JPWO2014010261A1 - 乳腺疾患の検査方法 - Google Patents
乳腺疾患の検査方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2014010261A1 JPWO2014010261A1 JP2014524659A JP2014524659A JPWO2014010261A1 JP WO2014010261 A1 JPWO2014010261 A1 JP WO2014010261A1 JP 2014524659 A JP2014524659 A JP 2014524659A JP 2014524659 A JP2014524659 A JP 2014524659A JP WO2014010261 A1 JPWO2014010261 A1 JP WO2014010261A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cypa
- milk
- mammary gland
- antibody
- mastitis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 208000030270 breast disease Diseases 0.000 title claims description 28
- 238000010998 test method Methods 0.000 title claims description 4
- 108010072220 Cyclophilin A Proteins 0.000 claims abstract description 325
- 102100034539 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A Human genes 0.000 claims abstract description 325
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims abstract description 249
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims abstract description 248
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims abstract description 247
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 230
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 claims abstract description 214
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 claims abstract description 166
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims abstract description 101
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 101
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 101
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 28
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 27
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 21
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 10
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 abstract description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 abstract description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 89
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 59
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 57
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 51
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 51
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 47
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 47
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 45
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 44
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 36
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 34
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 33
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 33
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 33
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 28
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 28
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 25
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 25
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 22
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 21
