JPWO2007105442A1 - 摂食障害または摂水障害の治療薬 - Google Patents

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Abstract

摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチドを有効成分として含有する摂食障害や摂水障害の治療薬、および該ペプチドを利用する該ペプチドの活性を促進または阻害する物質のスクリーニング方法を提供する。

Description

本発明は、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチドを有効成分として含有する摂食障害または摂水障害の治療薬、および、該ペプチドを利用する、該ペプチドの活性を阻害または促進する物質、あるいは、該ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストのスクリーニング方法に関する。
ＶＧＦ遺伝子は、ラットＰＣ１２細胞の神経成長因子刺激により増加する遺伝子として同定され（非特許文献１参照）、その後、ヒトＶＧＦ遺伝子が単離された（非特許文献２参照）。ＶＧＦ遺伝子破壊マウスでは、摂食量は不変、体重減少、体脂肪減少、酸素消費増加、運動量増加が認められ、また生殖機能にも異常が見られた。特に、エネルギー代謝亢進が認められている（非特許文献３参照）。
ＶＧＦ遺伝子は中枢、末梢神経系、内分泌、神経内分泌細胞に発現し、発現や分布は、摂食行動や消化管の運動を制御するニューロペプチドＹ、ペプチドＹＹ、グレリン（ｇｈｒｅｌｉｎ）、コレシストキニン等の発現パターンと類似し、エネルギー代謝に関連する部分に存在する（非特許文献４参照）。
ＶＧＦ遺伝子がコードする蛋白質（以下、ＶＧＦとよぶ）は、ヒトで６１５アミノ酸、ラット/マウスで６１７アミノ酸である。ＶＧＦの１〜２２番目のアミノ酸はシグナルペプチドであり、またプロホルモンコンベルターゼによる切断やアミド化等のプロセッシングを受ける配列が存在する。ＶＧＦのプロセッシングについて、ラットを中心に調べられており、ラットの脳より、ラットＶＧＦ（５９８−６１７）（かっこ内の数字は、ＶＧＦのアミノ酸配列におけるペプチドの配列の位置を表す。以下のペプチドについても同様）、ラットＶＧＦ（５９９−６１７）、ラットＶＧＦ（６０１−６１７）、ラットＶＧＦ（６０２−６１７）、ラットＶＧＦ（５８７−６１７）、ラットＶＧＦ（５８８−６１７）、ラットＶＧＦ（５６７−６１７）、ラットＶＧＦ（５５６−６１７）、ラットＶＧＦ（４８９−６１７）、ラットＶＧＦ１８（１８ｋＤａ：配列未確認）のＶＧＦに由来するペプチドの存在が確認されている（非特許文献５参照）。ラットＶＧＦ（５５６−６１７）の部分ペプチドである、ラットＶＧＦ（５７７−６１７）、ラットＶＧＦ（５８８−６１７）、ラットＶＧＦ（５９９−６１７）は、オスのラットの視床下部室傍核（ＰＶＮ）に直接投与することにより、勃起を引き起こす活性を示したが、ラットＶＧＦ（５５６−５７６）にはこの活性は確認されなかった（非特許文献６参照）。また、ＶＧＦ（５８８−５９６）をＶＧＦ遺伝子破壊マウスに腹腔内投与したところ、１０％〜１５％程度の体重上昇があったが、この体重増加が食物または水の摂取増加の結果であるか否かは判定できないと報告されている（特許文献１参照）。
ヒトＶＧＦに由来するペプチドについては、ヒト脳脊髄液においてヒトＶＧＦ（２３−６２）、ヒトＶＧＦ（２３−５９）、ヒトＶＧＦ（２６−６２）（非特許文献７参照）、さらに、ヒトＶＧＦ（２３−５８）、ヒトＶＧＦ（２４−５９）、ヒトＶＧＦ（２４−６２）、ヒトＶＧＦ（２６−５７）、ヒトＶＧＦ（２６−５８）、ヒトＶＧＦ（２６−５９）、ヒトＶＧＦ（２６−６１）、ヒトＶＧＦ（２６−６４）、ヒトＶＧＦ（４９−６２）、ヒトＶＧＦ（９０−１１４）、ヒトＶＧＦ（３５０−３６７）、ヒトＶＧＦ（３５０−３７０）、ヒトＶＧＦ（３７３−４０４）、ヒトＶＧＦ（３７３−４１７）、ヒトＶＧＦ（４２０−４７１）、ヒトＶＧＦ（４２０−４７８）の存在が報告されている（特許文献２参照）。また、ウシの脳下垂体後葉から、ラットＶＧＦ（５８８−６１７）に相当し、ヒトＶＧＦの５８６−６１５番目の配列と同一の配列のペプチドが単離されている（非特許文献８参照）。しかし、これらのヒトまたはウシのＶＧＦに由来するペプチドの生理活性については、報告されていない。
国際公開第０１／０７４７７号パンフレット 国際公開第０２／８２０７５号パンフレット サイエンス(Science)，（米国），１９８５年，第２２９巻，第４７１１号，ｐ．３９３−３９５ ジェノミクス(Genomics)，（米国），１９９７年，第４５巻、第２号，ｐ．４４３−４４６ ニューロン(Neuron)，（米国），１９９９年，第２３巻，第３号，ｐ．５３７−５４８ セリュラー・アンド・モレキュラー・ニューロバイオロジー（Cellular and Molecular Neurobiology），（米国），２００４年，第２４巻，第４号，ｐ．５１７−５３３ ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー（Journal of Neurochemistry），（イギリス），２００２年，第８１巻，第３号，ｐ．５６５−５７４ ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス（European Journal of Neuroscience），（フランス），２００４年，第２０巻，第１１号，ｐ．３０３５−３０４０ ジャーナル・オブ・クロマトグラフィーＢ：バイオメディカル・サイエンシズ・アンド・アプリケーションズ（Journal ofChromatography B: Biomedical Sciences and Applications）,（オランダ），２００１年，第７５４巻，第２号，ｐ．３５７−３６７ エンドクリノロジー（Endocrinology），（米国），１９９４年，第１３５巻，第６号，ｐ．２７４２−２７４８
本発明の目的は、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチドを有効成分として含有する摂食障害または摂水障害の治療薬、および該ペプチドを利用する、該ペプチドの活性を阻害または促進する物質のスクリーニング方法を提供することである。
本発明は以下の（１）〜（６）に関する。
（１）以下の（ａ）〜（ｅ）から選ばれる少なくとも１つのペプチドまたはその薬理学的に許容される塩を含有する摂食障害または摂水障害の治療剤。
（ａ）配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列からなるペプチド
