JPWO2007080977A1 - 免疫疾患の予防ないし治療剤および方法 - Google Patents
免疫疾患の予防ないし治療剤および方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2007080977A1 JPWO2007080977A1 JP2007534938A JP2007534938A JPWO2007080977A1 JP WO2007080977 A1 JPWO2007080977 A1 JP WO2007080977A1 JP 2007534938 A JP2007534938 A JP 2007534938A JP 2007534938 A JP2007534938 A JP 2007534938A JP WO2007080977 A1 JPWO2007080977 A1 JP WO2007080977A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- cryj1
- cells
- cryj2
- allergen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 title abstract description 22
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 title abstract description 7
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 title description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 46
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 44
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 44
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims abstract description 35
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 20
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 122
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 103
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 63
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 31
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 31
- VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 1-O-(alpha-D-galactosyl)-N-hexacosanoylphytosphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H]([C@H](O)[C@H](O)CCCCCCCCCCCCCC)CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 0.000 claims description 27
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 25
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 claims description 25
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 24
- 241000218645 Cedrus Species 0.000 claims description 23
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 8
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 11
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 abstract description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 abstract description 7
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 abstract description 7
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 abstract description 6
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 50
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 32
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 29
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 25
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 14
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 14
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 14
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 230000031261 interleukin-10 production Effects 0.000 description 10
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 7
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 7
- 210000003826 marginal zone b cell Anatomy 0.000 description 7
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 6
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 6
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 6
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 5
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 5
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 5
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 5
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 5
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 5
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 4
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 3
- 206010048908 Seasonal allergy Diseases 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000017307 interleukin-4 production Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 101150028074 2 gene Proteins 0.000 description 2
- 244000036975 Ambrosia artemisiifolia Species 0.000 description 2
- 235000003129 Ambrosia artemisiifolia var elatior Nutrition 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 229920000362 Polyethylene-block-poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 230000000961 alloantigen Effects 0.000 description 2
- 235000003484 annual ragweed Nutrition 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000006263 bur ragweed Nutrition 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 235000003488 common ragweed Nutrition 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- NTHXOOBQLCIOLC-UHFFFAOYSA-N iohexol Chemical compound OCC(O)CN(C(=O)C)C1=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C1I NTHXOOBQLCIOLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920006289 polycarbonate film Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009736 ragweed Nutrition 0.000 description 2
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 2
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 2
- -1 sorbit Chemical compound 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 2
- NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N (+)-Neomenthol Chemical compound CC(C)[C@@H]1CC[C@@H](C)C[C@@H]1O NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N 0.000 description 1
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 235000003261 Artemisia vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 240000006891 Artemisia vulgaris Species 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 244000274847 Betula papyrifera Species 0.000 description 1
- 235000009113 Betula papyrifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000009109 Betula pendula Nutrition 0.000 description 1
- 235000010928 Betula populifolia Nutrition 0.000 description 1
- 235000002992 Betula pubescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 206010010744 Conjunctivitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 244000301850 Cupressus sempervirens Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N DL-menthol Natural products CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 206010013700 Drug hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 241001302160 Escherichia coli str. K-12 substr. DH10B Species 0.000 description 1
- 240000008620 Fagopyrum esculentum Species 0.000 description 1
- 235000009419 Fagopyrum esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 239000004378 Glycyrrhizin Substances 0.000 description 1
- 244000043261 Hevea brasiliensis Species 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000080590 Niso Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 108010034546 Serratia marcescens nuclease Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000005764 Theobroma cacao ssp. cacao Nutrition 0.000 description 1
- 235000005767 Theobroma cacao ssp. sphaerocarpum Nutrition 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] n-[2-(dimethylamino)ethyl]carbamate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(=O)NCCN(C)C)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000002205 allergic conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940063655 aluminum stearate Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000024998 atopic conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N barbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=O)N1 HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003659 bee venom Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 235000001046 cacaotero Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- FNAQSUUGMSOBHW-UHFFFAOYSA-H calcium citrate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O FNAQSUUGMSOBHW-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000001354 calcium citrate Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol group Chemical group [C@@H]1(CC[C@H]2[C@@H]3CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)[C@H](C)CCCC(C)C HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- BIABMEZBCHDPBV-UHFFFAOYSA-N dipalmitoyl phosphatidylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC BIABMEZBCHDPBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 201000005311 drug allergy Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 description 1
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001341 hydroxy propyl starch Substances 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 235000013828 hydroxypropyl starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 239000003350 kerosene Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229940041616 menthol Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229920003052 natural elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229920001194 natural rubber Polymers 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015205 orange juice Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 239000005060 rubber Substances 0.000 description 1
- 235000014102 seafood Nutrition 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940079827 sodium hydrogen sulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 235000013337 tricalcium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7032—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a polyol, i.e. compounds having two or more free or esterified hydroxy groups, including the hydroxy group involved in the glycosidic linkage, e.g. monoglucosyldiacylglycerides, lactobionic acid, gangliosides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/35—Allergens
- A61K39/36—Allergens from pollen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55583—Polysaccharides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本発明は、ＮＫＴ細胞の多彩な機能の中から選択的に免疫抑制機能を増強させる方法、及び生体内で抗原特異的免疫抑制を効率よく誘導する方法、並びにそれらを応用した医薬を提供する。より詳細には、本発明は、ＣＤ１ｄリガンド及び標的抗原（例えば、アレルゲン、自己抗原）を含む医薬（例えば、アレルギー疾患、自己免疫疾患等の免疫疾患の予防・治療剤）を提供する。好ましくは、本医薬は、ＣＤ１ｄリガンド及び標的抗原を含む、内腔を有する薬物送達媒体を含有してなる。
Description
本発明は、アレルギー疾患又は自己免疫疾患などの免疫疾患の予防ないし治療剤、免疫疾患の予防ないし治療方法、スギ花粉抗原融合タンパク質などに関する。
免疫応答の異常を原因とする、自己免疫疾患、アレルギー疾患を始めとする免疫疾患に対する現行の治療の多くは対症療法であるため、このような疾患を根本的に治療し得る、免疫制御機構を利用した方法の開発が切望されている。免疫制御機構に関係する主要な細胞集団としては、ＮＫＴ細胞、免疫寛容誘導性樹状細胞、制御性Ｔ細胞などが既に報告されている。従って、免疫疾患を根本的に治療し得る方法としては、これらの免疫細胞を介した免疫制御機構を利用する方法が考えられる。
免疫疾患の治療につながり得る、免疫制御機構を利用する方法としては、これまでに、以下の報告がある。
特許文献１には、α−ＧａｌＣｅｒ（α-galactosylceramide）を包含するリポソーム内腔にOVA（卵白アルブミン）タンパク質を封入する方法と上記リポソームによるマウスの抗体産生抑制作用が記載されている。
非特許文献１には、マウス骨髄細胞をＩＬ−１０存在下に試験管内で培養するとＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈＣＤ１１ｃｌｏｗ細胞が増殖すること、また脾臓中にはＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈＣＤ１１ｃｌｏｗ細胞が存在し、試験管内とｉｎ ｖｉｖｏ（マウス）でナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞から制御性Ｔ細胞を分化・増殖させることができることが記載されている。
非特許文献２には、マウス骨髄細胞から制御性樹状細胞を人工的に作製する方法が記載されている。
非特許文献３には、マウス脾臓中の低比重Ｂ２２０陽性Ｂ細胞がバクテリア刺激でＩＬ−１０を産生する能力があることが記載されている。
非特許文献４には、α−ＧａｌＣｅｒを投与したマウスの脾臓中の低比重Ｂ細胞はＮＫＴ細胞のＩＬ−４産生能を高められないことと、ＤＣで活性化するＮＫＴ細胞のＩＦＮ−γとＩＬ−４産生機能を抑制することが記載されている。
しかしながら、ＮＫＴ細胞の多彩な機能の中から選択的に免疫抑制機能を増強させる方法、及び生体内で抗原特異的免疫抑制を効率よく誘導する方法は、未だ開発されていない。
国際公開WO2005/120574号パンフレット
Wakkach et al., Immunity 18: 605-617 (2003)
Sato et al., Immunity 18: 367-379 (2003)
Burke et al., The Journal of Immunology 173: 2362-2372 (2004)
Bezbradica et al., The Journal of Immunology 174: 4696-4705 (2005)
特許文献１には、α−ＧａｌＣｅｒ（α-galactosylceramide）を包含するリポソーム内腔にOVA（卵白アルブミン）タンパク質を封入する方法と上記リポソームによるマウスの抗体産生抑制作用が記載されている。
非特許文献１には、マウス骨髄細胞をＩＬ−１０存在下に試験管内で培養するとＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈＣＤ１１ｃｌｏｗ細胞が増殖すること、また脾臓中にはＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈＣＤ１１ｃｌｏｗ細胞が存在し、試験管内とｉｎ ｖｉｖｏ（マウス）でナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞から制御性Ｔ細胞を分化・増殖させることができることが記載されている。
非特許文献２には、マウス骨髄細胞から制御性樹状細胞を人工的に作製する方法が記載されている。
非特許文献３には、マウス脾臓中の低比重Ｂ２２０陽性Ｂ細胞がバクテリア刺激でＩＬ−１０を産生する能力があることが記載されている。
非特許文献４には、α−ＧａｌＣｅｒを投与したマウスの脾臓中の低比重Ｂ細胞はＮＫＴ細胞のＩＬ−４産生能を高められないことと、ＤＣで活性化するＮＫＴ細胞のＩＦＮ−γとＩＬ−４産生機能を抑制することが記載されている。
しかしながら、ＮＫＴ細胞の多彩な機能の中から選択的に免疫抑制機能を増強させる方法、及び生体内で抗原特異的免疫抑制を効率よく誘導する方法は、未だ開発されていない。
従って、本発明の目的は、ＮＫＴ細胞の多彩な機能の中から選択的に免疫抑制機能を増強させる方法、及び生体内で抗原特異的免疫抑制を効率よく誘導する方法、並びにそれらを応用した医薬を提供することである。
本発明者らは、鋭意検討を重ねた結果、ＣＤ１ｄリガンド及び天然または組換えアレルゲンを含む薬物送達媒体が該アレルゲンに起因するＩｇＥ産生を特異的に抑制することから、該アレルゲンに起因するアレルギー疾患が、このような薬物送達媒体により特異的に治療され得ることを見出し、また、かかる知見から、アレルゲンの代わりに自己抗原を含む薬物送達媒体を利用することで、該自己抗原に起因する自己免疫疾患についても同様に特異的に治療し得ることを着想し、以って本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、以下の発明などを提供する：
〔１〕ＣＤ１ｄリガンド及び標的抗原を含む、内腔を有する薬物送達媒体を含有してなる、該標的抗原に起因する免疫疾患の予防又は治療剤。
〔２〕標的抗原がアレルゲンであり、免疫疾患が該アレルゲンに起因するアレルギー疾患である上記〔１〕の剤。
〔３〕薬物送達媒体がリポソームである、上記〔１〕の剤。
〔４〕ＣＤ１ｄリガンドがα−ＧａｌＣｅｒである、上記〔１〕の剤。
〔５〕アレルゲンがスギ花粉抗原である、上記〔２〕の剤。
〔６〕アレルゲンがＣｒｙｊ１成熟タンパク質及びＣｒｙｊ２成熟タンパク質の融合タンパク質である、上記〔２〕の剤。
〔７〕融合タンパク質において、Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質がＣｒｙｊ２成熟タンパク質よりもＮ末端側に存在する、上記〔５〕の剤。
〔８〕ＣＤ１ｄリガンドがリポソーム膜内に包埋され、かつアレルゲンがリポソーム内腔に封入されている、上記〔２〕の剤。
〔９〕標的抗原が自己抗原である、上記〔１〕の剤。
〔１０〕スギ花粉抗原Ｃｒｙｊ１タンパク質とＣｒｙｊ２タンパク質を含む融合タンパク質。
〔１１〕前記Ｃｒｙｊ１タンパク質がＣｒｙｊ１成熟タンパク質であり、Ｃｒｙｊ２タンパク質がＣｒｙｊ２成熟タンパク質である上記〔１０〕の融合タンパク質。
〔１２〕Ｃｒｙｊ１タンパク質とＣｒｙｊ２タンパク質が、直接又はペプチドリンカーを介して連結されている、上記〔１０〕の融合タンパク質。
