JPWO2014030683A1 - 貧血患者の貧血の要因を検出するためのバイオマーカー - Google Patents
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Abstract
Description
この様な方法によって、ようやく骨髄異形成症候群(MDS)の診断が可能となる。
(1)前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるアクチビンレセプター2B(ACVR2B)の発現量を測定する工程1、
(2)工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量よりも多い場合に、前記患者の貧血の要因がMDSであると決定する工程2。
〔1〕前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程1、
〔2〕工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者は白血病発症リスクがあると決定する工程2。
{1}前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程1、
{2}工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者について輸血が必要でその頻度が、末梢血採取時における当該患者の輸血頻度よりも高いと決定する工程2。
本明細書にて用いる用語「貧血」とは、WHOのガイドラインに示されている様に、男性であれば血中のヘモグロビン濃度が13g/dL以下、女性であれば、12g/dL以下である状態をいい、動悸、息切れ、眩暈等の症状を呈するが、無症状である場合であっても、上述した血中ヘモグロビン濃度となっている場合には貧血であると決定してもよい。また、用語「貧血患者」とは上述した「貧血」の症状を患う者である。
本発明の方法は、貧血患者の<貧血の要因を検出する方法>、<白血病発症リスクを判定する方法>、及び<輸血の必要性及びその頻度を予測する方法>を包含する。
本発明の貧血患者の貧血の要因を検出する方法は、以下の工程1及び工程2を含む。
(1)前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程1、
(2)工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量よりも多い場合に、前記患者の貧血の要因がMDSであると決定する工程2。
工程1は、貧血患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程である。
工程2は、上記(工程1)にて測定した貧血患者の末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量よりも多い場合に、前記患者の貧血の要因がMDSであると決定する工程である。
本発明の貧血患者の白血病発症リスクを判定する方法は、以下の工程1及び工程2を含む。
〔1〕前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程1、
〔2〕工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者は白血病リスクがあると決定する工程2。
工程1は、貧血患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程である。
工程2は、上記〔工程1〕にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者は白血病発症リスクがあると決定する工程である。
本発明の貧血患者の輸血の必要性及びその頻度を予測する方法は、以下の工程1及び工程2を含む。
{1}前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程1、
{2}工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者について輸血が必要で、その頻度が、末梢血採取時における当該患者の輸血頻度よりも高いと決定する工程2。
工程1は、前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程である。
工程2は、上記工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者について輸血が必要であると判断する共に、末梢血採取時における当該患者の輸血頻度よりも、輸血頻度が高いと決定する工程である。
本発明の診断剤は、貧血患者の<貧血の要因をMDSであると検出するための診断剤>、<白血病発症リスクを判定するための診断剤>、及び<輸血の必要性及びその頻度の診断剤>を包含する。
貧血の要因をMDSであると検出するための診断剤は、後述する<貧血の要因をMDSであると検出するためのキット>の構成要素の1つとして好適に用いられる。そして、上述の<貧血の要因を検出する方法>において記載した方法に従って有用に用いられる。
