JPWO2013018879A1 - 脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質、これをコードする遺伝子及びその用途 - Google Patents
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Abstract
Description
上記(i)〜(iv)の反応は、それぞれ(i)3-ケトアシル-CoAシンターゼ、(ii)β-ケトアシルレダクターゼ、(iii)3-ヒドロキシアシル-CoAデヒドロゲナーゼ、(iv)エノイル-CoAレダクターゼの酵素が媒介することが知られている(非特許文献1)。
これらの酵素のうち、縮合反応を担う3-ケトアシル-CoAシンターゼは、基質となる脂肪酸に対し特異性を示すことが知られており、種々の生物から、様々な特異性を持つ酵素がクローン化されている。
特に、真菌類で最もよく研究されている酵母では、脂肪酸鎖長延長反応の四段階の反応全てにおいて、各反応を担う酵素とそれをコードする遺伝子が明らかになっている。
例えば、酵母においてβ-ケトアシルレダクターゼ活性を担う酵素をコードする遺伝子としてIFA38とAYR1の2つが知られており、さらに、これらを同時に欠失させると致死であることも知られている(非特許文献2)。また、AYR1遺伝子は、1-アシルジヒドロキシアセトンホスフェートレダクターゼ活性を有することも知られている。(非特許文献3)
これに対し、脂質生産菌であるモルティエレラ・アルピナ(Mortierella alpina (M. alpina))では、脂肪酸鎖長延長に関わる最初の反応を担う3-ケトアシル-CoA シンターゼ(いわゆる鎖長延長酵素)遺伝子(MALCE1(ELO3)、MALCE2、GLELO、MAELO)が知られているが(特許文献1)、3-ケトアシル-CoA シンターゼ以外の酵素の遺伝子は知られていない。
[1] 以下の(a)〜(e)よりなる群より選ばれるいずれかに記載のポリヌクレオチド:
(a)配列番号1又は4の塩基配列を含有するポリヌクレオチド;
(b)配列番号2のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(c)配列番号2のアミノ酸配列において、1〜100個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び/又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつ脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(d)配列番号2のアミノ酸配列に対して、60%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、かつ脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド;及び
(e)配列番号1又は4の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドであって、脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
[2] 以下の(f)又は(g)のいずれかである上記[1]に記載のポリヌクレオチド:
(f)配列番号2のアミノ酸配列において1〜10個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び/又は付加したアミノ酸配列からなり、かつ脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド;及び
(g)配列番号2のアミノ酸配列に対して、75%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、かつ脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
[3] 配列番号1又は4の塩基配列を含有する、上記[1]に記載のポリヌクレオチド。
[4] 配列番号2のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする、上記[1]に記載のポリヌクレオチド。
[5] DNAである、上記[1]〜[4]のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
[6] 上記[1]〜[5]のいずれかに記載のポリヌクレオチドにコードされるタンパク質。
[7] 上記[1]〜[5]のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有するベクター。