〔１３〕Ｃｒｙｊ１タンパク質がＮ末端側に、Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質がＣ末端側に存在する、上記〔１０〕の融合タンパク質。
〔１４〕上記〔１〕〜〔９〕のいずれかの免疫疾患の予防又は治療剤の薬学的有効量をその治療を必要とする被験体に投与する工程を含む、免疫疾患の予防又は治療方法。
〔１５〕前記被験体がヒト免疫疾患患者である、上記〔１４〕の免疫疾患の予防又は治療方法。
〔１〕ＣＤ１ｄリガンド及び標的抗原を含む、内腔を有する薬物送達媒体を含有してなる、該標的抗原に起因する免疫疾患の予防又は治療剤。
〔２〕標的抗原がアレルゲンであり、免疫疾患が該アレルゲンに起因するアレルギー疾患である上記〔１〕の剤。
〔３〕薬物送達媒体がリポソームである、上記〔１〕の剤。
〔４〕ＣＤ１ｄリガンドがα−ＧａｌＣｅｒである、上記〔１〕の剤。
〔５〕アレルゲンがスギ花粉抗原である、上記〔２〕の剤。
〔６〕アレルゲンがＣｒｙｊ１成熟タンパク質及びＣｒｙｊ２成熟タンパク質の融合タンパク質である、上記〔２〕の剤。
〔７〕融合タンパク質において、Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質がＣｒｙｊ２成熟タンパク質よりもＮ末端側に存在する、上記〔５〕の剤。
〔８〕ＣＤ１ｄリガンドがリポソーム膜内に包埋され、かつアレルゲンがリポソーム内腔に封入されている、上記〔２〕の剤。
〔９〕標的抗原が自己抗原である、上記〔１〕の剤。
〔１０〕スギ花粉抗原Ｃｒｙｊ１タンパク質とＣｒｙｊ２タンパク質を含む融合タンパク質。
〔１１〕前記Ｃｒｙｊ１タンパク質がＣｒｙｊ１成熟タンパク質であり、Ｃｒｙｊ２タンパク質がＣｒｙｊ２成熟タンパク質である上記〔１０〕の融合タンパク質。
〔１２〕Ｃｒｙｊ１タンパク質とＣｒｙｊ２タンパク質が、直接又はペプチドリンカーを介して連結されている、上記〔１０〕の融合タンパク質。
〔１３〕Ｃｒｙｊ１タンパク質がＮ末端側に、Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質がＣ末端側に存在する、上記〔１０〕の融合タンパク質。
〔１４〕上記〔１〕〜〔９〕のいずれかの免疫疾患の予防又は治療剤の薬学的有効量をその治療を必要とする被験体に投与する工程を含む、免疫疾患の予防又は治療方法。
〔１５〕前記被験体がヒト免疫疾患患者である、上記〔１４〕の免疫疾患の予防又は治療方法。
一つの実施形態において、本発明は、ＣＤ１ｄリガンド及び標的抗原を含む、内腔を有する薬物送達媒体（以下、必要に応じて、薬物送達媒体、内腔を有する薬物送達媒体、ＣＤ１ｄリガンドを含む薬物送達媒体、あるいは標的抗原を含む薬物送達媒体などと省略する）を含有してなる、免疫疾患の予防又は治療剤を提供する。
本発明で用いられ得る薬物送達媒体としては、動物への薬物送達を可能とし、かつ内腔を有するものである限り特に限定されないが、例えば、リポソーム、マイクロスフェアが挙げられる。
リポソームとは、ミセル（親水性領域と疎水性領域を含む両親媒性分子の凝集によって得られる水溶性粒子）が閉鎖した小胞構造をいう。本発明の医薬が薬物送達媒体としてリポソームを含む場合、ＣＤ１ｄリガンドがリポソーム膜内に包埋され得、かつアレルゲンがリポソーム内腔に封入され得る。薬物送達媒体としてリポソームが用いられる場合、かかるリポソームは、国際公開ＷＯ２００５／１２０５７４号公報に記載の方法により作製できる。詳細には、α−ＧａｌＣｅｒなどのＣＤ１ｄリガンドを含むリポソームは、PCT/JP2005/10254に記載されるような常法に従い、リポソームを構成する脂質とＣＤ１ｄリガンドを含む有機溶媒溶液を混合後に乾燥し、ここに水を加えて超音波処理することにより得ることができる。また、標的抗原を封入したリポソームは、リポソームを構成する脂質とＣＤ１ｄリガンドを含む有機溶媒溶液を混合後に乾燥し、ここに標的抗原の水溶液を加えて超音波処理することにより得ることができる。
マイクロスフェアとは、基剤として生体内で分解されるポリマーを使用した微小球状の物質をいう。マイクロスフェアとしては、例えば、多孔型マイクロスフェア、カプセル型マイクロスフェアが挙げられる。
ＣＤ１ｄリガンドとは、ＣＤ１ｄ発現抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に提示され、以ってＮＫＴ細胞を活性化し得る物質をいう。ＣＤ１ｄリガンドとしては、例えば、α−ＧａｌＣｅｒ及びその類縁体、並びに生体内に存在するＩＧｂ３（Isoglobo-glycosphingolipid）が挙げられるが、α−ＧａｌＣｅｒがより好ましい。
標的抗原は、生体において該抗原に対する免疫応答の抑制が所望されるものである限り特に限定されない。標的抗原は天然体、組換えタンパク質、化学合成物であってもよく、例えば、アレルゲン、自己抗原、移植片アロ抗原が挙げられる。以下、本発明の医薬を、アレルギー性疾患、及び自己免疫疾患等に適用する場合の詳細について説明する。
（アレルギー性疾患への適用）
アレルゲンは、生体が曝されるか、生体が摂取するか、または生体に適用される、アレルギーの原因となり得る因子である限り特に限定されない。このようなアレルゲンとしては、例えば、花粉（例、スギ、ヒノキ、ブタクサ、イネ、シラカンバ、カモガヤ、ヨモギ）、食品（例、牛乳、そば、卵、ピーナッツ、小麦、大豆、魚介類、果物またはそれらの加工品）、ヒト以外の生物またはその由来物（例、ダニ、カビ、動物・鳥類の体毛、ハチ毒）、薬物（例、ペニシリン系抗生物質、サルファ剤、バルビツール酸誘導体）、医療用品（例、天然ゴム手袋）、生活用品（例、装飾用具の金属）、その他の物質または組成物（例、ラテックス）などに含まれる、アレルギーの原因となり得る因子が挙げられる。
アレルゲンは、生体が曝されるか、生体が摂取するか、または生体に適用される、アレルギーの原因となり得る因子である限り特に限定されない。このようなアレルゲンとしては、例えば、花粉（例、スギ、ヒノキ、ブタクサ、イネ、シラカンバ、カモガヤ、ヨモギ）、食品（例、牛乳、そば、卵、ピーナッツ、小麦、大豆、魚介類、果物またはそれらの加工品）、ヒト以外の生物またはその由来物（例、ダニ、カビ、動物・鳥類の体毛、ハチ毒）、薬物（例、ペニシリン系抗生物質、サルファ剤、バルビツール酸誘導体）、医療用品（例、天然ゴム手袋）、生活用品（例、装飾用具の金属）、その他の物質または組成物（例、ラテックス）などに含まれる、アレルギーの原因となり得る因子が挙げられる。
本発明の医薬は、標的抗原としてアレルゲンを含む薬物送達媒体を含む場合、該アレルゲンに起因するアレルギー疾患の特異的治療剤として有用である。本発明者らは、ＣＤ１ｄリガンド及びアレルゲンを含む薬物送達媒体が該アレルゲンに起因するＩｇＥ産生を特異的に抑制することから、該アレルゲンに起因するアレルギー疾患が、このような薬物送達媒体により特異的に治療され得ることを見出した。本発明の医薬により特異的に治療され得るアレルギー疾患としては、例えば、アトピー型気管支喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎（例、花粉症）、アレルギー性結膜炎、食物アレルギー、薬物アレルギーが挙げられる。
アレルゲンとして好ましい例は、スギ花粉抗原（例、Ｃｒｙｊ１、Ｃｒｙｊ２等のタンパク質）であり得る。アレルゲンとしてはまたスギ花粉抗原の組換え融合タンパク質もまた好ましい。このような融合タンパク質としては、例えば、Ｃｒｙｊ１タンパク質及びＣｒｙｊ２タンパク質の融合タンパク質（以下、必要に応じて「融合タンパク質」と省略する）が挙げられる。
Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質は、Ｃｒｙｊ１遺伝子より発現したポリペプチドのうち、Ｎ末端側に存在するシグナル領域が少なくとも部分的に除去されたポリペプチドである。例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＢＡＡ０７０２０を参照すると、Ｃｒｙｊ１タンパク質として、３７４個のアミノ酸残基からなるポリペプチドが登録されているが、Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質は、ＢＡＡ０７０２０に登録された３７４個のアミノ酸残基からなるポリペプチドのうち、２２〜３７４番目のアミノ酸残基からなるポリペプチドに対応する。ＢＡＡ０７０２０に登録された３７４個のアミノ酸残基からなるポリペプチドのうち、１〜２１番目のアミノ酸残基からなる領域はシグナル領域である。
Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質は、天然Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質、あるいは天然Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質における１個以上（例えば１〜１０個、好ましくは１〜７個、より好ましくは１〜５個、最も好ましくは１、２又は３個）のアミノ酸が改変（例、置換、付加、挿入、欠失）され、又は天然Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、好ましくは約９７％、より好ましくは約９８％、最も好ましくは約９９％のアミノ酸配列同一性（％）を示すアミノ酸配列を有し、かつＣｒｙｊ１成熟タンパク質中のエピトープを保持する変異タンパク質であり得る。天然Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質としては、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＢＡＡ０７０２０に登録された３７４個のアミノ酸残基からなるポリペプチドのうち、２２〜３７４番目のアミノ酸残基を有するポリペプチド、及び天然に存在するそのアイソタイプ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｄ３４６３９、Ｄ２６５４４、Ｄ２６５４５、ＡＢ０８１３０９、ＡＢ０８１３１０参照）が挙げられる。変異タンパク質は、Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質における１又は２以上、好ましくは全てのエピトープ（例、Ｔ細胞又はＢ細胞エピトープ）を保持するように改変されたタンパク質であり得る。
Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質は、Ｃｒｙｊ２遺伝子より発現したポリペプチドのうち、Ｎ末端側に存在するシグナル領域、並びに成熟タンパク質のコーディング部分のＮ末端及びＣ末端側にそれぞれ存在する２つのプロ領域が除去されたポリペプチドである。例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：Ｐ４３２１２を参照すると、Ｃｒｙｊ２タンパク質として、５１４個のアミノ酸残基からなるポリペプチドが登録されているが、Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質は、Ｐ４３２１２に登録された５１４個のアミノ酸残基からなるポリペプチドのうち、４６〜４３３番目のアミノ酸残基からなるポリペプチドに対応する。Ｐ４３２１２に登録された５１４個のアミノ酸残基からなるポリペプチドのうち、１〜２２番目のアミノ酸残基からなる領域はシグナル領域であり、２３〜４５番目のアミノ酸残基からなる領域及び４３４〜５１４番目のアミノ酸残基からなる領域はそれぞれプロ領域である。
Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質は、天然Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質、あるいは天然Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質における１個以上（例えば１〜１０個、好ましくは１〜７個、より好ましくは１〜５個、最も好ましくは１、２又は３個）のアミノ酸が改変（例、置換、付加、挿入、欠失）され、又は天然Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、好ましくは約９７％、より好ましくは約９８％、最も好ましくは約９９％のアミノ酸配列同一性（％）を示すアミノ酸配列を有し、かつＣｒｙｊ２成熟タンパク質中のエピトープを保持する変異タンパク質であり得る。天然Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質としては、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：Ｐ４３２１２に登録された５１４個のアミノ酸残基からなるポリペプチドのうち、４６〜４３３番目のアミノ酸残基からなるポリペプチド、及び天然に存在するそのアイソタイプ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｄ３７７６５、Ｄ２９７７２、Ｅ１０７１６、ＡＢ０８１４０３、ＡＢ０８１４０４、ＡＢ０８１４０５参照）が挙げられる。変異タンパク質は、Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質における１又は２以上、好ましくは全てのエピトープ（例、Ｔ細胞又はＢ細胞エピトープ）を保持するように改変されたタンパク質であり得る。