白血病発症リスクを判定するための診断剤は、後述する<白血病発症リスクを判定するためのキット>の構成要素の1つとして好適に用いられる。そして、上述の<白血病リスクを判定する方法>において記載した方法に従って有用に用いられる。
輸血の必要性及びその頻度の診断剤は、後述する<輸血の必要性及びその頻度を予測するためのキット>の構成要素の1つとして好適に用いられる。そして、上述の<輸血の必要性及びその頻度を予測する方法>において記載した方法に従って有用に用いられる。
本発明のキットは、貧血患者の<貧血の要因をMDSであると検出するためのキット>、<白血病発症リスクを判定するためのキット>、及び<輸血の必要性及びその頻度を予測するためのキット>を包含する。
貧血の要因をMDSであると検出するためのキットは、上述の抗ACVR2B抗体を含む。
白血病発症リスクを判定するためのキットは、上述の抗ACVR2B抗体を含む。
輸血の必要性及びその頻度を予測するためのキットは、上述の抗ACVR2B抗体を含む。
さらに、輸血の必要性及びその頻度を予測するための他のキットに含まれる構成要素の何れか1つ以上を含んでいてもよい。構成要素とは、特に限定はされないが、例えば、抗フェリチン抗体、抗葉酸抗体、抗ビタミンB12抗体等が挙げられる。
本発明のバイオマーカーは、貧血患者の<貧血の要因をMDSであると決定するためのバイオマーカー>、<白血病発症リスクを判定するためのバイオマーカー>、及び<輸血の必要性及びその頻度を予測するためのバイオマーカー>を包含する。
貧血の要因をMDSであると決定するためのバイオマーカーは、ACVR2BACVR2Bからなる。
白血病発症リスクを判定するためのバイオマーカーは、ACVR2Bからなる。
輸血の必要性及びその頻度を予測するためのバイオマーカーは、ACVR2Bからなる。
本実施例にて用いた抗体は、以下の通りである。
定法に基づいて作製したGata1−GFPトランスジェニックマウスの胎齢16.5週目の胎仔から肝臓組織を採取し、その後、常法に従って細胞群に分散させた。得られた細胞群は、3mLのPBSで洗浄した後、3mLのMACSバッファーにて氷上で30分間ブロッキング処理を行った。
上述の分取した正染性赤芽球と網赤芽球をDNAアレイ法(アジレントテクノロジー社)に供し、それぞれの細胞集団内で発現している遺伝子を解析した。表2に、正染性赤芽球よりも網赤芽球の方が発現量の少ない遺伝子を示す。
健常者、RA患者、及びRCMD患者の末梢血を1〜2mLずつ採取し、凝固を防ぐために、EDTA−2Naで処理した。次いで、1x106個の細胞をチューブへとり、3mLのPBSで3回、末梢血を洗浄し、氷上で30分間3mLのMACSバッファーを用いてブロッキング処理に供した。その後、氷上のまま、末梢血に上記表1に示す抗体のうち、human GPA−FITC、human CD71−PE、humanCD45−APC−Cy7、及びhuman ACTR−IIB−APCを加え、30分間免疫反応を行った。
技術分野
[0001]
本発明は、貧血患者がMDSであると決定するためのバイオマーカー、貧血患者の貧血の要因を決定する方法、及びそのためのキット並びに診断剤に関する。
[0002]
また、本発明は、貧血患者の白血病発症リスクを決定するためのバイオマーカー、貧血患者の白血病発症リスクを決定する方法、及びそのためのキット並びに診断剤に関する。
[0003]
更に、本発明は、貧血患者の輸血の必要性及びその頻度を決定するためのバイオマーカー、貧血患者の輸血の必要性及びその頻度を決定する方法、及びこれらに用いられるキット並びに診断剤に関する。
背景技術
[0004]
貧血の症状を訴える患者を診断するには、その原因を調べる必要がある。通常であれば、患者の症状や身体状態の問診に加え、末梢血中の末梢血のヘモグロビン値を測定して確定診断を行った後、赤血球、白血球、血小板等の血液細胞の数、鉄分、ビタミン類等の量の検査等を行う。
[0005]
それでもなお、貧血の原因が掴めない場合は、患者から骨髄穿刺によって検体を採取して骨髄中の造血の状態、芽球の有無、異常染色体の有無等といった、多血球の形態学的な情報を、熟練した技術、所謂、巧の技を習得した血液専門医によって調べる必要がある。
この様な方法によって、ようやく骨髄異形成症候群(MDS)の診断が可能となる。
[0006]
MDSとは血液腫瘍の一種で、血球の量、質等が異常となる疾患である。そして、MDSとは、前白血病状態を引き起こして造血障害を来たし、その予後も悪く、急性骨髄性白血病に移行することが知られている。また、血球
MDSの診断方法の開発が求められる。そこで、造血分化過程において、例えばマウスではSca−1、c−kit、CD71、Gata1、Ter119等が、ヒトでは、CD34、CD71、GPA(Glycophorin A)等が発現することが知られており、これらをバイオマーカーとしたMDSの診断方法が開発されつつあるが、何れも実用に耐え難く実現していない。
[0019]
また、本発明者は、上述の様に造血に関与することが知られているアクチビンの受容体の1つであるACVR2Bが造血分化の過程に関与するかどうかは明確ではないことも見出している。
[0020]
さらに、WT1をコードするmRNAを用いたキットは、末梢血から全RNAを採取する必要があると言う点で簡便とはいえない。