[8] 上記[1]〜[5]のいずれかに記載のポリヌクレオチドが導入された非ヒト形質転換体。
[9] 上記[7]に記載のベクターが導入された非ヒト形質転換体。
[10] 前記形質転換体が脂質生産菌である、上記[8]又は[9]に記載の形質転換体。
[11] 前記脂質生産菌が、モルティエレラ・アルピナ(Mortierella alpina)である、上記[10]に記載の形質転換体。
[12] 上記[8]〜[11]のいずれかに記載の形質転換体の培養物から、脂質又は脂肪酸組成物を採取することを特徴とする、脂質又は脂肪酸組成物の製造方法。
[13] 前記脂質が、トリアシルグリセロールである、上記[12]に記載の方法。
[14] 前記脂肪酸が、炭素数18以上のものである、上記[12]に記載の方法。
[15] 上記[12]に記載の製造方法により採取された脂質又は脂肪酸組成物を含有する食品、医薬品、化粧品又は石鹸。
なお、本明細書において引用した全ての文献、および公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。また、本明細書は、2011年8月4日に出願された本願優先権主張の基礎となる日本国特許出願(特願2011-171044号)の明細書及び図面に記載の内容を包含する。
まず、本発明は、以下の(a)〜(e)よりなる群より選ばれるいずれかに記載のポリヌクレオチドを提供する。
(a)配列番号1又は4の塩基配列を含有するポリヌクレオチド;
(b)配列番号2のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(c)配列番号2のアミノ酸配列において、1〜100個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び/又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつ脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(d)配列番号2のアミノ酸配列に対して、60%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、かつ脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド;及び
(e)配列番号1又は4の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドであって、脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド
本明細書中、「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド」とは、例えば、配列番号1又は4の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチド、又は配列番号2のアミノ酸配列をコードする塩基配列からなるポリヌクレオチドの全部又は一部をプローブとして、コロニーハイブリダイゼーション法、プラークハイブリダイゼーション法又はサザンハイブリダイゼーション法などを用いることにより得られるポリヌクレオチドをいう。ハイブリダイゼーションの方法としては、例えば、"Sambrook & Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual Vol. 3, Cold Spring Harbor, Laboratory Press 2001"及び"Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons 1987-1997"などに記載されている方法を利用することができる。
本発明は、次の(i)〜(iv)に示すタンパク質を提供する。
(i)上記(a)〜(e)のいずれかのポリヌクレオチドにコードされるタンパク質
(ii)配列番号2のアミノ酸配列を含むタンパク質
(iii)配列番号2のアミノ酸配列における1若しくは複数個のアミノ酸が、欠失、置換、挿入、及び/又は付加されたアミノ酸配列を含み、かつ脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質
(iv)配列番号2のアミノ酸配列に対して75%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、かつ脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質