アミノ酸配列同一性（％）は、当該分野で慣用のプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等）を初期設定で用いて決定することができる。同一性（％）はまた、当該分野で公知の任意のアルゴリズム、例えば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら（１９７０）（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）、Ｍｙｅｒｓ及びＭｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ，１９８８，４：１１−１７）のアルゴリズム等を使用して決定することができる。Ｎｅｅｄｌｅｍａｎらのアルゴリズムは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれており、同一性（％）は、例えば、ＢＬＯＳＵＭ ６２ ｍａｔｒｉｘ又はＰＡＭ２５０ ｍａｔｒｉｘ、並びにｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ：１６、１４、１２、１０、８、６若しくは４、及びｌｅｎｇｔｈ ｗｅｉｇｈｔ：１、２、３、４、５若しくは６のいずれかを使用することによって決定することができる。また、Ｍｙｅｒｓ及びＭｉｌｌｅｒのアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラムに組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、例えば、ＰＡＭ１２０ ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ、ｇａｐ ｌｅｎｇｔｈ ｐｅｎａｌｔｙ １２、ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｙ ４を用いることができる。アミノ酸配列同一性は、上記の任意の方法で決定されたものであれば構わず、例えば計算に際して、上記の方法のなかで最も低い値を示す方法が採用され得る。
融合タンパク質は、Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質がＮ末端側に、Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質がＣ末端側に存在するものであっても、あるいはＣｒｙｊ１成熟タンパク質がＣ末端側に、Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質がＮ末端側に存在するものであってもよい。融合タンパク質はさらに、Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質とＣｒｙｊ２成熟タンパク質との間にペプチドリンカーを含んでいなくともよく、又は含んでいてもよい。当業者は、当該技術分野における技術常識より、かかるペプチドリンカーを適宜設計できる。例えば、ペプチドリンカーは、約３０以下、好ましくは約２５以下、より好ましくは約２０以下、さらにより好ましくは約１５以下、最も好ましくは約１０又は５以下のアミノ酸残基の長さであり得る。
融合タンパク質はまた、Ｎ末端又はＣ末端のいずれか、あるいは双方にさらなるペプチド部分が付加されたものであってもよい。このようなペプチド部分は、融合タンパク質に付加された場合に、融合タンパク質の特性を保持し得るものである限り特に限定されない。例えば、このようなペプチド部分としては、精製用タグ（例、ヒスチジン（Ｈｉｓ）タグ、ＦＬＡＧタグ、Ｍｙｃタグ）が挙げられる。また、このようなペプチド部分は、例えば約３０以下、好ましくは約２５以下、より好ましくは約２０以下のアミノ酸残基の長さであり得る。
融合タンパク質は可溶性タンパク質であり得る。融合タンパク質が可溶性画分中に得られる可溶性タンパク質である場合、例えば、カラムクロマトグラフィー等の一般的な精製法により高純度に精製可能である、タンパク質の修飾が容易であるなどのメリットがある。融合タンパク質はまた、不溶性画分中に得られた場合であっても、可溶化処理により可溶化タンパク質として得ることができ、従って上記メリットもまた有する。
アナフィラキシー反応は、肥満細胞表面に結合しているＩｇＥ抗体へのアレルゲンの結合により生じるシグナルの細胞内への導入により引き起こされる。融合タンパク質は、スギ花粉抗原（例、天然型Ｃｒｙｊ１）に特異的なＩｇＥ抗体の産生を誘導し得ないばかりか、スギ花粉抗原によるスギ花粉抗原特異的ＩｇＥ抗体の産生をも抑制し得る。一方で、融合タンパク質は、Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質及びＣｒｙｊ２成熟タンパク質における１以上（好ましくは全て）のＴ細胞エピトープを保持し得る。従って、融合タンパク質は、天然型Ｃｒｙｊ１またはＣｒｙｊ２特異的ＩｇＥ抗体に結合し得ないことから、アナフィラキシー反応を生じ得ない安全なアレルゲンであり得る、スギ花粉に起因するアナフィラキシー反応の程度を抑制し得る、スギ花粉抗原に特異的な免疫（例、細胞性免疫、ＩｇＧ等の液性免疫）を十分に誘導し得る、全てのスギ花粉症患者におけるＴ細胞エピトープをカバーし得る等の利点を有する。
（自己免疫疾患等への適用）
自己抗原は、自己免疫疾患において免疫細胞の標的となり得る抗原である限り特に限定されない。自己抗原としては、例えば、コラーゲン、核酸（関節性リウマチ、全身性エリテマトーデス）、ミエリン塩基性蛋白質（ＭＢＰ）（多発性硬化症）、サイログロブリン（甲状腺自己免疫疾患）、移植片アロ抗原（移植片対宿主病）が挙げられる。
自己抗原は、自己免疫疾患において免疫細胞の標的となり得る抗原である限り特に限定されない。自己抗原としては、例えば、コラーゲン、核酸（関節性リウマチ、全身性エリテマトーデス）、ミエリン塩基性蛋白質（ＭＢＰ）（多発性硬化症）、サイログロブリン（甲状腺自己免疫疾患）、移植片アロ抗原（移植片対宿主病）が挙げられる。
本発明の医薬は、標的抗原として自己抗原を含む薬物送達媒体を含む場合、自己免疫疾患の治療剤として有用である。本発明者らは、ＣＤ１ｄリガンド及びアレルゲンを含む薬物送達媒体が該アレルゲンに起因するアレルギー疾患を特異的に治療し得ることを見出したことから、アレルゲンの代わりに自己抗原を含む薬物送達媒体を利用することで、該自己抗原に起因する自己免疫疾患についても同様に特異的に治療し得ることを着想した。このような自己免疫疾患としては、例えば、上述したものが挙げられる。
本発明の薬物送達媒体が投与される個体は、任意の動物種であり得る。このような動物種としては、例えば、霊長類、齧歯動物等の哺乳動物、鳥類が挙げられる。より詳細には、本発明が適用され得る動物としては、例えば、ヒト、サル、チンパンジー、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、ニワトリが挙げられる。臨床応用という観点からはヒト、及び／又はイヌ、ネコが好ましい。
本発明の医薬は、薬物送達媒体に加え、任意の担体、例えば医薬上許容され得る担体を含むことができる。医薬上許容され得る担体としては、例えば、ショ糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、ショ糖、デンプン等の結合剤、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ナトリウム−グリコール−スターチ、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑剤、クエン酸、メントール、グリシルリシン・アンモニウム塩、グリシン、オレンジ粉等の芳香剤、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン等の保存剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等の安定剤、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸濁剤、界面活性剤等の分散剤、水、生理食塩水、オレンジジュース等の希釈剤、カカオ脂、ポリエチレングリコール、白灯油等のベースワックスなどが挙げられるが、それらに限定されるものではない。
経口投与に好適な製剤は、水、生理食塩水のような希釈液に有効量の物質を溶解させた液剤、有効量の物質を固体や顆粒として含んでいるカプセル剤、サッシェ剤または錠剤、適当な分散媒中に有効量の物質を懸濁させた懸濁液剤、有効量の物質を溶解させた溶液を適当な分散媒中に分散させ乳化させた乳剤、あるいは散剤、顆粒剤等である。
非経口的な投与（例、静脈内注射、皮下注射、筋肉注射、局所注入など）に好適な製剤としては、水性および非水性の等張な無菌の注射液剤があり、これには抗酸化剤、緩衝液、制菌剤、等張化剤等が含まれていてもよい。また、水性および非水性の無菌の懸濁液剤が挙げられ、これには懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、防腐剤等が含まれていてもよい。当該製剤は、アンプルやバイアルのように単位投与量あるいは複数回投与量ずつ容器に封入することができる。また、有効成分および医薬上許容され得る担体を凍結乾燥し、使用直前に適当な無菌のビヒクルに溶解または懸濁すればよい状態で保存することもできる。
本発明の剤の薬学的有効量は、有効成分の活性や種類、投与様式（例、経口、非経口）、病気の重篤度、投与対象となる動物種、投与対象の薬物受容性、体重、年齢等によって異なり一概に云えないが、通常、成人１日あたり有効成分量として体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇである。
本発明の剤は、免疫疾患を有する被験体(特にヒト患者)に１日或いは数日間連続投与してもよく、１日ないし数日間の間隔をあけて投与してもよい。例えば免疫疾患が花粉症の場合には、対象となる花粉(例えばスギ、ブタクサなど)の飛散時期の前、または花粉の飛散時期に花粉症の被験体に投与され得る。また、他のアレルギー疾患の場合には、被験体が当該アレルゲンに接触する前、或いは当該アレルゲンに接触後アレルギー症状が現れた時点で投与するのが望ましい。
以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、これらは単なる例示であって、本発明の範囲を何ら限定するものではない。
製造例１：α-ガラクトシルセラミドと天然型Cry j1蛋白質を含有するリポソームの製造
L-α-Phosphatidylglycerol, dipalmitoyl (DPPG；和光純薬) 1.12 mgと1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-[Methoxy(Polyethyleneglycol)-2000](Ammonium Salt) (PEG-PE； Avanti Polar Lipids) 0.029 mgをクロロホルム/メタノール（1:1）溶媒250μlに溶解した。また、α-ガラクトシルセラミド（独立行政法人理化学研究所免疫・アレルギー科学総合研究センターにて作製）0.16 mgは別にクロロホルム/メタノール（1:1）溶媒250μlに溶解した。次に、両者を混合しエバポレーターで乾固させた後、真空下のデシケーター内で一晩乾燥させた。次に天然スギ花粉から精製されたCry j1蛋白質(生化学工業)濃度が0.4mg/mlである水溶液を200μl添加し、超音波破砕装置にて10分間処理した後、ポアサイズ0.22μmの滅菌用メンブランを通過させた。次に、ポアサイズ100 nmのポリカーボネート膜を装着したLiposoFast-Basic extruder（Avestin Inc,）を、25回通過させることにより整粒した。Amicon Ultra-4 遠心フィルター（PL-100）（Millipore）を用いてCry j1を封入したリポソームの濃縮と精製水での洗浄によりリポソーム未封入Cry j1タンパク質の除去を行ない、最終的に精製水で800μl水溶液に調整した。この天然型Cry j1封入リポソーム（αGC-天然型Cry j1リポソーム）を含む水溶液をSDS電気泳動で解析した結果、Cry j1タンパク質濃度は50 μg/mlであることが確認された。またα-GalCerが全てリポソーム膜に取り込まれたと想定し、Lipo-αGC＋Cry j1溶液中のα-GalCer最終濃度を200μg/mlとした。
L-α-Phosphatidylglycerol, dipalmitoyl (DPPG；和光純薬) 1.12 mgと1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-[Methoxy(Polyethyleneglycol)-2000](Ammonium Salt) (PEG-PE； Avanti Polar Lipids) 0.029 mgをクロロホルム/メタノール（1:1）溶媒250μlに溶解した。また、α-ガラクトシルセラミド（独立行政法人理化学研究所免疫・アレルギー科学総合研究センターにて作製）0.16 mgは別にクロロホルム/メタノール（1:1）溶媒250μlに溶解した。次に、両者を混合しエバポレーターで乾固させた後、真空下のデシケーター内で一晩乾燥させた。次に天然スギ花粉から精製されたCry j1蛋白質(生化学工業)濃度が0.4mg/mlである水溶液を200μl添加し、超音波破砕装置にて10分間処理した後、ポアサイズ0.22μmの滅菌用メンブランを通過させた。次に、ポアサイズ100 nmのポリカーボネート膜を装着したLiposoFast-Basic extruder（Avestin Inc,）を、25回通過させることにより整粒した。Amicon Ultra-4 遠心フィルター（PL-100）（Millipore）を用いてCry j1を封入したリポソームの濃縮と精製水での洗浄によりリポソーム未封入Cry j1タンパク質の除去を行ない、最終的に精製水で800μl水溶液に調整した。この天然型Cry j1封入リポソーム（αGC-天然型Cry j1リポソーム）を含む水溶液をSDS電気泳動で解析した結果、Cry j1タンパク質濃度は50 μg/mlであることが確認された。またα-GalCerが全てリポソーム膜に取り込まれたと想定し、Lipo-αGC＋Cry j1溶液中のα-GalCer最終濃度を200μg/mlとした。
実施例１：α-ガラクトシルセラミド含有リポソームによるB220 + 細胞からのIL-10産生誘導
BDF1マウスにaqueous α-GalCer またはαGC-リポソーム（国際公開WO2005/120574号公報）を2μg α-GalCer/マウスで腹腔内に投与し、24時間後に脾臓を摘出した。スライドガラスで脾臓をすり潰し、細胞を調製した後、抗CD11c 抗体磁性マイクロビーズ (Miltenyi) を添加し、マグネットを用いてCD11c+細胞 (DC) を調製した。マグネットに結合しなかった残りの細胞から抗B220 mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi) でB220+細胞 (B細胞) を調製した。96ウエルU底培養プレートの１ウエル内に、200μlの培養液に懸濁した2.5 x 105個の正常BDF1マウスの全脾臓細胞とaqueous α-GalCer またはαGC-リポソーム 投与BDF1マウス脾臓細胞由来の1 x 105個のDCまたは3 x 105個のB細胞を加え、37℃の5% C02含有インキュベータ内で培養した。24、48、72時間後の培養上清中のサイトカインIFN-γ、IL-4、IL-10をELISAで測定した（図１）。