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 21
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 21
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 20
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 18
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 16
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 14
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 14
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 14
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 14
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 13
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 12
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 12
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 12
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 10
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 10
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 9
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 9
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 9
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 9
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 8
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 8
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 8
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 7
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 7
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 6
- 108010068682 Cyclophilins Proteins 0.000 description 6
- 102000001493 Cyclophilins Human genes 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 6
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 6
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 5
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 5
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 4
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 4
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 4
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 4
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 4
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 4
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010002329 Aneurysm Diseases 0.000 description 3
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 3
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100040283 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase B Human genes 0.000 description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 3
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 108010048032 cyclophilin B Proteins 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 3
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 3
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 3
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 108010044156 peptidyl-prolyl cis-trans isomerase b Proteins 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000011946 reduction process Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]-4-isothiocyanatobenzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(N=C=S)=CC=C1C([O-])=O OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000878213 Homo sapiens Inactive peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP6 Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100036984 Inactive peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP6 Human genes 0.000 description 2
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 2
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 102000009097 Phosphorylases Human genes 0.000 description 2
- 108010073135 Phosphorylases Proteins 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- GNNALEGJVYVIIH-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydrochloride Chemical compound Cl.NC1=CC=CC=C1N GNNALEGJVYVIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000011984 electrochemiluminescence immunoassay Methods 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 2
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000012817 gel-diffusion technique Methods 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 2
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 2
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000021243 milk fat Nutrition 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 2
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 2
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 2
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 2
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 238000010517 secondary reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 description 2
- QTERVOZQCNPERI-UHFFFAOYSA-N 1h-indole;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.C1=CC=C2NC=CC2=C1 QTERVOZQCNPERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 4-aminophthalhydrazide Chemical compound O=C1NNC(=O)C=2C1=CC(N)=CC=2 HUDPLKWXRLNSPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 1
- 241001416153 Bos grunniens Species 0.000 description 1
- 101000800130 Bos taurus Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- SGHZXLIDFTYFHQ-UHFFFAOYSA-L Brilliant Blue Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 SGHZXLIDFTYFHQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108010065152 Coagulase Proteins 0.000 description 1
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 102000000541 Defensins Human genes 0.000 description 1
- 108010002069 Defensins Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102100026236 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000228451 Stevia rebaudiana Species 0.000 description 1
- 206010042674 Swelling Diseases 0.000 description 1
- 108010027179 Tacrolimus Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018679 Tacrolimus Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical class C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003452 antibody preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 201000003149 breast fibroadenoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000005482 chemotactic factor Substances 0.000 description 1
- 239000012916 chromogenic reagent Substances 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000010485 coping Effects 0.000 description 1