[0021]
上記現状に鑑み、本発明の主な課題は、貧血の原因を決定するための方法を提供すること、特に骨髄穿刺を行わない、血液専門医の決定を必要としない等といった、簡便な方法で決定する方法を提供することである。更に、本発明の課題には、貧血患者が、白血病が発症しやすい状態かどうかを決定するための簡便な方法を提供することも含まれる。そして、本発明の課題には、貧血患者の輸血の必要性及びその頻度を決定する方法も含まれる。
課題を解決するための手段
[0022]
本発明者は、Gata1―GFPトランスジェニックマウスを用いた実験によって、造血幹細胞から分化各ステージに分類される細胞群である、正染性赤芽球、網赤芽球、及び赤血球を分離することに成功した。
[0023]
これらの分離された、それぞれの細胞群に関して更に研究を重ねた結果、ACVR2Bの発現量が、細胞群間において顕著に異なることを見出した。
[0024]
本発明は、斯かる知見に基づいてなされたものであり、下記に示す広い態様の発明を包含するものである。
[0025]
項1 下記の工程1及び2を含む貧血患者の貧血の要因をMDSと決定する方法;
(1)前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるアクチビンレセプター2B(ACVR2B)の発現量を測定する工程1、
(2)工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量よりも多い場合に、前記患者の貧血の要因がMDSであると決定する工程2。
[0026]
項2 前記多血球が、赤血球、白血球、及び血小板からなる群より選択される一つ以上である、項1に記載の方法。
[0027]
項3 MDSが、RA、RCMD、RCMD−RS、及びRAEBからなる群より選択される少なくとも1つである項1又は2に記載の方法。
[0028]
項4 下記の工程1及び2を含む貧血患者の白血病発症リスクを決定する方法;
〔1〕前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程1、
〔2〕工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者は白血病発症リスクがあると決定する工程2。
[0029]
項5 前記多血球が、赤血球、白血球、及び血小板からなる群より選択される一つ以上である、項4に記載の方法。
[0030]
項6 白血病が、急性骨髄性白血病である、項4又は5に記載の方法。
[0031]
項7 下記の工程1及び2を含む貧血患者の輸血の必要性又はその頻度を決定する方法;
{1}前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程1、
{2}工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者について輸血が必要でその頻度が、末梢血採取時における当該患者の輸血頻度よりも高いと決定する工程2。
[0032]
項8 前記多血球が、赤血球、白血球、及び血小板からなる群より選択される何れか1つである、項7に記載の方法。
[0033]
項9 白血病が、急性骨髄性白血病である、項7又は8に記載の方法。
[0034]
項10 抗ACVR2B抗体を含む、貧血患者の貧血の要因をMDSであると決定するための診断剤。
[0035]
項11 MDSが、RA、RCMD、RCMD−RS、及びRAEBからなる群より選択される少なくとも1つである、項10に記載の診断剤。
[0036]
項12 抗ACVR2B抗体を含む、貧血患者の貧血の要因をMDSであると決定するためのキット。
[0037]
項13 MDSが、RA、RCMD、RCMD−RS、及びRAEBからなる群より選択される少なくとも1つである、項12に記載のキット。
[0038]
項14 抗ACVR2B抗体を含む、貧血患者の白血病発症リスクを決定するための診断剤。
[0039]
項15 白血病が、急性骨髄性白血病である、項14に記載の診断剤。
[0040]
項16 抗ACVR2B抗体を含む、貧血患者の白血病発症リスクを決定するためのキット。
[0041]
項17 白血病が、急性骨髄性白血病である、項16に記載のキット。
[0042]
項18 抗ACVR2B抗体を含む、貧血患者の輸血の必要性及びその頻度を決定するための診断剤。
[0043]
項19 抗ACVR2B抗体を含む、貧血患者の輸血の必要性及びその頻度を決定するためのキット。
[0044]
項20 ACVR2Bからなる、貧血患者の貧血の要因をMDSであると決定するためのバイオマーカー。
[0045]
項21 MDSが、RA、RCMD、RCMD−RS、及びRAEBからなる群より選択される少なくとも1つである、項20に記載のバイオマーカー。
[0046]
項22 ACVR2Bからなる、貧血患者の貧血患者の白血病発症リスクを決定するためのバイオマーカー。
[0047]
項23 白血病が、急性骨髄性白血病である、項22に記載のバイオマーカー。
[0048]
項24 ACVR2Bからなる、貧血患者の貧血の患者の輸血の必要性及
びその頻度を決定するためのバイオマーカー。
発明の効果
[0049]
以下に、本発明の効果について記載する。ただし、本願発明が、以下に示す効果の全てを有する発明に限定されず、少なくとも何れか1つの効果を有する発明であることは言うまでもない。
[0050]
本発明に係る方法、診断剤、キット、又はバイオマーカーを用いることによって、従来MDSを診断する上で行われる、患者に負担のかかる骨髄穿刺を行わずに診断することが可能である点で優れている。そして、高度な技術を有する血液専門医によらずにMDSの診断が可能である点においても非常に優れている。
[0051]
また、本発明に係る方法、診断剤、キット、又はバイオマーカーは、貧血の原因をMDSと簡便な方法によって決定づけるのに特に有用である。このことは、一般クリニックにおける外来患者を専門医に紹介するに必要な患者のエビデンスを十分に、且つ簡便に得ることが可能である点において優れている。
[0052]
特に、貧血の患者はほぼ毎日、外来に訪れるため、MDSといった非常に重篤な疾患を早い段階で診断する点においても非常に有用である。
[0053]
更に、本発明の方法、診断剤、キット、又はバイオマーカーは、MDSから白血病への進行の予測に有効に用いられる。
[0054]
MDSは白血病に進行し易い事が知られており、結果として白血病を発症してしまうと、骨髄内で白血病細胞が激しく増殖し、正常に血球を作る事ができず、延いては赤血球を作れなくなる事に伴うことで貧血の状態となり、MDSの治療の際には輸血が必要になる事も知られている。また、MDSとは赤血球への分化、成熟等において障害が認められる事から、MDSそのものの治療にも輸血が必要である。
[0055]
以上のことから、本発明の方法、診断剤、キット、又はバイオマーカーは、輸血の必要性及びその頻度を決定することにおいても非常に有用である。
図面の簡単な説明
[0075]
本明細書にて用いる用語「発現量」とは、mRNAの発現量ではなく、mRNAを基に翻訳されたタンパク質の発現量であることを意味する。
[0076]
本明細書にて用いる用語「バイオマーカー」とは、糖質、脂質、タンパク質、等の生体由来の物質で、生体内の生物学的変化を定量的に把握するための指標となるものを指す。
[0077]
より具体的に、バイオマーカーとは、病気等の現状を把握するために用いられる現状を診断又は判定するための指標としての役割と、疾患等の予防や病状の推移を予測するための予測診断又は推定するための指標としての役割を有するものである。
[0078]
本発明の方法
本発明の方法は、貧血患者の<貧血の要因を決定する方法>、<白血病発症リスクを決定する方法>、及び<輸血の必要性及びその頻度を決定する方法>を包含する。
[0079]
<貧血の要因を決定する方法>
本発明の貧血患者の貧血の要因を決定する方法は、以下の工程1及び工程2を含む。
(1)前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程1、
(2)工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量よりも多い場合に、前記患者の貧血の要因がMDSであると決定する工程2。
[0080]
(工程1について)
工程1は、貧血患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程である。
[0081]
末梢血とは血管内に存在する血液を意味する。このような末梢血は、ヒトの血管内に注射針等を刺して採取すればよい。注射針等は、例えば金属製のものを用いればよく、サーフロー(登録商標)のような留置張りを用いてもよい。プラスチック製の注射針を金属針と共に血管内に刺して、それを留置
VR2Bの測定方法及び測定条件と同じである。
[0104]
なお、予め測定した健常者から得られる末梢血の多血球におけるのACVR2Bの量(測定値)を一般化しておき、その一般化した数値(例えばカットオフ値と呼ばれる。)を基に、(工程1)にて測定した貧血患者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの量が多いか又は少ないかを比較してもよい。
[0105]
一般化した数値は、ある一定以上数の異なる健常者から得られる末梢血の多血球におけるACVR2Bの量を統計学的に解析し、単位末梢血量当たり、又は単位多血球量当たりの数値として一般化する方法が挙げられるが、このような方法は、公知の解析技術、統計学的技術等を用いればよく、上述の方法に限定はされない。
[0106]
<白血病発症リスクを決定する方法>
本発明の貧血患者の白血病発症リスクを決定する方法は、以下の工程1及び工程2を含む。
〔1〕前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程1、
〔2〕工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者は白血病リスクがあると決定する工程2。
[0107]
〔工程1について〕
工程1は、貧血患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程である。
[0108]
本工程は、上述の<貧血の要因を決定する方法>における(工程1)と同様にすればよい。
[0109]
〔工程2について〕
工程2は、上記〔工程1〕にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者は白血病発症リスクがあると決定する工程である。
[0110]
健常者とは、上述の<貧血の要因を決定する方法>における(工程1)に記載の通りである。
[0111]
多血球とは、〔工程1〕にて測定する前記患者から得た末梢血に含まれる多血球と同様に定義されるものである。
[0112]
健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量は、上述の〔工程1〕におけるACVR2Bの測定方法と同じ方法にて決定することができる。
[0113]
ここで、〔工程1〕にて測定した貧血患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量と、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量の比較は、以下に示す比較方法を採用すればよい。
[0114]
第1の比較方法として、健常者から得られた末梢血に含まれる多血球サンプルを、〔工程1〕にて測定した貧血患者から得た末梢血に含まれる多血球サンプルと、同じ測定方法及び同じ測定条件で測定し、得られたACVR2Bの量を相対的に比較する方法が挙げられる。
[0115]
比較した結果、ACVR2Bの量が多ければ多い程、上述した多血球の分化、成熟等の障害の程度が強い事から、貧血患者が白血病を発症しやすいと決定することができるために、〔工程1〕にて測定した貧血患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの量が、健常者から得られた末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの量よりも多い場合、貧血患者は白血病リスクがあると決定することができる。
[0116]
第2の比較方法として、健常者から得られた末梢血に含まれる多血球サンプルにおけるACVR2Bの量を予め測定しておき、その測定値よりも、〔工程1〕にて測定した貧血患者から得られた末梢血における多血球におけるACVR2Bの量が多い場合に、貧血患者は白血病発症リスクがあると決定することができる。
[0117]
また、第2の比較方法における、貧血患者から得られた末梢血の多血球におけるACVR2Bの測定方法及び測定条件は、上述した第1の方法と同様
に、予め測定した健常者から得られた末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの測定方法及び測定条件とそれぞれ同じである。
[0118]
なお、第2の比較方法において、上記〔工程1〕にて測定された貧血患者から得られる末梢血の多血球におけるACVR2Bの量と比較する対象数値は、上記<貧血の要因を決定する方法>にて説明したカットオフ値を同様に用いればよい。
[0119]
<輸血の必要性及びその頻度を決定する方法>
本発明の貧血患者の輸血の必要性及びその頻度を決定する方法は、以下の工程1及び工程2を含む。
{1}前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程1、
{2}工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者について輸血が必要で、その頻度が、末梢血採取時における当該患者の輸血頻度よりも高いと決定する工程2。
[0120]
{工程1について}
工程1は、前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程である。
[0121]
本工程は、上述の<貧血の要因を決定する方法>における(工程1)と同様にすればよい。
[0122]
{工程2について}
工程2は、上記工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者について輸血が必要であると判断する共に、末梢血採取時における当該患者の輸血頻度よりも、輸血頻度が高いと決定する工程である。
[0123]
工程2により、輸血頻度が高いと決定された貧血患者であって、末梢血採取時における輸血の回数が0回(貧血に対する輸血措置がなされていない)である患者は、少なくとも1回の輸血が必要であると決定され、末梢血採取
時において貧血に対する輸血措置を少なくとも1回でも受けたことのある患者は、その回数よりも多い輸血回数が必要であると決定される。
[0124]
健常者とは、上述の<貧血の要因を決定する方法>における(工程1)に記載の通りである。
[0125]
多血球とは、{工程1}にて測定する前記患者から得た末梢血に含まれる多血球と同様に定義されるものである。
[0126]
健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量は、上述の{工程1}におけるACVR2Bの測定方法と同じ方法にて決定することができる。
[0127]
ここで、{工程1}にて測定した貧血患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量と、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量の比較は、以下に示す比較方法を採用すればよい。
[0128]
第1の比較方法として、健常者から得られた末梢血に含まれる多血球サンプルを、{工程1}にて測定した貧血患者から得た末梢血に含まれる多血球サンプルと、同じ測定方法及び同じ測定条件で測定し、得られたそれぞれのACVR2Bの量を相対的に比較する方法が挙げられる。
[0129]
比較した結果、ACVR2Bの量が多ければ多い程、貧血患者について輸血が必要で、その頻度が高いと決定することができるために、{工程1}にて測定した貧血患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの量が、健常者から得られた末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの量よりも多い場合、貧血患者について輸血が必要で、その輸血頻度が高いと決定することができる。
[0130]
第2の比較方法として、健常者から得られた末梢血に含まれる多血球サンプルにおけるACVR2Bの量を予め測定しておき、その測定値よりも、{工程1}にて測定した貧血患者から得られた末梢血における多血球におけるACVR2Bの量が多い場合に、貧血患者について輸血が必要で、その頻度が高いと決定することができる。
[0131]
また、第2の比較方法における、貧血患者から得られた末梢血の多血球におけるACVR2Bの測定方法及び測定条件は、上述した第1の方法と同様に、予め測定した健常者から得られた末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの測定方法及び測定条件と同じである。
[0132]
なお、第2の比較方法において、上記{工程1}にて測定された貧血患者から得られる末梢血の多血球におけるACVR2Bの量と比較する対象数値は、上記<貧血の要因を決定する方法>にて説明したカットオフ値を同様に用いればよい。
[0133]
輸血頻度が高いとは、末梢血採取時における輸血回数(0回を含む)と比較して、輸血の回数が多いことを意味し、これを言い換えると、貧血患者の将来の輸血回数が、末梢血採取時における輸血回数よりも増えることを意味する。
[0134]
本発明の診断剤
本発明の診断剤は、貧血患者の<貧血の要因をMDSであると決定するための診断剤>、<白血病発症リスクを決定するための診断剤>、及び<輸血の必要性及びその頻度を決定するための診断剤>を包含する。
[0135]
本発明の診断剤は、抗ACVR2B抗体を含む。抗ACVR2B抗体とは、上述の<貧血の要因を決定する方法>の(工程1)にて詳述したACVR2Bに対する抗体と同様である。
[0136]
診断剤そのものが抗ACVR2B抗体であっても、他の成分を含んでいてもよい。他の成分を含んでいる場合、診断剤における抗ACVR2B抗体の含有量は特に限定される事はないが、診断剤当たり、通常は0.0001〜99.99重量部程度である。診断剤に含まれる他の成分とは、抗ACVR2B抗体の、ACVR2Bに対して特異的に結合する能力を発揮する範囲に限り、診断剤の分野で用いられる公知の成分であり、特に限定はされない。
[0137]
<貧血の要因をMDSであると決定するための診断剤>
貧血の要因をMDSであると決定するための診断剤は、後述する<貧血の要因をMDSであると決定するためのキット>の構成要素の1つとして好適
に用いられる。そして、上述の<貧血の要因を決定する方法>において記載した方法に従って有用に用いられる。
[0138]
<白血病発症リスクを決定するための診断剤>
白血病発症リスクを決定するための診断剤は、後述する<白血病発症リスクを決定するためのキット>の構成要素の1つとして好適に用いられる。そして、上述の<白血病リスクを決定する方法>において記載した方法に従って有用に用いられる。
[0139]
<輸血の必要性及びその頻度を決定するための診断剤>
輸血の必要性及びその頻度を決定するための診断剤は、後述する<輸血の必要性及びその頻度を決定するためのキット>の構成要素の1つとして好適に用いられる。そして、上述の<輸血の必要性及びその頻度を決定する方法>において記載した方法に従って有用に用いられる。
[0140]
本発明のキット
本発明のキットは、貧血患者の<貧血の要因をMDSであると決定するためのキット>、<白血病発症リスクを決定するためのキット>、及び<輸血の必要性及びその頻度を決定するためのキット>を包含する。
[0141]
本発明のキットは、抗ACVR2B抗体を含む。抗ACVR2B抗体とは、<貧血の要因を決定する方法>の(工程1)にて詳述したACVR2Bに対する抗体と同様にすればよい。
[0142]
本発明のキットに包含される抗ACVR2B抗体は、ACVR2Bに対して特異的に結合する能力を発揮する抗体である範囲において、2種類以上の抗体を包含していてもよい。この場合、それぞれの抗体は別々の容器に充填されていてもよく、同一の容器に充填されていてもよい。
[0143]
なお、上述の抗ACVR2B抗体は、後述する本発明のキットに包含されていてもよい器具の底面等に吸着した態様で、本発明のキットに包含されていてもよい。
[0144]
本発明のキットには、多血球に特異的に発現するマーカーに対する抗体を更に含んでいてもよい。多血球とは、上記<貧血の要因を決定する方法>の
(工程1)の通りであり、このような抗体は、具体的には上記<貧血の要因を決定する方法>の(工程1)にて記載したものである。
[0145]
また、本発明のキットには、適当な生化学的実験に主に用いられる器具を包含していてもよい。例えば、プレート、マルチウェルプレート、シール、ディッシュ、スポイト、キャピラリー、チューブ等が挙げられる。
[0146]
更に、本発明のキットには適当な生化学的試薬を包含していてもよく、例えば、緩衝液、適当な界面活性剤等を含む洗浄液、染色液、発色液、増感液、反応停止液;アビジン化化合物、ビオチン化化合物;抗イムノグロブリン抗体、標識化抗イムノグロブリン抗体;安定剤、防腐剤、保存剤、タンパク質分解酵素阻害剤;ACVR2B標準物質等が挙げられる。
[0147]
<貧血の要因をMDSであると決定するためのキット>
貧血の要因をMDSであると決定するためのキットは、上述の抗ACVR2B抗体を含む。
[0148]
貧血の要因をMDSであると決定するためのキットは、上述の<貧血患者の貧血の要因を決定する方法>に、特に好適に用いることができる。従って、当該キットには当該方法について記載したプロトコールを含んでいてもよい。
[0149]
さらに、貧血の要因をMDSであると検出するための他のキットに含まれる構成要素の何れか1つ以上を含んでいてもよい。構成要素とは、特に限定はされないが、例えば、抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD5抗体、抗CD10抗体、抗CD13抗体、抗CD19抗体、抗CD20抗体、抗CD23抗体、抗CD33抗体、抗CD34抗体、抗CD38抗体、抗CD45抗体、抗CD45RA抗体、抗CD90抗体、抗IgM抗体、抗HLA−DR抗体;抗CD71抗体、抗GPA抗体;抗CD41抗体、抗CD42b抗体、抗CD61抗体、抗CD62P抗体、抗PAC−1抗体等が挙げられる。これらの中でも、抗CD45抗体、抗CD34抗体、抗GPA抗体等が好ましい。
[0150]
<白血病発症リスクを決定するためのキット>
白血病発症リスクを決定するためのキットは、上述の抗ACVR2B抗体を含む。
[0151]
白血病発症リスクを決定するためのキットは、上述の<白血病発症リスクを決定する方法>に、特に好適に用いることができる。従って、当該キットには当該方法について記載したプロトコールを含んでいてもよい。
[0152]
さらに、白血病発症リスクを決定するための他のキットに含まれる構成要素の何れか1つ以上を含んでいてもよい。このような構成要素として、例えば、抗Tim−3抗体等が挙げられる。このような構成要素を用いた白血病発症リスクを決定する方法は、上述の他のキットを使用する際の公知のプロトコールに従えばよい。
[0153]
なお、白血病発症リスクを決定するためのキットには、白血病のタイプを決定するためのキットの構成要素が含まれていてもよく、例えば、抗CD1a抗体、抗CD2抗体、抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD5抗体、抗CD7抗体、抗CD8抗体、抗CD10抗体、抗CD13抗体、抗CD14抗体、抗CD19抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD23抗体、抗CD33抗体、抗CD34抗体、抗CD38抗体、抗CD41抗体、抗HLA−DR抗体、抗CD56抗体、抗CD235a:GPA抗体などが挙げられる。
[0154]
このような構成要素を用いる事によって、白血病のタイピングを決定する方法は、上述の白血病のタイピングを決定するためのキットを使用する際の公知のプロトコールに従えばよい。
[0155]
<輸血の必要性及びその頻度を決定するためのキット>
輸血の必要性及びその頻度を決定するためのキットは、上述の抗ACVR2B抗体を含む。
[0156]
輸血の必要性及びその頻度を決定するためのキットは、上述の<輸血の必要性及びその頻度を決定する方法>に、特に好適に用いることができる。従って、当該キットには当該方法について記載したプロトコールを含んでいてもよい。
さらに、輸血の必要性及びその頻度を決定するための他のキットに含まれる構成要素の何れか1つ以上を含んでいてもよい。構成要素とは、特に限定はされないが、例えば、抗フェリチン抗体、抗葉酸抗体、抗ビタミンB12抗体等が挙げられる。
[0157]
本発明のバイオマーカー
本発明のバイオマーカーは、貧血患者の<貧血の要因をMDSであると決定するためのバイオマーカー>、<白血病発症リスクを決定するためのバイオマーカー>、及び<輸血の必要性及びその頻度を決定するためのバイオマーカー>を包含する。
[0158]
<貧血の要因をMDSであると決定するためのバイオマーカー>
貧血の要因をMDSであると決定するためのバイオマーカーは、ACVR2BACVR2Bからなる。
[0159]
ACVR2Bとは、上述の通りである。このようなACVR2Bは、末梢血の多血球に存在する。末梢血とは上述の通りである。
[0160]