その結果、αGC-リポソーム投与BDF1マウス脾臓由来のCD11c+細胞の添加群は、aqueousα-GalCer投与BDF1マウス脾臓由来のCD11c+細胞の添加群に比べてIFN-γ産生量が高かったが、IL-4とIL-10産生量は同等であった。αGC-リポソーム 投与BDF1マウス脾臓由来のB220+細胞を全脾臓細胞に添加すると、IL-10は産生されるが、IL-4とIFN-γは産生されなかった。aqueous α-GalCer投与BDF1マウス脾臓由来のB220+細胞を全脾臓細胞に添加した場合には、IL-4、IL-10、IFN-γ産生は検出されなかった。
BDF1マウスにaqueous α-GalCer またはαGC-リポソーム（国際公開WO2005/120574号公報）を2μg α-GalCer/マウスで腹腔内に投与し、24時間後に脾臓を摘出した。スライドガラスで脾臓をすり潰し、細胞を調製した後、抗CD11c 抗体磁性マイクロビーズ (Miltenyi) を添加し、マグネットを用いてCD11c+細胞 (DC) を調製した。マグネットに結合しなかった残りの細胞から抗B220 mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi) でB220+細胞 (B細胞) を調製した。96ウエルU底培養プレートの１ウエル内に、200μlの培養液に懸濁した2.5 x 105個の正常BDF1マウスの全脾臓細胞とaqueous α-GalCer またはαGC-リポソーム 投与BDF1マウス脾臓細胞由来の1 x 105個のDCまたは3 x 105個のB細胞を加え、37℃の5% C02含有インキュベータ内で培養した。24、48、72時間後の培養上清中のサイトカインIFN-γ、IL-4、IL-10をELISAで測定した（図１）。
その結果、αGC-リポソーム投与BDF1マウス脾臓由来のCD11c+細胞の添加群は、aqueousα-GalCer投与BDF1マウス脾臓由来のCD11c+細胞の添加群に比べてIFN-γ産生量が高かったが、IL-4とIL-10産生量は同等であった。αGC-リポソーム 投与BDF1マウス脾臓由来のB220+細胞を全脾臓細胞に添加すると、IL-10は産生されるが、IL-4とIFN-γは産生されなかった。aqueous α-GalCer投与BDF1マウス脾臓由来のB220+細胞を全脾臓細胞に添加した場合には、IL-4、IL-10、IFN-γ産生は検出されなかった。
実施例２：α-ガラクトシルセラミド含有リポソームによる辺縁帯B細胞からのIL-10産生誘導
BDF1マウスにαGC-リポソームを2μg α-GalCer/マウスで腹腔内に投与し、24時間後に脾臓を摘出した。脾臓中に１ mg/mlのコラゲナーゼD (Roche) を注入し、CO2インキュベータ内で45分間インキュベートした。次に、脾臓から細胞を抽出し3 mlのHistoDenz (14.1%, Sigma-aldrich) に懸濁した後、50μMの2-メルカプトエタノール (2ME) 含有X-VIVO 15培地 (CAMBREX Bio Science Walkerville, Inc.) を重層した。1500 rpmで5分間遠心後、中間層の低密度 (LD) 細胞と沈殿の高密度 (HD) 細胞を回収した。50 μM 2ME, 10 % FCSを含有する X-VIVO 15培地で細胞を洗浄後、0.5% FCS含有リン酸緩衝液 (PBS) に懸濁した。LD細胞に抗CD11c mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi) を添加し、マグネットを用いてCD11c+樹状細胞を調製した後、残りの細胞から抗B220 mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi) でLD-B細胞を調製した。また、HD細胞から抗B220 mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi)で HD-B細胞を調製した。LD-B細胞とHD-B細胞をそれぞれFITC標識抗IgM抗体とPE標識抗CD21抗体で染色後、フローサイトメーターで解析した（図２Ａ）。96ウエルU底培養プレートの１ウエル内に、200μlの培養液に懸濁した2.5 x 105個の正常BDF1マウスの全脾臓細胞と1 x 105個のLD-B細胞またはHD-B細胞を入れ、37℃の5% C02含有インキュベータ内で培養した。
その結果、LD-B細胞を全脾臓細胞に添加した群のみ、培養上清中にIL-10産生が検出された（図２Ｂ）。LD-B細胞は辺縁帯B細胞であることから、αGC-リポソームの生体内投与（インビボ）により得られる辺縁帯B細胞が、全脾臓細胞との相互作用により、IL-10産生を誘導することが示された。
BDF1マウスにαGC-リポソームを2μg α-GalCer/マウスで腹腔内に投与し、24時間後に脾臓を摘出した。脾臓中に１ mg/mlのコラゲナーゼD (Roche) を注入し、CO2インキュベータ内で45分間インキュベートした。次に、脾臓から細胞を抽出し3 mlのHistoDenz (14.1%, Sigma-aldrich) に懸濁した後、50μMの2-メルカプトエタノール (2ME) 含有X-VIVO 15培地 (CAMBREX Bio Science Walkerville, Inc.) を重層した。1500 rpmで5分間遠心後、中間層の低密度 (LD) 細胞と沈殿の高密度 (HD) 細胞を回収した。50 μM 2ME, 10 % FCSを含有する X-VIVO 15培地で細胞を洗浄後、0.5% FCS含有リン酸緩衝液 (PBS) に懸濁した。LD細胞に抗CD11c mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi) を添加し、マグネットを用いてCD11c+樹状細胞を調製した後、残りの細胞から抗B220 mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi) でLD-B細胞を調製した。また、HD細胞から抗B220 mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi)で HD-B細胞を調製した。LD-B細胞とHD-B細胞をそれぞれFITC標識抗IgM抗体とPE標識抗CD21抗体で染色後、フローサイトメーターで解析した（図２Ａ）。96ウエルU底培養プレートの１ウエル内に、200μlの培養液に懸濁した2.5 x 105個の正常BDF1マウスの全脾臓細胞と1 x 105個のLD-B細胞またはHD-B細胞を入れ、37℃の5% C02含有インキュベータ内で培養した。
その結果、LD-B細胞を全脾臓細胞に添加した群のみ、培養上清中にIL-10産生が検出された（図２Ｂ）。LD-B細胞は辺縁帯B細胞であることから、αGC-リポソームの生体内投与（インビボ）により得られる辺縁帯B細胞が、全脾臓細胞との相互作用により、IL-10産生を誘導することが示された。
実施例３：α-ガラクトシルセラミド含有リポソームパルス辺縁帯B細胞によるIL-10産生誘導
BDF1マウスから摘出した脾臓中に１ mg/mlのコラゲナーゼD (Roche) を注入し、CO2インキュベータ内で45分間インキュベートした。次に、脾臓から細胞を抽出し3 mlのHistoDenz (14.1%, Sigma-aldrich) に懸濁した後、50 μMの2-メルカプトエタノール (2ME) 含有X-VIVO 15培地(CAMBREX Bio Science Walkerville, Inc.) を重層した。1500 rpmで5分間遠心後、中間層の低密度 (LD) 細胞を回収した。50μM 2ME, 10% FCSを含有する X-VIVO 15培地で細胞を洗浄後、0.5% FCS含有リン酸緩衝液 (PBS) に懸濁した。LD細胞に抗CD11c mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi) を添加し、マグネットを用いてCD11c+樹状細胞を調製した後、残りの細胞から抗B220 mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi) でLD-B細胞を調製した。3 x 106個のLD-B細胞を3 mlの培養液の入った6穴 (ウエル) 培養プレートに添加し、さらにαGC-リポソームを培養液に最終濃度100 ng/mlで添加したウエルと添加しないウエルを用意した。18時間、37℃の5% C02含有インキュベータ内で培養した後、それぞれのウエルから細胞を回収した。BDF1マウスから摘出した全脾臓細胞に抗B220 mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi) を添加し、マグネットを用いてB220+細胞を除去した全脾臓細胞 (-B220陽性細胞) を調製した。96ウエルU底培養プレートの１ウエル内に、200μlの培養液に懸濁した2.5 x 105個の正常BDF1マウスの全脾臓細胞 (-B220陽性細胞) と1 x 105個のLD-B細胞を入れ、37℃の5% C02含有インキュベータ内で2日または3日間培養した。
その結果、αGC-リポソームを添加して培養したLD-B細胞を全脾臓細胞 (-B220陽性細胞) に添加した群のみ、培養上清中にIL-10産生が検出された（図３）。LD-B細胞は辺縁帯B細胞であることから、αGC-リポソームでパルスされた辺縁帯B細胞（インビボ）が、全脾臓細胞との相互作用により、IL-10産生を誘導することが示された。
BDF1マウスから摘出した脾臓中に１ mg/mlのコラゲナーゼD (Roche) を注入し、CO2インキュベータ内で45分間インキュベートした。次に、脾臓から細胞を抽出し3 mlのHistoDenz (14.1%, Sigma-aldrich) に懸濁した後、50 μMの2-メルカプトエタノール (2ME) 含有X-VIVO 15培地(CAMBREX Bio Science Walkerville, Inc.) を重層した。1500 rpmで5分間遠心後、中間層の低密度 (LD) 細胞を回収した。50μM 2ME, 10% FCSを含有する X-VIVO 15培地で細胞を洗浄後、0.5% FCS含有リン酸緩衝液 (PBS) に懸濁した。LD細胞に抗CD11c mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi) を添加し、マグネットを用いてCD11c+樹状細胞を調製した後、残りの細胞から抗B220 mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi) でLD-B細胞を調製した。3 x 106個のLD-B細胞を3 mlの培養液の入った6穴 (ウエル) 培養プレートに添加し、さらにαGC-リポソームを培養液に最終濃度100 ng/mlで添加したウエルと添加しないウエルを用意した。18時間、37℃の5% C02含有インキュベータ内で培養した後、それぞれのウエルから細胞を回収した。BDF1マウスから摘出した全脾臓細胞に抗B220 mAb磁性マイクロビーズ (Miltenyi) を添加し、マグネットを用いてB220+細胞を除去した全脾臓細胞 (-B220陽性細胞) を調製した。96ウエルU底培養プレートの１ウエル内に、200μlの培養液に懸濁した2.5 x 105個の正常BDF1マウスの全脾臓細胞 (-B220陽性細胞) と1 x 105個のLD-B細胞を入れ、37℃の5% C02含有インキュベータ内で2日または3日間培養した。
その結果、αGC-リポソームを添加して培養したLD-B細胞を全脾臓細胞 (-B220陽性細胞) に添加した群のみ、培養上清中にIL-10産生が検出された（図３）。LD-B細胞は辺縁帯B細胞であることから、αGC-リポソームでパルスされた辺縁帯B細胞（インビボ）が、全脾臓細胞との相互作用により、IL-10産生を誘導することが示された。
実施例４：α-ガラクトシルセラミドと天然型Cry j1蛋白質を含有するリポソーム投与によるin vivo二次的IgE抗体産生の抑制作用
天然型Cry j1 (5μg/マウス, 生化学工業) と水酸化アルミニュウムゲル (2 mg/マウス) で２回感作したBDF1マウスに、αＧＣ−天然型Cry j1−リポソーム(αGC: 2μg, Cryj1: 0.5μg/マウス)、αＧＣ−リポソーム(αGC: 2μg/マウス)又はリポソーム単体を感作から28日、35日、42日目の3回静脈内に投与し、49日目に天然型Cry j1 (1μg/マウス) で追加免疫した。追加免疫前後に採血し、血清中の抗Cry j1-IgE抗体をELISAで測定した。その結果、αＧＣ−天然型Cryj1−リポソームを投与した群では、追加免疫後の二次的IgE抗体産生が有意に抑制されていた（図４）。
天然型Cry j1 (5μg/マウス, 生化学工業) と水酸化アルミニュウムゲル (2 mg/マウス) で２回感作したBDF1マウスに、αＧＣ−天然型Cry j1−リポソーム(αGC: 2μg, Cryj1: 0.5μg/マウス)、αＧＣ−リポソーム(αGC: 2μg/マウス)又はリポソーム単体を感作から28日、35日、42日目の3回静脈内に投与し、49日目に天然型Cry j1 (1μg/マウス) で追加免疫した。追加免疫前後に採血し、血清中の抗Cry j1-IgE抗体をELISAで測定した。その結果、αＧＣ−天然型Cryj1−リポソームを投与した群では、追加免疫後の二次的IgE抗体産生が有意に抑制されていた（図４）。
実施例５：Cry j1/2融合遺伝子の合成
Cry j1/2融合遺伝子は、Cry j1遺伝子（GenBankアクセッション番号：BAA07020）のN末端シグナル領域を含まない63位（Ser）から1122位（Cys）までのヌクレオチド（成熟Cryj1）とCry j2遺伝子（GenBankアクセッション番号：P43212）のN末端シグナル及びプロ領域を含まない138位（Arg）から1299位（Ser）までのヌクレオチド（成熟Cry j2）を以下の方法で結合することにより作製した。成熟Cry j2遺伝子領域には、XbaI切断配列が868-874位（Ser-Arg）のヌクレオチド配列（TCTAGA）として存在し、種々ベクターとの組換え操作に不都合であるため、TCTAGA→TCAAGAのコドン置換によりXbaI切断配列を喪失させることとした。まず、Cryj2遺伝子全長が挿入されたプラスミドDNA（（独）森林総合研究所）をテンプレートにし、プライマー1、2又はプライマー3、4によるPCRをDNA合成の正確度が高いDNAポリメラーゼ（例、宝酒造のPrimeStar、東洋紡のKOD）存在下で20サイクル行った。その結果、成熟Cryj2のN末端領域断片とC末端領域断片をそれぞれ増幅することができた。次に、これら2つのDNA断片を混合し、プライマー1、4を用いたPCRを20サイクル行うことにより、成熟Cry j2遺伝子全長を増幅させた。このDNA断片をベクターpMAT324のXbaI-EcoRI部位にサブクローニングした後、DNAシークエンシングを行い、成熟Cryj2遺伝子のXbaI切断配列の喪失とその他全配列にPCRによる変異が生じていないことを確認した（pMAT324-Cry j2ΔXbaI）。Cryj1/j2融合遺伝子を作製するため、pMAT324-Cry j2ΔXbaIをテンプレートにプライマー4、5を用いたPCRを行い、成熟Cry j2遺伝子断片を増幅した。次にCryj1遺伝子全長が挿入されたプラスミドDNA（（独）森林総合研究所）をテンプレートにプライマー6、7を用いたPCRを行い、成熟Cry j1遺伝子断片を増幅した。最後に、成熟Cry j1遺伝子領域DNA断片と成熟Cryj2遺伝子領域DNA断片を混合し、プライマー4、6を用いたPCRを20サイクル行うことにより、Cry j1/2融合遺伝子DNA断片を増幅した。Cry j1/2融合遺伝子をEcoRI消化後、SmaIとEcoRIで切断されたpET47b（Novagen）ベクターとライゲーションを行い、大腸菌DH10B株に形質転換した（pET47b-Cryj1/2）。DNAシークエンシングによりCry j1/2融合遺伝子の全配列と、ヒスチジン（His）タグ配列がCryj1/2遺伝子の5’末端に付加されていることを確認した(図５、６)。
以下、必要に応じて、本実施例で作製された構築物をrecCryj1/2と省略する。
Cry j1/2融合遺伝子は、Cry j1遺伝子（GenBankアクセッション番号：BAA07020）のN末端シグナル領域を含まない63位（Ser）から1122位（Cys）までのヌクレオチド（成熟Cryj1）とCry j2遺伝子（GenBankアクセッション番号：P43212）のN末端シグナル及びプロ領域を含まない138位（Arg）から1299位（Ser）までのヌクレオチド（成熟Cry j2）を以下の方法で結合することにより作製した。成熟Cry j2遺伝子領域には、XbaI切断配列が868-874位（Ser-Arg）のヌクレオチド配列（TCTAGA）として存在し、種々ベクターとの組換え操作に不都合であるため、TCTAGA→TCAAGAのコドン置換によりXbaI切断配列を喪失させることとした。まず、Cryj2遺伝子全長が挿入されたプラスミドDNA（（独）森林総合研究所）をテンプレートにし、プライマー1、2又はプライマー3、4によるPCRをDNA合成の正確度が高いDNAポリメラーゼ（例、宝酒造のPrimeStar、東洋紡のKOD）存在下で20サイクル行った。その結果、成熟Cryj2のN末端領域断片とC末端領域断片をそれぞれ増幅することができた。次に、これら2つのDNA断片を混合し、プライマー1、4を用いたPCRを20サイクル行うことにより、成熟Cry j2遺伝子全長を増幅させた。このDNA断片をベクターpMAT324のXbaI-EcoRI部位にサブクローニングした後、DNAシークエンシングを行い、成熟Cryj2遺伝子のXbaI切断配列の喪失とその他全配列にPCRによる変異が生じていないことを確認した（pMAT324-Cry j2ΔXbaI）。Cryj1/j2融合遺伝子を作製するため、pMAT324-Cry j2ΔXbaIをテンプレートにプライマー4、5を用いたPCRを行い、成熟Cry j2遺伝子断片を増幅した。次にCryj1遺伝子全長が挿入されたプラスミドDNA（（独）森林総合研究所）をテンプレートにプライマー6、7を用いたPCRを行い、成熟Cry j1遺伝子断片を増幅した。最後に、成熟Cry j1遺伝子領域DNA断片と成熟Cryj2遺伝子領域DNA断片を混合し、プライマー4、6を用いたPCRを20サイクル行うことにより、Cry j1/2融合遺伝子DNA断片を増幅した。Cry j1/2融合遺伝子をEcoRI消化後、SmaIとEcoRIで切断されたpET47b（Novagen）ベクターとライゲーションを行い、大腸菌DH10B株に形質転換した（pET47b-Cryj1/2）。DNAシークエンシングによりCry j1/2融合遺伝子の全配列と、ヒスチジン（His）タグ配列がCryj1/2遺伝子の5’末端に付加されていることを確認した(図５、６)。
以下、必要に応じて、本実施例で作製された構築物をrecCryj1/2と省略する。
プライマー１（センス）：CCGGTCTAGAAAAGTTGAGCATTC（配列番号１）
プライマー２（アンチセンス）：CCTCTGCTCTTGAGTTTTCCC（配列番号２）
プライマー３（センス）：GGGAAAACTCAAGAGCAGAGG（配列番号３）
プライマー４（アンチセンス）：CCGGAATTCCTATCAACTTGGACTTAAATTC（配列番号４）
プライマー５（センス）：AGAAAAGTTGAGCATTC（配列番号５）
プライマー６（センス）：TCTGATAATCCCATAGAC（配列番号６）
プライマー７（アンチセンス）：GAATGCTCAACTTTTCTACAACGTTTAGAGAGAGAGC（配列番号７）
プライマー２（アンチセンス）：CCTCTGCTCTTGAGTTTTCCC（配列番号２）
プライマー３（センス）：GGGAAAACTCAAGAGCAGAGG（配列番号３）
プライマー４（アンチセンス）：CCGGAATTCCTATCAACTTGGACTTAAATTC（配列番号４）
プライマー５（センス）：AGAAAAGTTGAGCATTC（配列番号５）
プライマー６（センス）：TCTGATAATCCCATAGAC（配列番号６）
プライマー７（アンチセンス）：GAATGCTCAACTTTTCTACAACGTTTAGAGAGAGAGC（配列番号７）
実施例６：recCryj1/2タンパク質の発現確認
pET47b-Cryj1/2プラスミドDNAを、大腸菌BL21株（インビトロジェン）に形質転換した。カナマイシン（最終濃度20μg/ml）を添加したLB培地100 mlに形質転換株を植菌した。37℃で一昼夜培養した後、100 mlの菌体培養液全てを1 Lのカナマイシン含有LB培地に移し、さらに37℃で2時間培養した。次に、IPTGを最終濃度0.1 mMになるように添加した後、30℃で3時間培養した。菌体を回収し、超音波破砕した後、高速遠心機で沈殿を分離した。沈殿を水に懸濁後、遠心後の上清とともにSDSポリアクリルアミド電気泳動とHRP標識抗Cryj2モノクローナル抗体（林原研究所）を用いたウエスタンブロッティングで解析した。その結果、菌体破砕後の沈殿画分で、クマシーブリリアントブルー（CBB）タンパク染色で陽性でかつ、抗Cryj2モノクローナル抗体陽性の分子量約70 kDaのタンパク質がrecCryj1/2タンパク質であることが予想された。次に、ウエスタンブロッティングでPVDF膜にトランスファーした上記75 kDa付近のバンドをCBB染色後に切り出し、エンドプロテアーゼAsp-N（タカラバイオ）酵素消化後、質量分析を行った結果、Cry j1とCry j2内のペプチド配列を多数検出できた。
以上の結果から、菌体破砕沈殿にある約75 kDaのタンパク質はrecCryj1/2タンパク質であることが確認された。
pET47b-Cryj1/2プラスミドDNAを、大腸菌BL21株（インビトロジェン）に形質転換した。カナマイシン（最終濃度20μg/ml）を添加したLB培地100 mlに形質転換株を植菌した。37℃で一昼夜培養した後、100 mlの菌体培養液全てを1 Lのカナマイシン含有LB培地に移し、さらに37℃で2時間培養した。次に、IPTGを最終濃度0.1 mMになるように添加した後、30℃で3時間培養した。菌体を回収し、超音波破砕した後、高速遠心機で沈殿を分離した。沈殿を水に懸濁後、遠心後の上清とともにSDSポリアクリルアミド電気泳動とHRP標識抗Cryj2モノクローナル抗体（林原研究所）を用いたウエスタンブロッティングで解析した。その結果、菌体破砕後の沈殿画分で、クマシーブリリアントブルー（CBB）タンパク染色で陽性でかつ、抗Cryj2モノクローナル抗体陽性の分子量約70 kDaのタンパク質がrecCryj1/2タンパク質であることが予想された。次に、ウエスタンブロッティングでPVDF膜にトランスファーした上記75 kDa付近のバンドをCBB染色後に切り出し、エンドプロテアーゼAsp-N（タカラバイオ）酵素消化後、質量分析を行った結果、Cry j1とCry j2内のペプチド配列を多数検出できた。
以上の結果から、菌体破砕沈殿にある約75 kDaのタンパク質はrecCryj1/2タンパク質であることが確認された。
実施例７：recCryj1/2タンパク質の可溶化と精製
pET47b-Cryj1/2発現菌体1 g（湿重量）をBugbuster（Novagen）5 mlとBenzonase（Novagen）1μlで溶解後、16000 g、20分間遠心し不溶性画分を回収した。次にBugbuster（Novagen）5 mlを添加し、ボルテックスで十分に攪拌した後、Lysonase（Novagen）2μlを添加し、さらにボルテックスで攪拌した。室温に5分間静置後、10倍希釈したBugbuster（Novagen）溶液30 mlを添加し、16000 g、15分間遠心し不溶性画分を回収した。次に35 mlの10 mMイミダゾール/8 M尿素/リン酸緩衝液（PBS）に懸濁後、磁気スターラーにて攪拌し、不溶性タンパク質を溶解した。高速遠心機で18000 rpm、15分間遠心した後、上清を回収した。次に、0.1 M NiSO4を充填し、50 mMイミダゾール/8 M尿素/PBSで平衡化したChelating Sepharose FF（GLヘルスケアバイオサイエンス）カラムに、遠心上清を高速液体クロマトグラフィーでアプライした。50 mMイミダゾール/8 M尿素/PBSで洗浄後、500 mMイミダゾール/8 M尿素/PBSでrecCryj1/2融合タンパク質を溶出した。溶出液にアルギニンを最終濃度0.4 Mになるように添加後、透析チューブに入れ、0.4 Mアルギニン/PBS溶液内で24時間透析することによって、可溶化recCryj1/2タンパク質を回収した。SDSポリアクリルアミド電気泳動と抗ヒスチジンタグモノクローナル抗体（GEヘルスバイオサイエンス）、又はHRP標識抗Cryj2モノクローナル抗体（林原研究所）を用いたウエスタンブロッティングでrecCryj1/2タンパク質であることを確認した。
pET47b-Cryj1/2発現菌体1 g（湿重量）をBugbuster（Novagen）5 mlとBenzonase（Novagen）1μlで溶解後、16000 g、20分間遠心し不溶性画分を回収した。次にBugbuster（Novagen）5 mlを添加し、ボルテックスで十分に攪拌した後、Lysonase（Novagen）2μlを添加し、さらにボルテックスで攪拌した。室温に5分間静置後、10倍希釈したBugbuster（Novagen）溶液30 mlを添加し、16000 g、15分間遠心し不溶性画分を回収した。次に35 mlの10 mMイミダゾール/8 M尿素/リン酸緩衝液（PBS）に懸濁後、磁気スターラーにて攪拌し、不溶性タンパク質を溶解した。高速遠心機で18000 rpm、15分間遠心した後、上清を回収した。次に、0.1 M NiSO4を充填し、50 mMイミダゾール/8 M尿素/PBSで平衡化したChelating Sepharose FF（GLヘルスケアバイオサイエンス）カラムに、遠心上清を高速液体クロマトグラフィーでアプライした。50 mMイミダゾール/8 M尿素/PBSで洗浄後、500 mMイミダゾール/8 M尿素/PBSでrecCryj1/2融合タンパク質を溶出した。溶出液にアルギニンを最終濃度0.4 Mになるように添加後、透析チューブに入れ、0.4 Mアルギニン/PBS溶液内で24時間透析することによって、可溶化recCryj1/2タンパク質を回収した。SDSポリアクリルアミド電気泳動と抗ヒスチジンタグモノクローナル抗体（GEヘルスバイオサイエンス）、又はHRP標識抗Cryj2モノクローナル抗体（林原研究所）を用いたウエスタンブロッティングでrecCryj1/2タンパク質であることを確認した。
実施例８：recCryj1/2タンパク質免疫によるin vivo 抗体産生能
BALB/c x DBA2 F1（BDF1）マウス1群5匹（雌、８週齢、チャールズリバー）に、水酸化アルミニュウムゲル・アジュバント（理化学研究所）2 mgに混合したスギ花粉由来精製Cryj1（天然型Cryj1；林原研究所）10μgあるいはrecCryj1/2タンパク質5又は10μgを実験開始時（0日目）と14日目に腹腔内免疫し、41日目にそれぞれのマウスに天然型Cryj1を1μgあるいはrecCryj1/2タンパク質を5又は10μg追加免疫した。さらに、81日目には、全てのマウスに水酸化アルミニュウムゲル2 mgに混合した天然型Cryj1 1μgを追加免疫した。眼窩採血を13、28、55、76、95日目に実施し、血清中の天然型Cryj1特異的抗体価とrecCryj1/2特異的IgE抗体価を測定した。その結果、28、55、76日目の天然型Cryj1特異的IgE抗体価は、天然型Cryj1免疫マウスでは上昇したが、recCryj1/2タンパク質を免疫したマウスでは全く上昇せず、さらに81日目の水酸化アルミニュウムゲル・アジュバントと天然型Cryj1の免疫に対しても、天然型Cryj1特異的IgE抗体の上昇は94日目でほとんど認められなかった（図７）。しかしながら、76日目のrecCryj1/2特異的IgE抗体価は、recCryj1/2融合タンパク質を免疫したマウスで上昇していた(図８)。一方、28、55日目の天然型Cryj1特異的IgG1やIgG2a抗体価の上昇は、天然型Cryj1免疫マウスとrecCryj1/2免疫マウスの両方で認められた（図９）。
以上の結果から、recCryj1/2タンパク質は、天然型Cryj1特異的IgE抗体の産生を誘導しない、安全な減感作抗原になり得ることが示唆された。
BALB/c x DBA2 F1（BDF1）マウス1群5匹（雌、８週齢、チャールズリバー）に、水酸化アルミニュウムゲル・アジュバント（理化学研究所）2 mgに混合したスギ花粉由来精製Cryj1（天然型Cryj1；林原研究所）10μgあるいはrecCryj1/2タンパク質5又は10μgを実験開始時（0日目）と14日目に腹腔内免疫し、41日目にそれぞれのマウスに天然型Cryj1を1μgあるいはrecCryj1/2タンパク質を5又は10μg追加免疫した。さらに、81日目には、全てのマウスに水酸化アルミニュウムゲル2 mgに混合した天然型Cryj1 1μgを追加免疫した。眼窩採血を13、28、55、76、95日目に実施し、血清中の天然型Cryj1特異的抗体価とrecCryj1/2特異的IgE抗体価を測定した。その結果、28、55、76日目の天然型Cryj1特異的IgE抗体価は、天然型Cryj1免疫マウスでは上昇したが、recCryj1/2タンパク質を免疫したマウスでは全く上昇せず、さらに81日目の水酸化アルミニュウムゲル・アジュバントと天然型Cryj1の免疫に対しても、天然型Cryj1特異的IgE抗体の上昇は94日目でほとんど認められなかった（図７）。しかしながら、76日目のrecCryj1/2特異的IgE抗体価は、recCryj1/2融合タンパク質を免疫したマウスで上昇していた(図８)。一方、28、55日目の天然型Cryj1特異的IgG1やIgG2a抗体価の上昇は、天然型Cryj1免疫マウスとrecCryj1/2免疫マウスの両方で認められた（図９）。
以上の結果から、recCryj1/2タンパク質は、天然型Cryj1特異的IgE抗体の産生を誘導しない、安全な減感作抗原になり得ることが示唆された。
実施例９：recCryj1/2タンパク質のin vivo IgE抗体産生抑制能
BDF1マウス（雌、８週齢、チャールズリバー）に、水酸化アルミニュウムゲル・アジュバント（理化学研究所）2 mgに混合したスギ花粉由来精製Cryj1（天然型Cryj1；林原研究所）5μgを実験開始時（0日目）と14日目に腹腔内免疫した後、50日目に天然型Cryj1を1μg追加免疫した。この間、眼窩採血を14、29、57日目に実施し、血清中天然型Cryj1特異的IgE抗体を測定した。その後99日目に全マウスの天然型Cryj1特異的IgE抗体を測定し、抗体価の平均値が等しくなるようにマウスを3群（5匹1群）に分けた。106、113、120日目には各群のマウスの腹腔内に、recCryj1/2タンパク質（0.2μg）、recCryj1/2タンパク質（2μg）又は生理食塩水を3回投与し、さらに133日目に天然型Cryj1を1μg追加免疫した。眼窩採血を140、160日目に実施し、天然型Cryj1特異的IgE抗体価を測定した。その結果、recCryj1/2投与群では、投与後の天然型Cryj1特異的IgE抗体価（127日目）は生理食塩水投与群よりも上昇したが、その後の天然型Cryj1の追加免疫（133日目）後の天然型Cryj1特異的IgE抗体価（160日目）は、生理食塩水投与群で上昇したがrecCryj1/2投与群では逆に低下した（図１０）。
以上の結果から、recCryj1/2タンパク質は、天然型Cryj1特異的IgE抗体価の上昇を抑制できる減感作抗原として利用できることが示唆された。
BDF1マウス（雌、８週齢、チャールズリバー）に、水酸化アルミニュウムゲル・アジュバント（理化学研究所）2 mgに混合したスギ花粉由来精製Cryj1（天然型Cryj1；林原研究所）5μgを実験開始時（0日目）と14日目に腹腔内免疫した後、50日目に天然型Cryj1を1μg追加免疫した。この間、眼窩採血を14、29、57日目に実施し、血清中天然型Cryj1特異的IgE抗体を測定した。その後99日目に全マウスの天然型Cryj1特異的IgE抗体を測定し、抗体価の平均値が等しくなるようにマウスを3群（5匹1群）に分けた。106、113、120日目には各群のマウスの腹腔内に、recCryj1/2タンパク質（0.2μg）、recCryj1/2タンパク質（2μg）又は生理食塩水を3回投与し、さらに133日目に天然型Cryj1を1μg追加免疫した。眼窩採血を140、160日目に実施し、天然型Cryj1特異的IgE抗体価を測定した。その結果、recCryj1/2投与群では、投与後の天然型Cryj1特異的IgE抗体価（127日目）は生理食塩水投与群よりも上昇したが、その後の天然型Cryj1の追加免疫（133日目）後の天然型Cryj1特異的IgE抗体価（160日目）は、生理食塩水投与群で上昇したがrecCryj1/2投与群では逆に低下した（図１０）。
以上の結果から、recCryj1/2タンパク質は、天然型Cryj1特異的IgE抗体価の上昇を抑制できる減感作抗原として利用できることが示唆された。
製造例２：α-ガラクトシルセラミドとrecCry j1/2(組換え融合蛋白質)を含有するリポソームの製造
L-α-Phosphatidylcholine,dioleoyl (DOPC；和光純薬) 0.77 mgとCholesteryl 3β-N-(dimethylaminoethyl)carbonate hydrochloride（DC-Chol；Sigama-aldrich)0.83 mgと1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N- [Methoxy(Polyethylene glycol)-2000](Ammonium Salt) (PEG-PE； Avanti Polar Lipids) 0.029 mgをクロロホルム/メタノール（1:1）溶媒250μlに溶解した。また、α-ガラクトシルセラミド（独立行政法人理化学研究所免疫・アレルギー科学総合研究センターにて作製）0.16 mgは別にクロロホルム/メタノール（1:1）溶媒250μlに溶解した。次に、両者を混合しエバポレーターで乾固させた後、真空下のデシケーター内で一晩乾燥させた。次にrecCryj1/2タンパク質(実施例7)濃度が0.4mg/mlである水溶液を200μl添加し、超音波破砕装置にて10分間処理した後、ポアサイズ0.22μmの滅菌用メンブランを通過させた。次に、ポアサイズ100 nmのポリカーボネート膜を装着したLiposoFast-Basic extruder（Avestin Inc,）を、25回通過させることにより整粒した。Amicon Ultra-4 遠心フィルター（PL-100）（Millipore）を用いてrecCryj1/2を封入したリポソームの濃縮と精製水での洗浄によりリポソーム未封入recCryj1/2タンパク質の除去を行ない、最終的に精製水で800μl水溶液に調整した。このrecCryj1/2封入リポソーム（αGC-recCryj1/2リポソーム）を含む水溶液をSDS電気泳動で解析した結果、recCryj1/2タンパク質濃度は25 μg/mlであることが確認された。またα-GalCerが全てリポソーム膜に取り込まれたと想定し、Lipo-αGC＋Cry j1溶液中のα-GalCer最終濃度を200μg/mlとした。
L-α-Phosphatidylcholine,dioleoyl (DOPC；和光純薬) 0.77 mgとCholesteryl 3β-N-(dimethylaminoethyl)carbonate hydrochloride（DC-Chol；Sigama-aldrich)0.83 mgと1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N- [Methoxy(Polyethylene glycol)-2000](Ammonium Salt) (PEG-PE； Avanti Polar Lipids) 0.029 mgをクロロホルム/メタノール（1:1）溶媒250μlに溶解した。また、α-ガラクトシルセラミド（独立行政法人理化学研究所免疫・アレルギー科学総合研究センターにて作製）0.16 mgは別にクロロホルム/メタノール（1:1）溶媒250μlに溶解した。次に、両者を混合しエバポレーターで乾固させた後、真空下のデシケーター内で一晩乾燥させた。次にrecCryj1/2タンパク質(実施例7)濃度が0.4mg/mlである水溶液を200μl添加し、超音波破砕装置にて10分間処理した後、ポアサイズ0.22μmの滅菌用メンブランを通過させた。次に、ポアサイズ100 nmのポリカーボネート膜を装着したLiposoFast-Basic extruder（Avestin Inc,）を、25回通過させることにより整粒した。Amicon Ultra-4 遠心フィルター（PL-100）（Millipore）を用いてrecCryj1/2を封入したリポソームの濃縮と精製水での洗浄によりリポソーム未封入recCryj1/2タンパク質の除去を行ない、最終的に精製水で800μl水溶液に調整した。このrecCryj1/2封入リポソーム（αGC-recCryj1/2リポソーム）を含む水溶液をSDS電気泳動で解析した結果、recCryj1/2タンパク質濃度は25 μg/mlであることが確認された。またα-GalCerが全てリポソーム膜に取り込まれたと想定し、Lipo-αGC＋Cry j1溶液中のα-GalCer最終濃度を200μg/mlとした。
実施例１０：α-ガラクトシルセラミドとrecCry j1/2(組換え融合蛋白質)を含有するリポソーム投与によるin vivo三次的IgE抗体産生の抑制作用
天然型Cryj1 (5μg/マウス, 生化学工業) と水酸化アルミニュウムゲル (2 mg/マウス) で２回感作したBDF1マウスに、天然型Cryj1 (1μg/マウス, 生化学工業)を追加免疫した後、αＧＣ−recCry j1/2−リポソーム(αGC: 2μg,recCry j1/2: 0.5μg/マウス)、αＧＣ−リポソーム(αGC: 2μg/マウス)又はリポソーム単体を、感作から105日、112日、119日目の3回腹腔内に投与し、126日目に天然型Cryj1 (1μg/マウス) で二回目の追加免疫を行った。感作前、感作後１４日、２８日、５６日、９８日、１２６日、１４０日、１６０日目に採血し、血清中の抗Cryj1-IgE抗体をELISAで測定した。その結果、αＧＣ−リポソームまたはαＧＣ−recCryj1/2−リポソームを投与した群では、リポソーム単体を投与した陰性対照に比べて投与後の血中IgE抗体価の減少が顕著でかつ、二回目の追加免疫後の三次的IgE抗体産生の上昇も抑制されていた（αＧＣ−recCryj1/2−リポソーム投与群の抑制効果は統計学的に有意）（図１１）。以上の結果より、αＧＣ−リポソームにはアレルギー発症後の高IgE抗体価を下げる治療効果が期待でき、さらにリポソーム内にアレルゲン性がない抗原を封入することによって、その効果をさらに増強できることが示唆された。
天然型Cryj1 (5μg/マウス, 生化学工業) と水酸化アルミニュウムゲル (2 mg/マウス) で２回感作したBDF1マウスに、天然型Cryj1 (1μg/マウス, 生化学工業)を追加免疫した後、αＧＣ−recCry j1/2−リポソーム(αGC: 2μg,recCry j1/2: 0.5μg/マウス)、αＧＣ−リポソーム(αGC: 2μg/マウス)又はリポソーム単体を、感作から105日、112日、119日目の3回腹腔内に投与し、126日目に天然型Cryj1 (1μg/マウス) で二回目の追加免疫を行った。感作前、感作後１４日、２８日、５６日、９８日、１２６日、１４０日、１６０日目に採血し、血清中の抗Cryj1-IgE抗体をELISAで測定した。その結果、αＧＣ−リポソームまたはαＧＣ−recCryj1/2−リポソームを投与した群では、リポソーム単体を投与した陰性対照に比べて投与後の血中IgE抗体価の減少が顕著でかつ、二回目の追加免疫後の三次的IgE抗体産生の上昇も抑制されていた（αＧＣ−recCryj1/2−リポソーム投与群の抑制効果は統計学的に有意）（図１１）。以上の結果より、αＧＣ−リポソームにはアレルギー発症後の高IgE抗体価を下げる治療効果が期待でき、さらにリポソーム内にアレルゲン性がない抗原を封入することによって、その効果をさらに増強できることが示唆された。
ＣＤ１ｄリガンド及び標的抗原（例、アレルゲン、自己抗原）を含む、内腔を有する薬物送達媒体を含有してなる、本発明の剤は、標的抗原に起因する疾患の特異的な治療に有用である。
本発明の剤はまたスギ花粉抗原の融合タンパク質を含み得る。本発明の剤に含まれ得る融合タンパク質は、アナフィラキシー反応を生じ得ない安全なアレルゲンとなり得る、スギ花粉に起因するアナフィラキシー反応の程度を抑制し得る、スギ花粉抗原に特異的な免疫を十分に誘導し得る、全てのスギ花粉症患者におけるＴ細胞エピトープをカバーし得るという優れた効果を奏する。従って、本発明の剤は、スギ花粉症の新規減感作療法において、並びに／あるいは治療用ワクチン等の医薬として有用であり得る。
本出願は、２００６年１月１３日に日本で提出された特願２００６−００５６５８を基礎としており、その内容は本参照により本明細書中に援用される。
本発明の剤はまたスギ花粉抗原の融合タンパク質を含み得る。本発明の剤に含まれ得る融合タンパク質は、アナフィラキシー反応を生じ得ない安全なアレルゲンとなり得る、スギ花粉に起因するアナフィラキシー反応の程度を抑制し得る、スギ花粉抗原に特異的な免疫を十分に誘導し得る、全てのスギ花粉症患者におけるＴ細胞エピトープをカバーし得るという優れた効果を奏する。従って、本発明の剤は、スギ花粉症の新規減感作療法において、並びに／あるいは治療用ワクチン等の医薬として有用であり得る。
本出願は、２００６年１月１３日に日本で提出された特願２００６−００５６５８を基礎としており、その内容は本参照により本明細書中に援用される。
Claims (15)
- ＣＤ１ｄリガンド及び標的抗原を含む、内腔を有する薬物送達媒体を含有してなる、該標的抗原に起因する免疫疾患の予防又は治療剤。
- 標的抗原がアレルゲンであり、免疫疾患が該アレルゲンに起因するアレルギー疾患である請求項１記載の剤。
- 薬物送達媒体がリポソームである、請求項１記載の剤。
- ＣＤ１ｄリガンドがα−ＧａｌＣｅｒである、請求項１記載の剤。
- アレルゲンがスギ花粉抗原である、請求項２記載の剤。
- アレルゲンがＣｒｙｊ１成熟タンパク質及びＣｒｙｊ２成熟タンパク質の融合タンパク質である、請求項２記載の剤。
- 融合タンパク質において、Ｃｒｙｊ１成熟タンパク質がＣｒｙｊ２成熟タンパク質よりもＮ末端側に存在する、請求項５記載の剤。