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- CYQFCXCEBYINGO-IAGOWNOFSA-N delta1-THC Chemical compound C1=C(C)CC[C@H]2C(C)(C)OC3=CC(CCCCC)=CC(O)=C3[C@@H]21 CYQFCXCEBYINGO-IAGOWNOFSA-N 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- MUJOIMFVNIBMKC-UHFFFAOYSA-N fludioxonil Chemical compound C=12OC(F)(F)OC2=CC=CC=1C1=CNC=C1C#N MUJOIMFVNIBMKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000005732 intercellular adhesion Effects 0.000 description 1
- 210000005024 intraepithelial lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 229940099262 marinol Drugs 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 108010029942 microperoxidase Proteins 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000001483 mobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920005668 polycarbonate resin Polymers 0.000 description 1
- 239000004431 polycarbonate resin Substances 0.000 description 1
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 1
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 235000020185 raw untreated milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N rebaudioside A Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000012423 response to bacterium Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000002702 ribosome display Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 235000020046 sherry Nutrition 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/99—Isomerases (5.)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/36—Gynecology or obstetrics
- G01N2800/365—Breast disorders, e.g. mastalgia, mastitits, Paget's disease
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
(1)被験体の乳房または乳分房から採取された乳汁におけるシクロフィリンAを検出することにより乳汁中のシクロフィリンA量を得る工程
(2)前記乳汁中のシクロフィリンA量に基づいて、被験体の乳房または乳分房における乳腺疾患の発症または乳腺疾患の発症可能性を判定する工程
(1’)被験体の乳房または乳分房から採取された乳腺におけるシクロフィリンAを検出することにより乳腺中のシクロフィリンA量を得る工程
(2’)前記乳腺中のシクロフィリンA量に基づいて、被験体の乳房または乳分房における乳腺疾患の発症または乳腺疾患の発症可能性を判定する工程
ラフィー法からなる群から選択される手法により実施される。
1.乳腺疾患の検査方法
本発明の方法は、乳腺または乳汁におけるシクロフィリンA量を指標とした、乳腺疾患の検査方法である。
(1)被験体の乳房または乳分房から採取された乳汁におけるシクロフィリンAを検出することにより乳汁中のシクロフィリンA量を得る工程
(2)前記乳汁中のシクロフィリンA量に基づいて、被験体の乳房または乳分房における乳腺疾患の発症または乳腺疾患の発症可能性を判定する工程
(1’)被験体の乳房または乳分房から採取された乳腺におけるシクロフィリンAを検出することにより乳腺中のシクロフィリンA量を得る工程
(2’)前記乳腺中のシクロフィリンA量に基づいて、被験体の乳房または乳分房における乳腺疾患の発症または乳腺疾患の発症可能性を判定する工程
本発明の乳腺疾患検査用試薬は、抗シクロフィリンA抗体(抗CyPA抗体)からなる。抗CyPA抗体は、CyPAに対する特異的親和性を有する限り、その種類や由来などは特に限定されない。また、抗CyPA抗体は、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体のいずれであってもよい。ポリクローナル抗体としては、免疫動物から採取した抗血清由来のIgG画分のほか、抗血清からCyPAを抗原とするアフィニティー精製して得た抗体を使用できる。また、市販されている抗体、たとえば、abcam(登録商標) rabbit−anti human CyPA(ポリクローナル抗体)を使用できる。なお、上記市販抗体は、ヒトCyPA抗体を認識する抗体ではあるが、ウシの乳汁中のCyPAに特異的に結合することができる。このように、抗CyPA抗体としては、抗原認識部位が異種のものであっても、被験体におけるCyPAに特異的に結合することができれば、使用することができる。
本発明のキットは、主要構成要素として本発明の試薬を含む。乳腺疾患の検査法を実施する際に使用するその他の試薬(緩衝液、ブロッキング用試薬、酵素の基質、発色試薬など)に加えて、器具や装置(容器、反応装置、蛍光リーダーなど)などをキットに含めてもよい。また、標準試料としてCyPAをキットに含めることが好ましい。さらには、CyPAの検出以外の乳腺疾患の検査法に用いるための試薬、器具、装置などをキットに含めることも可能である。たとえば、乳腺疾患の判定精度を高めるために、PLテスト用の試薬、器具および/または装置をキットに含めることができる。本発明のキットには、通常の市販されているキットと同様に、取り扱い説明書が添付されることが好ましい。
