JPWO2008143171A1 - 糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定により胃粘膜の状態を判断する方法 - Google Patents
糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定により胃粘膜の状態を判断する方法 Download PDFInfo
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Abstract
Description
したがって、胃炎の診断方法として、被験者の負担が少なく、簡便に実施することができ、かつ、胃炎の程度を詳細に細分化して診断できる方法の開発が求められていた。
したがって、胃癌の一次スクリーニング法として、被験者の負担が少なく簡便に実施することができ、かつ、見逃し例の割合をできるだけ低くすることができ、さらに胃癌に罹患している危険率あるいは将来罹患する危険率の診断方法としても危険率の程度と危険率の高い胃癌の種類を詳細に細分化して診断できる方法の開発が求められていた。
また、本発明は、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値のみを指標として、前記対象の胃粘膜の状態を判断する、前記方法に関する。
本発明は、さらに、対象の血液中におけるペプシノーゲンIIの濃度に対するペプシノーゲンIの濃度の比を指標とする、前記の方法に関する。
本発明はまた、対象の血液中におけるペプシノーゲンIIの濃度に対するペプシノーゲンIの濃度の比が、3以下であることまたは3を越えることを指標とする、前記方法に関する。
また、本発明は、胃粘膜の状態が、軽度、中等度もしくは高度の萎縮から選択される少なくとも1つである、前記の方法に関する。
また、本発明は、胃癌が、未分化型胃癌または分化型胃癌である、前記方法に関する。
さらに本発明は、胃粘膜の状態が、将来、胃癌に罹患する危険率の高い状態である、前記の方法に関する。
本発明はまた、胃癌が、未分化型胃癌または分化型胃癌である、前記方法に関する。
さらにまた、本発明は、ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値が、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体を使用した酵素免疫測定法により測定されたものである、前記の方法に関する。
そしてまた、本発明は、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体がモノクローナル抗体である、前記方法に関する。
本発明はさらに、対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値のみを指標として、前記対象の胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量する、前記方法に関する。
また本発明は、ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値が、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体を使用した酵素免疫測定法により測定されたものである、前記の方法に関する。
そしてまた、本発明は、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体がモノクローナル抗体である、前記の方法に関する。
なお、本発明の方法は、糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の測定値を指標として採用したことにより、ヘリコバクター・ピロリの感染および増殖に起因して変化する胃粘膜の状況を時間差なくモニターすることを可能にし、またそのことにより胃粘膜の状況を簡便かつ正確に判断することを可能にしたものである。
そしてまた、本発明によれば、対象の胃内におけるヘリコバクター・ピロリの総菌量を定量的に反映する糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、対象の胃粘膜の状態を極めて正確に判断することができる。例えば、胃粘膜の炎症については、発症直後の極めて軽微な炎症から進展した高度の炎症まで、詳細に分類することができ、また胃粘膜の萎縮および炎症の程度という観点から細分化した判断を行うことができる。胃癌の一次スクリーニングについては偽陰性率や見逃し率が極めて低いことから信頼性の高い判断を行うことができるとともに、胃癌に罹患している危険率や、未発症者については将来罹患する危険率の程度とその癌の種類についても判断することが可能である。
まず、マイクロプレートのウェルやプラスチックチューブなどの固相にあらかじめ抗ヘリコバクター・ピロリ抗原抗体を結合させておき、これにサンプル(対象の糞便の希釈液)を添加して、サンプル中のヘリコバクター・ピロリ抗原を抗原抗体反応により固相に結合させる。次いで、夾雑物を洗い流した後、酵素標識した第二の抗体(抗ヘリコバクター・ピロリ抗原抗体)を添加して再度抗原抗体反応により「固相化抗体/ヘリコバクター・ピロリ抗原 /酵素標識抗体」のサンドイッチ構造を構築させる。ここで遊離の酵素標識抗体を洗い流し、発色基質を添加して、サンドイッチ構造の量(すなわち、サンプル中のヘリコバクター・ピロリ抗原の量)に比例した発色反応を起こさせる。その後、生成した発色物質の量を吸光度計等で読み取り、得られた吸光度などを測定値とする。
また、本発明において、慢性胃炎とは、加齢に応じて発症頻度が高い慢性的な胃炎をいい、従来は老化現象と考えられていたが、近年ヘリコバクター・ピロリにより発生することが分かってきたもので、活動性胃炎、萎縮性胃炎などに区別される。
また、腸上皮化生とは、胃粘膜に特有の組織構造、すなわち胃酸を分泌する胃固有腺が失われて腸粘膜に類似した状態に変化した粘膜をいう。
対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗体の定量的測定を行うときの手順を、例えば、上記の「テストメイト ピロリ抗原 EIA」を用いた場合について簡単に述べる。
各対象の採便容器から、便希釈液1滴(50μl)を、抗ヘリコバクター・ピロリnative カタラーゼマウスモノクローナル抗体(21G2)を固相化した96穴マイクロプレートに加え、さらに、ペルオキシダーゼ標識抗ヘリコバクター・ピロリnative カタラーゼマウスモノクローナル抗体(21G2)液50μlを加えて1時間反応させる。次いで、各ウェルを洗浄液により5回洗浄して未反応物を除去し、基質液(過酸化水素およびテトラメチルベンチジン)100μlを加えて10分間反応させた後、反応停止液(0.5mol/l硫酸)を加えて反応を停止させ、マイクロプレートリーダーで吸光度(450nm/630nm)を測定する。
上記の胃炎の分類にしたがえば、各胃炎の状態と胃癌との関連を合わせて考慮すると、例えば、OD値が、1.5以上である場合を未分化型胃癌に罹患している危険率、未発症者については将来罹患する危険率が高い状態にあると判断することができる。
さらに、PGI/PGIIのほか、年齢や他の検査値(血液中のPGI濃度、血液中のPGII濃度、血液中の抗CagA抗体の濃度)、対象の自覚症状(上部腹痛、胃もたれ、胸焼け、悪心・嘔気、腹部膨満感など)の有無等を指標として加えてもよく、これらの指標を用いてさらに詳細に分類することもできる。
<実施例1>
ヘリコバクター・ピロリ陽性の健常者104名(男性36名、女性68名)を対象として、UBT(尿素呼気試験)、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原測定、血液中ペプシノーゲン(PGIおよびPGII)濃度、血液中抗CagA抗体濃度の測定を行った。
測定方法は、UBT(尿素呼気試験)はユービット錠(大塚製薬)を用いて行い、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原測定は「テストメイト ピロリ抗原 EIA」を用いて行った。なお、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原測定によりOD値0.1以上を陽性と判定した。
まず、上記104名の集団に関し、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原測定により得られた定量的測定値(以下、「便中ピロリ菌抗原OD値」と記載する)とUBT値との関係について検討するため、胃粘膜萎縮が存在しないとされるPGI/PGII>3の集団とおよび胃粘膜萎縮が存在するとされるPGI/PGII≦3の集団とに分けて散布図を作成し(図1)、さらに、便中ピロリ菌抗原OD値とUBT値との間の相関係数を、前記のPGI/PGII>3の集団およびPGI/PGII≦3の集団に分けて算出した。その結果を表2に示す。
次に、便中ピロリ菌抗原OD値とPGI/PGIIとの関係について検討するため、上記104名の集団の散布図を作成したところ(図3)、胃粘膜萎縮を有する集団(PGI/PGII≦3)において、便中ピロリ菌抗原OD値が高い集団が含まれることが見出された。よって、胃粘膜萎縮により胃内のピロリ菌量は減少するという従来の知見に反して、胃粘膜萎縮を呈していても、胃内のピロリ菌量が多い集団が存在することが示唆された。
また、図3において、上記(1)の図2と同様に、相関性が認められる集団と、相関性が認められない集団とを、散布図上で分けて示したところ(図4)、上記(1)で見出された「便中ピロリ菌抗原OD値とUBT値との間に相関性のない」新規集団は、胃粘膜萎縮を有する集団(PGI/PGII≦3)のうち、便中ピロリ菌抗原OD値1.5以上である集団に特に顕著に認められることが明らかになった。
さらに、便中ピロリ菌抗原OD値とPGI値またはPGII値との関係を検討するため、それぞれ上記104名の集団の散布図を作成し(図5および6)、便中ピロリ菌抗原OD値とPGI値、または便中ピロリ菌抗原OD値とPGII値との相関係数を算出した(表3および4)。
上記(4)と同様に、UBT値とPGI値またはPGII値との関係を検討するため、それぞれ上記104名の集団の散布図を作成し(図7および8)、相関係数を算出したが、便中ピロリ菌抗原OD値の場合とは異なり、UBT値とPGI値、また、UBT値とPGII値との間にいずれも有意な相関は認められなかった。
次に、UBT値とPGI/PGIIとの関係について検討するため、上記104名の集団の散布図を作成したところ(図9)、胃粘膜萎縮を有する集団(PGI/PGII≦3)では、PGI/PGIIの低下にしたがって、UBT値が低下することが見出された。これは、UBT値がヘリコバクター・ピロリのウレアーゼ活性を検出するものであることから、胃粘膜萎縮が進行してPGI/PGII値が低下するのに伴って、胃酸分泌が減少して胃内pHが上昇し、ヘリコバクター・ピロリのウレアーゼ活性が低下したためと考えられる。
したがって、UBT値は、胃粘膜萎縮を呈する場合(PGI/PGII≦3)には、胃内に存在するピロリ菌量の指標とはならないことが理解される。
上記の通り、便中ピロリ菌抗原OD値に関して1.5を基準として集団を統計学的に分類し得ることを見出したことから、本実施例において対象となったヘリコバクター・ピロリ陽性の健常者104名を便中ピロリ菌抗原OD値に関して1.5以上の集団と1.5未満の集団に分け、そのPGI値およびPGII値の範囲の分布から、便中ピロリ菌抗原OD値が具体的な胃粘膜の状態にどのように対応しているかについて検討した。PGI値については、PGI値≦30、30<PGI値≦50、50<PGI値≦70、70<PGI値の4つに分類し、PGII値については、PGII値≦10、10<PGII値≦20、20<PGII値の3つに分類した。結果を以下の表5に示す。
さらに、表6より、便中ピロリ菌抗原OD値が1.5未満の集団および1.5以上の集団の2つの集団について、PGI値ならびにPGII値を比較したところ、PGII値に関して統計的に有意な差を確認することができた。
したがって、便中ピロリ菌抗原OD値1.5を基準として分類することが臨床的にも意義のあるものであることが示された。
なお、表6においては、OD値の基準値を2.0にした場合についても示しているが、1.5の場合と同様の結果が得られた。すなわち、便中ピロリ菌抗原OD値が2.0未満の集団および2.0以上の集団の2つの集団について、PGI値ならびにPGII値を比較したところ、PGII値に関して統計的に有意な差を確認することができた。
便中ピロリ菌抗原OD値については1.5、また、PGI/PGIIについては萎縮の有無の指標となる3を基準として、本実施例において対象となったヘリコバクター・ピロリ陽性の健常者104名をカテゴリーI(便中ピロリ菌抗原OD値が0.1以上1.5未満かつPGI/PGIIが3以上)、カテゴリーII(便中ピロリ菌抗原OD値が1.5以上かつPGI/PGIIが3未満)、カテゴリーIII(便中ピロリ菌抗原OD値が1.5以上かつPGI/PGIIが3以下)およびカテゴリーIV(便中ピロリ菌抗原OD値が0.1以上1.5未満かつPGI/PGIIが3以下)の4つの集団に分類した(図10)。
カテゴリーIIは、便中ピロリ菌抗原OD値が1.5以上かつPGI/PGIIが3より大きい集団であり、胃粘膜萎縮を伴わず、中等度〜高度の炎症を有する活動性胃炎の集団であると考えられる。カテゴリーII内では、便中ピロリ菌抗原OD値が上昇するほど、活動性胃炎の程度が進行している(高度になる)とみなされる。
なお、胃粘膜の状態が健常であると分類されるには、便中ピロリ菌抗原OD値が0.1未満かつPGI/PGIIが3を越える必要がある。
さらに、カテゴリーI〜IVに関して、それぞれ、PGI/PGII、便中ピロリ菌抗原OD値、PGI値、PGII値の平均値を以下の表7に示す。
表8に示すように、PGI/PGIIが3以下で萎縮性胃炎と判断される集団を便中ピロリ菌抗原OD値1.5で分類したカテゴリーIIIとカテゴリーIVを比較すると、カテゴリーIIIのPGIIは統計的に有意に高値であり、炎症が高度であることが確認された。その他に、カテゴリーIIとカテゴリーIIIのPGIIにも統計的な有意差が確認された。このように、カテゴリーIからカテゴリーIVの分類化は臨床的にも意義のあるものであることが示された。
ピロリ菌感染性胃炎の進行は、図15に示すとおり、典型的には、前庭部優勢胃炎、pangastritis、体部優勢胃炎へと推移する(前庭部優勢胃炎は、欧米人に多いタイプであり、pangastritisおよび体部優勢胃炎は40歳以上の日本人に多いタイプである)。この胃炎の進行の各ステージと、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原OD値との関連性について明らかにするため、成人200例(男性94例、女性104例、平均年齢55歳(22〜84歳))を対象として、実施例1と同様に、糞便中ヘリコバクター・ピロリ抗原測定、血液中ペプシノーゲン(PGIおよびPGII)濃度、血液中抗CagA抗体濃度の測定を行なった。さらに内視鏡的検証のため、上部消化管検査による内視鏡的萎縮境界の判定(木村・竹本分類)、腸上皮化生、組織学的胃炎評価(シドニーシステムによる評価;前庭部大弯、体下部小弯、体上部大弯)について検討した。
胃炎分布の判定方法は、以下の規準にしたがって行なった。
〔判定基準〕
炎症なし:シドニー分類にて、前庭部大弯、体部大弯、体部小弯の何れの好中球も正常
前庭部優勢胃炎:シドニー分類にて、好中球のレベルが前庭部大弯>体部大弯
pangastritis:シドニー分類にて、好中球のレベルが前庭部大弯=体部大弯
体部優勢胃炎:シドニー分類にて、好中球のレベルが前庭部大弯<体部大弯
症例の検討を進めていく中で、本発明者らは、PG法によって陰性と判断された患者(PGI/PGII>3またはPGI>70)においても重症の胃炎患者が存在するが、このようなPG法見逃し症例についても、本発明の方法において、便中ピロリ菌抗原OD値の基準を1.5よりも高くすることによって、典型的にはOD値の基準を2.0とすることによって、見逃すことなく胃炎状態を判別できることを見出した。
すなわち、PG法陰性の群では、体部大弯のアクティビティ(好中球浸潤)が軽度では全てOD<2であり、中等度から高度ではOD値>2となる症例が過半数であった。胃炎のパターンでもpangastritis、体部胃炎となるにつれてOD値が上昇した。一方、PG法陽性群では、このような傾向は認めなかった。
したがって、OD値>2であれば、体部の好中球浸潤が高く、pangastritisや体部優勢胃炎である可能性が高いと判別できることが確認された。このことは、OD値>2の場合、pangastritisや体部優勢胃炎の炎症パターンと関連性が強い若年性未分化型胃ガンのリスク群であると判断できることをも示す。
表11の結果から、萎縮進展(萎縮境界)および腸上皮化生においても、OD値<1.5かつPGI/PGII>3の集団はピロリ菌陰性者または感染初期段階であることが示唆された。また、OD値<1.5で、PGI/PGII≦2の集団は、腸上皮化生の平均値が高く、慢性化が最も進んだ症例が多く含まれていた。
Claims (16)
- 対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、前記対象の胃粘膜の状態を判断する方法。
- 対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値のみを指標として、前記対象の胃粘膜の状態を判断する、請求項1に記載の方法。
- さらに、対象の血液中におけるペプシノーゲンIIの濃度に対するペプシノーゲンIの濃度の比を指標とする、請求項1に記載の方法。
- 対象の血液中におけるペプシノーゲンIIの濃度に対するペプシノーゲンIの濃度の比が、3以下であることまたは3を越えることを指標とする、請求項3に記載の方法。
- 胃粘膜の状態が、軽度、中等度もしくは高度の炎症から選択される少なくとも1つである、請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
- 胃粘膜の状態が、軽度、中等度もしくは高度の萎縮から選択される少なくとも1つである、請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
- 胃粘膜の状態が、現在、胃癌に罹患している危険率の高い状態である、請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
- 胃癌が、未分化型胃癌または分化型胃癌である、請求項7に記載の方法。
- 胃粘膜の状態が、将来、胃癌に罹患する危険率の高い状態である、請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
- 胃癌が、未分化型胃癌または分化型胃癌である、請求項9に記載の方法。
- ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値が、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体を使用した酵素免疫測定法により測定されたものである、請求項1〜10のいずれかに記載の方法。
- ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体がモノクローナル抗体である、請求項11に記載の方法。
- 対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値を指標として、前記対象の胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量する方法。
- 対象の糞便中に存在するヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値のみを指標として、前記対象の胃内に存在するヘリコバクター・ピロリの菌量を定量する、請求項13に記載の方法。
- ヘリコバクター・ピロリ抗原の定量的測定値が、ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体を使用した酵素免疫測定法により測定されたものである、請求項13または14に記載の方法。
- ヘリコバクター・ピロリ抗原に対する抗体がモノクローナル抗体である、請求項15に記載の方法。
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