貧血の要因をMDSと決定するためのバイオマーカーは、上述の<貧血の要因を決定する方法>において記載した方法に従って有用に用いられる。
[0161]
<白血病発症リスクを決定するためのバイオマーカー>
白血病発症リスクを決定するためのバイオマーカーは、ACVR2Bからなる。
[0162]
ACVR2Bとは、上述の通りである。このようなACVR2Bは、末梢血の多血球に存在する。末梢血とは上述の通りである。
[0163]
白血病発症リスクを決定するためのバイオマーカーは、上述の<白血病発症リスクを決定する方法>において記載した方法に従って有用に用いられる。
[0164]
<輸血の必要性及びその頻度を決定するためのバイオマーカー>
輸血の必要性及びその頻度を決定するためのバイオマーカーは、ACVR2Bからなる。
[0165]
ACVR2Bとは、上述の通りである。このようなACVR2Bは、末梢
血の多血球に存在する。末梢血とは上述の通りである。
[0166]
輸血の必要性及びその頻度を決定するためのバイオマーカーは、上述の<輸血の必要性及びその頻度を決定する方法>において記載した方法に従って有用に用いられる。
実施例
[0167]
以下に示す実施例に基づいて、本発明を更に詳細に説明する。ただし、本発明が以下に示す実施例に限定されないのは言うまでもない。
[0168]
<抗体>
本実施例にて用いた抗体は、以下の通りである。
[0169]
[表1]
[0170]
※上記抗体の他に、human ACVR2B−APCを、human ACVR2B(abcam)とAPC conjugation kit (Dojindo)を用い、常法に従って作製した。
[0171]
<各分化ステージの血球細胞の分取>
定法に基づいて作製したGata1−GFPトランスジェニックマウスの胎齢16.5週目の胎仔から肝臓組織を採取し、その後、常法に従って細胞群に分散させた。得られた細胞群は、3mLのPBSで洗浄した後、3mLのMACSバッファーにて氷上で30分間ブロッキング処理を行った。
[0172]
次いで、氷上のまま、細胞群に上記表1に示す抗体である、mouse
Claims (18)
- 下記の工程1及び2を含む貧血患者の貧血の要因を検出する方法;
(1)前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるアクチビンレセプター2B(ACVR2B)の発現量を測定する工程1、
(2)工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量よりも多い場合に、前記患者の貧血の要因が骨髄異形成症候群(MDS)であると決定する工程2。 - MDSが、RA、RCMD、RCMD−RS、及びRAEBからなる群より選択される少なくとも1つである請求項1に記載の方法。
- 下記の工程1及び2を含む貧血患者の白血病の発症リスクを判定する方法;
〔1〕前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程1、
〔2〕工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者は白血病発症リスクがあると決定する工程2。 - 白血病が、急性骨髄性白血病である、請求項3に記載の方法。
- 下記の工程1及び2を含む貧血患者の輸血の必要性及びその頻度を予測する方法;
{1}前記患者から得た末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量を測定する工程1、
{2}工程1にて測定したACVR2Bの発現量が、健常者から得られる末梢血に含まれる多血球におけるACVR2Bの発現量より多い場合に、前記患者について輸血が必要で、その頻度が末梢血採取時における当該患者の輸血頻度よりも高いと決定する工程2。 - 抗ACVR2B抗体を含む、貧血患者の貧血の要因をMDSであると検出するための診断剤。
- MDSが、RA、RCMD、RCMD−RS、及びRAEBからなる群より選択される少なくとも1つである請求項6に記載の診断剤。
- 抗ACVR2B抗体を含む、貧血患者の白血病発症リスクを判定するための診断剤。
- 白血病が、急性骨髄性白血病である、請求項8に記載の診断剤。
- 抗ACVR2B抗体を含む、貧血患者の輸血の必要性及びその頻度の診断剤。
- 抗ACVR2B抗体を含む、貧血患者の貧血の要因をMDSであると検出するためのキット。
- MDSが、RA、RCMD、RCMD−RS、及びRAEBからなる群より選択される少なくとも1つである請求項11に記載のキット。
- 抗ACVR2B抗体を含む、貧血患者の白血病発症リスクを判定するためのキット。
- 白血病が、急性骨髄性白血病である、請求項13に記載のキット。
- 抗ACVR2B抗体を含む、貧血患者の輸血の必要性及びその頻度を予測するためのキット。
- ACVR2Bからなる、貧血患者がMDSであると判定するためのバイオマーカー。
- ACVR2Bからなる、貧血患者の白血病発症リスクを決定するためのバイオマーカー。
- ACVR2Bからなる、貧血患者の輸血の必要性及びその頻度を予測するためのバイオマーカー。
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