（ｂ）配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列を含み、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチド
（ｃ）配列番号１、２、４または５のアミノ酸配列において、１以上５以下のアミノ酸が置換、欠失もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチド
（ｄ）配列番号１、２、４または５のアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチド、および
（ｅ）下記式（Ｉ）で表されるペプチドであって、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチド。
［化１］
Ｒ１−Ａ−Ｒ２ （Ｉ）
（式中、Ｒ１は水素原子、置換もしくは非置換のアルカノイル、置換もしくは非置換のアロイル、置換もしくは非置換のヘテロアリールカルボニル、置換もしくは非置換のアルコキシカルボニル、置換もしくは非置換のアリールオキシカルボニル、または置換もしくは非置換のヘテロアリールオキシカルボニルを表し、Ｒ２はヒドロキシ、置換もしくは非置換のアルコキシ、または置換もしくは非置換のアミノを表し、Ａは上記（ａ）〜（ｄ）のいずれかのペプチドのペプチド残基を表す）。
（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド（ただし、配列番号７のアミノ酸配列からなるペプチドは除く）またはその薬理学的に許容される塩。
（３）（１）の（ａ）〜（ｅ）または（２）のいずれかに記載のペプチドまたはその塩および試験物質を視床下部細胞、下垂体細胞または脳組織に接触させた場合の細胞応答を測定し、該ペプチドまたはその塩を試験物質の非存在下で視床下部細胞、下垂体細胞または脳組織に接触させた場合の細胞応答と比較して、細胞応答が抑制される場合の試験物質を、該ペプチドの有する摂食または摂水行動を促進する活性を阻害する物質として選択することを特徴とする、該ペプチドの有する摂食もしくは摂水行動を促進する活性を阻害する物質のスクリーニング方法。
（４）（１）の（ａ）〜（ｅ）または（２）のいずれかに記載のペプチドまたはその塩および試験物質を視床下部細胞、下垂体細胞または脳組織に接触させた場合の細胞応答を測定し、該ペプチドまたはその塩を試験物質の非存在下で視床下部細胞、下垂体細胞または脳組織に接触させた場合の細胞応答と比較して、細胞応答が促進される場合の試験物質を、該ペプチドの有する摂食または摂水行動を促進する活性を促進する物質として選択することを特徴とする、該ペプチドの有する摂食または摂水行動を促進する活性を促進する物質のスクリーニング方法。
（５）（１）の（ａ）〜（ｅ）または（２）のいずれかに記載のペプチドまたはその塩および試験物質を視床下部細胞、下垂体細胞、または視床下部細胞もしくは下垂体細胞の膜画分に接触させた場合の該細胞もしくは該細胞の膜画分に対する該ペプチドまたはその塩の結合量を測定し、該ペプチドまたはその塩を試験物質の非存在下で該細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合の該ペプチドまたはその塩の結合量と比較して、結合量が低下する場合の試験物質を該ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストとして選択することを特徴とする、該ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストのスクリーニング方法。
（６）（１）の（ａ）〜（ｅ）または（２）のいずれかに記載のペプチドまたはその塩および試験物質を脳組織または脳組織の膜画分に接触させた場合の脳組織または脳組織の膜画分に対する該ペプチドまたはその塩の結合量を測定し、該ペプチドまたはその塩を試験物質の非存在下で脳組織または脳組織の膜画分に接触させた場合の該ペプチドまたはその塩の結合量と比較して、結合量が低下する場合の試験物質を該ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストとして選択することを特徴とする、該ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストのスクリーニング方法。
本発明により、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチドを有効成分として含有する摂食障害または摂水障害の治療薬、該ペプチドを利用する、該ペプチドの活性を促進または抑制する物質あるいは該ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストのスクリーニング方法が提供される。
図１は、１μｍｏｌ／Ｌのペプチド１（配列番号１で示されるペプチド）による、アポエクオリン発現マウスの視床下部の細胞の細胞内カルシウム濃度の上昇を示す。横軸は、培地添加後の時間（秒）、縦軸は毎秒の相対発光量（ＲＬＵ）である。２５秒でペプチド１を添加した。 図２は、５μｍｏｌ／Ｌのペプチド１による、アポエクオリン発現マウスの下垂体の細胞の細胞内カルシウム濃度の上昇を示す。横軸は、培地添加後の時間（秒）、縦軸は毎秒の相対発光量（ＲＬＵ）である。２５秒でペプチド１を添加した。 図３は、１μｍｏｌ／Ｌのペプチド２（配列番号２で示されるペプチド）による、アポエクオリン発現マウスの視床下部の細胞の細胞内カルシウム濃度の上昇を示す。横軸は、培地添加後の時間（秒）、縦軸は毎秒の相対発光量（ＲＬＵ）である。２５秒でペプチド２を添加した。 図４は、１μｍｏｌ／Ｌのペプチド２による、アポエクオリン発現マウスの下垂体の細胞の細胞内カルシウム濃度の上昇を示す。横軸は、培地添加後の時間（秒）、縦軸は毎秒の相対発光量（ＲＬＵ）である。２５秒でペプチド２を添加した。 図５は、ペプチド１によるラットの摂食行動の促進を示す。ペプチド投与後１時間後の結果である。縦軸は摂食量（ｇ）である。 図６は、ペプチド１によるラットの摂水行動の促進を示す。ペプチド投与後１時間後の結果である。縦軸は摂水量（ｇ）である。 図７は、ペプチド２およびペプチド３（配列番号５で示されるペプチド）によるラットの摂水行動の促進を示す。縦軸は摂水量（ｇ）である。□はペプチド投与後１時間後、■はペプチド投与後２時間後の結果である。
１．本発明の治療薬に使用するペプチド
本発明の摂食障害または摂水障害の治療薬は、以下の（ａ）〜（ｅ）のいずれかのペプチドまたはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。本発明において、以下の（ａ）〜（ｅ）のいずれかのペプチドを「ＶＧＦ関連ペプチド」ともよぶ。
（ａ）配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列からなるペプチド。配列番号１のアミノ酸配列は、ヒトＶＧＦの５８６−６１５番目のアミノ酸配列、配列番号２のアミノ酸配列は、ラットＶＧＦのアミノ酸配列において配列番号１のアミノ酸配列に相当する配列であって、ラットＶＧＦの５８８−６１７番目のアミノ酸配列に相当する。配列番号３のアミノ酸配列は、配列番号１と２のコンセンサス配列であって、下記式（II）で表されるアミノ酸配列である。
［化２］
Ala-Gln-Glu-Glu-Ala-Ｘ１-Ala-Glu-Glu-Arg-Arg-Leu-Gln-Glu-Gln-Glu-Glu-Leu-Glu-Asn-Tyr-Ile-Glu-His-Val-Leu-Leu-Ｘ２-Arg-Pro （ＩＩ）

（式中、Ｘ１およびＸ２は独立して同一または異なった任意のアミノ酸を表す）
式（II）において、好ましくは、Ｘ1はアスパラギン酸、グルタミン酸、イソアスパラギン酸、イソグルタミン酸、２−アミノアジピン酸または２−アミノスベリン酸であり、Ｘ２はアルギニン、リジン、オルニチン、２，４−ジアミノブタン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸またはヒスチジンであり、より好ましくは、Ｘ１はアスパラギン酸またはグルタミン酸であり、Ｘ２はアルギニンまたはヒスチジンである。
配列番号４のアミノ酸配列は、ヒトＶＧＦの５５４−６１５番目のアミノ酸配列、配列番号５のアミノ酸配列は、ラットＶＧＦの５５６−６１７番目のアミノ酸配列に相当する。配列番号６のアミノ酸配列は、配列番号４と５のコンセンサス配列であって、下記式（III）で表されるアミノ酸配列である。
［化３］
Thr-Leu-Gln-Pro-Pro-Ｘ３-Ｘ４-Ｘ５-Arg-Arg-Arg-His-Ｘ６-His-His-Ala-Leu-Pro-Pro-Ｘ７-Arg-His-Ｘ８-Pro-Ｘ９-Ｘ１０-Glu-Ala-Gln-Ala-Arg-Arg-Ala-Gln-Glu-Glu-Ala-Ｘ１-Ala-Glu-Glu-Arg-Arg-Leu-Gln-Glu-Gln-Glu-Glu-Leu-Glu-Asn-Tyr-Ile-Glu-His-Val-Leu-Leu-Ｘ２-Arg-Pro （ＩＩＩ）

（式中、Ｘ１−Ｘ１０は独立して同一または異なった任意のアミノ酸を表す）
式（III）において、好ましくは、Ｘ1はアスパラギン酸、グルタミン酸、イソアスパラギン酸、イソグルタミン酸、２−アミノアジピン酸または２−アミノスベリン酸であり、Ｘ２はアルギニン、リジン、オルニチン、２，４−ジアミノブタン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸またはヒスチジンであり、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ７はセリンまたはアラニンであり、Ｘ５はセリンまたはロイシンであり、Ｘ６はチロシンまたはフェニルアラニンであり、Ｘ８はチロシンまたはヒスチジンであり、Ｘ９はグリシンまたはアスパラギン酸であり、Ｘ１０はアルギニンまたはロイシンであり、より好ましくは、Ｘ１はアスパラギン酸またはグルタミン酸であり、Ｘ２はアルギニンまたはヒスチジンである。
（ｂ）配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列を含み、摂食もしくは摂水行動の促進作用を有するペプチド。（ｂ）のペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列を含み、摂食もしくは摂水行動の促進作用を有していれば、アミノ酸数はいくつでもよいが、８０以下が好ましく、６０以下がさらに好ましく、４０以下が特に好ましい。
（ｃ）配列番号１、２、４または５のアミノ酸配列において、１以上５以下のアミノ酸が置換、欠失もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、摂食もしくは摂水行動の促進作用を有するペプチド。
（ｄ）配列番号１、２、４または５のアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、摂食もしくは摂水行動の促進作用を有するペプチド。
（ｅ）下記式（ＩＶ）で表されるペプチドであって、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチド。
［化４］
Ｒ１−Ａ−Ｒ２ （ＩＶ）
（式中、Ｒ１は水素原子、置換もしくは非置換のアルカノイル、置換もしくは非置換のアロイル、置換もしくは非置換のヘテロアリールカルボニル、置換もしくは非置換のアルコキシカルボニル、置換もしくは非置換のアリールオキシカルボニル、または置換もしくは非置換のヘテロアリールオキシカルボニルを表し、Ｒ２はヒドロキシ、置換もしくは非置換のアルコキシ、または置換もしくは非置換のアミノを表し、Ａは上記（ａ）〜（ｄ）のいずれかのペプチドのペプチド残基を表す。）
配列番号１、２、４または５のアミノ酸配列において、１以上５以下のアミノ酸残基が置換、欠失もしくは付加されたとは、同一配列中の任意かつ一もしくは複数のアミノ酸配列中の位置において、１以上５以下のアミノ酸残基の置換、欠失もしくは付加があることを意味し、置換、欠失もしくは付加が同時に生じてもよい。置換または付加されるアミノ酸としては、例えば、必須アミノ酸として知られる２０種類のＬ-アミノ酸、すなわちＬ−アラニン、Ｌ−アスパラギン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−グルタミン酸、グリシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−リジン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−セリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−チロシン、Ｌ−バリンおよびＬ−システインがあげられるが、これに限定されるものではなく、例えば、ｔｅｒｔ-ロイシン、ノルロイシン、ノルバリン、２−アミノブタン酸、Ｏ−メチルセリン、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、イソアスパラギン酸、イソグルタミン酸、２−アミノアジピン酸、２−アミノスベリン酸、オルニチン、２，４−ジアミノブタン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、ホモセリン等の他のアミノ酸でもよく、またＤ−アミノ酸あるいはβ−アミノ酸でもよい。