- ＣＤ１ｄリガンドがリポソーム膜内に包埋され、かつアレルゲンがリポソーム内腔に封入されている、請求項２記載の剤。
- 標的抗原が自己抗原である、請求項１記載の剤。
- スギ花粉抗原Ｃｒｙｊ１タンパク質とＣｒｙｊ２タンパク質を含む融合タンパク質。
- 前記Ｃｒｙｊ１タンパク質がＣｒｙｊ１成熟タンパク質であり、Ｃｒｙｊ２タンパク質がＣｒｙｊ２成熟タンパク質である請求項１０記載の融合タンパク質。
- Ｃｒｙｊ１タンパク質とＣｒｙｊ２タンパク質が、直接又はペプチドリンカーを介して連結されている、請求項１０記載の融合タンパク質。
- Ｃｒｙｊ１タンパク質がＮ末端側に、Ｃｒｙｊ２成熟タンパク質がＣ末端側に存在する、請求項１０記載の融合タンパク質。
- 請求項１〜９のいずれかに記載の免疫疾患の予防又は治療剤の薬学的有効量をその治療を必要とする被験体に投与する工程を含む、免疫疾患の予防又は治療方法。
- 前記被験体がヒト免疫疾患患者である、請求項１４記載の免疫疾患の予防又は治療方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2007534938A JP5191234B2 (ja) | 2006-01-13 | 2007-01-12 | 免疫疾患の予防ないし治療剤および方法 |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2006005658 | 2006-01-13 | ||
| JP2006005658 | 2006-01-13 | ||
| PCT/JP2007/050340 WO2007080977A1 (ja) | 2006-01-13 | 2007-01-12 | 免疫疾患の予防ないし治療剤および方法 |
| JP2007534938A JP5191234B2 (ja) | 2006-01-13 | 2007-01-12 | 免疫疾患の予防ないし治療剤および方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPWO2007080977A1 true JPWO2007080977A1 (ja) | 2009-06-11 |
| JP5191234B2 JP5191234B2 (ja) | 2013-05-08 |
Family
ID=38256381
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2007534938A Expired - Fee Related JP5191234B2 (ja) | 2006-01-13 | 2007-01-12 | 免疫疾患の予防ないし治療剤および方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20120121688A1 (ja) |
| EP (1) | EP1974750A4 (ja) |
| JP (1) | JP5191234B2 (ja) |
| KR (1) | KR20080082893A (ja) |
| CN (1) | CN101309705A (ja) |
| AU (1) | AU2007205489A1 (ja) |
| CA (1) | CA2601803A1 (ja) |
| WO (1) | WO2007080977A1 (ja) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2398466B1 (en) | 2008-11-24 | 2021-02-17 | Massachusetts Institute of Technology | Methods and compositions for localized nanoparticle delivery to a tumor |
| US20110229556A1 (en) * | 2010-03-19 | 2011-09-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Lipid-coated polymer particles for immune stimulation |
| US9149432B2 (en) | 2010-03-19 | 2015-10-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Lipid vesicle compositions and methods of use |
| KR101783068B1 (ko) | 2010-03-19 | 2017-09-28 | 메사추세츠 인스티튜트 오브 테크놀로지 | 지질 소포 조성물 및 사용 방법 |
| JP5875246B2 (ja) * | 2010-12-10 | 2016-03-02 | 日東電工株式会社 | シート状製剤及びシート状製剤の製造方法 |
| EP2889039B1 (en) | 2012-08-22 | 2017-11-08 | Regimmune Corporation | Preparation for preventing or treating type i diabetes |
| JP6361004B2 (ja) * | 2012-11-05 | 2018-07-25 | 株式会社レグイミューン | 免疫寛容誘導剤 |
| WO2014133106A1 (ja) * | 2013-02-27 | 2014-09-04 | 独立行政法人理化学研究所 | アレルギー疾患治療薬 |
| CA3191031A1 (en) | 2013-09-27 | 2015-04-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Carrier-free biologically-active protein nanostructures |
| AU2016305087B2 (en) | 2015-08-12 | 2022-01-20 | Massachusetts Institute Of Technology | Cell surface coupling of nanoparticles |
| WO2017218533A1 (en) | 2016-06-13 | 2017-12-21 | Torque Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for promoting immune cell function |
| CN106560217A (zh) * | 2016-08-16 | 2017-04-12 | 璐烘芳 | 应用柳杉花粉构建非人哺乳动物过敏性鼻炎模型的方法 |
| CA3074826A1 (en) | 2017-09-05 | 2019-03-14 | Torque Therapeutics, Inc. | Therapeutic protein compositions and methods of making and using the same |
| EP3845242A4 (en) | 2018-08-30 | 2022-05-11 | Tokushima University | IMMUNE TOLERANCE INDUCING AGENT AND THERAPEUTIC OR PROPHYLACTIC AGENT FOR AN ALLERGIC DISORDER |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0314682D0 (en) * | 2003-06-24 | 2003-07-30 | Isis Innovation | Materials and methods relating to the modulation of T cell response to soluble antigen |
| WO2005120574A1 (ja) * | 2004-06-11 | 2005-12-22 | Riken | 調節性細胞リガンドをリポソームに含有させてなる医薬 |
-
2007
- 2007-01-12 WO PCT/JP2007/050340 patent/WO2007080977A1/ja active Application Filing
- 2007-01-12 JP JP2007534938A patent/JP5191234B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-01-12 CN CNA2007800001093A patent/CN101309705A/zh active Pending
- 2007-01-12 EP EP07706682A patent/EP1974750A4/en not_active Withdrawn
- 2007-01-12 CA CA002601803A patent/CA2601803A1/en not_active Abandoned
- 2007-01-12 US US11/817,350 patent/US20120121688A1/en not_active Abandoned
- 2007-01-12 AU AU2007205489A patent/AU2007205489A1/en not_active Abandoned
- 2007-01-12 KR KR1020077021021A patent/KR20080082893A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2007205489A1 (en) | 2007-07-19 |
| KR20080082893A (ko) | 2008-09-12 |
| JP5191234B2 (ja) | 2013-05-08 |
| US20120121688A1 (en) | 2012-05-17 |
| CA2601803A1 (en) | 2007-07-19 |
| EP1974750A1 (en) | 2008-10-01 |
| CN101309705A (zh) | 2008-11-19 |
| EP1974750A4 (en) | 2010-06-09 |
| WO2007080977A1 (ja) | 2007-07-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5191234B2 (ja) | 免疫疾患の予防ないし治療剤および方法 | |
| JP6763832B2 (ja) | 感染症、自己免疫疾患、同種因子に対する免疫応答、アレルギー性疾患、腫瘍、移植片拒絶反応、および、遺伝子療法または遺伝子ワクチン接種のために使用されるウイルスベクターに対する免疫応答の予防および／または治療における使用のための免疫原性ペプチド | |
| CN109069605B (zh) | 新免疫原性CD1d结合肽 | |
| JP2021165273A (ja) | ペプチドコンジュゲート粒子 | |
| JP7078641B2 (ja) | 自己免疫疾患の治療のためのｒｎａ | |
| US20210355162A1 (en) | Modulation of antigen immunogenicity by deleting epitopes recognized by nkt cells | |
| US20210106652A1 (en) | Immunogenic Compounds For Treatment Of Fibrosis, Autoimmune Diseases And Inflammation | |
| RU2603075C2 (ru) | Изменение иммуногенности антигена путем введения эпитопов, узнаваемых nkt-клетками | |
| EP1267921B1 (en) | Composition and method for the prevention and/or the treatment of der pii allergy | |
| JP2017510631A (ja) | 癌に対しｎｋｇ２ｄ経路機能を回復させるためのワクチン組成物および方法 | |
| JP2023525276A (ja) | 延長された酸化還元酵素モチーフを有する免疫原性ペプチド | |
| CA2882553A1 (en) | Preparation for preventing or treating type i diabetes | |
| WO2023056334A1 (en) | Tlr4 agonist for modulating immune response | |
| WO2019246408A2 (en) | Antibody linked peptide based immunotherapy for type 1 diabetes | |
| Pfrengle et al. | Antigenic liposomes displaying CD22 ligands induce antigen-specific B cell apoptosis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20091218 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120424 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120622 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120904 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20121102 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20130108 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20130129 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20160208 Year of fee payment: 3 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |