JPWO2012008584A1 - 抗体の作製方法及び抗体 - Google Patents
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Abstract
Description
難溶性抗原である大腸菌で発現させたリコンビナントシスタチンC((株)免疫生物研究所)10mgと、分散安定化剤としてのポリビニルピロリドン50mg、界面活性剤としてのポリオキシル20セチルエーテル100mgとを試験管にとり、ジメチルスルフオキシド(DMSO)2mLに溶解した。減圧条件下でDMSO溶液を乾固し、抗原と分散安定化剤が均一に分子分散した残存物(以下、「ペレット」という)を得た。得られたペレットに水1.0mLを添加し、密閉した。
シスタチンC微粒子分散液を用いて得られたウサギ抗血清(No.4〜6)、及び、未処理のシスタチンCを用いて得られたウサギ抗血清(No.1〜3)、及び、変性剤を添加したシスタチンC溶液を用いて作製された市販のウサギ抗シスタチンC抗血清(ダコ・ジャンパン株式会社)(No.7)について、ELISA法による力価の測定を行った。
実施例2と同じ抗体を用いて、Inhibition法により抗原特異性の評価を行った。尿由来ヒトシスタチンCを4000〜7.8ng/mLまで2倍連続希釈した抗原液、及び抗原の含まれていない溶液を、先の力価測定の結果から力価を揃えた各抗血清と等量混合して、37℃で60分静置した(一次反応)。次いで一次反応した溶液を、尿由来ヒトシスタチンCを50ng/ウェルでコートしたタイタープレートに添加し、37℃で60分反応させた。その後、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ウサギIgG抗体を添加し、オルソフェニレンジアミン発色による490nmの吸光度を測定した。抗原が含まれていない溶液で測定した吸光度を100%として、各抗原濃度での割合を算出した。ウサギを4回免疫後の抗血清の吸光度の結果は表3、ウサギを6回免疫後の抗血清の吸光度の結果を表4に示した。
Claims (3)
- 難溶性抗原と、分散安定化剤及び界面活性剤のいずれか一方又は両方とを揮発性有機溶媒に溶解させる溶解工程と、
得られた溶液から前記有機溶媒を除去し、前記抗原と、前記分散安定化剤及び前記界面活性剤のいずれか一方又は両方とを含む残存物を容器の内壁に固定する固定工程と、
前記容器に水を加え、前記残存物に光を照射し、前記抗原と、前記分散安定化剤及び前記界面活性剤のいずれか一方又は両方とを含む微粒子が水に分散された分散液を得る照射工程と、
前記分散液を用いて動物を免疫し、抗体を得る免疫工程と
を含む、抗体の作製方法。 - 前記分散安定化剤は、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリアクリルアミド、ポリアミン、ポリアクリル酸ナトリウム、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ酢酸ビニル、ポロキサマー、乳酸グリコール酸共重合体、ポリ乳酸、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリオキシエチレン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリブテン、ポリプロピレングリコール、デンプン、アミロペクチン、デキストラン、ゼラチン、シクロデキストリン、キトサン、プルラン、タンニン、リグニン、テルペン、ヒアルロン酸ナトリウム、マンニトール、メグルミン、アラビアゴム、シスポリイソプレンゴム、及びアルギン酸ナトリウムからなる群より選択される少なくとも1つの高分子ポリマーであり、前記界面活性剤は、ポリオキシル20セチルエーテル、ドデシル硫酸ナトリウム、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、ドクサートナトリウム、ロート油、ショ糖脂肪酸エステル、スクワラン、ステアリルアルコール、ポリオキシエチレン40モノステアレート、セチルアルコール、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルアミン、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテルセバシン酸ジエチル、ソルビタン脂肪酸エステル、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ソルビタントリオレエート、オクチルフェノールポリ、ポリソルベート、モノステアリン酸グリセリン、ラウリルジメチルアミンオキシド、ラウリルサルコシンナトリウム、リン酸ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド、及びステロイドサポニンからなる群より選択される少なくとも1つの界面活性剤である、請求項1に記載の方法。
- 請求項1又は2に記載の方法によって得られる抗体。
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