以下に、相互に置換可能なアミノ酸残基の例を示す。同一群に含まれるアミノ酸残基は相互に置換可能である。
Ａ群：ロイシン、イソロイシン、ノルロイシン、バリン、ノルバリン、アラニン、２−アミノブタン酸、メチオニン、Ｏ−メチルセリン、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、ｔｅｒｔ-ロイシン
Ｂ群：アスパラギン酸、グルタミン酸、イソアスパラギン酸、イソグルタミン酸、２−アミノアジピン酸、２−アミノスベリン酸
Ｃ群：アスパラギン、グルタミン
Ｄ群：リジン、アルギニン、オルニチン、２，４−ジアミノブタン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸
Ｅ群：プロリン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン
Ｆ群： セリン、スレオニン、ホモセリン
Ｇ群：フェニルアラニン、チロシン
配列番号１、２、４または５のアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列とは、相同性解析プログラムBLAST 2 Sequences〔FEMSMicrobiol Lett. 174, 247 (1999)〕を用いてデフォルトの条件（program: blastp、matrix: BLOSUM62、opengap: 11 penalties、extension gap: 1 penalty、gap x_dropoff: 50、expect: 10.0、wordsize: 3）で計算し、アラインメントをしたときに、相同性（対象の配列と相同性解析を行った配列との間で同一のアミノ酸数／相同性解析を行った配列の全体のアミノ酸数＋アラインメント時に挿入されたギャップの数）が９０％以上、好ましくは９５％以上であるアミノ酸配列をいう。
上記式（Ｉ）〜（ＩＶ）の各基の定義において、アルカノイルとしては、例えば直鎖または分枝状の炭素数１〜２０の、例えばホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、ヘプタノイル、ラウロイル、エイコサノイル等があげられる。
アロイルおよびアリールオキシカルボニルのアリール部分としては、例えば炭素数６〜１５の、例えばフェニル、ナフチル等があげられる。
ヘテロアリールカルボニルおよびヘテロアリールオキシカルボニルのヘテロアリール部分としては、例えばフリル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル等があげられる。
アルコキシカルボニルおよびアルコキシのアルキル部分としては、例えば直鎖または分枝状の炭素数１〜２０の、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、デシル、ドデシル、エイコシル等があげられる。
置換アルカノイル、置換アルコキシカルボニルおよび置換アルコキシにおける置換基としては、同一または異なって置換数１〜３の、例えばヒドロキシ、カルボキシ、炭素数３〜８の、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル等の脂環式アルキル、置換もしくは非置換のフェニル、フルオレニル等があげられる。置換フェニルの置換基としては、同一または異なって置換数１〜３の、例えばアルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、ニトロ、スルホ、シアノ、ハロゲン等があげられ、ハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素の各原子があげられる。置換フェニルの置換基としてのアルキル、アルコキシのアルキル部分は、前記アルコキシカルボニルおよびアルコキシのアルキル部分と同義である。
置換アロイル、置換アリールオキシカルボニル、置換ヘテロアリールカルボニルおよび置換ヘテロアリールオキシカルボニルにおける置換基は、同一または異なって置換数１〜３であり、上記の置換フェニルの置換基と同義である。
置換アミノにおける置換基としては、同一または異なって置換数１〜２の、例えば置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のアリール等があげられる。アルキルは、前記アルコキシ等のアルキル部分と同義であり、置換アルキルの置換基は、前記置換アルコキシ等の置換基と同義である。アリールは、前記アロイルまたはアリールオキシカルボニルのアリール部分と同義であり、置換アリールの置換基は、前記アロイルまたはアリールオキシカルボニルの置換基と同義である。
また、Ａを構成するアミノ酸残基の側鎖の官能基が化学的に修飾または保護されたものであってもかまわない。そのように側鎖官能基が化学的に修飾または保護されたアミノ酸残基としては、例えば、側鎖カルボキシ基がベンジルエステルで保護されたアスパラギン酸残基もしくはグルタミン酸残基、側鎖チオール基がカルボキシメチル化されたシステイン残基等があげられる。
薬理学的に許容される塩としては、例えば、酸付加塩、金属塩、有機塩基付加塩等があげられる。酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩および酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩等の有機酸塩があげられる。金属塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられる。有機塩基付加塩としては、例えば、メチルアミン、エチルアミン、アニリン等の一級アミン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン等の二級アミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、ピリジン等の三級アミン等とで形成される塩、アンモニウム塩等があげられる。
（ａ）〜（ｅ）のペプチドが、摂食行動もしくは摂水行動を促進する活性を有していることは、実施例２に示した、ラットの側脳室内にペプチドを含む生理食塩水を投与し、投与後１〜２時間の摂餌量および飲水量を測定して、生理食塩水のみを投与した場合の摂餌量および飲水量と比較する方法を行い、生理食塩水のみを投与した場合と比較してペプチドを含む生理食塩水を投与した場合に摂餌量または飲水量が増加することで確認できる。また、（ａ）〜（ｅ）のペプチドが、視床下部細胞または下垂体細胞の細胞内カルシウムイオン濃度を上昇させる活性を有していることを確認することによっても、摂食行動もしくは摂水行動を促進する活性を有していることを確認できる。ペプチドが視床下部細胞または下垂体細胞の細胞内カルシウムイオン濃度を上昇させる活性を有していることは、実施例１に示した、アポエクオリンを発現するトランスジェニックマウスから摘出した視床下部または下垂体を細断し、セレンテラジンを含む培地で培養し、培地を添加し、２５秒後にペプチドを含む培地を添加して、培地の添加直後からルミノメーターで相対発光量を測定する方法を行い、培地を添加した場合と比較してペプチドを含む培地を添加した場合に相対発光量が上昇することで確認できる。
上記のＶＧＦ関連ペプチドは、例えば泉屋信夫、加藤哲夫ら，「ペプチド合成の基礎と実験」，丸善，（１９８５年）、相本三郎ら，「実験化学講座」，第４版，第２２巻，「有機合成IV酸・アミノ酸・ペプチド」，丸善，（１９９９年）、Int. J. Pept. Protein Res. 35, 161-214 (1990)、Fields,G. B., Solid-Phase Peptide Synthesis, Methods in Enzymology, vol. 289, AcademicPress, (1997)、Pennington, M. W. and Dunn, B. M., Peptide Synthesis Protocols,Methods in Molecular Biology, vol. 35, Humana Press, (1994) 等に記載の通常のペプチド合成法により合成後、精製することによって得ることができる。具体的な合成法としては、例えば、アジド法、酸クロライド法、酸無水物法、混合酸無水物法、ジクロロメタン法、活性エステル法、カルボイミダゾール法、酸化還元法等があげられる。また、その合成は、固相合成法および液相合成法のいずれをも適用することができる。すなわち、本発明のペプチドを構成するアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的とするペプチドを合成することができる。
さらに、ＶＧＦ関連ペプチドが、ペプチドを構成するアミノ酸残基の側鎖および／またはペプチドのアミノ末端および／またはペプチドのカルボキシ末端が化学修飾や保護がなされているものである場合には、ペプチド合成後に化学修飾する方法、化学修飾されたアミノ酸を用いてペプチド合成する方法、またはペプチド合成の最終脱保護の反応条件を適当に選ぶ方法等、ペプチド合成化学の分野において従来公知の方法〔泉屋信夫ら，「ペプチド合成の基礎と実験」，丸善，（１９８５年）、矢島治明監修，「続医薬品の開発」，第１４巻，「ペプチド合成」，広川書店，（１９９１年）、日本生化学会編「生化学実験講座」，第１巻，「タンパク質の化学IV―化学修飾とペプチド合成」，東京化学同人、大野素徳ら，「生物化学実験法」，第１２，１３巻，「蛋白質の化学修飾（上）（下）」，学会出版センター，（１９８１年）〕によって製造することができる。
また、ＶＧＦ関連ペプチドは、自動ペプチド合成機を用いて合成することもできる。ペプチド合成機によるペプチドの合成は、島津製作所製ペプチド合成機、アドバンスト・ケムテック社（AdvancedChemTech, Inc.）製ペプチド合成機等の市販のペプチド合成機上で、適当に側鎖を保護したＮα−Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−アミノ酸あるいはＮα−Ｂｏｃ（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−アミノ酸等を用い、それぞれの合成プログラムに従って実施することができる。原料となる保護アミノ酸および担体樹脂は、アプライド・バイオシステムズ社（AppliedBiosystems）、島津製作所、国産化学株式会社、ＥＭＤバイオサイエンシズ社（EMD Biosienses, Inc.）、渡辺化学株式会社、アドバンスト・ケムテック社、アナスペック社（AnaSpec,Inc.）またはペプチド研究所株式会社等から入手することができる。
ＶＧＦ関連ペプチドの精製は、通常の精製法、例えば溶媒抽出、蒸留、カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、再結晶等を組み合わせて行なうことができる。
２．ＶＧＦ関連ペプチドまたはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬製剤
ＶＧＦ関連ペプチドまたはその薬理学的に許容される塩を含有する医薬製剤は、活性成分として該ペプチドまたはその薬理学的に許容される塩単独で、あるいは任意の他の治療のための有効成分との混合物として含有することができる。また、それら医薬製剤は、活性成分を薬理学的に許容される一種もしくはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られている任意の方法により製造される。
投与経路は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましく、経口または、例えば脳室内、静脈内等の非経口をあげることができる。
投与形態としては、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、注射剤等がある。
経口投与に適当な、例えばシロップ剤のような液体調製物は、水、蔗糖、ソルビット、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油等の油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類等を使用して製造できる。また、錠剤、散剤および顆粒剤等は、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニット等の賦形剤、澱粉、アルギン酸ソーダ等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤等を用いて製造できる。
非経口投与に適当な製剤は、好ましくは受容者の血液と等張である活性化合物を含む滅菌水性剤からなる。例えば、注射剤の場合は、塩溶液、ブドウ糖溶液または塩水とブドウ糖溶液の混合物からなる担体等を用いて注射用の溶液を調製する。
また、これら非経口剤においても、経口剤で例示した希釈剤、防腐剤、フレーバー類、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤等から選択される１種もしくはそれ以上の補助成分を添加することもできる。
