列Ｂ ＫＥＱＱＳＡＦＹ
このアラインメントのスコアは、一致（＋１）×６＋不一致（−１）×１＋ギャップ（−１）×１＝４である。
この例では、全ポジション数は８であり、一致ポジション数は６であるから、上記式に従って算出した配列相同性は、６／８×１００＝７５．０％である。
（１）２つのアミノ酸配列のアラインメントを行う
一致（マッチ）は＋１、不一致（ミスマッチ）は−１、ギャップは−１のスコアを与え、アラインメント・スコアが最大となるようにアラインメントを行う。
（２）配列相同性を計算する
得られたアラインメントに基づいて、次式により配列相同性を計算する。
配列相同性［％］＝（一致ポジション数／全ポジション数）×１００［％］
全ポジション数はアラインメントの長さであり、一致ポジション数はアミノ酸の種類が一致するポジションの数である。
ここで、アミノ酸残基の種類が一致するか否かの判断は、そのアミノ酸残基の元になるアミノ酸の側鎖（アミノ酸側鎖）の構造が同一であるか否かによるものとする。なお、エナンチオマーの関係にあるアミノ酸の側鎖の構造は同一ではない。
（３）配列相同性の計算例
例えば、次のアミノ酸配列を考える。
配列Ａ ＥＱＱＮＡＦＹ
配列Ｂ ＫＥＱＱＳＡＦＹ
これを、上記した条件の下でアラインメントすると、次のようになる。ここで、配列Ａ、Ｂ間でアミノ酸（残基）の種類が一致する箇所には、見やすくするため、ホモロジー・ストリング「｜」を付けている。また、「−」はギャップである。
配列Ａ −ＥＱＱＮＡＦＹ
｜｜｜ ｜｜｜
配列Ｂ ＫＥＱＱＳＡＦＹ
このアラインメントのスコアは、一致（＋１）×６＋不一致（−１）×１＋ギャップ（−１）×１＝４である。
この例では、全ポジション数は８であり、一致ポジション数は６であるから、上記式に従って算出した配列相同性は、６／８×１００＝７５．０％である。
配列番号１で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２で示されるポリペプチド（ＫＥＱＱＮＡＦＹ，８７．５％）、配列番号５で示されるポリペプチド（ＥＧＱＮＡＦＹ，８５．７％）、配列番号９で示されるポリペプチド（ＥＱＮＡＦＹ，８５．７％）、配列番号１０で示されるポリペプチド（ＥＱＱＳＡＦＹ，８５．７％）、配列番号１６で示されるポリペプチド（ＥＡＱＱＮＡＦＹ，８７．５％）、配列番号１９で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ−ＮＨ２，１００％）（ここで、「−ＮＨ２」はＮ末端カルボキシ基のアミド化を表す。以下同じ。）、配列番号２０で示されるポリペプチド（Ａｃ−ＥＱＱＮＡＦＹＫ，８７．５％）（ここで、「Ａｃ−」はＣ末端アミノ基のアセチル化を表す。以下同じ。）、配列番号２４で示されるポリペプチド（Ｈ２Ｎ−（ｐｅｇ）８−ＥＱＱＮＡＦＹＥ，８７．５％）（ここで、「ｐｅｇ」はエチレングリコール単位を表し、「Ｈ２Ｎ−（ｐｅｇ）８−」はポリペプチド主鎖と結合する側とは反対側の末端にアミノ基を有するエチレングリコール単位８個からなるポリエチレングリコール鎖がＮ末端アミノ基に結合していることを表す。以下同じ。）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号１で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号１で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２で示されるポリペプチド、配列番号１６で示されるポリペプチド、配列番号１９で示されるポリペプチド、配列番号２０で示されるポリペプチド、配列番号２４で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号１で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１９で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号１で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２で示されるポリペプチド、配列番号１６で示されるポリペプチド、配列番号１９で示されるポリペプチド、配列番号２０で示されるポリペプチド、配列番号２４で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号１で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１９で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号２で示されるポリペプチド（ＫＥＱＱＮＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ，８７．５％）、配列番号１９で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ−ＮＨ２，８７．５％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号２で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号２で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１で示されるポリペプチド、配列番号１９で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号２で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１で示されるポリペプチド、配列番号１９で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号３で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号４で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨＬ，９１．７％）、配列番号１１で示されるポリペプチド（ＥＱＱＳＡＦＹＥＩＬＨ，９０．９％）、配列番号２１で示されるポリペプチド（Ａｃ−ＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨＫ，９１．７％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号３で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号３で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号４で示されるポリペプチド、配列番号１１で示されるポリペプチド、配列番号２１で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号３で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号４で示されるポリペプチド、配列番号１１で示されるポリペプチド、配列番号２１で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号３で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号４で示されるポリペプチド、配列番号１１で示されるポリペプチド、配列番号２１で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号３で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号４で示されるポリペプチド、配列番号１１で示されるポリペプチド、配列番号２１で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号４で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨＬ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号３で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨ，９１．７％）、配列番号２１で示されるポリペプチド（Ａｃ−ＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨＫ，９１．７％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号４で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号４で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号３で示されるポリペプチド、配列番号２１で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号４で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号３で示されるポリペプチド、配列番号２１で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号４で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号３で示されるポリペプチド、配列番号２１で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号４で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号３で示されるポリペプチド、配列番号２１で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号５で示されるポリペプチド（ＥＧＱＮＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ，８５．７％）、配列番号９で示されるポリペプチド（ＥＱＮＡＦＹ，８５．７％）、配列番号１９で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ−ＮＨ２，８５．７％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号５で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
配列番号６で示されるポリペプチド（ＫＫＫＥＱＱＮＡＦＹＫＫＫ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２２で示されるポリペプチド（Ａｃ−ＫＫＫＥＱＱＮＡＦＹＫＫＫ，１００％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号６で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号６で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２２で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号６で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２２で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号６で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２２で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号６で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２２で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号７で示されるポリペプチド（ＫＫＫＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨＫＫＫ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２３で示されるポリペプチド（Ａｃ−ＫＫＫＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨＫＫＫ，１００％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号７で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号７で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２３で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号７で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２３で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号７で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２３で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号７で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２３で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号９で示されるポリペプチド（ＥＱＮＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ，８５．７％）、配列番号５で示されるポリペプチド（ＥＧＱＮＡＦＹ，８５．７％）、１９で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ−ＮＨ２，８５．７％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号９で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
配列番号１０で示されるポリペプチド（ＥＱＱＳＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ，８５．７％）、配列番号１２で示されるポリペプチド（ＤＱＱＳＡＦＹ，８５．７％）、配列番号１４で示されるポリペプチド（ＥＡＱＱＳＡＦＹ，８７．５％）、配列番号１５で示されるポリペプチド（ＥＱＳＡＦＹ，８５．７％）、配列番号１９で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ−ＮＨ２，８５．７％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号１０で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号１０で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１４で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号１０で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１４で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号１１で示されるポリペプチド（ＥＱＱＳＡＦＹＥＩＬＨ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号３で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨ，９０．９％）、配列番号１３で示されるポリペプチド（ＤＱＱＳＡＦＹＥＩＬＨ，９０．９％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号１１で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号１１で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号３で示されるポリペプチド、配列番号１３で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号１１で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号３で示されるポリペプチド、配列番号１３で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号１１で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号３で示されるポリペプチド、配列番号１３で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号１１で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号３で示されるポリペプチド、配列番号１３で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号１２で示されるポリペプチド（ＤＱＱＳＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１０で示されるポリペプチド（ＥＱＱＳＡＦＹ，８５．７％）、配列番号１７で示されるポリペプチド（ＤＡＱＱＳＡＦＹ，８７．５％）、配列番号１８で示されるポリペプチド（ＤＱＳＡＦＹ，８５．７％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号１２で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号１２で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１７で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号１２で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１７で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号１３で示されるポリペプチド（ＤＱＱＳＡＦＹＥＩＬＨ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１１で示されるポリペプチド（ＥＱＱＳＡＦＹＥＩＬＨ，９０．９％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号１３で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号１３で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１１で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号１３で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１１で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号１３で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１１で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
さらに、配列番号１３で示されるポリペプチドに対して９０％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１１で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号１４で示されるポリペプチド（ＥＡＱＱＳＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１０で示されるポリペプチド（ＥＱＱＳＡＦＹ，８７．５％）、配列番号１６で示されるポリペプチド（ＥＡＱＱＮＡＦＹ，８７．５％）、配列番号１７で示されるポリペプチド（ＤＡＱＱＳＡＦＹ，８７．５％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号１４で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号１４で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１０で示されるポリペプチド、配列番号１６で示されるポリペプチド、配列番号１７で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号１４で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１０で示されるポリペプチド、配列番号１６で示されるポリペプチド、配列番号１７で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号１５で示されるポリペプチド（ＥＱＳＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１０で示されるポリペプチド（ＥＱＱＳＡＦＹ，８７．５％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号１５で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
配列番号１６で示されるポリペプチド（ＥＡＱＱＮＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ，８７．５％）、配列番号１４で示されるポリペプチド（ＥＡＱＱＳＡＦＹ，８７．５％）、配列番号１９で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ−ＮＨ２，８７．５％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号１６で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号１６で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１で示されるポリペプチド、配列番号１４で示されるポリペプチド、配列番号１９で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号１６で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１で示されるポリペプチド、配列番号１４で示されるポリペプチド、配列番号１９で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号１７で示されるポリペプチド（ＤＡＱＱＳＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１２で示されるポリペプチド（ＤＱＱＳＡＦＹ，８７．５％）、配列番号１４で示されるポリペプチド（ＥＡＱＱＳＡＦＹ，８７．５％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号１７で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
また、配列番号１７で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１２で示されるポリペプチド、配列番号１４で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
また、配列番号１７で示されるポリペプチドに対して８７％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１２で示されるポリペプチド、配列番号１４で示されるポリペプチドなどが挙げられる。
配列番号１８で示されるポリペプチド（ＤＱＳＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号１２で示されるポリペプチド（ＤＱＱＳＡＦＹ，８５．７％）などが挙げられる。なお、括弧内のアミノ酸配列の後に記載したパーセンテージは、配列番号１８で示されるポリペプチドに対する配列相同性を表す。
配列番号２〜４のいずれかで示されるポリペプチドと８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチドとしては、アミノ酸配列中、ＥＱＱＮＡＦＹで示される部分のアミノ酸配列に変化がないもの、またはその部分のアミノ酸配列がＥＧＱＮＡＦＹ、ＥＱＱＳＡＦＹに置換されたものが好ましく、その部分のアミノ酸配列に変化がないものが好ましい。
また、本発明は、配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、それぞれ独立に、１〜１０個のアミノ酸残基、好ましくは１〜５個のアミノ酸残基が共有結合した抗体結合性ポリペプチドを提供する。
上記１〜１０個のアミノ酸残基からなるアミノ酸またはポリペプチドは、例えば、担持材料（担体）とのリンカーとして利用できる。担体とのリンカーとしてはチオール基を持つＣｙｓ、アミノ基を持つＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄｂｕ、Ｄｐｒ、カルボキシル基を持つＧｌｕ、Ａｓｐ、水酸基を持つＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、その他、Ｈｉｓ、Ａｒｇ等が挙げられ、さらにそれらのアミノ酸残基を複数個利用することもできる。また、選択されるアミノ酸側鎖として、チオール基を持つＣｙｓ、アミノ基を持つＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄｂｕ、Ｄｐｒ，カルボキシル基を持つＧｌｕ、Ａｓｐ、水酸基を持つＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、その他、Ｈｉｓ、Ａｒｇ等が好ましく挙げられる。
上記１〜１０個のアミノ酸残基からなるリンカーがポリペプチドの主鎖または側鎖と結合する側とは反対側の末端または側鎖には、担体に固定化するための固定化官能基が導入されていてもよい。固定化官能基としては、アミノ基、カルボキシル基、水酸基、チオール基などが挙げられる。
配列番号１で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、それぞれ独立に、１〜１０個のアミノ酸残基、好ましくは１〜５個のアミノ酸残基が共有結合した抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号６で示されるポリペプチド（ＫＫＫＥＱＱＮＡＦＹＫＫＫ）が挙げられる。これは、配列番号１で示されるポリペプチドに対して１００％の配列相同性を有するポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ）のＮ末端およびＣ末端に、それぞれ、３個のアミノ酸残基からなる「ＫＫＫ」がペプチド結合したものということができる。
配列番号３で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨ）に対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、それぞれ独立に、１〜１０個のアミノ酸残基、好ましくは１〜５個のアミノ酸残基が共有結合した抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号７で示されるポリペプチド（ＫＫＫＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨＫＫＫ）が挙げられる。これは、配列番号３で示されるポリペプチドに対して１００％の配列相同性を有するポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹＥＩＬＨ）のＮ末端およびＣ末端に、それぞれ、３個のアミノ酸残基からなる「ＫＫＫ」がペプチド結合したものということができる。
また、配列番号１で示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、それぞれ独立に、１〜１０個のアミノ酸残基、好ましくは１〜５個のアミノ酸残基が共有結合した抗体結合性ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号２〜８のいずれか１つで表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含まないことが好ましく、いずれのアミノ酸配列も含まないことがより好ましい。
また、配列番号２で示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、それぞれ独立に、１〜１０個のアミノ酸残基、好ましくは１〜５個のアミノ酸残基が共有結合したポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号６または７で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含まないことが好ましい。
また、配列番号３で示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、それぞれ独立に、１〜１０個のアミノ酸残基、好ましくは１〜５個のアミノ酸残基が共有結合したポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号４または７で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含まないことが好ましい。
また、本発明は、配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、それぞれ独立に、１〜２４個のエチレングリコール単位、好ましくは４〜８個のエチレングリコール単位が共有結合した抗体結合性ポリペプチドを提供する。
上記１〜２４個のエチレングリコール単位からなるポリエチレングリコール鎖も担持材料（担体）とのリンカーとして利用できる。担体とのリンカーとして利用する場合には、ポリペプチドの主鎖または側鎖と結合する側とは反対側の末端には、担体に固定化するための固定化官能基が導入されていてもよい。固定化官能基としては、例えば、アミノ基、カルボキシル基、水酸基、チオール基などが挙げられる。
配列番号１で示されるポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹ）に対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、それぞれ独立に、１〜２４個のエチレングリコール単位、好ましくは４〜８個のエチレングリコール単位が共有結合した抗体結合性ポリペプチドとしては、例えば、配列番号２４で示されるポリペプチド（Ｈ２Ｎ−（ｐｅｇ）８−ＥＱＱＮＡＦＹＥ）が挙げられる。これは、配列番号１で示されるポリペプチドに対して８７．５％の配列相同性を有するポリペプチド（ＥＱＱＮＡＦＹＥ）のＮ末端にポリペプチドと結合する側とは反対側の末端にアミノ基を有するエチレングリコール単位８個からなるポリエチレングリコールが共有結合したものである。
さらに、本発明は、配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所が修飾された抗体結合性ポリペプチドを提供する。
修飾は、保護基を導入するものや、ポリペプチドを担体に固定化するための固定化官能基を導入するものが好ましい。例えば、Ｎ末端のアセチル化、Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）化、Ｃ末端のアミド化、エステル化などが挙げられる。さらに、担体に固定化するためのリンカーを付加してもよく、例えば、１〜２４個のエチレングリコール単位からなるポリエチレングリコール鎖の結合などが挙げられる。このポリエチレングリコール鎖のポリペプチドと結合する側とは反対側の末端は、水酸基であってもよいが、アミノ基、カルボキシル基、チオール基などの固定化官能基が導入されてもよい。
さらに、アミノ酸側鎖を修飾してもよく、特に限定されるものではないが、例えば、側鎖水酸基のリン酸化（Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ残基）、側鎖アミノ基のメチル化（Ｌｙｓ残基）、側鎖アミノ基のアセチル化（Ｌｙｓ残基）などが挙げられる。
本発明の抗体結合性ポリペプチドとしては、配列番号１〜４のいずれか１つで示されるポリペプチド、そのポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチド、そのポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所にそれぞれ１〜１０個のアミノ酸残基が共有結合したポリペプチド、またはそのポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所が修飾されたポリペプチドが好ましく、配列番号１もしくは３で示されるポリペプチド、そのポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチド、またはそのポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所にそれぞれ１〜１０個のアミノ酸残基が共有結合したポリペプチドがより好ましく、配列番号１で示されるポリペプチド、そのポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチド、またはそのポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所にそれぞれ１〜１０個のアミノ酸残基が共有結合したポリペプチドがさらに好ましい。
また、本発明の抗体結合性ポリペプチドとしては、担体に固定化するためのリンカー部分を含むものが好ましく、配列番号１〜４のいずれか１つで示されるポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所にそれぞれ１〜１０個のアミノ酸残基が共有結合したポリペプチドが好ましく、配列番号１または３で示されるポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所にそれぞれ１〜１０個のアミノ酸残基が共有結合したポリペプチドがより好ましく、配列番号６または７で示されるポリペプチドがさらに好ましい。
特に好ましくは、配列番号７で示されるポリペプチドである。
特に好ましくは、配列番号７で示されるポリペプチドである。
［抗体結合性融合ポリペプチド］
さらに、本発明は、上記抗体結合性ポリペプチドを１ドメイン単位として、そのドメイン単位２〜１０個を共有結合にて融合させた抗体結合性融合ポリペプチドを提供する。
抗体結合性融合ポリペプチドとすることにより、抗体および抗体誘導体への結合能を高めることができる。
さらに、本発明は、上記抗体結合性ポリペプチドを１ドメイン単位として、そのドメイン単位２〜１０個を共有結合にて融合させた抗体結合性融合ポリペプチドを提供する。
抗体結合性融合ポリペプチドとすることにより、抗体および抗体誘導体への結合能を高めることができる。
この抗体結合性融合ポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸残基の側鎖から選択される少なくとも１か所が修飾されていてもよい。
修飾は、保護基を導入するものや、ポリペプチドを担体に固定化するための固定化官能基を導入するものが好ましい。例えば、Ｎ末端のアセチル化、Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）化、Ｃ末端のアミド化、エステル化などが挙げられる。さらに、担体に固定化するためのリンカーを付加してもよく、例えば、１〜２４個のエチレングリコール単位からなるポリエチレングリコール鎖の結合などが挙げられる。このポリエチレングリコール鎖のポリペプチドと結合する側とは反対側の末端は、水酸基であってもよいが、アミノ基、カルボキシル基、チオール基などの固定化官能基が導入されてもよい。
さらに、アミノ酸側鎖を修飾してもよく、特に限定されるものではないが、例えば、側鎖水酸基のリン酸化（Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ残基）、側鎖アミノ基のメチル化（Ｌｙｓ残基）、側鎖アミノ基のアセチル化（Ｌｙｓ残基）などが挙げられる。
修飾は、保護基を導入するものや、ポリペプチドを担体に固定化するための固定化官能基を導入するものが好ましい。例えば、Ｎ末端のアセチル化、Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）化、Ｃ末端のアミド化、エステル化などが挙げられる。さらに、担体に固定化するためのリンカーを付加してもよく、例えば、１〜２４個のエチレングリコール単位からなるポリエチレングリコール鎖の結合などが挙げられる。このポリエチレングリコール鎖のポリペプチドと結合する側とは反対側の末端は、水酸基であってもよいが、アミノ基、カルボキシル基、チオール基などの固定化官能基が導入されてもよい。
さらに、アミノ酸側鎖を修飾してもよく、特に限定されるものではないが、例えば、側鎖水酸基のリン酸化（Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ残基）、側鎖アミノ基のメチル化（Ｌｙｓ残基）、側鎖アミノ基のアセチル化（Ｌｙｓ残基）などが挙げられる。
このような抗体結合性融合ポリペプチドとして、好ましくは、上記ドメイン単位２〜５個と、さらにドメイン単位間を連結するリンカーを含むものが挙げられる。
リンカーはポリペプチドに共有結合し、ドメイン単位間を連結することができるものであれば特に限定されないが、アミノ酸残基および／またはエチレングリコール単位からなるものが好ましい。
リンカーがアミノ酸残基（ペプチド単位）からなる場合（以下、アミノ酸残基からなるリンカーをペプチドリンカーという場合がある。）、リンカー１つあたりのアミノ酸残基数は、特に限定されないが、１〜１０個が好ましく、１〜５個がより好ましい。
また、リンカーがエチレングリコール単位からなる場合（以下、エチレングリコール単位からなるリンカーをＰＥＧリンカーという場合がある。）、リンカー１つあたりのエチレングリコール単位数は、特に限定されないが、１〜２４個が好ましく、１〜１２個がより好ましく、４個から８個がさらに好ましい。
また、リンカーがアミノ酸残基およびエチレングリコール単位からなる場合（以下、アミノ酸残基およびエチレングリコール単位からなるリンカーを複合リンカーという場合がある。）、アミノ酸残基およびエチレングリコール単位はランダムに結合していてもよいし、交互に結合していてもよいし、アミノ酸残基からなるブロックとエチレングリコール単位からなるブロックとがそれぞれ１ないし複数個連結していてもよい。リンカーがアミノ酸残基およびエチレングリコール単位からなる場合のアミノ酸残基の合計数は、特に限定されないが、１〜１０個が好ましく、１〜５個がより好ましい。また、エチレングリコール単位の合計数は、特に限定されないが、１〜２４個が好ましく、１〜１２個がより好ましく、４個から８個がさらに好ましい。
リンカーがアミノ酸残基（ペプチド単位）からなる場合（以下、アミノ酸残基からなるリンカーをペプチドリンカーという場合がある。）、リンカー１つあたりのアミノ酸残基数は、特に限定されないが、１〜１０個が好ましく、１〜５個がより好ましい。
また、リンカーがエチレングリコール単位からなる場合（以下、エチレングリコール単位からなるリンカーをＰＥＧリンカーという場合がある。）、リンカー１つあたりのエチレングリコール単位数は、特に限定されないが、１〜２４個が好ましく、１〜１２個がより好ましく、４個から８個がさらに好ましい。
また、リンカーがアミノ酸残基およびエチレングリコール単位からなる場合（以下、アミノ酸残基およびエチレングリコール単位からなるリンカーを複合リンカーという場合がある。）、アミノ酸残基およびエチレングリコール単位はランダムに結合していてもよいし、交互に結合していてもよいし、アミノ酸残基からなるブロックとエチレングリコール単位からなるブロックとがそれぞれ１ないし複数個連結していてもよい。リンカーがアミノ酸残基およびエチレングリコール単位からなる場合のアミノ酸残基の合計数は、特に限定されないが、１〜１０個が好ましく、１〜５個がより好ましい。また、エチレングリコール単位の合計数は、特に限定されないが、１〜２４個が好ましく、１〜１２個がより好ましく、４個から８個がさらに好ましい。
より具体的には、リンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチドリンカー、リンカー１つあたり１〜２４個のエチレングリコール単位からなるＰＥＧリンカー、ならびにリンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基および１〜２４個のエチレングリコール単位からなる複合リンカーからなる群から選択される少なくとも１つのリンカーが好ましく、リンカー１つあたりのアミノ酸残基数が１〜１０個のペプチドリンカーまたはリンカー１つあたりのエチレングリコール単位数１〜２４個のＰＥＧリンカーがより好ましく、リンカー１つあたりのアミノ酸残基数が１〜１０個のペプチドリンカーがさらに好ましく、リンカー１つあたりのアミノ酸残基数が１〜５個のペプチドリンカーがいっそう好ましい。
また、リンカーを２つ以上含む場合は、それぞれのリンカーのアミノ酸残基の種類および数ならびにエチレングリコール単位数は、同じであってもよいし、相違していてもよい。例えば、ペプチドリンカー、ＰＥＧリンカー、および複合リンカーからなる群から、任意に２つ以上のリンカーを選択して用いることができる。
また、リンカーに含むことができるアミノ酸残基の種類は、特に制限されないが、例えば、ＩｇＧ抗体との相互作用が少ないＧｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ等が挙げられる。リンカー１つあたり、Ｇｌｙ、ＡｌａおよびＳｅｒからなる群から選択される少なくとも１種類のアミノ酸残基を少なくとも１個含むことが好ましい。すなわち、リンカーとしては、リンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーならびにリンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基および１〜２４個のエチレングリコール単位からなる複合リンカーからなる群から選択される少なくとも１つのリンカーが好ましく、１〜１０個のアミノ酸残基がＧｌｙ、ＡｌａおよびＳｅｒからなる群から選択される少なくとも１種類を少なくとも１個含むことがより好ましい。
また、リンカーには、担体との結合性を有するアミノ酸残基含を１個または２個以上含んでもよく、例えば、チオール基を持つＣｙｓ、アミノ基を持つＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄｂｕ、Ｄｐｒ、カルボキシル基を持つＧｌｕおよびＡｓｐ、ならびに水酸基を持つＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、その他、Ｈｉｓ、Ａｒｇからなる群から選択される１個または２個以上のアミノ酸残基を含むことができる。
本発明の抗体結合性融合ポリペプチドの分子量は特に限定されるものではないが、抗原性の観点からアミノ酸残基の合計分子量が５０００以下であることが好ましく、３５００以下であることがより好ましく、３０００以下であることがさらに好ましい。
［ポリペプチドの合成方法］
本発明のポリペプチドの合成方法は特に限定されるものではないが、例えば、有機合成化学的ペプチド合成方法または遺伝子工学的ペプチド合成方法によって合成することができる。
有機合成化学的ペプチド合成方法としては、液相合成法、固相合成法のいずれも用いることができる。本発明のポリペプチドの合成方法としては、自動ペプチド合成装置を用いた固相合成法が簡便であり好ましい。
遺伝子工学的ペプチド合成方法は、細胞に遺伝子導入し、ペプチドを合成する方法である。細胞としては、細菌、線虫細胞、昆虫細胞、哺乳類細胞、動物細胞等が用いられる。
本発明のポリペプチドの合成方法は特に限定されるものではないが、例えば、有機合成化学的ペプチド合成方法または遺伝子工学的ペプチド合成方法によって合成することができる。
有機合成化学的ペプチド合成方法としては、液相合成法、固相合成法のいずれも用いることができる。本発明のポリペプチドの合成方法としては、自動ペプチド合成装置を用いた固相合成法が簡便であり好ましい。
遺伝子工学的ペプチド合成方法は、細胞に遺伝子導入し、ペプチドを合成する方法である。細胞としては、細菌、線虫細胞、昆虫細胞、哺乳類細胞、動物細胞等が用いられる。
［抗体または抗体誘導体の吸着材料］
また、本発明は、上記抗体結合性ポリペプチドまたは上記抗体結合性融合ポリペプチドを水不溶性担体に固定化した、抗体または抗体誘導体の吸着材料を提供する。さらには、本発明は、この吸着材料を用いるアフィニティクロマト用担体をも提供しうる。
また、本発明は、上記抗体結合性ポリペプチドまたは上記抗体結合性融合ポリペプチドを水不溶性担体に固定化した、抗体または抗体誘導体の吸着材料を提供する。さらには、本発明は、この吸着材料を用いるアフィニティクロマト用担体をも提供しうる。
上記水不溶性担体としては、結晶性セルロース、架橋セルロース、架橋アガロース、架橋デキストラン、架橋プルラン等の多糖類、アクリレート系重合体、スチレン系重合体などの有機担体、ガラスビーズ、シリカゲルなどの無機担体、さらにはこれらの組合せによって得られる、有機−有機、有機―無機等の複合担体などが挙げられる。水不溶性担体としては、アルカリ耐性の観点から、多糖類またはアクリレート系重合体がより好ましく、アガロースまたはセルロース等の多糖類がさらに好ましい。水不溶性担体として用いることができる市販品としては、例えば、多孔質セルロースゲルであるセルファイン（Ｃｅｌｌｕｆｉｎｅ） ＧＣＬ２０００（ＪＮＣ社製）セルファインＭＡＸ（Ｃｅｌｌｆｉｎｅ ＭＡＸ） ＣＭＪＮＣ社製）、アリルデキストランとメチレンビスアクリルアミドとを共有結合で架橋したセファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ） Ｓ−１０００ ＳＦ（ＧＥヘルスケア社製）、アクリレート系の担体であるトヨパール（ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ）（東ソー社製）、トヨパール（ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ） ＡＦ−Ｃａｒｂｏｘｙ−６５０ （東ソー社製）、トヨパール（ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ） ＧｉｇａＣａｐ ＣＭ−６５０ （東ソー社製）、アガロース系の架橋担体であるセファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ） ＣＬ４Ｂ（ＧＥヘルスケア社製）、エポキシ基で活性化されたポリメタクリルアミドであるオイパーギット（Ｅｕｐｅｒｇｉｔ） Ｃ２５０Ｌ（シグマアルドリッチ社製）などが挙げられる。ただし、本発明における水不溶性担体は、これらの担体または活性化担体にのみ限定されるものではない。また、本発明に用いる水不溶性担体は、本吸着材料の使用目的および方法からみて、表面積が大きいことが好ましく、適当な大きさの細孔を多数有する多孔質であることが好ましい。担体の形態としては、特に限定されるものではないが、ビーズ状、繊維状、膜状、中空糸状など、いずれも可能であり、任意の形態を選ぶことができる。
［担体への固定化方法］
本発明の抗体結合性ポリペプチドまたは抗体結合性融合ポリペプチドを水不溶性担体に固定化する方法は特に限定されるものではないが、一般にタンパク質またはポリペプチドを担体に固定化する場合に採用される方法を例示する。
担体を臭化シアン、エピクロロヒドリン、ジグリシジルエーテル、トシルクロライド、トレシルクロライド、ヒドラジン等と反応させて担体を活性化または担体表面に反応性官能基を導入し、リガンドとして固定化する化合物と反応、固定化する方法、また、担体とリガンドとして固定化する化合物が存在する系にカルボジイミドのような縮合試薬、またはグリセルアルデヒドのように分子中に複数の官能基を持つ試薬を加えて縮合、架橋することによる固定化が挙げられる。
本発明の抗体結合性ポリペプチドまたは抗体結合性融合ポリペプチドを水不溶性担体に固定化する方法は特に限定されるものではないが、一般にタンパク質またはポリペプチドを担体に固定化する場合に採用される方法を例示する。
担体を臭化シアン、エピクロロヒドリン、ジグリシジルエーテル、トシルクロライド、トレシルクロライド、ヒドラジン等と反応させて担体を活性化または担体表面に反応性官能基を導入し、リガンドとして固定化する化合物と反応、固定化する方法、また、担体とリガンドとして固定化する化合物が存在する系にカルボジイミドのような縮合試薬、またはグリセルアルデヒドのように分子中に複数の官能基を持つ試薬を加えて縮合、架橋することによる固定化が挙げられる。
リガンドを担体に固定化する際には、リガンドを水系溶媒（水系分散媒）または有機系溶媒（有機系分散媒）に溶解（分散）することが好ましい。水系溶媒（水系分散媒）としは、特に限定されるものではないが、例えば、ＨＥＰＥＳ緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液などを挙げることができる。有機系溶媒（有機系分散媒）は、特に限定されるものではないが、極性有機溶媒が好ましく、殊にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）やジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、アルコールが好ましく、例えば、メタノール、エタノール、２−プロパノール（ＩＰＡ，イソプロピルアルコール）、２，２，２−トリフルオロエタノール（ＴＦＥ，トリフルオロエタノール）、１，１，１，３，３，３-−ヘキサフルオロ−２−プロパノール（ＨＦＩＰ，ヘキサフルオロイソプロピルアルコール）などが挙げられる。
リガンドを固定化する際のｐＨ条件は特に限定されず、酸性、中性、アルカリ性のいずれでもよく、例えば、使用する溶媒（分散媒）に合わせて適宜設定することができる。
例えば、アルカリ性にする場合は、ジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）等の塩基をＤＭＳＯやアルコールに添加してもよい。
リガンドを固定化する際のｐＨ条件は特に限定されず、酸性、中性、アルカリ性のいずれでもよく、例えば、使用する溶媒（分散媒）に合わせて適宜設定することができる。
例えば、アルカリ性にする場合は、ジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）等の塩基をＤＭＳＯやアルコールに添加してもよい。
上記吸着材料をアフィニティクロマトグラフィー用充填剤とする場合の抗体結合性リガンド密度は特に限定されないが、０．１〜１０００ｍｍｏｌ／充填剤１Ｌが好ましく、０．１〜５００ｍｍｏｌ／充填剤１Ｌがより好ましく、１〜１００ｍｍｏｌ／充填剤１Ｌがさらに好ましい。この範囲内であると、抗体結合性リガンドの使用量と抗体精製性能のバランスがよく、より低コストで、効率よく抗体を精製することができる。
［リガンドの分子量］
また、プロテインＡ、プロテインＡのＺフラグメント等の分子量が大きな分子は抗原性を有することが知られているが、一般に、アミノ酸残基の合計分子量５０００以下、好ましくは３５００以下、より好ましくは３０００以下の、分子量が小さな分子は抗原性を発現しにくいことも知られている。本発明の抗体結合性ポリペプチドは抗原性を発現しにくく、その抗体結合性ポリペプチドを担体に固定化したリガンド固定化担体は、アフィニティクロマトグラフィー用担体として好適に用いられる。
また、プロテインＡ、プロテインＡのＺフラグメント等の分子量が大きな分子は抗原性を有することが知られているが、一般に、アミノ酸残基の合計分子量５０００以下、好ましくは３５００以下、より好ましくは３０００以下の、分子量が小さな分子は抗原性を発現しにくいことも知られている。本発明の抗体結合性ポリペプチドは抗原性を発現しにくく、その抗体結合性ポリペプチドを担体に固定化したリガンド固定化担体は、アフィニティクロマトグラフィー用担体として好適に用いられる。
［抗体結合性ポリペプチドの用途］
本発明の抗体結合性ポリペプチドの用途は、上述したアフィニティクロマトグラフィーの技術領域における抗体結合性リガンドとしての用途のみならず、イムノアッセイの技術領域においては、抗体標識用リンカーとしての用途があり、また、抗体薬物複合体の技術領域においては、抗体薬物複合体用リンカーとしての用途がある。
本発明の抗体結合性ポリペプチドの用途は、上述したアフィニティクロマトグラフィーの技術領域における抗体結合性リガンドとしての用途のみならず、イムノアッセイの技術領域においては、抗体標識用リンカーとしての用途があり、また、抗体薬物複合体の技術領域においては、抗体薬物複合体用リンカーとしての用途がある。
〈抗体標識用リンカー〉
イムノアッセイは、免疫反応（抗原抗体反応）を利用して、微量物質の検出・定量を行う分析方法であり、特異性が高く高感度であるという特徴を持つ。
イムノアッセイにおいて、微量物質（抗原）に結合した抗体（一次抗体）を検出するには、一次抗体に直接標識する方法、一次抗体に結合する抗体（二次抗体）に標識する方法などがある。本発明の抗体結合性ポリペプチドは、一次抗体に標識物質を結合させるためのリンカーとして用いることができるし、二次抗体に標識物質を結合させるためのリンカーとして用いることもできる。本発明の抗体結合性ポリペプチドは抗体結合性（ＩｇＧ結合性）を有するので、標識した本発明の抗体結合性ポリペプチドを、標識した二次抗体の代わりに用いることも可能である。
また、標識には多種あり、ラジオアイソトープを標識として用いる系を放射免疫測定法（ＲＩＡ；radio immunoassay）、ペルオキシダーゼ等の酵素を標識として用いる系を酵素免疫測定法（ＥＩＡ；enzyme immunoassay）、ルミノール等の化学発光物質を標識として用いる系を化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ；chemiluminescentimmunoassay）、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ；fluorescein isothiocyanate）等の蛍光発光物質（蛍光色素）を標識物質として用いる系を蛍光免疫測定法（ＦＩＡ；fluorescent immunoassay）という。本発明の抗体結合性ポリペプチドは、いずれの系においても、抗体標識用リンカーとして使用することができる。
イムノアッセイの検出感度を上げるためには、抗体１分子に多数の標識を付けることが必要であるが、従来の抗体標識用リンカーでは、多数結合した際に抗体の結合活性の低下を招き、かえってイムノアッセイの利点である特異性および感度を損なう可能性があった。しかし、本発明の抗体結合性ポリペプチドは、抗体に多数結合した場合であっても、抗体の構造的完全性を保持することができ、抗体の結合活性を低下させないので、多数結合した際にも、イムノアッセイの利点である特異性および感度を損なわず、検出感度を上げることが期待される。
イムノアッセイは、免疫反応（抗原抗体反応）を利用して、微量物質の検出・定量を行う分析方法であり、特異性が高く高感度であるという特徴を持つ。
イムノアッセイにおいて、微量物質（抗原）に結合した抗体（一次抗体）を検出するには、一次抗体に直接標識する方法、一次抗体に結合する抗体（二次抗体）に標識する方法などがある。本発明の抗体結合性ポリペプチドは、一次抗体に標識物質を結合させるためのリンカーとして用いることができるし、二次抗体に標識物質を結合させるためのリンカーとして用いることもできる。本発明の抗体結合性ポリペプチドは抗体結合性（ＩｇＧ結合性）を有するので、標識した本発明の抗体結合性ポリペプチドを、標識した二次抗体の代わりに用いることも可能である。
また、標識には多種あり、ラジオアイソトープを標識として用いる系を放射免疫測定法（ＲＩＡ；radio immunoassay）、ペルオキシダーゼ等の酵素を標識として用いる系を酵素免疫測定法（ＥＩＡ；enzyme immunoassay）、ルミノール等の化学発光物質を標識として用いる系を化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ；chemiluminescentimmunoassay）、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ；fluorescein isothiocyanate）等の蛍光発光物質（蛍光色素）を標識物質として用いる系を蛍光免疫測定法（ＦＩＡ；fluorescent immunoassay）という。本発明の抗体結合性ポリペプチドは、いずれの系においても、抗体標識用リンカーとして使用することができる。
イムノアッセイの検出感度を上げるためには、抗体１分子に多数の標識を付けることが必要であるが、従来の抗体標識用リンカーでは、多数結合した際に抗体の結合活性の低下を招き、かえってイムノアッセイの利点である特異性および感度を損なう可能性があった。しかし、本発明の抗体結合性ポリペプチドは、抗体に多数結合した場合であっても、抗体の構造的完全性を保持することができ、抗体の結合活性を低下させないので、多数結合した際にも、イムノアッセイの利点である特異性および感度を損なわず、検出感度を上げることが期待される。
〈抗体薬物複合体用リンカー〉
抗体薬物複合体（ＡＤＣ；Antibody Drug Conjugate）は、別名、武装抗体（Armed Antibody）とも呼ばれ、細胞を認識する抗体と活性本体である薬物（低分子薬物）とを、適切なリンカーで結合した医薬である。抗体薬物複合体の作用機序は、概ね、以下のとおりである。
(1)標的細胞表面の標的分子に抗体薬物複合体の抗体部分が結合する。
(2)抗体薬物複合体が細胞内に取り込まれる。
(3)細胞内で抗体薬物複合体のリンカーが切断される。
(4)細胞内で薬物（低分子薬物）の薬効が発揮される。
抗体薬物複合体では、抗体が標的とする分子が発現している細胞でのみ薬効が発揮されるため、全身の副作用を抑え、標的細胞に集中して薬効を発揮できるため、薬物単体に比べて、よく効き、副作用が少ない。例えば、細胞分裂が盛んながん細胞を攻撃することを目的として開発された抗がん剤は、同様に盛んな細胞分裂で機能を維持している細胞、具体的には、免疫を担当する細胞、消化管の細胞、毛根の細胞なども攻撃してしまうため、副作用として、感染症に弱くなり、下痢を起こし、頭髪が抜け落ちるなどの症状が現れることがある。しかし、抗体薬物複合体では、標的のがん細胞に選択的に抗がん剤を運搬することができるので、抗がん剤が標的細胞以外の細胞を攻撃することによる副作用を抑えることができる。
抗体薬物複合体用リンカーは、抗体薬物複合体の抗体部分と薬物部分とをつなぎ、血中では安定し、細胞内で抗体と薬物を切断して放出することが要求されるだけではなく、抗体の結合活性を損なわないことも要求される。薬物の運搬効率を上げるためには、抗体１分子に多数の薬物を付けることが必要であるが、従来の抗体薬物複合体用リンカーでは、多数結合した際に抗体の結合活性の低下を招き、かえって抗体薬物複合体の利点である選択性を損ない、標的細胞への薬物運搬効率が低下する可能性があった。しかし、本発明の抗体結合性ポリペプチドは、抗体に多数結合した場合であっても、抗体の構造的完全性を保持することができ、抗体の結合活性を低下させないので、多数結合した際にも、抗体薬物複合体の利点である選択性を損なわず、標的細胞への薬物運搬効率を上げることが期待される。
抗体薬物複合体（ＡＤＣ；Antibody Drug Conjugate）は、別名、武装抗体（Armed Antibody）とも呼ばれ、細胞を認識する抗体と活性本体である薬物（低分子薬物）とを、適切なリンカーで結合した医薬である。抗体薬物複合体の作用機序は、概ね、以下のとおりである。
(1)標的細胞表面の標的分子に抗体薬物複合体の抗体部分が結合する。
(2)抗体薬物複合体が細胞内に取り込まれる。
(3)細胞内で抗体薬物複合体のリンカーが切断される。
(4)細胞内で薬物（低分子薬物）の薬効が発揮される。
抗体薬物複合体では、抗体が標的とする分子が発現している細胞でのみ薬効が発揮されるため、全身の副作用を抑え、標的細胞に集中して薬効を発揮できるため、薬物単体に比べて、よく効き、副作用が少ない。例えば、細胞分裂が盛んながん細胞を攻撃することを目的として開発された抗がん剤は、同様に盛んな細胞分裂で機能を維持している細胞、具体的には、免疫を担当する細胞、消化管の細胞、毛根の細胞なども攻撃してしまうため、副作用として、感染症に弱くなり、下痢を起こし、頭髪が抜け落ちるなどの症状が現れることがある。しかし、抗体薬物複合体では、標的のがん細胞に選択的に抗がん剤を運搬することができるので、抗がん剤が標的細胞以外の細胞を攻撃することによる副作用を抑えることができる。
抗体薬物複合体用リンカーは、抗体薬物複合体の抗体部分と薬物部分とをつなぎ、血中では安定し、細胞内で抗体と薬物を切断して放出することが要求されるだけではなく、抗体の結合活性を損なわないことも要求される。薬物の運搬効率を上げるためには、抗体１分子に多数の薬物を付けることが必要であるが、従来の抗体薬物複合体用リンカーでは、多数結合した際に抗体の結合活性の低下を招き、かえって抗体薬物複合体の利点である選択性を損ない、標的細胞への薬物運搬効率が低下する可能性があった。しかし、本発明の抗体結合性ポリペプチドは、抗体に多数結合した場合であっても、抗体の構造的完全性を保持することができ、抗体の結合活性を低下させないので、多数結合した際にも、抗体薬物複合体の利点である選択性を損なわず、標的細胞への薬物運搬効率を上げることが期待される。
以下に実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
［ポリペプチドの合成］
表２に示す配列番号１から配列番号２０までのポリペプチドまたは融合ポリペプチドを、全自動ペプチド合成装置（ＰＳＳＭ−８、島津製作所社製）により合成した。
表２に示す配列番号１から配列番号２０までのポリペプチドまたは融合ポリペプチドを、全自動ペプチド合成装置（ＰＳＳＭ−８、島津製作所社製）により合成した。
［実施例１］
（１）リガンドの固定
ＧＥヘルスケア社製の表面プラズモン共鳴装置であるＢｉａｃｏｒｅ３０００に市販のＣＭ５（カルボキシメチルデキストラン導入タイプ、ＧＥヘルスケア社製））センサーチップをセットし、ＳＰＲ（表面プラズモン）用ＨＥＰＥＳ緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）を１０μＬ／ｍｉｎの流速で安定させ、０．２ＭのＥＤＣ（１−エチル―３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、和光純薬工業（株）製）と０．０４ＭのＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、和光純薬工業（株）製）混合水溶液を７０μＬ添加した。その後、上記ＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈し、０．２０μｍ径のＰＴＦＥフィルター（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）で処理したポリペプチド１の試料液５００μＬを担体試料に供給し、その後、エタノールアミン溶液によってブロッキング処理を施し、水酸化ナトリウム水溶液にて洗浄して、固定化を行い、固定化担体を製造した。この固定化担体を、以下「固定化担体Ａ」という。
（１）リガンドの固定
ＧＥヘルスケア社製の表面プラズモン共鳴装置であるＢｉａｃｏｒｅ３０００に市販のＣＭ５（カルボキシメチルデキストラン導入タイプ、ＧＥヘルスケア社製））センサーチップをセットし、ＳＰＲ（表面プラズモン）用ＨＥＰＥＳ緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）を１０μＬ／ｍｉｎの流速で安定させ、０．２ＭのＥＤＣ（１−エチル―３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、和光純薬工業（株）製）と０．０４ＭのＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、和光純薬工業（株）製）混合水溶液を７０μＬ添加した。その後、上記ＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈し、０．２０μｍ径のＰＴＦＥフィルター（ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）で処理したポリペプチド１の試料液５００μＬを担体試料に供給し、その後、エタノールアミン溶液によってブロッキング処理を施し、水酸化ナトリウム水溶液にて洗浄して、固定化を行い、固定化担体を製造した。この固定化担体を、以下「固定化担体Ａ」という。
（２）抗体結合性の評価
上記（１）で製造した固体化担体Ａに、１０〜３０００ｎＭのヒトＩｇＧ抗体を１０分間添加し、ＨＥＰＥＳ緩衝液中での２５℃での解離を測定し、結合反応曲線から抗体の結合速度Ｋｏｎ［ｎＭ／ｓ］および解離速度Ｋｏｆｆ［１／ｓ］を算出し、さらに、ポリペプチド１とヒトＩｇＧ抗体の結合反応における解離定数Ｋｄ［ｎＭ］を算出した。
（抗体結合性の評価基準）
解離定数（Ｋｄ）が１００ｎＭ以下・・・・・・・・・・・・Ａ
解離定数（Ｋｄ）が１００ｎＭ超、３００ｎＭ以下・・・・・Ｂ
解離定数（Ｋｄ）が３００ｎＭ超、５００ｎＭ以下・・・・・Ｃ
解離定数（Ｋｄ）が５００ｎＭ超、１０００ｎＭ以下・・・・Ｄ
解離定数（Ｋｄ）が１０００ｎＭ超・・・・・・・・・・・・Ｅ
評価結果を表２の該当欄に示す。
評価ＡおよびＢはリガンドがアフィニティクロマト担体用リガンドとして十分な抗体結合性を有することを表し、評価Ｃ、ＤおよびＥは十分な抗体結合性を有しないことを表す。十分な抗体結合性を有するリガンドを用いることにより、回収効率が高くなり、より効率的に抗体を精製することが可能となり、抗体の精製コストをより低減することができる。
なお、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ４．１（フィッティングソフト、ＧＥヘルスケア社製）を用いてフィッティングを行い、算出した解離速度Ｋｏｆｆ＝１．７×１０−４［１／ｓ］であった。
上記（１）で製造した固体化担体Ａに、１０〜３０００ｎＭのヒトＩｇＧ抗体を１０分間添加し、ＨＥＰＥＳ緩衝液中での２５℃での解離を測定し、結合反応曲線から抗体の結合速度Ｋｏｎ［ｎＭ／ｓ］および解離速度Ｋｏｆｆ［１／ｓ］を算出し、さらに、ポリペプチド１とヒトＩｇＧ抗体の結合反応における解離定数Ｋｄ［ｎＭ］を算出した。
（抗体結合性の評価基準）
解離定数（Ｋｄ）が１００ｎＭ以下・・・・・・・・・・・・Ａ
解離定数（Ｋｄ）が１００ｎＭ超、３００ｎＭ以下・・・・・Ｂ
解離定数（Ｋｄ）が３００ｎＭ超、５００ｎＭ以下・・・・・Ｃ
解離定数（Ｋｄ）が５００ｎＭ超、１０００ｎＭ以下・・・・Ｄ
解離定数（Ｋｄ）が１０００ｎＭ超・・・・・・・・・・・・Ｅ
評価結果を表２の該当欄に示す。
評価ＡおよびＢはリガンドがアフィニティクロマト担体用リガンドとして十分な抗体結合性を有することを表し、評価Ｃ、ＤおよびＥは十分な抗体結合性を有しないことを表す。十分な抗体結合性を有するリガンドを用いることにより、回収効率が高くなり、より効率的に抗体を精製することが可能となり、抗体の精製コストをより低減することができる。
なお、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ４．１（フィッティングソフト、ＧＥヘルスケア社製）を用いてフィッティングを行い、算出した解離速度Ｋｏｆｆ＝１．７×１０−４［１／ｓ］であった。
（３）選択性の評価
上記（１）で製造した固体化担体Ａに、２５℃にて１０００ｎＭのＢＳＡ（Bovine Serum Albumin（牛血清アルブミン），シグマアルドリッチ社製）を１０分間添加し、ＨＥＰＥＳ緩衝液中での１０分間後の結合量をＳＰＲにて測定した。
（選択性の評価基準）
ＢＳＡと結合しなかった・・・・・・・Ａ
ＢＳＡと結合したことを確認した・・・Ｄ
評価結果を表２の該当欄に示す。
評価Ａはリガンドがアフィニティクロマト担体用リガンドとして十分な選択性を有することを表し、評価Ｄは十分な選択性を有しないことを表す。十分な選択性を有するリガンドを用いることにより、目的の抗体以外のタンパク質がリガンドに結合する可能性が低くなり、より高度に精製された抗体を得ることができる。
上記（１）で製造した固体化担体Ａに、２５℃にて１０００ｎＭのＢＳＡ（Bovine Serum Albumin（牛血清アルブミン），シグマアルドリッチ社製）を１０分間添加し、ＨＥＰＥＳ緩衝液中での１０分間後の結合量をＳＰＲにて測定した。
（選択性の評価基準）
ＢＳＡと結合しなかった・・・・・・・Ａ
ＢＳＡと結合したことを確認した・・・Ｄ
評価結果を表２の該当欄に示す。
評価Ａはリガンドがアフィニティクロマト担体用リガンドとして十分な選択性を有することを表し、評価Ｄは十分な選択性を有しないことを表す。十分な選択性を有するリガンドを用いることにより、目的の抗体以外のタンパク質がリガンドに結合する可能性が低くなり、より高度に精製された抗体を得ることができる。
（４）アルカリ耐性の評価
合成したポリペプチド１を１Ｎ ＮａＯＨに室温にて１時間浸漬し、その後上記（１）のようにリガンドを固定化して製造した固定化担体Ａの抗体結合量が変化していないかＳＰＲにて評価した。
（アルカリ耐性の評価基準）
抗体結合量が変化しなかった・・・・・Ａ
抗体結合量が低下した・・・・・・・・Ｄ
評価結果を表２の該当欄に示す。
評価Ａはリガンドがアフィニティクロマト担体用リガンドとして十分なアルカリ耐性を有することを表し、評価Ｄは十分なアルカリ耐性を有しないことを表す。十分なアルカリ耐性を有するリガンドを用いることにより、アフィニティクロマト用担体を繰り返し洗浄して用いることができるため、抗体の精製コストを低減することができる。
合成したポリペプチド１を１Ｎ ＮａＯＨに室温にて１時間浸漬し、その後上記（１）のようにリガンドを固定化して製造した固定化担体Ａの抗体結合量が変化していないかＳＰＲにて評価した。
（アルカリ耐性の評価基準）
抗体結合量が変化しなかった・・・・・Ａ
抗体結合量が低下した・・・・・・・・Ｄ
評価結果を表２の該当欄に示す。
評価Ａはリガンドがアフィニティクロマト担体用リガンドとして十分なアルカリ耐性を有することを表し、評価Ｄは十分なアルカリ耐性を有しないことを表す。十分なアルカリ耐性を有するリガンドを用いることにより、アフィニティクロマト用担体を繰り返し洗浄して用いることができるため、抗体の精製コストを低減することができる。
（５）経時安定性の評価
合成したポリペプチド１の溶液を恒温層（４０℃）にて１ヶ月保管した後、上記（１）のようにリガンドを固定化して製造した固定化担体Ａの抗体結合量が変化していないかＳＰＲにて評価した。
（経時安定性の評価基準）
抗体結合量が変化しなかった・・・・・Ａ
抗体結合量が低下した・・・・・・・・Ｄ
評価Ａはリガンドがアフィニティクロマト担体用リガンドとして十分な経時安定性を有することを表し、評価Ｄは十分な経時安定性を有しないことを表す。十分な経時安定性を有するリガンドを用いることにより、アフィニティクロマト用担体を室温条件下にて保管し、繰り返し用いることができるため、抗体の精製コストを低減することができる。
合成したポリペプチド１の溶液を恒温層（４０℃）にて１ヶ月保管した後、上記（１）のようにリガンドを固定化して製造した固定化担体Ａの抗体結合量が変化していないかＳＰＲにて評価した。
（経時安定性の評価基準）
抗体結合量が変化しなかった・・・・・Ａ
抗体結合量が低下した・・・・・・・・Ｄ
評価Ａはリガンドがアフィニティクロマト担体用リガンドとして十分な経時安定性を有することを表し、評価Ｄは十分な経時安定性を有しないことを表す。十分な経時安定性を有するリガンドを用いることにより、アフィニティクロマト用担体を室温条件下にて保管し、繰り返し用いることができるため、抗体の精製コストを低減することができる。
［実施例２］
（１）リガンドとして、配列番号２によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｂ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｂを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．３×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号２によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｂ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｂを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．３×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例３］
（１）リガンドとして、配列番号３によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｃ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｃを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．７×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号３によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｃ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｃを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．７×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例４］
（１）リガンドとして、配列番号４によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｄ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｄを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．３×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号４によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｄ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｄを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．３×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例５］
（１）リガンドとして、配列番号５によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｅ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｅを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝２．０×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号５によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｅ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｅを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝２．０×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例６］
（１）リガンドとして、配列番号６によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｆ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｆを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号６によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｆ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｆを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例７］
（１）リガンドとして、配列番号７によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｇ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｇを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．６×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号７によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｇ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｇを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．６×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例８］
（１）リガンドとして、配列番号８によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｈ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｈを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号８によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｈ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｈを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例９］
（１）リガンドとして、配列番号９によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｉ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｉを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．７×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号９によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｉ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｉを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．７×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例１０］
（１）リガンドとして、配列番号１０によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｊ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｊを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号１０によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｊ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｊを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例１１］
（１）リガンドとして、配列番号１１によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｋ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｋを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．８×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号１１によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｋ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｋを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．８×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例１２］
（１）リガンドとして、配列番号１２によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｌ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｌを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号１２によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｌ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｌを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例１３］
（１）リガンドとして、配列番号１３によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｍ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｍを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号１３によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｍ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｍを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例１４］
（１）リガンドとして、配列番号１４によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｎ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｎを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．４×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号１４によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｎ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｎを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．４×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例１５］
（１）リガンドとして、配列番号１５によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｏ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｏを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．４×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号１５によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｏ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｏを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．４×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例１６］
（１）リガンドとして、配列番号１６によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｐ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｐを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．９×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号１６によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｐ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｐを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．９×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例１７］
（１）リガンドとして、配列番号１７によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｑ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｑを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．３×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号１７によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｑ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｑを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．３×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例１８］
（１）リガンドとして、配列番号１８によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｒ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｒを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．９×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号１８によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｒ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｒを用いて、実施例１と同様にして、抗体結合性、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．９×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例１９］
（１）リガンドとして、表２の実施例１９のリガンドの欄に示す１次構造のポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｓ」を製造した。
表２の実施例１９のリガンドの欄において、１次構造のＣ末端の「−ＮＨ２」は、Ｃ末端のチロシン残基のカルボキシ基がアミド化されていることを示す。
（２）製造した固定化担体Ｓを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、表２の実施例１９のリガンドの欄に示す１次構造のポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｓ」を製造した。
表２の実施例１９のリガンドの欄において、１次構造のＣ末端の「−ＮＨ２」は、Ｃ末端のチロシン残基のカルボキシ基がアミド化されていることを示す。
（２）製造した固定化担体Ｓを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例２０］
（１）リガンドとして、表２の実施例２０のリガンドの欄に示す１次構造のポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｔ」を製造した。
表２の実施例２０のリガンドの欄において、１次構造のＮ末端の「Ａｃ−」は、Ｎ末端のグルタミン残基のα位炭素に結合したアミノ基がアセチル化されていることを示す。
（２）製造した固定化担体Ｔを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．４×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、表２の実施例２０のリガンドの欄に示す１次構造のポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｔ」を製造した。
表２の実施例２０のリガンドの欄において、１次構造のＮ末端の「Ａｃ−」は、Ｎ末端のグルタミン残基のα位炭素に結合したアミノ基がアセチル化されていることを示す。
（２）製造した固定化担体Ｔを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．４×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例２１］
（１）リガンドとして、表２の実施例２１のリガンドの欄に示す１次構造のポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｕ」を製造した。
表２の実施例２１のリガンドの欄において、１次構造のＮ末端の「Ａｃ−」は、Ｎ末端のグルタミン残基のα位炭素に結合したアミノ基がアセチル化されていることを示す。
（２）製造した固定化担体Ｕを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．６×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、表２の実施例２１のリガンドの欄に示す１次構造のポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｕ」を製造した。
表２の実施例２１のリガンドの欄において、１次構造のＮ末端の「Ａｃ−」は、Ｎ末端のグルタミン残基のα位炭素に結合したアミノ基がアセチル化されていることを示す。
（２）製造した固定化担体Ｕを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．６×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例２２］
（１）リガンドとして、表２の実施例２２のリガンドの欄に示す１次構造のポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｖ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｖを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、表２の実施例２２のリガンドの欄に示す１次構造のポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｖ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｖを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．５×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例２３］
（１）リガンドとして、表２の実施例２３のリガンドの欄に示す１次構造のポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｗ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｗを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．６×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、表２の実施例２３のリガンドの欄に示す１次構造のポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ４．０の酢酸緩衝液にて２５μＭに希釈した試料液５０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｗ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｗを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．６×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例２４］
（１）リガンドとして、表２の実施例２４のリガンドの欄に示す１次構造のポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｘ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｘを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．３×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、表２の実施例２４のリガンドの欄に示す１次構造のポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｘ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｘを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．３×１０−４［１／ｓ］であった。
［実施例２５］
（１）リガンドとして、表２の実施例２５のリガンドの欄に示す１次構造の融合ポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｙ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｙを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．９×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、表２の実施例２５のリガンドの欄に示す１次構造の融合ポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｙ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｙを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝１．９×１０−４［１／ｓ］であった。
［比較例１］
（１）リガンドとして、野生型プロテインＡ（ＲｅｐｌｉＧｅｎ社製）を配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ５．０の酢酸緩衝液にて５０ｎＭに希釈した試料液１０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｚ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｚを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝２．５×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、野生型プロテインＡ（ＲｅｐｌｉＧｅｎ社製）を配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ５．０の酢酸緩衝液にて５０ｎＭに希釈した試料液１０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体Ｚ」を製造した。
（２）製造した固定化担体Ｚを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝２．５×１０−４［１／ｓ］であった。
［比較例２］
（１）リガンドとして、改変型プロテインＡ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社製）を配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ５．０の酢酸緩衝液にて１００ｎＭに希釈した試料液１０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体ＡＡ」を製造した。
（２）製造した固定化担体ＡＡを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝３．２×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、改変型プロテインＡ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社製）を配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたこと、およびｐＨ５．０の酢酸緩衝液にて１００ｎＭに希釈した試料液１０μＬをＨＥＰＥＳ緩衝液にて１００μＭに希釈した試料液５００μＬの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体ＡＡ」を製造した。
（２）製造した固定化担体ＡＡを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝３．２×１０−４［１／ｓ］であった。
［比較例３］
（１）リガンドとして、非特許文献１記載の合成方法に従って合成した低分子化合物ＡｐＡ（下記化学式）を配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体ＡＢ」を製造した。
（１）リガンドとして、非特許文献１記載の合成方法に従って合成した低分子化合物ＡｐＡ（下記化学式）を配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体ＡＢ」を製造した。
（２）製造した固定化担体ＡＢを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝６．５×１０−４［１／ｓ］であった。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝６．５×１０−４［１／ｓ］であった。
［比較例４］
（１）リガンドとして、配列番号２６によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体ＡＣ」を製造した。
（２）製造した固定化担体ＡＣを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝２．４×１０−４［１／ｓ］であった。
（１）リガンドとして、配列番号２６によって示されるポリペプチドを配列番号１によって示されるポリペプチドの代わりに用いたことを除いて、実施例１と同様にして、「固定化担体ＡＣ」を製造した。
（２）製造した固定化担体ＡＣを用いて、実施例１と同様にして、解離定数、選択性、アルカリ耐性、および経時安定性を評価した。評価結果を表２の該当欄に示す。
なお、解離速度Ｋｏｆｆ＝２．４×１０−４［１／ｓ］であった。
以上の結果から、実施例１〜２５の抗体結合性ポリペプチドは、いずれも、天然型プロテインＡに遜色のない抗体結合性および選択性を有するとともに、天然型プロテインＡおよび改変型プロテインＡに比べて優れたアルカリ耐性、経時安定性を有することが示された。
また、天然型プロテインＡおよび改変型プロテインＡはいずれも抗原性を有するが、本発明の抗体結合性ポリペプチドは抗原性を有しないため、アフィニティクロマト精製用のリガンドとして用いた場合に、精製抗体に混入したとしても、人体に対する安全性が高い。
また、実施例１〜２５の抗体結合性ポリペプチドと比較例４のポリペプチド（ＱＱＮＡＦＹＥ）とを対比すると、比較例４のポリペプチドは抗体結合性および選択性が不十分であり、要求される水準に達していなかった。
また、天然型プロテインＡおよび改変型プロテインＡはいずれも抗原性を有するが、本発明の抗体結合性ポリペプチドは抗原性を有しないため、アフィニティクロマト精製用のリガンドとして用いた場合に、精製抗体に混入したとしても、人体に対する安全性が高い。
また、実施例１〜２５の抗体結合性ポリペプチドと比較例４のポリペプチド（ＱＱＮＡＦＹＥ）とを対比すると、比較例４のポリペプチドは抗体結合性および選択性が不十分であり、要求される水準に達していなかった。
本発明の抗体結合性ポリペプチドおよび吸着材料は、抗体医薬品の精製部材として有用である。また、本発明の抗体結合性ポリペプチドは、抗体標識用リンカー、または抗体薬物複合体用リンカーとしても有用である。
Claims (13)
- 配列番号１〜１８のいずれか１つで示される抗体結合性ポリペプチド。
- 配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有する抗体結合性ポリペプチド。
- 配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、１〜１０個のアミノ酸残基が共有結合した抗体結合性ポリペプチド。
- 配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所に、１〜２４個のエチレングリコール単位が共有結合した抗体結合性ポリペプチド。
- 配列番号１〜１８のいずれか１つで示されるポリペプチドに対して８５％以上の配列相同性を有するポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸側鎖から選択される少なくとも１か所が修飾された抗体結合性ポリペプチド。
- 請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体結合性ポリペプチドを１ドメイン単位として、前記ドメイン単位２〜１０個を共有結合にて融合させた抗体結合性融合ポリペプチド。
- 請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体結合性ポリペプチドを１ドメイン単位として、前記ドメイン単位２〜１０個を共有結合にて融合させた抗体結合性融合ポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端およびアミノ酸残基の側鎖から選択される少なくとも１か所が修飾された抗体結合性融合ポリペプチド。
- 前記抗体結合性融合ポリペプチドが、前記ドメイン単位２〜５個と、さらに前記ドメイン単位間を連結するリンカーとを含む、請求項６または７に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
- 前記リンカーが、リンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチドリンカー、リンカー１つあたり１〜２４個のエチレングリコール単位からなるＰＥＧリンカー、ならびにリンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基および１〜２４個のエチレングリコール単位からなる複合リンカーからなる群から選択される少なくとも１つのリンカーである、請求項８に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
- 前記リンカーが、リンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーならびにリンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基および１〜２４個のエチレングリコール単位からなる複合リンカーからなる群から選択される少なくとも１つのリンカーであり、前記１〜１０個のアミノ酸残基がＧｌｙ、ＡｌａおよびＳｅｒからなる群から選択される少なくとも１種類を少なくとも１個含む、請求項９に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
- 前記リンカーが、リンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーならびにリンカー１つあたり１〜１０個のアミノ酸残基および１〜２４個のエチレングリコール単位からなる複合リンカーからなる群から選択される少なくとも１つのリンカーであり、前記１〜１０個のアミノ酸残基がＬｙｓ、ＯｒｎおよびＣｙｓからなる群から選択される少なくとも１種類を少なくとも１個含む、請求項９に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
- 前記ドメイン単位および前記リンカーに含まれるアミノ酸残基の合計分子量が５０００以下である、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の抗体結合性融合ポリペプチド。
- 請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体結合性ポリペプチドまたは請求項６〜１２のいずれか１項に記載の抗体結合性融合ポリペプチドを水不溶性担体に固体化した、抗体または抗体誘導体の吸着材料。
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