具体的には、脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質を、上記の適切な宿主細胞で発現させた場合、発現させていない同種細胞と比べて、(i)炭素数16の脂肪酸量が減少し、炭素数18の脂肪酸量が増加するか、(ii)炭素数17の脂肪酸量が減少し、炭素数19の脂肪酸量が増加するか、(iii)炭素数18の脂肪酸量が減少し、炭素数20の脂肪酸量が増加するか、(iv)炭素数20の脂肪酸量が減少し、炭素数22の脂肪酸量が増加するか、(v)炭素数22の脂肪酸量が減少し、炭素数24の脂肪酸量が増加するか、(vi)炭素数24の脂肪酸量が減少し、炭素数26の脂肪酸量が増加するか、(vii)炭素数26の脂肪酸量が減少し、炭素数28の脂肪酸量が増加するか、あるいは(viii)炭素数28の脂肪酸量が減少し、炭素数30の脂肪酸量が増加する。
なお、脂肪酸鎖長延長促進活性は、Han, G. et al., (2002) J. Biol. Chem. 277, 35440-35449に記載の方法に従って測定することができる。
また、脂肪酸鎖長延長促進活性を確認する方法としては、酵母、脂質生産菌及び植物細胞等の適切な宿主細胞を用いた実験が挙げられる。本発明のタンパク質をコードするポリヌクレオチドを宿主細胞内で発現させた場合に、より鎖長の長い脂肪酸の生成量が増加すれば、そのポリヌクレオチドにコードされるタンパク質又はペプチドは脂肪酸鎖長延長促進活性を有するということができる。本発明者らは、実施例において、酵母細胞内で本発明のタンパク質を発現させ、ガスクロマトグラフィーを用いて、当該酵母細胞に含まれる脂肪酸組成を分析したところ、炭素数16の脂肪酸量が減少し、炭素数18の脂肪酸量が増大したことを確認している。
酵母は、炭素数18までの脂肪酸しか合成することができないため、実施例では炭素数18の脂肪酸の量が増加していたが、炭素数が18よりも多い脂肪酸、例えば、炭素数19又は20の脂肪酸を合成可能な細胞(例えば、モルティエレラ・アルピナ(Mortierella alpina))を宿主として用いた場合、その宿主細胞が合成しうる脂肪酸のうち、より炭素数の多い脂肪酸(例えば、最も炭素数の多い脂肪酸)(例えば、モルティエレラ・アルピナであれば、炭素数20の脂肪酸)の量が増加するものと考えられる。
また、本発明のタンパク質により鎖長延長される脂肪酸は、飽和脂肪酸又は不飽和脂肪酸のいずれであってもよいが、好ましくは、不飽和脂肪酸であり、さらに好ましくは、1価、2価、3価又は4価の不飽和脂肪酸である。
本発明のタンパク質は、酵母由来のAYR1タンパク質のホモログタンパク質であることから、AYR1と同様に、β‐ケトアシルレダクターゼ活性を有するものと考えられる。酵母では、β‐ケトアシルレダクターゼ活性を有する遺伝子として、AYR1のほかにIFA38が知られており、これら2つを同時に破壊すると致死であることが知られている(Han, G. et al., (2002) J. Biol. Chem. 277, 35440-35449)。本発明のタンパク質が、β‐ケトアシルレダクターゼ活性を有するかどうかは、AYR1遺伝子およびIFA38遺伝子を破壊した酵母株において、本発明のタンパク質を発現させれば同株が生育できること、あるいは、β‐ケトアシルレダクターゼ活性が補填され得るかどうかを調べることにより、確認することができる。
本発明はまた、別の実施形態において、本発明のポリヌクレオチドを含有する発現ベクターを提供する。
本発明のベクターは、通常、
(i)宿主細胞内で転写可能なプロモーター;
(ii)該プロモーターに結合した、上記(a)〜(g)のいずれかに記載のポリヌクレオチド;及び
(iii)RNA分子の転写終結及びポリアデニル化に関し、宿主細胞内で機能するシグナルを構成要素として含む発現カセット
を含むように構成される。
このように構築されるベクターは、宿主細胞に導入される。本発明において使用される適切な宿主細胞の例としては、脂質生産菌、酵母等が挙げられる。
脂質生産菌に導入する際に用いるベクターとしては、例えば、pDura5(Appl. Microbiol. Biotechnol., 65, 419-425, (2004))が利用可能であるが、これに限定されない。
形質転換の際に用いる選択マーカーとしては、栄養要求性マーカー(ura5、niaD、trp1)、薬剤耐性マーカー(hygromycine、ゼオシン)、ジェネチシン耐性遺伝子(G418r)、銅耐性遺伝子(CUP1)(Marin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 337 1984)、セルレニン耐性遺伝子(fas2m, PDR4)(それぞれ猪腰淳嗣ら, 生化学, 64, 660, 1992; Hussain et al., gene, 101, 149, 1991)等が利用可能である。
本発明はまた、別の実施形態において、上記の形質転換脂質生産菌又は酵母を用いる脂質又は脂肪酸組成物の製造方法を提供する。
本明細書中、「脂質」とは、脂肪酸とアルコールとがエステル結合した化合物(例えば、グリセリド)又はその類似体(例えば、コレステロールエステル)等を含む単純脂質、単純脂質の一部にさらにリン酸、アミノ酸、糖等が結合した複合脂質、及び脂質の加水分解物で水に溶けない誘導脂質をいうものとする。
本明細書中、「油脂」とは、グリセロールと脂肪酸のエステル(グリセリド)のことをいう。
本明細書中、「脂肪酸」とは、一般式RCOOH(Rはアルキル基)で表される脂肪族モノカルボン酸(カルボキシル基を一個有し、炭素原子が鎖状に連結したカルボン酸)のことをいう。脂肪酸には、炭化水素鎖中に二重結合を有さない飽和脂肪酸と、二重結合を含む不飽和脂肪酸とが含まれる。
また、本発明の方法により製造される脂肪酸は、好ましくは、炭素数18以上の脂肪酸であり、更に好ましくは、トリアシルグリセロールに含有される炭素数18以上の脂肪酸である。
炭素数18以上の脂肪酸の例としては、ステアリン酸(18:0)、オレイン酸(
18:1(9))、バクセン酸(18:1(11))、リノール酸(18:2(9,12))、α-リノレン酸(18:3(9,12,15))、γ-リノレン酸(18:3(6,9,12))、エレオステアリン酸(18:3(9,11,13))、アラキジン酸(20:0)、エイコセン酸(20:1Δ11)、8,11-エイコサジエン酸(20:2(8,11))、5,8,11-エイコサトリエン酸(20:3(5,8,11))、アラキドン酸(20:4(5,8,11,14))、ベヘン酸(22:0)、リグノセリン酸(24:0)、ネルボン酸(24:1)、セロチン酸(26:0)、モンタン酸(28:0)及びメリシン酸(30:0)が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
また、本発明の方法により製造される脂肪酸は、飽和脂肪酸又は不飽和脂肪酸のいずれであってもよいが、好ましくは、不飽和脂肪酸であり、さらに好ましくは、1価、2価、3価又は4価の不飽和脂肪酸である。
なお、本発明の方法により生成される脂質及び該脂質に含まれる脂肪酸の組成は、上記の脂質の抽出方法、脂肪酸の分離方法又はそれらの組合せによって確認することができる。
栄養補助食品とは、特定の栄養成分が強化されている食品をいう。健康食品とは、健康的な又は健康によいとされる食品をいい、栄養補助食品、自然食品、ダイエット食品等を含む。機能性食品とは、体の調節機能を果たす栄養成分を補給するための食品をいい、特定保健用食品と同義である。幼児用食品とは、約6歳までの子供に与えるための食品をいう。老人用食品とは、無処理の食品と比較して消化及び吸収が容易であるように処理された食品をいう。乳児用調製乳とは、約1歳までの子供に与えるための調製乳をいう。未熟児用調製乳とは、未熟児が生後約6ヶ月になるまで与えるための調製乳をいう。
さらに、当該遺伝子の発現量を指標にして、脂質、特に、トリアシルグリセロール生産を効率よく行うための培養条件の検討、培養管理、等にも利用できる。
M. alpina 1S-4株を100mlのGY2:1培地(2%グルコース、1%酵母エキス pH6.0)に植菌し、28℃で2日間振とう培養した。濾過により菌体を集菌し、DNeasy (QIAGEN) を用いてゲノムDNAを調製した。上記ゲノムDNAの塩基配列を、 Roche 454 GS FLX Standard を用いて決定した。その際、フラグメントライブラリーの塩基配列決定を2ラン分、メイトペアライブラリーの塩基配列決定を3ラン分行った。得られた塩基配列をアッセンブリすることにより、300個のSuper Contigが得られた。
M. alpina 1S-4株を100mlの培地(1.8%グルコース、1%酵母エキス、pH6.0)に植菌し、3日間28℃で前培養した。10L培養槽(Able Co.,東京)に5Lの培地(1.8%グルコース、1%大豆粉、0.1%オリーブ油、0.01%アデカノール、0.3%KH2PO4、0.1% Na2SO4、0.05% CaCl2・2H2O、0.05% MgCl2・6H2O、pH6.0)を入れ、前培養物を全量植菌し、300rpm、1vvm、26℃の条件で8日間通気攪拌培養した。培養1、2、及び3日目に各々2%、2%、及び1.5%相当のグルコースを添加した。培養1、2、3、6、及び8日目の各ステージに菌体を回収し、塩酸グアニジン/CsCl法でtotal RNAを調製した。Oligotex-dT30 <Super> mRNA Purification Kit(Takara Bio Inc.)を用いて、total RNAからpoly(A)+RNAの精製を行った。各ステージのcDNAライブラリーを、ZAP-cDNA GigapackIII Gold Cloning Kit (STRATAGENE) を用いて作製した。