ＶＧＦ関連ペプチドまたはその薬理学的に許容される塩の投与量および投与回数は、投与形態、患者の年齢、体重、治療すべき症状の性質もしくは重篤度により異なるが、通常経口の場合、成人一人当り０．０１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは０．０５〜５０ｍｇを一日一回ないし数回投与する。静脈内投与等の非経口投与の場合、成人一人当り０．００１ 〜１００ｍｇ 、好ましくは０．０１〜１０ｍｇを一日一回ないし数回投与する。しかしながら、これら投与量および投与回数に関しては、前述の種々の条件により変動する。
ＶＧＦ関連ペプチドは摂食または摂水行動を促進する活性を有するので、上記の医薬製剤は、神経性食欲不振症（拒食症、神経性無食欲症）等の摂食障害あるいは摂水障害の治療剤として有用である。
３．ＶＧＦ関連ペプチドの活性を阻害または促進する物質のスクリーニング方法
ＶＧＦ関連ペプチドは、摂食または摂水行動を促進する活性を有するので、該ペプチドは、摂食または摂水行動の制御に関与する器官である脳、特に視床下部および下垂体に作用し、その細胞応答を起こすと考えられる。
ＶＧＦ関連ペプチドの有する摂食または摂水行動を促進する活性を阻害する物質は、（ｉ）視床下部細胞、下垂体細胞または脳組織に、ＶＧＦ関連ペプチドまたはその塩および試験物質を接触させた場合の細胞応答を測定し、（ii）同じ細胞に試験物質の非存在下で、該ペプチドまたはその塩を接触させた場合の細胞応答と比較し、（iii）試験物質の存在下で細胞応答が抑制される場合にその試験物質を該ペプチドの有する摂食または摂水行動を促進する活性を阻害する物質として選択すること、によりスクリーニングできる。
また同様に、（ｉ）視床下部細胞、下垂体細胞または脳組織に、ＶＧＦ関連ペプチドまたはその塩および試験物質を接触させた場合の細胞応答を測定し、（ii）同じ細胞に試験物質の非存在下で、該ペプチドまたはその塩を接触させた場合の細胞応答と比較し、（iii）試験物質の存在下で細胞応答が促進される場合にその試験物質を該ペプチドの有する摂食または摂水行動を促進する活性を促進する物質として選択すること、により該ペプチドの有する摂食または摂水行動を促進する活性を促進する物質をスクリーニングできる。
細胞応答としては、視床下部細胞、下垂体細胞または脳組織にＶＧＦ関連ペプチドを接触させたときに起こる、測定可能な細胞応答であれば、いかなる細胞応答でもかまわないが、例えば、細胞内カルシウムイオン濃度の上昇があげられる。
上記のスクリーニング方法で用いる視床下部細胞および下垂体細胞は、ＶＧＦ関連ペプチドと接触させたときに細胞応答を示す細胞であれば、視床下部または下垂体に由来する細胞株でもよいし、動物から採取した視床下部または下垂体を細断したものでもよい。また、視床下部または下垂体を含む脳の一部を細断したものでもよい。上記のスクリーニング方法で用いる脳組織は、視床下部または下垂体を含む脳の一部、または脳全体を細断したものが好ましい。アポエクオリン遺伝子を導入して作製した全身にアポエクオリンを発現するトランスジェニックマウス（ＷＯ０２／０１０３７１）の視床下部または下垂体を採取し、細断して得られる細胞は、セレンテラジンの存在下で発光量をルミノメーターで測定することにより、細胞内カルシウムイオン濃度を簡便に測定できるので、好ましい。
上記のスクリーニング方法で得られるＶＧＦ関連ペプチドの有する摂食または摂水行動を促進する活性を促進する物質は、ＶＧＦ関連ペプチドと同様に、摂食若しくは摂水行動を促進させる活性を有するので、摂食障害・摂水障害などの疾患の治療薬に用いることができる。また、上記のスクリーニング方法で得られるＶＧＦ関連ペプチドの有する摂食または摂水行動を促進する活性を阻害する物質は、摂食行動を抑制するので、肥満症の治療薬、あるいは肥満症の治療に伴う食事療法（ダイエット）を補助するための薬剤として用いることができる。
４．ＶＧＦ関連ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストのスクリーニング方法
ＶＧＦ関連ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストは、（ｉ）視床下部細胞もしくは下垂体細胞または該細胞の膜画分に、ＶＧＦ関連ペプチドまたはその塩および試験物質を接触させた場合の該細胞または該細胞の膜画分に対する該ペプチドまたはその塩の結合量を測定し、（ii）同じ細胞または膜画分に試験物質の非存在下で、該ペプチドまたはその塩を接触させた場合の該細胞または該細胞の膜画分に対する該ペプチドまたはその塩の結合量と比較し、（iii）試験物質の存在下で該ペプチドまたはその塩の結合量が低下する場合にその試験物質を該ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストとして選択すること、によりスクリーニングできる。また、視床下部細胞もしくは下垂体細胞または該細胞の膜画分の代わりに脳組織または脳組織の膜画分を用いた同様の方法によりスクリーニングできる。
上記のスクリーニングに用いる視床下部細胞、下垂体細胞および脳組織としては、上記３．に記載の細胞および脳組織を用いることができる。該細胞もしくは該細胞の細胞膜画分、または脳組織もしくは脳組織の膜画分は、適当な緩衝液に懸濁する。緩衝液は、ＶＧＦ関連ペプチドまたはその塩と、懸濁した細胞、組織または膜画分との結合を阻害しない緩衝液であればいずれでもよく、例えばｐＨ４〜１０（望ましくはｐＨ６〜８）のリン酸緩衝液やＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液等が用いられる。また、非特異的結合を低減させる目的で、ＣＨＡＰＳ、Ｔｗｅｅｎ−８０、ジギトニン、デオキシコール酸等の界面活性剤やウシ血清アルブミンやゼラチン等の各種蛋白質を緩衝液に加えることもできる。さらに、プロテアーゼによる本発明のポリペプチドやリガンドの分解を抑える目的でＰＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ−６４、ペプスタチン等のプロテアーゼ阻害剤を添加することもできる。
上記の細胞または膜画分に対するＶＧＦ関連ペプチドまたはその塩の結合量は、例えば、該ペプチドを標識して、該細胞または該細胞の膜画分と接触させ、該細胞または該細胞の膜画分に結合した標識の量として測定することができる。標識物質としては、放射性同位元素、蛍光物質、発光物質、ビオチン、ジゴキシゲニン、タグ配列を含むペプチド、酵素等があげられ、標識した該ペプチドが該細胞または該細胞の膜画分との結合を有していればいずれのものでもよい。以下にスクリーニング法の具体例をあげる。
１０μＬ〜１０ｍＬの該細胞もしくは該細胞の細胞膜画分、または脳組織もしくは脳組織の膜画分の懸濁液に、１２５Ｉ、３Ｈ等の放射性同位元素で標識した一定の放射能量を有するＶＧＦ関連ペプチドまたはその塩を共存させて結合実験を行う。反応は０〜５０℃、好ましくは４〜３７℃で、２０分〜２４時間、好ましくは３０分〜３時間行なう。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同緩衝液で洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活性をγ−カウンターまたは液体シンチレーションカウンターで計測する。この時の放射活性を全結合量（Ａ）とする。大過剰の非標識の同ペプチドまたはその塩を加えた条件で同様の反応を行い、その時の放射活性を非特異的結合量（Ｂ）とする。Ａ−Ｂが、試験物質の非存在下での結合量となる。全結合量の測定と同様の測定を試験物質を加えた条件で行い、その時の放射活性をＣとする。Ｃ−Ｂが試験物質の存在下での結合量となる。試験物質の結合阻害率は下記の式で求めることができる。
阻害率（％）＝［１−｛（Ｃ−Ｂ）／（Ａ−Ｂ）｝］×１００
上記のスクリーニング方法で得られるＶＧＦ関連ペプチドの受容体に対するアゴニストは、ＶＧＦ関連ペプチドと同様に、摂食または摂水行動を促進させる活性を有するので、摂食障害・摂水障害などの疾患の治療薬に用いることができる。また、該受容体に対するアンタゴニストは、ＶＧＦ関連ペプチドが有する、摂食行動を促進させる活性を阻害するので、肥満症の治療薬、あるいは肥満症の治療に伴う食事療法（ダイエット）を補助するための薬剤として用いることができる。
以下に、本発明の実施例を示す。
ＶＧＦに由来するペプチドの視床下部細胞および下垂体細胞に対する作用
配列番号１、２および５のアミノ酸配列からなるペプチド（以下、それぞれペプチド１、ペプチド２、ペプチド３とよぶ）をシグマジェノシス社に依頼して化学合成した。配列番号１のアミノ酸配列は、ヒトＶＧＦのアミノ酸配列の５８６〜６１５番目の配列、配列番号２のアミノ酸配列は、ラットＶＧＦのアミノ酸配列の５８８〜６１７番目の配列、配列番号５のアミノ酸配列は、ラットＶＧＦのアミノ酸配列の５５６〜６１７番目の配列である。
全身にアポエクオリンを発現しているアポエクオリン遺伝子のトランスジェニックマウス（以下、アポエクオリン発現マウスとよぶ）の視床下部細胞および下垂体細胞を利用して、ペプチドのこれらの細胞に対する作用を、細胞内カルシウムイオン濃度を指標にして調べた。アポエクオリン発現マウスの細胞は、アポエクオリンが発光基質セレンテラジンの存在下でカルシウムイオンと結合し発光するため、細胞内カルシウムイオン濃度をモニターできる。なお、特許文献（ＷＯ０２／０１０３７１）には、アポエクオリン発現マウスの作製法、該マウス由来の生体試料を使用した生理活性物質の評価方法および、以下に示すような生理活性ペプチドを該マウスの臓器を使用して評価した実験結果が開示されている。すなわち、アポエクオリン発現マウスより得られた各臓器に、アンジオテンシンIIを終濃度１μｍｏｌ／Ｌで添加したところ、血管、子宮、副腎において強い発光が観察され、またブラジキニンを終濃度１０μｍｏｌ／Ｌで添加したところ、血管、子宮、副腎において強い発光が観察されたとの記載があり、アポエクオリン発現マウスはペプチドの生理活性評価に使用可能である。
アポエクオリン発現マウスは特許文献（ＷＯ０２／０１０３７１）の参考例４で開示されている方法に従い作製した。アポエクオリン発現マウスを屠殺後、視床下部および下垂体を摘出し、それぞれを約１〜２ｍｍ３の立方体に細断して試料を調製した。次に、視床下部試料または下垂体試料それぞれについて、５ｍＬチューブ（Rohren-Tubes；ザルスタット（Sarstedt）社製、Ｎｏ．５５．４７６）中で、ＲＰＭＩ１６４０培地に溶解した１０μｍｏｌ／Ｌセレンテラジン〔モレキュラー・プローブズ（MolecularProbes社）製〕溶液５０μＬに、調製した試料３個を加え３７℃で３時間培養した。３時間後、ＲＰＭＩ１６４０培地を添加し、２５秒後にＲＰＭＩ１６４０培地に溶解したペプチドを、視床下部試料に対しては終濃度１μｍｏｌ／Ｌになるように、下垂体試料に対しては終濃度５μｍｏｌ／Ｌになるように添加し、ルミノメーター〔オートルーマット（AutoLumat）ＬＢ９５３、ベルトルード（Berthold）社製〕を用いて、ＲＰＭＩ１６４０培地の添加直後から１秒ごとに相対発光量を測定した。
その結果、ペプチド１を加えることにより、視床下部試料（図１）および下垂体試料（図２）で発光が観察された。また、ペプチド２を加えることにより、視床下部試料（図３）および下垂体試料（図４）で発光が観察された。以上から、ペプチド１および２は、視床下部細胞および下垂体細胞において細胞内のカルシウムイオンの濃度を上昇させる活性を有していることがわかった。視床下部や下垂体は、摂食行動や摂水行動を支配する食欲中枢に関与する臓器であるので、ペプチド１および２が、視床下部細胞や下垂体細胞に作用し、摂食行動または摂水行動に影響を及ぼすことが予想された。
ペプチドのラットの摂食行動・摂水行動に対する作用
１０週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラット（日本チャールズリバー）５匹の側脳室にカニューラを挿入、固定し、１週間の回復期間をおいた。ストレスによる非特異的な行動異常を起こさないように、午前１０時前後の明期に毎日ハンドリングを行った。ケージ内に通常餌と蒸留水を置き、自由給餌の状態でペプチドを含む生理食塩水もしくは人工髄液１０μｌを、カニューラを通して各ラットの側脳質内に投与した。各ラットのペプチドの投与後１時間または２時間の自由行動下での飲水量と摂餌量を測定した。コントロールとして、同一ラットに日を変えて生理食塩水もしくは人工髄液１０μｌをペプチドの投与と同一の条件で側脳質内に投与し、投与後１時間または２時間の自由行動下での飲水量と摂餌量を測定した。ペプチド投与時の飲水量および摂餌量とコントロールの生理食塩水投与時の飲水量および摂餌量とをそれぞれの平均値で比較した。
その結果、図５に見られるように、ペプチド１を投与して１時間後にコントロールと比較して摂餌量が増加しており、ペプチド１の投与により明らかな摂食行動の促進が認められた。また、図６に見られるように、ペプチド１を投与して１時間後にコントロールと比較して飲水量が増加しており、ペプチド１の投与により明らかな摂水行動の促進が認められた。さらに、図７に見られるように、ペプチド２およびペプチド３を投与して１時間および２時間後にコントロールと比較して飲水量が増加しており、ペプチド２およびペプチド３の投与により明らかな摂水行動の促進が認められた。
本発明により、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチドを有効成分として含有する摂食障害または摂水障害の治療薬、該ペプチドを利用する、該ペプチドの活性を促進または抑制する物質あるいは該ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストのスクリーニング方法が提供される。本発明で提供されるスクリーニング方法によって得られる該ペプチドの活性を促進する物質および該ペプチドの受容体に対するアゴニストは、摂食障害または摂水障害の治療に有用であり、該ペプチドの活性を阻害する物質および該ペプチドの受容体に対するアンタゴニストは、肥満症の治療、あるいは肥満症の治療に伴う食事療法（ダイエット）を補助に有用である。
「配列表フリーテキスト」
配列番号１−発明者：中里雅光；山崎基生
配列番号３−配列番号１と２のアミノ酸配列のコンセンサス配列
配列番号６−配列番号４と５のアミノ酸配列のコンセンサス配列

Claims (6)

  1. 以下の（ａ）〜（ｅ）から選ばれる少なくとも１つのペプチドまたはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する摂食障害または摂水障害の治療剤。
    （ａ）配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列からなるペプチド
    （ｂ）配列番号１〜６のいずれかのアミノ酸配列を含み、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチド
    （ｃ）配列番号１、２、４または５のアミノ酸配列において、１以上５以下のアミノ酸が置換、欠失もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチド
    （ｄ）配列番号１、２、４または５のアミノ酸配列と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチド、および
    （ｅ）下記式（Ｉ）で表されるペプチドであって、摂食または摂水行動を促進する活性を有するペプチド。
    ［化５］
    Ｒ１−Ａ−Ｒ２ （Ｉ）

    （式中、Ｒ１は水素原子、置換もしくは非置換のアルカノイル、置換もしくは非置換のアロイル、置換もしくは非置換のヘテロアリールカルボニル、置換もしくは非置換のアルコキシカルボニル、置換もしくは非置換のアリールオキシカルボニル、または置換もしくは非置換のヘテロアリールオキシカルボニルを表し、Ｒ２はヒドロキシ、置換もしくは非置換のアルコキシ、または置換もしくは非置換のアミノを表し、Ａは上記（ａ）〜（ｄ）のいずれかのペプチドのペプチド残基を表す）
  2. 配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチド（ただし、配列番号７のアミノ酸配列からなるペプチドは除く）またはその薬理学的に許容される塩。
  3. 請求項１の（ａ）〜（ｅ）または請求項２のいずれかに記載のペプチドまたはその塩および試験物質を視床下部細胞、下垂体細胞または脳組織に接触させた場合の細胞応答を測定し、該ペプチドまたはその塩を試験物質の非存在下で視床下部細胞、下垂体細胞または脳組織に接触させた場合の細胞応答と比較して、細胞応答が抑制される場合の試験物質を、該ペプチドの有する摂食または摂水行動を促進する活性を阻害する物質として選択することを特徴とする、該ペプチドの有する摂食もしくは摂水行動を促進する活性を阻害する物質のスクリーニング方法。
  4. 請求項１の（ａ）〜（ｅ）または請求項２のいずれかに記載のペプチドまたはその塩および試験物質を視床下部細胞、下垂体細胞または脳組織に接触させた場合の細胞応答を測定し、該ペプチドまたはその塩を試験物質の非存在下で視床下部細胞、下垂体細胞または脳組織に接触させた場合の細胞応答と比較して、細胞応答が促進される場合の試験物質を、該ペプチドの有する摂食または摂水行動を促進する活性を促進する物質として選択することを特徴とする、該ペプチドの有する摂食または摂水行動を促進する活性を促進する物質のスクリーニング方法。
  5. 請求項１の（ａ）〜（ｅ）または請求項２のいずれかに記載のペプチドまたはその塩および試験物質を視床下部細胞、下垂体細胞、または視床下部細胞もしくは下垂体細胞の膜画分に接触させた場合の該細胞もしくは該細胞の膜画分に対する該ペプチドまたはその塩の結合量を測定し、該ペプチドまたはその塩を試験物質の非存在下で該細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合の該ペプチドまたはその塩の結合量と比較して、結合量が低下する場合の試験物質を該ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストとして選択することを特徴とする、該ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストのスクリーニング方法。
  6. 請求項１の（ａ）〜（ｅ）または請求項２のいずれかに記載のペプチドまたはその塩および試験物質を脳組織または脳組織の膜画分に接触させた場合の脳組織または脳組織の膜画分に対する該ペプチドまたはその塩の結合量を測定し、該ペプチドまたはその塩を試験物質の非存在下で脳組織または脳組織の膜画分に接触させた場合の該ペプチドまたはその塩の結合量と比較して、結合量が低下する場合の試験物質を該ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストとして選択することを特徴とする、該ペプチドの受容体に対するアゴニストまたはアンタゴニストのスクリーニング方法。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK1196442T3 (da) * 1999-07-21 2006-05-08 Amgen Inc VGF-polypeptider og fremgangsmåder til behandling af VGF-relaterede lidelser
AU2001238347A1 (en) * 2000-02-28 2001-09-12 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
EP1694816B1 (en) * 2003-11-07 2013-08-28 Ciphergen Biosystems, Inc. Biomarkers for alzheimer's disease
JPWO2007013586A1 (ja) * 2005-07-29 2009-02-12 協和発酵キリン株式会社 新規ペプチド

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