JPWO2011132511A1 - 新規微生物並びにそれを用いた水素製造方法、1,3−プロパンジオール製造方法及びバイオディーゼル廃液の処理方法 - Google Patents
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Abstract
Description
[グリセロール資化性水素生産菌の探索]
バイオディーゼル(FAME)製造工場の排水を微生物源として、集積培養により、グリセロール資化性水素生産菌の探索を行った。
・検出器:TCD (60mA)
・カラム:ポラパックN,モレキュラーシーブ13X,ポラパックQ
・キャリアガス:アルゴン
・カラム温度:60℃
・インジェクション温度:60℃
・ディテクター温度:80℃
[PEG8株の16S rDNA塩基配列解析による同定]
実施例1で取得した菌株のひとつであるPEG8株について、16S rDNAの塩基配列解析により菌株の同定を行った。
[PEG8株の菌学的性質の解析]
PEG8株について、光学顕微鏡(BX50F4、オリンパス社製)による形態観察、Barrowらの方法(Cowan and Steel’s Manual for the Identification of Medical Bacteria. 3rd edition. 1993年,Cambridge University Press.)に基づいた、カタラーゼ反応、オキシダーゼ反応、ブドウ糖からの酸/ガス産生、ブドウ糖の酸化/発酵(O/F)の試験を実施した。また、フェイバーG「ニッスイ」(日水製薬社製)を用いてグラム染色性解析を実施した。さらに、API20Eキット(ビオメリュー社製)を用い、表4及び5に示した各項目についての試験を実施した。各項目の判定はキットに添付のマニュアルに従った。
[回分培養によるグリセロールからの水素及び1,3−プロパンジオール生産]
5ml LB培地中、37℃で11時間振とう培養したPEG8株を、500mlの原料液(組成;酵母エキス 2.5g/L、ペプトン 2.5g/L、グリセロール 7質量%、pH6.5)を含む1L容ミニジャーに添加した。窒素ガスでミニジャー中のガスを置換し、1Lファーメンター(BMJ−01PI、ABLE&Biott社製)を用い、嫌気条件下、37℃、150rpmの振とう速度で培養を行った。13時間培養した後、培養液を約50ml残し、450mlの新しい原料液を加えて、培養を繰り返した。経時的に培養液及びガスのサンプリングを行い、水素ガスの生成量、1,3−プロパンジオールの生成量、エタノール生成量、残留グリセロール量及びOD660値の測定を行った。
・移動液:純水
・カラム:Shim−pack SCR−102H(島津社製)
・カラム温度:70℃
・流速:0.6ml/min
・検出器:示唆屈折計
[グリセロール濃度の影響]
酵母エキスを2.5g/L、ペプトンを2.5g/L、2−Morpholinoethanesulfonic acid(MES)を53.3g/L、及びグリセロールを1.0%、2.5%、5.0%、7.5%、10.0%、15.0%、20.0%、25.0%、30.0%(いずれも質量%)含む原料液10ml(pH6.5)を20mlバイアルに入れ、PEG8株を播種して、37℃で22時間静置培養した。培養後の水素ガス生成量とOD660値を測定し、グリセロール濃度による影響を解析した。
[繰り返し回分培養による水素収率の推移]
実施例4と同じ条件でPEG8株を23〜25時間培養した。培養後50mlの培養液を残し、450mlの新しい原料液を加えて、培養を繰り返した。これを8回繰り返し、各回の培養後の水素生成量、1,3−プロパンジオールの生成量、エタノール生成量を測定した。
[バイオディーゼル廃液を用いた繰り返し回分培養による水素収率の推移]
純品グリセロールに代えてバイオディーゼル廃液(グリセロール濃度 87.6質量%)を用いた以外は実施例4と同じ条件でPEG8株を23〜25時間培養した。培養後50mlの培養液を残し、450mlの新しい原料液を加えて、培養を繰り返した。これを8回繰り返し、各回の培養後の水素生成量、1,3−プロパンジオールの生成量、エタノール生成量を測定した。なお、バイオディーゼル廃液として、植物油を原料としてバイオディーゼルを製造した際の廃液を用いた。また、上記バイオディーゼル廃液は、グリセロール濃度が7.5質量%相当となるように原料液に添加した。
[PEG8株のその他の特性]
PEG8株の特性を解析するため、培地pHの影響、発酵温度の影響、培地中のエタノールの影響及び各種炭素源の資化性試験を行った。
[PEG8株のその他の特性2]
各種炭素源(グルコース、マンニトール)の資化性試験を以下の条件で行った。酵母エキス 2.5g/L、ペプトン 2.5g/L、MES 53.3g/L、図7に示した各炭素源(グルコース、マンニトール) 2質量%を含む、pH6.5の原料液9.5mlにPEG8株の前培養液0.5mlを加え、34℃で19時間培養を行い、水素ガスの生成量を測定した。さらに、培養後の培養液0.5mlに上記原料液9.5mlを加え、34℃で19時間培養を行い、水素ガスの生成量を測定した。これを2回繰り返し、3回の培養結果を基に評価を行った。
Claims (11)
- エンテロバクター(Enterobacter)属に属し、グリセロールを資化して水素ガスを生成する能力及び1,3−プロパンジオールを生成する能力を有し、かつ、10質量%のグリセロール存在下でグリセロールを資化することのできる微生物。
- 更に15質量%のグリセロール存在下でグリセロールを資化することのできる、請求項1に記載の微生物。
- 独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター 受託番号NITE BP−901(エンテロバクター sp.PEG8)で特定される微生物。
- グリセロールを基質として、請求項1〜3のいずれか一項に記載の微生物に水素ガスを生成させる水素製造方法。
- 前記グリセロールが、バイオディーゼル廃液に含まれるものである、請求項4に記載の水素製造方法。
- グリセロールを基質として、請求項1〜3のいずれか一項に記載の微生物に1,3−プロパンジオールを生成させる1,3−プロパンジオール製造方法。
- 前記グリセロールが、バイオディーゼル廃液に含まれるものである、請求項6に記載の1,3−プロパンジオール製造方法。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の微生物に、バイオディーゼル廃液中に含まれるグリセロールを分解させる分解工程を有するバイオディーゼル廃液の処理方法。
- 前記分解工程において生成する水素ガス又は1,3−プロパンジオールを回収する回収工程を更に有する、請求項8に記載のバイオディーゼル廃液の処理方法。
- バイオディーゼル廃液を含む原料液と請求項1〜3のいずれか一項に記載の微生物とを接触させ、前記バイオディーゼル廃液中のグリセロールを分解させることで、グリセロールを予め設定した濃度まで減少させた後、グリセロールが減少した原料液の少なくとも一部を、バイオディーゼル廃液を含む他の原料液と交換する、バイオディーゼル廃液の処理方法。
- 前記バイオディーゼル廃液中のグリセロールを分解させることで、グリセロールを予め設定した濃度まで減少させるとともに、生成する水素ガス又は1,3−プロパンジオールを回収した後、バイオディーゼル廃液を含む他の原料液と交換する、請求項10に記載のバイオディーゼル廃液の処理方法。
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