酵母の1-アシル ジヒドロキシアセトンホスフェートレダクターゼ活性およびβ-ケトアシルレダクターゼ活性を担う遺伝子であるScAYR1(YIL124W)のホモログをゲノムデータベースより検討した。その結果、配列番号4の配列を含むスーパーコンティグがヒットした。配列番号4に係る遺伝子をMaADR1と命名した。
MaADR1遺伝子のcDNAをクローン化するため、開始コドンや終止コドンの存在、ホモログとの配列比較から、配列番号4の1-3番目のATGが開始コドン、1587‐1589番目が、終止コドンと推定された。そこで、以下のプライマーを合成した。
Bam-ADR-F: 5’-GGATCCATGGCCTCGTCTAAAAAGATCGTCCT-3’(配列番号5)
Sal-ADR-R: 5’-GTCGACTACTTTCCAACGACCTTGCCATCC-3’(配列番号6)
M. alpina 1S-4株のcDNAを鋳型として、プライマーBam-ADR-FとSal-ADR-R、KOD-Plus(TOYOBO)によりPCR増幅を行ったところ、約0.87kbのDNA断片が増幅された。これをZero Blunt TOPO PCRクローニングキット(Invitrogen)を用いてクローン化し、得られたプラスミドをpCR-MaADR1とした。このプラスミドのインサートの配列、すなわち、MaADR1遺伝子のCDS配列を配列番号3に示す。さらに、MaADR1遺伝子のORF配列を配列番号1に示す。
MaADR1遺伝子のゲノム配列(配列番号4)とCDS配列(配列番号3)を比較したところ、本遺伝子のゲノム配列は、エクソン5つ、イントロン4つからなり(図1)、242個のアミノ酸残基からなるタンパク質をコードしていると推定される(図2)。
MaADR1の推定アミノ酸配列(配列番号2)をGENEBANK nrに登録されているアミノ酸配列に対してBLASTpにて相同性解析を行った。その結果、この配列に対して最もE-valueの低かったアミノ酸配列、すなわち同一性の高かったアミノ酸配列は、Volvox carterif. nagariensis(緑藻類)由来の推定タンパク質(GENEBANK accession No.XP_002946364)であり、アミノ酸配列の同一性は、34.7%であった。また、MaADR1の推定アミノ酸配列は、酵母S. cerevisiae由来のAYR1pのアミノ酸配列とは25.6%、IFA38のアミノ酸配列とは13.6%の同一性を示した。
MaADR1、Volvox carterif. nagariensis(緑藻類)由来の推定タンパク質(GENEBANK accession No.XP_002946364)及びS. cerevisiae由来のAYR1pの各アミノ酸配列の比較を図3に示す。
酵母用発現ベクターの構築
酵母発現用ベクターpYE22m(Biosci. Biotech. Biochem., 59, 1221-1228, 1995)を制限酵素BamHIとSalIで消化したDNA断片と、プラスミドpCR-MaADR1を制限酵素BamHIとSalIで消化して得られた約0.87KbpのDNA断片をligation high(TOYOBO)で連結し、プラスミドpYE-MaADR1を構築した。
プラスミドpYE22m、pYE-MaADR1をそれぞれ用いて酢酸リチウム法により、酵母S. cerevisiae EH13-15株(trp1,MATα)(Appl. Microbiol. Biotechnol., 30, 515-520, 1989)を形質転換した。形質転換株は、SC-Trp(1lあたり、Yeast nitrogen base w/o amino acids(DIFCO)6.7g、グルコース20g、アミノ酸パウダー(アデニン硫酸塩1.25g、アルギニン0.6g、アスパラギン酸3g、グルタミン酸3g、ヒスチジン0.6g、ロイシン1.8g、リジン0.9g、メチオニン0.6g、フェニルアラニン1.5g、セリン11.25g、チロシン0.9g、バリン4.5g、スレオニン6g、ウラシル0.6gを混合したもの)1.3g)寒天培地(2%アガー)上で生育するものとして選抜した。
プラスミドpYE22mを用いて形質転換して得られた任意の4株と、プラスミドpYE-MaADR1を用いて形質転換して得られた任意の4株を、以下の培養実験に供した。前培養として、SC-Trp培地10mlに酵母をプレートから1白金耳植菌し、30℃で1日間振とう培養を行った。本培養は、SC-Trp培地10mlに前培養液を100μl添加し、30℃で2日間振とう培養を行った。
酵母の培養液を遠心分離することにより、菌体を回収した。10mlの滅菌水で洗浄し、遠心分離により再び菌体を回収し、凍結乾燥した。凍結乾燥菌体に、1mlのクロロホルム:メタノール(2:1)とガラスビーズを加え、ビーズビーターにて菌体を破砕したあと、遠心分離して上清を回収した。残った菌体にさらに1mlのクロロホルム:メタノール(2:1)を加え、同様にして、上清を回収することを繰り返し、総量4mlのクロロホルム:メタノール(2:1)で脂質を回収した。スピードバックを使って、溶媒を留去した。試料を1mlのクロロホルムに溶解した。
この試料のうち、200μlを取り、塩酸メタノール法により脂肪酸をメチルエステルに誘導し、ガスクロマトグラフィーにより、脂肪酸分析を行い、菌体内の総脂肪酸の組成を求めた。
すなわち、MaADR1を酵母で高発現させた場合、トリアシルグリセロールを構成する脂肪酸の組成がより長鎖の脂肪酸の比率が高まるように変化した。
配列番号6:合成DNA
Claims (15)
- 以下の(a)〜(e)よりなる群より選ばれるいずれかに記載のポリヌクレオチド:
(a)配列番号1又は4の塩基配列を含有するポリヌクレオチド;
(b)配列番号2のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(c)配列番号2のアミノ酸配列において、1〜100個のアミノ酸が欠失、置換、挿入、及び/又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつ脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(d)配列番号2のアミノ酸配列に対して、60%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、かつ
脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド;及び
(e)配列番号1又は4の塩基配列と相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドであって、脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。 - 以下の(f)又は(g)のいずれかである請求項1に記載のポリヌクレオチド:
(f)配列番号2のアミノ酸配列において1〜10個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び/又は付加したアミノ酸配列からなり、かつ脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド;及び
(g)配列番号2のアミノ酸配列に対して、75%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有し、かつ脂肪酸鎖長延長促進活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。 - 配列番号1又は4の塩基配列を含有する、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
- 配列番号2のアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
- DNAである、請求項1〜4のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
- 請求項1〜5のいずれかに記載のポリヌクレオチドにコードされるタンパク質。
- 請求項1〜5のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有するベクター。
- 請求項1〜5のいずれかに記載のポリヌクレオチドが導入された非ヒト形質転換体。
- 請求項7に記載のベクターが導入された非ヒト形質転換体。
- 前記形質転換体が脂質生産菌である、請求項8又は9に記載の形質転換体。
- 前記脂質生産菌が、モルティエレラ・アルピナ(Mortierella alpina)である、請求項10に記載の形質転換体。
- 請求項8〜11のいずれかに記載の形質転換体の培養物から、脂質又は脂肪酸組成物を採取することを特徴とする、脂質又は脂肪酸組成物の製造方法。
- 前記脂質が、トリアシルグリセロールである、請求項12に記載の方法。
- 前記脂肪酸が、炭素数18以上のものである、請求項12に記載の方法。
- 請求項12に記載の製造方法により採取された脂質又は脂肪酸組成物を含有する食品、医薬品、化粧品又は石鹸。
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