本発明のハイブリドーマは、抗シクロフィリンA抗体を産生する能力を有する。本発明の抗体は、本発明のハイブリドーマによって生産される抗シクロフィリンA抗体である。本発明のハイブリドーマは抗CyPA抗体を産生する能力を有する抗体産生細胞と骨髄腫細胞などの腫瘍細胞または不死化細胞とを融合させて得られる融合細胞であれば特に限定されない。本発明の抗体は、CyPAに対して特異的親和性を有する抗体であれば特に限定されない。本発明のハイブリドーマや抗体の構造および機能、確認方法、製造方法ならびに使用方法については、上記した抗CyPA抗体や抗CyPA抗体を産生するハイブリドーマに関する記載を参照できる。
本発明のマーカーは、シクロフィリンAからなる、乳腺疾患検出用マーカーである。本発明のマーカーは、乳腺疾患、特に感染性の乳腺疾患である乳房炎の発症またはその発症可能性の指標となる生体分子のことをいう。本発明のマーカーは、生体中に存在するシクロフィリンAそのものではなく、生体から採取された乳腺や乳汁から分離されたシクロフィリンAが本発明のマーカーとして利用される。本発明のマーカーは、乳房炎の早期検出に特に有用である。
1.材料および方法
(1)試料
乳房炎発症乳腺組織として、下記A〜Cに示す三種の実験区のホルスタイン泌乳牛のうち、実験的乳房炎または潜在性乳房炎の発症が認められた乳房から採取した乳腺組織を用いた。乳腺組織は、ウシを屠殺した後直ちに採取し、すみやかにPLP固定液またはリン酸緩衝ホルマリン固定液を用いて、4℃で一晩固定した。固定後70%エタノール、80%エタノール、90%エタノール、95%エタノールにそれぞれ12時間浸し、さらに100%エタノールに24時間組織を浸し、段階的に脱水を行った。脱水後、トルエン、パラフィンにそれぞれ6時間浸した後、パラフィンに包埋した。また、各実験区のホルスタイン泌乳牛のうち、PBSを投与して処理した乳房から採取した乳腺組織を対照正常乳腺組織として用いた(Toshinobu Kuroishiら、Clin Diagn Lab Immunol.2003;10:1011−1018;Kai Kら、J Vet Med Sci.2002;64:873−8を参照、該文献の記載はここに開示として援用される)。乳酸菌産生ペプチドは、カワイらの文献(Kawai Yら,Biosci Biotechnol Biochem.1997;61:179−82、該文献の記載はここに開示として援用される)に記載の方法にしたがって精製した。
Staphylococcal Endotoxins C(SEC)をPBS 10mLに溶かした0.1μg/μl SEC溶液を乳頭よりホルスタイン泌乳牛の乳分房へ投与して乳房炎を発症させた実験的乳房炎(PLP固定パラフィン包埋乳腺組織;ホルスタイン泌乳牛;分娩後日数 約300日)をSEC投与実験区とした。
Staphylococcas aureus(S.A)をPBS 10mLに溶かした154cfu/ml S.A溶液を乳頭よりホルスタイン泌乳牛の乳分房へ投与して乳房炎を発症させた実験的乳房炎(リン酸緩衝ホルマリン固定パラフィン包埋乳腺組織およびバイオプシーより得た乳腺組織;ホルスタイン泌乳牛;分娩後日数 約60日)をS.A投与実験区とした。
ラクトフェリン(Lf)または乳酸菌産生ペプチドをPBS 10mLに溶かした10mg/mLまたは20mg/mL Lf溶液を乳頭よりホルスタイン泌乳牛の乳分房へ投与した潜在性乳房炎(PLP固定パラフィン包埋乳腺組織;ホルスタイン泌乳牛;分娩後日数 約305日:乾乳導入5日)をLf投与実験区とした。
本発明者らが作製した抗CyPA抗体(2H5−F3抗体)を用いて、免疫組織化学染色により、乳腺組織におけるCyPAの局在を確認した。2H5−F3抗体は以下[i]および[ii]の手順により作製した。
本発明者らは、ウシ腸管上皮細胞株(BIE細胞)の樹立とそのin vitro M細胞(M−BIE細胞)への分化誘導法を確立している。(Characterization of newly established bovine intestinal epithelial cell line,K.Miyazawa,Histochem Cell Biol (2010)vol.133,p125−134、該文献の記載はここに開示として援用される)。M−BIE細胞を2.7×106cells/ml−PBSの濃度に調整し、BALB/cマウスの腹腔内に0.5mlを免疫した。14日後、4.0×106cells/ml−PBSに調整したM−BIE細胞の0.3mlを同一マウスの尾静脈から投与し、追加免疫した。その5日後に、免疫したマウスより脾細胞を採取し、50%(w/v) ポリエチレングリコール(PEG4000)を用いて、SP2/0−ag14−K13マウスミエローマ細胞と融合した。融合したハイブリドーマは、HAT培地 (2mM glutamate,0.2% glucose,10% FBS,100μM hypoxanthine,0.4μM aminopterine,16μM thymidineを含むRPMI−1640)を用いて選抜した。選抜したハイブリドーマから、下記の免疫組織化学染色によってウシ腸管上皮においてFAEを特異的に認識する抗体を産生するウェルを選抜し、限界希釈法によって更なるクローニングを行った。クローニングにより最終的に得られたクローン化細胞をBALB/cマウスの腹腔に投与した。BALB/cマウスの腹水由来のモノクローナル抗体は、HiTrap IgM Purification HP(GE Healthcare Bio−Science AB,Uppsala,Sweden)を用いて精製した。抗体のサブクラスはmouse monoclonal antibody isotyping kit(Dainippon Sumitomo Pharma)で決定し、2H5−F3モノクローナル抗体とした。
Transmembrane Protein Extraction Kit(Novagen)を用いてM−BIE細胞の細胞質画分および細胞膜画分、それぞれのタンパク質を回収した。抽出した細胞膜画分のタンパク質を60μl(2.0μg/μl)と2H5−F3モノクローナル抗体1.0μl(2.45μg/μl)を混合し、4℃で一晩静置した。次にμMACS protein G(Milteny Biotech)50μlと混合し、4℃で1時間静置した後、免疫沈降を行った。免疫沈降で得られたタンパク質溶解液をSDS−PAGEで分離し、Silver Stain MS Kit(Wako)で染色した。2H5−F3モノクローナル抗体特異的なバントを抽出し、LC−MS/MS解析を行った。また、免疫沈降で得られたタンパク質をウェスタンブロッティングして、2H5−F3モノクローナル抗体との反応性を解析した。その結果、2H5−F3抗体の認識する抗原はシクロフィリンAであることを同定した。
各実験区のパラフィン包埋乳腺組織から厚さ4μmの切片を作製し、以下の手順でCyPAについて免疫組織化学染色を行った。
切片を脱パラフィン化して得た乳腺組織を5分間水洗し、次いでTarget Retrieval Solution Low pH(Dako)を用いて121℃で5分間の抗原賦活化処理に供した。処理後の乳腺組織を、PBSで3分間洗浄し、これを3回繰り返した。洗浄後の乳腺組織を、3% 正常ヤギ血清/PBSを用いて20分間のブロッキング処理に供した。処理後の乳腺組織を、抗CyPA抗体2,000倍希釈/PBSを用いて、4℃で14時間の一次抗体反応に供した。
反応後の乳腺組織を、PBSで3分間洗浄し、これを3回繰り返した。洗浄後の乳腺組織を、Histofine Simplestain MAX−PO(M)(Nichirei)を用いて室温で20分間の二次抗体反応に供した。反応後の乳腺組織を、PBSで3分間洗浄し、これを3回繰り返した。洗浄後の乳腺組織を、0.0025% 3.3’−diaminobenzidine(同仁、熊本、日本)+0.006% H2O2/0.05M Tris−HCl(pH 7.5)を用いて、室温で1分間のDAB発色反応に供した。反応後の乳腺組織を蒸留水(DW)で数秒間洗浄した。洗浄後の乳腺組織を、室温にて20秒間のヘマトキシリン対比染色に供した。染色後の乳腺組織を、60分間、流水により洗浄した。洗浄後の乳腺組織を、脱水および透徹し、マリノール(武藤化学)を用いて封入した。
(1)SEC投与実験区の乳腺組織の観察
ウシ乳腺におけるCyPAの発現を免疫組織化学染色により観察した。SEC投与実験区の対照正常乳腺組織において、CyPAは乳腺胞に局在していた(図1A)。乳腺胞の乳腺上皮細胞で均一にCyPAが発現していた(図1B)。微量であるが乳腺胞内にある乳汁でCyPAが弱く発現していた(図1C)。
ウシ乳腺におけるCyPAの発現を免疫組織化学染色により観察した。S.A投与実験区の対照正常乳腺組織において、SEC投与実験区の対照正常乳腺組織と同様に、乳腺胞の乳腺上皮細胞でCyPAが均一に発現していたこと、および乳汁で微量にCyPAが発現していたことが確認された(図3A〜3C)。
ウシ乳腺におけるCyPAの発現を免疫組織化学染色により観察した。治療のためにラクトフェリンを投与したLf投与実験区の対照正常乳腺組織において、SECおよびS.A投与実験区のPBS投与乳腺組織(対照正常乳腺組織)と同様に、乳腺上皮細胞および乳汁でCyPAの発現が確認された(図5A〜B、図6A〜C)。間質が肥大し萎縮した乳腺胞および乳腺上皮細胞のCyPA発現は、SA投与実験区の乳房炎発症乳腺と同様に、萎縮していない乳腺胞および乳腺上皮細胞と比べて減少していた(図6C)。また潜在性乳房炎発症した乳腺組織では、上記の実験的乳房炎組織と同様に、正常乳腺組織と比較すると、乳腺上皮細胞、乳汁および免疫細胞浸潤部位でCyPAが高発現していた。(図7A〜C)。
上記の結果から、正常な乳房から採取した乳腺組織において、CyPAが細胞内タンパク質として乳腺上皮細胞および乳汁に存在することが確認された。また、細菌毒素であるSECおよび細菌であるS.Aを投与して乳房炎を発症させた乳房から採取した乳腺組織においても、同様にCyPAが発現した。特に、正常乳腺組織と比べて、乳房炎発症乳腺組織における乳腺上皮細胞、乳汁および免疫細胞浸潤部位のCyPA発現は強かった。搾乳最後期などに見られる間質が肥大化することにより萎縮した乳腺胞および乳腺上皮細胞では、萎縮していない乳腺胞や乳腺上皮細胞と比較すると、それぞれCyPAの発現量が低下した。
1.材料および方法
(1)試料
供試牛として宮城県畜産試験場で飼育されたホルスタイン泌乳牛を用いた。PLテスターおよびCL能の結果より乳房炎を発症していると診断されたホルスタイン泌乳牛8頭および罹患歴がない健常ホルスタイン泌乳牛4頭の合計12頭の供試牛を用いた。乳汁サンプルとして全分房乳、計48サンプル(内1分房は盲乳処置中)を使用した。表1に、試験で使用した乳汁サンプルのデータを示した。
ウェスタンブロット法でのCyPAの解析には、市販のポリクローナル抗体である抗CyPA抗体(rabbit−anti human CyPA;Abcam(登録商標))を用いた。
A.乳汁サンプル中の乳清タンパク質の抽出およびタンパク定量
次の手順で乳汁サンプル中の乳清タンパク質を抽出および定量した。乳汁サンプルを1,100G、4℃、20分間の遠心処理に供した。処理後の乳汁サンプルから乳脂肪および沈殿物を除去し、乳清を採取した。採取した乳清をPierce(登録商標)BCA Protein Assay Kit(Thermo Sientific)を用いて、37℃で30分間インキュベートした。インキュベート後の乳清について、DS PHARMA BIOMEDICALを用いてタンパク濃度を測定したところ、14μg/μlとの定量結果を得た。
タンパク定量した後の乳清サンプルを用いて、以下の手順でCyPAタンパク質の解析を行った。
1日目として、タンパク定量した後の乳清サンプル中のタンパク質を、PAGEL(ATTO;E−T520L)を用いて、タンパク質濃度が21μg/laneになるようにSDS−PAGEによって分離した。分離したタンパク質をImmobion−P Transfer membrames(Millipore)のメンブランとセラミドライシステム(Bio−Rad)を用いて、60分間、1.2mA/cm2で該メンブランへ転写した。転写後のメンブランをTBS−Tweenで、10分間を3回繰り返すことにより洗浄(0.1%Tween20/TBS;TBS−T)した。洗浄後のメンブランを、60分間のブロッキング処理(3% normal goat serum/TBS−T)に供した。処理後のメンブランを、TBS−Tweenにて、10分間を3回繰り返すことにより洗浄した。洗浄後のメンブランを、4℃で14時間の一次抗体反応(抗CyPA抗体1,000倍希釈/TBS−T)に供した。
1日目として、5% 2MEを加えたタンパク定量後の乳清サンプル中のタンパク質を、PAGEL(ATTO;E−T520L)を用いて、タンパク質濃度が21μg/laneになるように、SDS−PAGEによって分離した。分離したタンパク質をImmobion−P Transfer membrames(Millipore)のメンブランとセラミドライシステム(Bio−Rad)を用いて、60分間、1.2mA/cm2でメンブランへ転写した。転写後のメンブランをTBS−Tween(0.1%Tween20/TBS;TBS−T)で10分間を3回繰り返すことにより洗浄した。洗浄後のメンブランを、60分間のブロッキング処理(3% normal goat serum/TBS−T)に供した。TBS−Tweenを用いて10分間を3回繰り返すことにより洗浄した。洗浄後のメンブランを4℃で14時間の一次抗体反応(抗CyPA抗体1,000倍希釈/TBS−T)に供した。
タンパク定量した乳清サンプルを用いて、次の手順で乳清中のタンパク質の解析を行った。乳清サンプル中のタンパク質を、PAGEL(ATTO;E−T520L)を用いてタンパク質濃度が21μg/laneになるようにSDS−PAGEによって分離した。分離後のゲルを、5分間のMQ洗浄を3回繰り返した。洗浄後のゲルを、ULTRA−FAST Coomassie Stain(NRV,USA)を用いて、室温で20分間の発色処理に供した。処理後のゲルにおけるバンドを確認した。
上記(3)B(B)の手順で、乳清サンプル中のタンパク質を分離した。分離後のゲルから、Molecular Imager FXを用いてバンドを検出および撮影した。撮影して得たイメージファイルを、Photshop 5.0 LE.を用いてグレースケールにより白黒反転させた。白黒反転させて得たイメージファイルを、NIHイメージ(NIH imager Ver.1.62,USA)のgel plotting Macrosを用いて解析し、バンド強度を測定した。バンド強度を測定して得たCyPAの濃度は、表1の牛体番号108の右後分房の乳汁サンプル(解析番号42)を基準として数値化した。また、得られたCyPA濃度とCL値との相関関係を解析した。
(1)乳汁中CyPAの検出方法の確立
牛体番号81の分房別乳汁サンプル(解析番号9−12)を用いて、タンパク質解析を行った。Coomassie Brilliant Blue(CBB)染色を行った結果、還元処理した非感染分房乳汁サンプル(解析番号10−12)および乳房炎発症分房乳汁サンプル(解析番号9)の解析結果として、65kDa付近にてバンドが検出された(図8)。これは本来160kDa程度のIgGが還元されて得たものと推測される。また、非還元処理で見られた50kDa付近のタンパク質は、還元処理後には検出されなかった。
上記(1)から、乳房炎に罹患している泌乳牛に由来する乳汁サンプル中にCyPAタンパク質が検出されたことから、全乳汁サンプル(解析番号1−48、ただし解析番号19は盲乳処置中)について還元処理を行い、得られた乳清サンプル中のCyPAタンパク質を解析した。健常牛分房乳汁サンプル(解析番号33−48)および乳房炎発症乳汁サンプル(解析番号1−32)を用いた解析では、CyPAタンパク質が検出された(図10A〜C)。健常牛分房乳は乳房炎発症分房乳と比べ、CyPAタンパク質が少なかった。一方、乳房炎発症乳の非感染分房乳(解析番号1,3−6,10−12,14,16,18−22,24−26,29)は、乳房炎発症分房乳(解析番号2,7−9,13,15,17,23,27,28,30−32)より、CyPAタンパク質が少なかった。
健常牛の分房乳汁サンプルで乳性状、PLテストおよびCL能が低かった牛体番号108の解析番号42の乳汁サンプルを標準として、全乳汁サンプルのCyPA発現強度を測定した。解析番号1−48(ただし解析番号19は盲乳処置中)のCyPA発現の相対値を算出した(表2)。CL能とCyPA発現強度には相関関係が見られた(p<0.0001)(図11)。CL能の上昇に伴い、CyPA発現強度も増加することが明らかになった。
非還元処理した乳清サンプルのウェスタンブロットでは、非感染分房乳汁サンプルにおいてCyPAは検出されなかった。しかし、高いCL能を示す乳房炎発症分房乳汁サンプルからは、CyPAを大量に検出した。一方、乳清タンパク質の還元処理を行ったところ、健常牛由来乳汁サンプルおよび乳房炎発症牛由来乳汁サンプルの乳清中にCyPAが検出された。
Claims (14)
- 乳腺または乳汁におけるシクロフィリンA量を指標とした、乳腺疾患の検査方法。
- 下記(1)および(2)の工程を含む、乳腺疾患の検査方法。
(1)被験体の乳房または乳分房から採取された乳汁におけるシクロフィリンAを検出することにより乳汁中のシクロフィリンA量を得る工程
(2)前記乳汁中のシクロフィリンA量に基づいて、被験体の乳房または乳分房における乳腺疾患の発症または乳腺疾患の発症可能性を判定する工程 - 前記工程(2)は、前記乳汁中のシクロフィリンA量が、健常な乳房または乳分房から採取した乳汁中のシクロフィリンA量よりも大きい場合に、被験体の乳房または乳分房において乳腺疾患が発症している、または乳腺疾患が発症する可能性があると判定する工程である、請求項2に記載の方法。
- 前記工程(2)は、前記乳汁中のシクロフィリンA量が、健常な乳房または乳分房から採取した乳汁中のシクロフィリンA量の2倍以上である場合に、被験体の乳房または乳分房において乳腺疾患が発症している、または乳腺疾患が発症する可能性があると判定する工程である、請求項2に記載の方法。
- 前記乳腺疾患が、感染性の乳腺疾患である、請求項2に記載の方法。
- 前記乳腺疾患が、乳房炎である、請求項2に記載の方法。
- 抗シクロフィリンA抗体からなる、乳腺疾患検査用試薬。
- 前記抗シクロフィリンA抗体が、不溶性担体に固相化されている抗シクロフィリンA抗体である、請求項7に記載の試薬。
- 前記乳腺疾患が、感染性の乳腺疾患である、請求項7に記載の試薬。
- 前記乳腺疾患が、乳房炎である、請求項7に記載の試薬。
- 請求項7に記載の試薬を含む、乳腺疾患検査用キット。
- シクロフィリンAからなる、乳腺疾患検出用マーカー。
- 前記乳腺疾患が、感染性の乳腺疾患である、請求項12に記載のマーカー。
- 前記乳腺疾患が、乳房炎である、請求項12に記載のマーカー。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012156163 | 2012-07-12 | ||
JP2012156163 | 2012-07-12 | ||
PCT/JP2013/052955 WO2014010261A1 (ja) | 2012-07-12 | 2013-02-08 | 乳腺疾患の検査方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2014010261A1 true JPWO2014010261A1 (ja) | 2016-06-20 |
JP6176741B2 JP6176741B2 (ja) | 2017-08-09 |
Family
ID=49915740
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014524659A Active JP6176741B2 (ja) | 2012-07-12 | 2013-02-08 | 乳腺疾患の検査方法 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10012649B2 (ja) |
JP (1) | JP6176741B2 (ja) |
WO (1) | WO2014010261A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014010261A1 (ja) * | 2012-07-12 | 2014-01-16 | 国立大学法人東北大学 | 乳腺疾患の検査方法 |
JP2016088918A (ja) * | 2014-11-11 | 2016-05-23 | 大山乳業農業協同組合 | 乳房炎治療・予防用組成物、並びに、乳房炎の治療・予防方法 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7105306B1 (en) * | 2000-08-10 | 2006-09-12 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and compositions for modulating somatolactogenic functions |
US20110207156A1 (en) * | 2008-10-29 | 2011-08-25 | The Regents Of The University Of Colorado | Biomarkers for Diagnosis of Breast Cancer |
WO2014010261A1 (ja) * | 2012-07-12 | 2014-01-16 | 国立大学法人東北大学 | 乳腺疾患の検査方法 |
-
2013
- 2013-02-08 WO PCT/JP2013/052955 patent/WO2014010261A1/ja active Application Filing
- 2013-02-08 JP JP2014524659A patent/JP6176741B2/ja active Active
- 2013-02-08 US US14/413,855 patent/US10012649B2/en active Active
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN7017000654; 日本畜産学会 第115回大会 講演要旨 , 20120328, p233、VII29-33 * |
JPN7017000655; KLASTRUP: Kieler Milchwirtshaftliche Forschungsberichte Vol.37, No.3, 1985, p254-260 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2014010261A1 (ja) | 2014-01-16 |
JP6176741B2 (ja) | 2017-08-09 |
US10012649B2 (en) | 2018-07-03 |
US20150192585A1 (en) | 2015-07-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5710699B2 (ja) | オートタキシン測定による慢性肝疾患の検査方法および検査薬 | |
US10126312B2 (en) | Diagnostic method for urinary tract infection | |
US11892457B2 (en) | Proteoliposome-based ZnT8 self-antigen for type 1 diabetes diagnosis | |
JP2016527483A (ja) | 前立腺癌を検出する方法 | |
EP2054443B1 (en) | Antibodies to an epitope of agr2, assays and hybridomas | |
WO2014192974A1 (ja) | 抗lgr6抗体を含む癌の検出用又は診断用試薬 | |
EP2692735B1 (en) | Antibody reacting with native cochlin-tomoprotein (ctp) and method for measuring ctp using same | |
JP6176741B2 (ja) | 乳腺疾患の検査方法 | |
WO2020184409A1 (ja) | 生体試料中のβ-D-グルカンの免疫学的分析方法、及びβ-D-グルカン分析用キット | |
US11746146B2 (en) | Antibody composition specifically recognizing an immunogenic fragment peptide of EN2 protein | |
JP2010281725A (ja) | ラクトフェリンの催炎性フラグメントの測定方法 | |
US11174310B2 (en) | Disulfide-type HMGB1-specific antibody, method for measuring disulfide-type HMGB1 and kit for said measurement, and measurement method capable of quantitating all of HMGB1 molecules including reduced HMGB1, disulfide-type HMGB1 and thrombin-cleavable HMGB1 and kit for said measurement | |
WO2020205299A1 (en) | Detecting cancer biomarker proteins in blood | |
JP6749221B2 (ja) | 疥癬の検査方法、並びにそれに用いる薬剤及びデバイス | |
JP7306661B2 (ja) | 消化管間質腫瘍を検出する方法および検出試薬 | |
CN115819548B (zh) | 一种检测炎症相关疾病的标志物和方法 | |
JP2016114360A (ja) | ヒトt細胞白血病ウイルスhbz蛋白質の検出方法 | |
JPWO2004009640A1 (ja) | 抗菌性ペプチドに対する抗体及びその利用 | |
WO2022054753A1 (ja) | 敗血症原因細菌の免疫学的分析キット | |
US20230133318A1 (en) | Novel biomarkers of membranous glomerulonephritis | |
JP2023138363A (ja) | 妊孕性を判定するためのバイオマーカー及びそれを用いた判定方法 | |
KR20200082651A (ko) | 디프테리아 독소에 대해 특이적으로 결합하는 단일클론항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이의 용도 | |
JP2013203733A (ja) | イヌ糸状虫22kDaタンパク質を利用したイヌ糸状虫感染の検出 | |
JP2001289859A (ja) | 多発性硬化症の診断方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170228 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170428 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170613 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170706 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6176741 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |