JPWO2016009809A1 - 遺伝子発現制御のための発現抑制核酸分子およびその用途 - Google Patents
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Abstract
Description
X領域とY領域とが連結した一本鎖核酸であり、
前記X領域は、
発現抑制配列であり、
前記Y領域に対する連結側領域(XB)および非連結側領域(XF)からなり、
前記連結側領域(XB)は、その領域内でステムループ構造またはステム構造を形成する配列であり、
前記非連結側領域(XF)は、前記Y領域と、分子内アニーリングするアニーリング配列を含むことを特徴とする。
本発明の発現抑制核酸分子は、前述のように、標的遺伝子の発現抑制核酸分子であって、
X領域とY領域とが連結した一本鎖核酸であり、
前記X領域は、
発現抑制配列であり、
前記Y領域に対する連結側領域(XB)および非連結側領域(XF)からなり、
前記連結側領域(XB)は、その領域内でステムループ構造またはステム構造を形成する配列であり、
前記非連結側領域(XF)は、前記Y領域と、分子内アニーリングするアニーリング配列を含むことを特徴とする。
本発明の発現抑制用組成物は、前述のように、標的遺伝子の発現を抑制するための組成物であって、前記本発明の発現抑制核酸分子を含むことを特徴とする。本発明の組成物は、前記本発明の発現抑制核酸分子を含むことが特徴であり、その他の構成は、何ら制限されない。本発明の発現抑制用組成物は、例えば、発現抑制用試薬ということもできる。
本発明の発現抑制方法は、前述のように、標的遺伝子の発現を抑制する方法であって、前記本発明の発現抑制核酸分子を使用することを特徴とする。本発明の発現抑制方法は、前記本発明の発現抑制核酸分子を使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。
本発明の疾患の治療方法は、前述のように、前記本発明の発現抑制核酸分子を、患者に投与する工程を含むことを特徴とする。本発明の治療方法は、前記本発明の発現抑制核酸分子を使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。
本発明の使用は、前記標的遺伝子の発現抑制のための、前記本発明の発現抑制核酸分子の使用である。
ルシフェラーゼ遺伝子を標的遺伝子とする発現抑制核酸分子(以下、「核酸分子」ともいう。)を合成し、ルシフェラーゼの発現抑制を確認した。
ルシフェラーゼ遺伝子の配列から、ステムループ構造を形成する19塩基長の領域を複数選択して、これらを発現抑制配列(#1、#2、#3、#4、#6)とした。
前記核酸分子を、ヒト非小細胞性肺がん細胞株(NCI―H1299)に導入し、ルシフェラーゼ mRNAの検出を行った。
5’-CGATTTTGTGCCAGAGTCCT-3’ (配列番号16)
5’-AATCTCACGCAGGCAGTTCT-3’ (配列番号17)
GAPDH プライマーセット
5’-ATGGGGAAGGTGAAGGTCG-3’ (配列番号18)
5’-GGGTCATTGATGGCAACAATATC-3’ (配列番号19)
ルシフェラーゼ遺伝子を標的遺伝子とする発現抑制核酸分子を合成し、ルシフェラーゼタンパク質の発現抑制を確認した。
S鎖: 5’-UACUAUUCGACACGCGAAGTT-3’(配列番号20)
AS鎖:5’-CUUCGCGUGUCGAAUAGUATT-3’(配列番号21)
ヒトKRAS遺伝子を標的遺伝子とする発現抑制核酸分子を合成し、KRAS遺伝子の発現抑制を確認した。
KRAS遺伝子の配列から、ステムループ構造を形成する19塩基長の領域を1つ選択して、これらを発現抑制配列とした。
前記核酸分子を、活性型ヒトKRAS(KRAS G12S)を有するA549細胞に導入し、KRAS mRNAの検出を行った。
5’-GGGGAGGGCTTTCTTTGTGTA-3’ (配列番号23)
5’-GTCCTGAGCCTGTTTTGTGTC-3’ (配列番号24)
Claims (21)
- X領域とY領域とが連結した一本鎖核酸であり、
前記X領域は、
発現抑制配列であり、
前記Y領域に対する連結側領域(XB)および非連結側領域(XF)からなり、
前記連結側領域(XB)は、その領域内でステムループ構造またはステム構造を形成する配列であり、
前記非連結側領域(XF)は、前記Y領域と、分子内アニーリングするアニーリング配列を含むことを特徴とする、標的遺伝子の発現抑制核酸分子。 - 5’側に前記X領域が配置され、3’側に前記Y領域が配置されている、請求項1記載の発現抑制核酸分子。
- 前記X領域における前記連結側領域(XB)は、5〜23塩基長である、請求項1または2記載の発現抑制核酸分子。
- 前記連結側領域(XB)において、ステムの長さが0〜10塩基長である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の発現抑制核酸分子。
- 前記連結側領域(XB)において、ループの長さが、3〜21塩基長である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の発現抑制核酸分子。
- 前記非連結側領域(XF)において、前記Y領域と分子内アニーリングするアニーリング配列が、0〜18塩基長である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の発現抑制核酸分子。
- 前記非連結側領域(XF)が、末端にオーバーハングを有する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の発現抑制核酸分子。
- 前記非連結側領域(XF)の前記オーバーハングが、1〜3塩基長である、請求項7記載の発現抑制核酸分子。
- 前記Y領域が、末端にオーバーハングを有する、請求項1〜8のいずれか一項に記載の発現抑制核酸分子。
- 前記Y領域の前記オーバーハングが、1〜3塩基長である、請求項9記載の発現抑制核酸分子。
- 前記X領域が、1〜23塩基長であり、前記Y領域が、0〜19塩基長である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の発現抑制核酸分子。
- 全長が、41塩基長以下である、請求項1〜11のいずれか一項に記載の発現抑制核酸分子。
- 全長が、5〜41塩基長である、請求項12記載の発現抑制核酸分子。
- 標的遺伝子の発現を抑制するための組成物であって、
請求項1から13のいずれか一項に記載の発現抑制核酸分子を含むことを特徴とする、発現抑制用組成物。 - 請求項1から13のいずれか一項に記載の発現抑制核酸分子を含むことを特徴とする、薬学的組成物。
- 標的遺伝子の発現を抑制する方法であって、
請求項1から13のいずれか一項に記載の発現抑制核酸分子を使用することを特徴とする発現抑制方法。 - 前記発現抑制核酸分子を、細胞、組織または器官に投与する工程を含む、請求項16記載の発現抑制方法。
- 前記発現抑制核酸分子を、in vivoまたはin vitroで投与する、請求項16または17記載の発現抑制方法。
- 前記発現抑制核酸分子を、非ヒト動物に投与する、請求項16または17記載の発現抑制方法。
- 疾患の治療方法であって、
請求項1から13のいずれか一項に記載の発現抑制核酸分子を、患者に投与する工程を含むことを特徴とする、治療方法。 - 疾患の治療に使用するための発現抑制核酸分子であって、
前記発現抑制核酸分子は、請求項1から13のいずれか一項に記載の発現抑制核酸分子であることを特徴とする、核酸分子。
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