JPWO2006019015A1 - インスリン結合たんぱく質と結合能力のあるペプチドおよび吸着材 - Google Patents

インスリン結合たんぱく質と結合能力のあるペプチドおよび吸着材 Download PDF

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Abstract

本発明は、インスリンに結合能力を有するたんぱく質（ＩＢＰ）に対して優れた結合能力を有するペプチド、該ペプチドをを水不溶性担体に固定した吸着体、該吸着材を含む吸着装置、および、該吸着剤または吸着装置を用いたＩＢＰの吸着方法を提供する本発明のペプチド、吸着剤、吸着装置、および方法を用いることにより、ＩＢＰを効率よく選択的に吸着・除去することができ、糖尿病をはじめとするＩＢＰが増悪因子として作用する疾患の治療等に使用しうる。

Description

本発明は、体液（例えば血液、血漿など）に存在するインスリンに結合能力を有するたんぱく質（インスリン結合たんぱく質：以下、ＩＢＰと記す）と結合能力のあるペプチド、該ペプチドを担体に固定した吸着材、該吸着材を含む吸着装置、および、該吸着剤または吸着装置を用いたＩＢＰの吸着方法に関する。
本発明のペプチド、吸着剤、吸着装置、および方法は、糖尿病をはじめとする、ＩＢＰが増悪因子として作用する疾患の治療等に使用しうる。
今日の飛躍的な医療技術の進歩にもかかわらず、先進国では、悪性腫瘍、動脈硬化、関節リュウマチなど、様々な成人病が大きな社会問題となっている。中でも糖尿病は、脳血管障害、虚血性心疾患など、多くの重篤な血管障害を引き起こす、特に潜在患者の多い疾患である。
糖尿病は、世界保健機構（ＷＨＯ）により、インスリンの絶対的欠乏により引き起こされる１型糖尿病（インスリン依存型糖尿病；ＩＤＤＭ）とインスリンの相対的不足による２型糖尿病（インスリン非依存型糖尿病；ＮＩＤＤＭ）に大きく分類される。大きな慢性合併症としては、神経障害、網膜症、そして腎症が挙げられ、これらは全て高血糖が主たる要因となっている。特に、糖尿病性腎症は、進行すると腎不全に陥り透析療法が必要となり、透析導入後の生存率は５年で約５０％と、非糖尿病患者のそれに比べて著しく低く、糖尿病性腎症患者の予後は依然として不良である。一方で、１９９８年度の年間新規透析治療導入患者数は慢性糸球体腎炎を抜いて原因疾患の第１位になり、その数は年々増加の一途を辿っている（非特許文献１）。
２型糖尿病は、インスリン分泌の相対的な低下に、肥満、過食、運動不足、ストレスなどの環境因子によって増大されるインスリン抵抗性が加わって発症すると考えられている。このインスリン抵抗性は、糖尿病ばかりでなく、動脈硬化などその他の疾患の発症や進展などにも広くかかわっており、その要因について、グルコース代謝の各段階で何らかの異常が見られることが分かっている。
グルコース代謝において、インスリンと選択的に結合して細胞内にグルコースを取り込む役割をするインスリンレセプターは、体内のほとんどの細胞膜に存在する、分子量約１３．５万のαサブユニットと分子量約９．５万のβサブユニット２つずつがＳ−Ｓ結合した４量体の糖蛋白である。１９７０年代以降、その構造などについて多くの研究がなされてきた（非特許文献２）。
一方で、細胞上のインスリンレセプターのような生理活性を持つ物質が、体液中に存在するという報告がなされている。その物質は完全なまたは一部欠損したインスリンレセプターなどが、何らかの原因で体液中に過剰発現したもの（可溶性のインスリンレセプター）と考えられ、それによって、高インスリン血症や、肝臓でのグルコース生産の増加とともに、高血糖状態になることが分かっている（非特許文献３）。ＷＯ０２／０９４３４４号公報は、インスリン結合タンパク質を除去する方法を開示するが、具体的なペプチドを開示しない。
ＷＯ０２／０９４３４４号公報 透析会誌 ３７ （１）（２００４） １−２４ Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７８ （２００３） ２７３２９−２７３３２ Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４３ （１９９４） １４３−１５３
前述のような可溶性のインスリンレセプターなどが体液中に存在すると、体液中のインスリンと結合することにより、インスリン活性が阻害されることから、インスリン抵抗性の要因となり得る。
しかしながら、いくつかのタイプのインスリン抵抗性改善薬があるものの、依然、この可溶性のインスリンレセプターなどを含む、ＩＢＰを対象とした効果的な治療法は見つかっていない。
また、医薬として用いられるインスリン活性を有するペプチドはいくつかあるが、体液との接触において、他のたんぱく質（アルブミンなど）には結合しない、より選択性を高めたペプチドについては見つかっていない。
本発明は、かかる問題を鑑み、体液（例えば血液、血漿など）に存在するＩＢＰに対する結合能力を持つペプチド、および、それを用いてＩＢＰを効率よく選択的に吸着できるＩＢＰ吸着材を提供し、さらに、この吸着材を用いた吸着装置、ならびにＩＢＰの吸着方法を提供するものである。
本発明者らは、上記課題を達成すべく鋭意研究を進めた結果、ＩＢＰに対する結合能力を持ち、かつ、アルブミンなどのたんぱく質は吸着しないペプチドを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、下記式（Ｉ）のアミノ酸配列を含むペプチドである：
Ｘ０１−［Ｘ０２−Ｌ−Ｘ０３−Ｘ０４−Ｘ０５−Ｘ０６−Ｎ−［Ｘ０７］m］n−Ｘ０８ （Ｉ）
式（Ｉ）中、
Ｘ０１＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここで、アミノ基はアセチル基またはビオチン基で置換され得る；
Ｘ０２＝Ｑ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｎ、または欠失；
Ｘ０３＝Ｅ、またはＤ
Ｘ０４＝Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｑ、または欠失；
Ｘ０５＝Ｙ、Ｆ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、または欠失；
Ｘ０６＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｓ、または欠失；
Ｘ０７＝スペーサー、リンカー、または欠失；
Ｘ０８＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここで、カルボキシル基はアミド基、または遊離酸で置換され得る；
ｍは０以上の整数；
ｎは１以上の整数を表す。ただしアミノ酸配列がＱＬＥＮＹＣＮとなる場合をを除く。
また、本発明は、下記式（II）のアミノ酸配列を含むペプチドである：
Ｕ０１−［Ｅ−Ｑ−Ｕ０２−Ｕ０３−Ｕ０４−Ｕ０５−［Ｕ０６］m］n−Ｕ０７ （II）
式（II）中、
Ｕ０１＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここでアミノ基は、アセチル基、またはビオチン基で置換され得る；
Ｕ０２＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｓ、または欠失；
Ｕ０３＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｓ、または欠失；
Ｕ０４＝Ｔ、Ｆ、Ｈ、Ｓ、Ｗ、Ｙ、または欠失；
Ｕ０５＝Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、または欠失；
Ｕ０６＝スペーサー、リンカー、または欠失；
Ｕ０７＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここで、カルボキシル基はアミド基、または遊離酸で置換され得る；
ｍは０以上の整数；
ｎは１以上の整数を表す。ただしアミノ酸配列がＥＱＣＣＴＳＩＣとなる場合を除く。
また、本発明は、記式（III）のアミノ酸配列を含むペプチドである：
Ｚ０１−Ｚ０２−Ｓ−Ｚ０３−Ｚ０４−Ｖ−Ｅ−Ｚ０５−Ｚ０６−Ｙ−Ｚ０７−Ｚ０８−Ｚ０９−Ｚ１０−Ｚ１１−Ｚ１２ （III）
式（III）中、
Ｚ０１＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここでアミノ基は、アセチル基、ビオチン基で置換され得る；
Ｚ０２＝Ｇ、Ａ、または欠失；
Ｚ０３＝Ｈ、Ｄ、またはＥ；
Ｚ０４＝Ｌ、Ｉ、またはＶ
Ｚ０５＝Ａ、Ｇ、Ｉ、ＬまたはＶ；
Ｚ０６＝Ｌ、Ａ、Ｉ、またはＶ
Ｚ０７＝Ｌ、Ｉ、またはＶ
Ｚ０８＝Ｖ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、または欠失；
Ｚ０９＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｌ、または欠失；
Ｚ１０＝Ｇ、Ａ、または欠失；
Ｚ１１＝Ｅ、Ｄ、または欠失；
Ｚ１２＝Ｒ、Ｋ、または欠失を表す。ただしアミノ酸配列がＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲとなる場合を除く。
また、本発明は、上記のペプチドを水溶性担体に固定した、インスリン結合たんぱく質の吸着剤である。
また、本発明は、前記吸着材が、液体の入口、出口を有する容器内に含まれ、そして該吸着材の容器外への流出防止手段が備えられているインスリン結合たんぱく質の吸着装置である。
さらに、本発明は、前記吸着材と、インスリン結合たんぱく質を含有する液体とを接触させる工程を包含するインスリン結合たんぱく質の吸着方法でもある。
本発明によれば、下記実施形態および実施例から明らかなとおり、体液中に存在するＩＢＰと選択的に結合するペプチド、および、それらペプチドを用いた、ＩＢＰを吸着する能力を有する新規な吸着材が提供される。また、該吸着材を充填してなる体液処理装置を用いることによって、血液、血漿、血清などの非処理液中のＩＢＰを選択的に除去することが可能である。
図１は、３種類のゲルを用いて流速と圧力損失との関係を調べた結果を示すグラフである。 図２は、本発明のＩＢＰの吸着装置一例の概略断面図である。
符号の説明
１ 体液の流入口
２ 体液の流出口
３ ＩＢＰの吸着材
４、５ 体液および体液に含まれる成分は通過できるが、前記ＩＢＰの吸着材は通過できないフィルター
６ カラム
７ 吸着器
以下に本発明を詳細に説明するが、本発明は以下の説明に限定されるものではない。
なお、本明細書においては、各種アミノ酸残基を次の略号で記載する。Ａ；Ｌ−アラニン残基、Ｃ；Ｌ−システイン残基、Ｄ；Ｌ−アスパラギン酸残基、Ｅ；Ｌ−グルタミン酸残基、Ｆ；Ｌ−フェニルアラニン残基、Ｇ；Ｌ−グリシン残基、Ｈ；Ｌ−ヒスチジン残基、Ｉ；Ｌ−イソロイシン残基、Ｋ；Ｌ−リジン残基、Ｌ；Ｌ−ロイシン残基、Ｍ；Ｌ−メチオニン残基、Ｎ；Ｌ−アスパラギン残基、Ｐ；Ｌ−プロリン、Ｑ；Ｌ−グルタミン残基、Ｒ；Ｌ−アルギニン残基、Ｓ；Ｌ−セリン残基、Ｔ；Ｌ−スレオニン残基、Ｖ；Ｌ−バリン残基、Ｗ;Ｌ−トリプトファン残基、Ｙ；Ｌ−チロシン残基。また本明細書においては、ペプチドのアミノ酸配列を、そのアミノ末端（Ｎ末端）が左側に位置し、カルボキシル末端（Ｃ末端）が右側に位置するように、常法に従って記述する。
本発明におけるＩＢＰは、
（１）完全なまたは一部欠損した可溶性インスリンレセプター、
（２）抗インスリン抗体（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＥのいずれであってもよい）、
（３）完全なまたは一部欠損した可溶性インスリン様成長因子Ｉレセプター、またはＩＩレセプター、
（４）抗インスリン様成長因子Ｉ、またはＩＩに対する抗体（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＥのいずれであってもよい）、
（５）インスリン様成長因子結合たんぱく質１、２、３、４、５、または６、
（７）インスリン様成長因子結合たんぱく質７、８、９、または１０などの、インスリン様成長因子結合たんぱく質関連たんぱく質（ＩＧＦＢＰｒｐ）、
（8）これらのうちいずれか１種以上のたんぱく質、またはそれら１種以上の複合体など、いくつか挙げられるが、本発明はこれに限定されるものではない。
すなわち、主に体液中に存在するインスリンと結合することによってインスリン本来の望まれる活性が実質的に妨げられ得る、インスリン抵抗性を誘発する物質全てを含むものとする。
本発明のペプチドは、ＩＢＰに対して結合能力を有する。ＩＢＰとの解離定数（ＫＤ）は１．０Ｅ−０４以下であるのが好ましく、１．０Ｅ−０５以下がより好ましく、１．０Ｅ−０６以下がさらに好ましい。
また、ＩＢＰに特異的に結合することが好ましい。なお、本明細書でいうペプチドとは、アミノ酸がペプチド結合により結合したものに加えて、所望により置換され、および／または所望によりペプチド以外の化合物が連結されているもの、いわゆる修飾されたペプチドも含む。
本発明のペプチドとしては、例えば、下記式（Ｉ）：
Ｘ０１−［Ｘ０２−Ｌ−Ｘ０３−Ｘ０４−Ｘ０５−Ｘ０６−Ｎ−［Ｘ０７］m］n−Ｘ０８ （Ｉ）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドが挙げられる。式（Ｉ）において、
Ｘ０１＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここで、アミノ基はアセチル基またはビオチン基で置換され得る；
Ｘ０２＝Ｑ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｎ、または欠失；
Ｘ０３＝Ｅ、またはＤ
Ｘ０４＝Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｑ、または欠失；
Ｘ０５＝Ｙ、Ｆ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、または欠失；
Ｘ０６＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｓ、または欠失；
Ｘ０７＝スペーサー、リンカー、または欠失；
Ｘ０８＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここで、カルボキシル基はアミド基、または遊離酸で置換され得る；
ｍは０以上の整数；
ｎは１以上の整数を表す。ただしアミノ酸配列がＱＬＥＮＹＣＮ（配列番号１）となる場合を除く。
前記式（Ｉ）で表されるペプチドとして、好ましくは、ＣＱＬＤＮＹＡＮ（配列番号２）、ＣＮＬＥＱＹＡＮ（配列番号３）、ＣＧＬＥＧＴＭＮ（配列番号４）、ＣＧＬＤＮＧＬＤＮ（配列番号５）またはＬＥＮＡＬＥＮ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むペプチドが挙げられる。
より好ましくは、ＣＱＬＤＮＹＡＮ（配列番号２）、ＣＮＬＥＱＹＡＮ（配列番号３）、ＣＧＬＥＧＴＭＮ（配列番号４）、ＣＧＬＤＮＧＬＤＮ（配列番号５）またはＬＥＮＡＬＥＮ（配列番号６）のアミノ酸配列をからなるペプチドである。
また、本発明のペプチドの他の例としては、下記式（II）：
Ｕ０１−［Ｅ−Ｑ−Ｕ０２−Ｕ０３−Ｕ０４−Ｕ０５−［Ｕ０６］m］n−Ｕ０７ （II）
で示されるアミノ酸配列を含むペプチドが挙げられる。上記式（II）において、
Ｕ０１＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここでアミノ基は、アセチル基、またはビオチン基で置換され得る；
Ｕ０２＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｓ、または欠失；
Ｕ０３＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｓ、または欠失；
Ｕ０４＝Ｔ、Ｆ、Ｈ、Ｓ、Ｗ、Ｙ、または欠失；
Ｕ０５＝Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、または欠失；
Ｕ０６＝スペーサー、リンカー、または欠失；
Ｕ０７＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここで、カルボキシル基はアミド基、または遊離酸で置換され得る；
ｍは０以上の整数；
ｎは１以上の整数を表す。ただしアミノ酸配列ＥＱＣＣＴＳＩＣ（配列番号７）を除く。
前記式（II）で示されるアミノ配列を含むペプチドとして、好ましくは、ＣＥＱＡＡＴＳ（配列番号８）、ＣＥＱＡＧＴＳ（配列番号９）、ＣＥＱＭＭＨＮ（配列番号１０）またはＥＱＣＣＨＮ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むペプチドが挙げられる。より好ましくは、ＣＥＱＡＡＴＳ（配列番号８）、ＣＥＱＡＧＴＳ（配列番号９）、ＣＥＱＭＭＨＮ（配列番号１０）またはＥＱＣＣＨＮ（配列番号１１）のアミノ酸配列からなるペプチドである。
また、本発明のペプチドの他の例としては、下記式（III）：
Ｚ０１−Ｚ０２−Ｓ−Ｚ０３−Ｚ０４−Ｖ−Ｅ−Ｚ０５−Ｚ０６−Ｙ−Ｚ０７−Ｚ０８−Ｚ９−Ｚ１０−Ｚ１１−Ｚ１２ （III）
で示されるアミノ酸配列を有するペプチドが挙げられる。上記式（III）において、
Ｚ０１＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここでアミノ基は、アセチル基、ビオチン基で置換され得る；
Ｚ０２＝Ｇ、Ａ、または欠失；
Ｚ０３＝Ｈ、Ｄ、またはＥ；
Ｚ０４＝Ｌ、Ｉ、またはＶ
Ｚ０５＝Ａ、Ｇ、Ｉ、ＬまたはＶ；
Ｚ０６＝Ｌ、Ａ、Ｉ、またはＶ
Ｚ０７＝Ｌ、Ｉ、またはＶ
Ｚ０８＝Ｖ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、または欠失；
Ｚ９＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｌ、または欠失；
Ｚ１０＝Ｇ、Ａ、または欠失；
Ｚ１１＝Ｅ、Ｄ、または欠失；
Ｚ１２＝Ｒ、Ｋ、または欠失を表す。ただしアミノ酸配列がＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲ（配列番号１２）となる場合を除く。
好ましくは、前記式（III）において、
Ｚ０１＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここでアミノ基は、アセチル基、またはビオチン基で置換され得る；
Ｚ０２＝Ｇ、Ａ、または欠失（ただしＺ０１＝Ｃのとき、Ｚ０２＝Ａ、または欠失）；
Ｚ０３＝Ｈ、Ｄ、またはＥ（ただしＺ０２＝Ｇのとき、Ｚ０３＝Ｄ、またはＥ）；
Ｚ０４＝Ｉ、またはＶ
Ｚ０５＝Ｇ、Ｉ、Ｌ、またはＶ；
Ｚ０６＝Ｌ、Ａ、Ｉ、またはＶ；
Ｚ０７＝Ｌ、Ｉ、またはＶ（ただしＺ０６＝Ｌのとき、Ｚ０７＝Ｉ、またはＶ）；
Ｚ０８＝Ｖ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、または欠失（ただしＺ０７＝Ｌのとき、Ｚ０８＝Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、または欠失）；
Ｚ９＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｌ、または欠失；
Ｚ１０＝Ｇ、Ａ、または欠失（ただしＺ０８＝ＶかつＺ９＝Ｃのとき、Ｚ１０＝Ａ、または欠失）；
Ｚ１１＝Ｅ、Ｄ、または欠失（ただしＺ９＝ＣかつＺ１０＝Ｇのとき、Ｚ１１＝Ｄ、または欠失）；
Ｚ１２＝Ｒ、Ｋ、または欠失（ただしＺ１０＝ＧかつＺ１１＝Ｅのとき、Ｚ１２＝Ｋ、または欠失）であるアミノ酸配列を含む、ペプチドである。
より好ましくは、ＣＡＳＤＩＶＥＧＬＹＩＶＬＡＥＲ（配列番号１４）、ＣＡＳＤＩＶＥＧＩＹＬ（配列番号１５）、ＣＡＳＨＩＶＥＧＩＹＬＩＬＡＥＲ（配列番号１６）、ＣＡＳＨＩＶＥＧＬＹＩＶＣＡＥＲ（配列番号１７）、ＣＡＳＨＩＶＥＧＩＹＬＡＣＧＤＲ（配列番号１８）、ＧＳＤＩＶＥＧＬＹＩＶＣＡＥＲ（配列番号１９）、ＧＳＤＩＶＥＧＩＹＬＡＬＧＥＫ（配列番号２０）またはＣＱＨＩＬＧＳＤＩＶＥＧＩＹＬ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むペプチドである。
更に好ましくは、ＣＡＳＤＩＶＥＧＬＹＩＶＬＡＥＲ（配列番号１４）、ＣＡＳＤＩＶＥＧＩＹＬ（配列番号１５）、ＣＡＳＨＩＶＥＧＩＹＬＩＬＡＥＲ（配列番号１６）、ＣＡＳＨＩＶＥＧＬＹＩＶＣＡＥＲ（配列番号１７）、ＣＡＳＨＩＶＥＧＩＹＬＡＣＧＤＲ（配列番号１８）、ＧＳＤＩＶＥＧＬＹＩＶＣＡＥＲ（配列番号１９）、ＧＳＤＩＶＥＧＩＹＬＡＬＧＥＫ（配列番号２０）またはＣＱＨＩＬＧＳＤＩＶＥＧＩＹＬ（配列番号２１）のアミノ酸配列からなるペプチドである。
本発明では、上記ペプチドまたはその部分ペプチドの単一種を、ＩＢＰを吸着するために使用しうる。また、上記ペプチドまたはその部分ペプチドの２以上を混合して、ＩＢＰを吸着するために使用しうる。
さらに本発明においては、上記ペプチドまたはその部分ペプチドの２以上を、直鎖状または分枝鎖状に連結してＩＢＰを吸着するために使用しうる。ペプチドを連結する場合、１０残基以下のペプチドを介して連結してもよい。
好ましい、連結されたペプチドの例としては、ＣＥＱＡＡＴＳＬＡＴＬＹＮＬＥＱＹＡＮ（配列番号２２）、ＣＥＱＡＡＴＳＬＡＳＬＦＱＬＤＮＹＡＮ（配列番号２３）またはＣＥＱＭＭＨＮＩＡＳＬＦＱＬＤＮＹＡＮ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むペプチドが挙げられる。
上記ペプチドはそれ自体、ＩＢＰの吸着材として使用しうるが、好ましくは、吸着材は、上記ペプチドが水不溶性担体に固定化されている。上記ペプチドの単一種を、該担体に固定化しうる。上記ペプチドの２以上を、独立的に選択して、該担体に固定化しうる。
その機能に影響を及ぼすことなく、ペプチドまたはたんぱく質中のアミノ酸位置を、保存的な手法で交換することが可能なことは、当業者には公知である。本発明の場合、「保存的」交換とは、以下のグループにおいて、同一グループ内のアミノ酸交換を意味する。グループＩ：Ｌ、Ｉ、Ｖ、Ｍ、Ｈ、Ｗ、Ｙ、およびＦ
グループＩＩ：Ｅ、Ｑ、Ｄ、およびＮ
グループＩＩＩ：Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ａ、およびＰ
グループＩＶ：Ｋ、およびＲ
上記ペプチドは、自体公知方法にしたがって製造できる。化学的方法たとえは、Ｆｍｏｃ法またはＢｍｏｃ法を使用しうる。あるいは、生物学的方法、例えば組み換え体生物例えば微生物を使用し、組み換え体ペプチドまたはたんぱく質を発現させてもよい。
好適な実施様態においては、ＩＢＰに結合能力を有するペプチドが水不溶性担体１ｍｌ当たりに０．００１ｎｍｏｌ以上、１００μｍｏｌ以下固定されている。
本発明に用いる水不溶性担体としては、ガラスビーズ、シリカゲルなどの無機担体、架橋ポリビニルアルコール、架橋ポリアクリレート、架橋ポリアクリルアミド、架橋ポリスチレンなどの合成高分子や結晶性セルロース、架橋セルロース、架橋アガロース、架橋デキストランなどの多糖類からなる有機担体、さらにはこれらの組み合わせによって得られる有機−有機、有機−無機などの複合担体などが挙げられる。
さらに好適な実施様態においては、ＩＢＰを吸着するにあたり、水不溶性担体が親水性である。親水性担体は非特異吸着が比較的少なく、ＩＢＰの吸着選択性が良好であるため好ましい。ここでいう親水性担体とは、担体を構成する化合物を平板状にしたときの水との接触角が６０度以下の担体を示す。この様な担体としてはセルロース、キトサン、デキストラン等の多糖類、ポリビニルアルコール、エチレン−酢酸ビニル共重合体けん化物、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリメタクリル酸メチル、ポリアクリル酸グラフト化ポリエチレン、ポリアクリルアミドグラフト化ポリエチレン、ガラスなどからなる担体が代表例として挙げられる。市販品としては多孔質セルロースゲルであるＧＣＬ２０００ｍ、エポキシ基で活性化されたポリメタクリルアミドであるオイパーギットＣ２５０Ｌなどを例示することができる。ただし、本発明においてはこれらの担体、活性化担体のみに限定されるものではないことは言うまでもない。上述の担体はそれぞれ単独で用いてもよいし、任意の２種類以上を混合してもよい。
本発明における水の接触角とは、主たる構成成分である高分子よりなる平滑なフィルムを作製し、水平な状態でその上に微量注射器をもちいて液滴を形成し、その接触角を室温で測定することにより求めることができる。また多孔質体が有機溶媒に溶解可能な場合は、多孔質体を溶解後、溶解液を用いて平板上にキャストフィルムを作製して接触角を測定することもできる。測定方法の詳細は、例えば「新実験化学講座１８ 界面とコロイド」 丸善株式会社（昭和５２年１０月２０日発行、初版）などを参照することができる。すなわち、鏡面仕上げの平滑度をもつ平板試片を、測定する液体の飽和蒸気で満たされたように水平に置き、その上へ微量注射器を用いて液滴を作る。液滴の大きさは、接触径が約３ｍｍ以下になるようにする（滴体積が０．１ｃｍ3以下であればよいという報告もある）。接触角は、一般には測角器のついた読みとり顕微鏡（倍率２０倍程度）ではかれる。鏡筒を１−２度水平より下方に傾けておくと像の鮮明度がきわめてよくなる。滴は前方から乳白ガラスを通した光あるいは熱線吸収ガラスを通した平行光で照明する（上記文献より抜粋）。
好適な実施様態においては、ＩＢＰを吸着するにあたり、本発明に用いる水不溶性担体としては、本吸着材の使用目的および方法からみて、表面積が大きことが望ましく、適当な大きさの細孔を多数有する、すなわち、多孔質であることが好ましい。
好適な実施様態においては、ＩＢＰを吸着するにあたり、水不溶性多孔質担体の排除限界分子量が１万以上１０００万以下である。ＩＢＰは、その分子量が１万以上１００万以下の分子であり、多孔質性の担体で抗体分子をより効率良く吸着する為には排除限界分子量がＩＢＰ分子の直径よりも大きいことが好ましい。しかし、大きすぎる場合には担体の強度が低下し、且つ表面積が減少するため、さらに好ましくは、排除限界分子量が１０万以上５００万以下であるものを使用する。
本発明において、担体の多孔構造については、吸着材の単位体積あたりの吸着性能から考えて、表面多孔性よりも全多孔性が好ましく、空孔容積が２０％以上であり、比表面積が３ｍ2／ｇ以上であることが好ましい。
本発明における担体の形態としては、ビーズ状、線維状、膜状（中空糸も含む）など何れも可能であり、任意の形態を選ぶことができるが、体外循環時の体液の流通面より、ビーズ状が特に好ましく用いられる。ビーズ状の平均粒径は１０〜２５００μｍのものが使いやすいが、２５μｍから８００μｍの範囲が好ましく用いられる。
さらに本発明における担体表面には、リガンドの固定化反応に用いうる官能基が存在しているとリガンドの固定化に好都合である。これらの官能基の代表例としては、水酸基、アミノ基、アルデヒド基、カルボキシル基、チオール基、シラノール基、アミド基、エポキシ基、サクシニルイミド基、酸無水物基などが挙げられる。
次に本発明に用いる担体としては硬質担体、軟質担体のいずれも用いることができるが、体外循環治療用の吸着材として使用するためには、カラムに充填し、通液する際などに目詰まりを生じないことが重要である。そのために充分な機械的強度が要求される。従って、本発明に用いる担体は硬質担体であることがより好ましい。本明細書中では、硬質担体とは、例えば粒状ゲルの場合、以下の条件でゲルをガラス製の円筒状カラム（内径９ｍｍ、カラム長１５０ｍｍ）に均一に充填し、水性流体を流した際の圧力損失△Ｐと流量の関係が０．３キログラム／ｃｍ2まで直線関係にあるものをいう。例えば、両端に孔径１５μｍのフィルターを装着したガラス製円筒状カラム（内径９ｍｍ、カラム長１５０ｍｍ）にアガロースゲル（Ｂｉｏｇｅｌ−Ａ５ｍ、粒径５０〜１００メッシュ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社）、ビニル系ポリマーゲル（トヨパールＨＷ−６５、粒径５０〜１００μｍ、東ソー株式会社）およびセルロースゲル（セルロファインＧＣ−７００ｍ、粒径４５〜１０５μｍ、チッソ株式会社）をそれぞれ均一に充填し、ペリスタティックポンプにより水を流し、流量と圧力損失△Ｐとの関係を求めた（図１）。縦軸に流速（ｃｍ／分）を横軸に圧力損失（ｋｇ／ｃｍ2）をプロットした。この図において、○はトヨパールＨＷ−６５、△はセルロファインＧＣ−７００ｍ、●はＢｉｏｇｅｌ−Ａ５ｍを示す。この結果、トヨパールＨＷ−６５およびセルロファインＧＣ−７００ｍが圧力増加にほぼ比例して流量が増加するのに対し、Ｂｉｏｇｅｌ−Ａ５ｍ用は圧密化を引き起こし、圧力を増加させても流量が増加しないことがわかる。
本発明における担体へのインスリン結合蛋白またはペプチドの固定化においては、たんぱく質またはペプチドの立体障害を小さくすることにより吸着効率を向上させ、さらに非特異的吸着を抑えるために、親水性スペーサーを介して固定化することが、より好ましい。
本明細書におけるスペーサーは、担体とリガンドを意図的に離すための化合物をいう。本明細書におけるリンカーは、担体とリガンドを結合する化合物をいう。親水性スペーサーとしては、例えば、両末端をカルボキシル基、アミノ基、アルデヒド基、エポキシ基などで置換したポリアルキレンオキサイドの誘導体を用いるのが好ましい。リンカーまたはスペーサーとして、ペプチドまたはアミノ酸を用いることもある。本発明のペプチドのアミノ末端および／又はカルボキシル末端に、スペーサー、リンカー、蛍光標識を結合し得る。
本発明における担体へ導入されるＩＢＰに結合活性を有するペプチド、およびスペーサーとして用いられる有機化合物の固定化方法は特に限定されるものではないが、一般にたんぱく質やペプチドを担体に固定化する場合に採用されるエポキシ反応、ニック塩基反応、カルボジイミド試薬などを用いた縮合反応、活性エステル反応、グルタルアルデヒド試薬などを用いた担体架橋反応などによる固定化方法が挙げられる。さらに、体外循環治療および血液浄化に用いられ得る吸着材であることを考慮して、吸着材の滅菌時または治療時に蛋白類が担体より容易に脱離しない固定化方法を適用することがより好ましい。
例えば、（１）担体が有するカルボキシル基をN−ヒドロキシコハク酸イミドと反応させることによってスクシンイミドオキシカルボニル基に置換して、たんぱく質またはペプチドをアミノ基の部分で反応させる方法（活性エステル法）、（２）担体が有するアミノ基またはカルボキシル基に、ジシクロヘキシルカルボジイミドなどの縮合試薬存在下で、たんぱく質またはペプチドのカルボキシル基またはアミノ基を縮合反応させる方法（縮合法）、（３）たんぱく質またはペプチドをグルタルアルデヒドなどの２個以上の官能基を有する化合物を用いて架橋する方法（単体架橋法）などが挙げられる。蛋白類の脱離溶出を極力抑えるためには共有結合法により結合することが好ましい。
好適な実施様態においては、本発明の吸着材は、血液、血漿、または他の体液中に存在するＩＢＰを吸着するために用いられる。より詳細に述べると、ＩＢＰに結合能力を有するペプチドを固定化した担体を、血液、血漿、血清などの体液と接触させて、体液中のＩＢＰを吸着する方法には種々の方法がある。代表的な方法としては、（１）体液を取り出してバックなどに貯留し、これを吸着材に混合してＩＢＰを吸着した後、吸着材を濾別してＩＢＰの除去された体液を得る方法、（２）体液の入口と出口を有し、出口に体液は通過するが吸着剤は通過しないフィルターを装着した容器に吸着材を充填し、これに体液を流す方法等がある。いずれの方法を用いてもよいが、後者の方法は操作も簡単であり、また体外循環回路に組み込むことにより患者の体液から効率よくオンラインでＩＢＰを除去することが可能であり、本発明の吸着材はこの方法に適している。
本発明のＩＢＰ吸着装置は、上記のいずれかに記載の吸着材が、液体の入口、出口を有する容器内に含まれ、そして該吸着材の容器外への流出防止手段が備えられている。例として、ＩＢＰを吸着する吸着材を用いた本発明のＩＢＰの吸着装置を、その概略断面図に基づき説明する。図２中に示す容器７は、液体の流入口または流出口１、液体の流出口または流入口２、本発明のＩＢＰ吸着材３、液体および液体に含まれる成分は通過できるがＩＢＰ吸着材は通過できない吸着材流出防止手段４および５、ならびにカラム６を有する。この容器の形状および材質に特に限定はないが、好ましいくは、例えば、容量２０〜４００ｍｌ程度、直径２〜１０ｃｍ程度の筒状容器が用いられる。
本発明のＩＢＰ吸着方法は、上記のいずれかに記載の吸着材とＩＢＰを含有する液体とを接触させる工程を包含する。
好適な実施様態においては、上記ＩＢＰを含有する液体は、血液、血漿または他の体液である。
ペプチドまたは吸着材のＩＢＰに対する吸着能は、例えば以下のように評価する。
ペプチドの評価
ＢＩＡｃｏｒｅ（ＢＩＡｃｏｒｅ社）を用いた方法（Ａｍ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２７２ （１９９７） Ｅ１０８９−１０９８に記載の方法）によって配列１の可溶性インスリンレプターへのアフィニティーを比較する。簡単には、配列１のペプチドを固定化した既製のセンサーチップ表面に、可溶性インスリンレプター溶液を接触させることによって、相互作用を測定する。
吸着材の評価
合成されたペプチドに可溶性インスリンレセプターを添加した健常人血清３００μｌを加えて３７度にて２時間振盪し、上清のインスリンレセプターをＲＩＡ法（Ａｍ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２５７ （１９８９） Ｅ４５１−４５７に記載の方法）により測定し、次式により吸着率を算出する。
吸着率／％＝（１−反応後Ａ濃度／反応前Ａ濃度）×１００
ここでＡは可溶性インスリンレセプターである。
以下に実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は以下の実施例のみに限定されるものではない。
（実施例１） ペプチドＰ２および吸着材１（ＧＣＬ２０００ｍ−Ｐ２）の調製
アミノ酸配列が、ＣＱＬＤＮＹＡＮ（配列番号２）であるペプチドを、Ｆｍｏｃ法にて化学合成した。得られた粗ペプチドは０．１％トリフルオロ酢酸に溶解後、高速液体クロマトグラフィーにて逆相カラム（μＢｏｎｄａｓｐｈｅｒｅ Ｃ１８、日本ミリポア・ウォーターズ社）を用いて精製した（ペプチドＰ２）。
セルロース系多孔質硬質ゲルであるＧＣＬ−２０００ｍ（球状タンパク質の排除限界分子量３００万、チッソ株式会社）９０ｍｌに水を加え全量を１８０ｍｌとしたのち、２Ｍ水酸化ナトリウム６０ｍｌを加え４０度とした。これにエピクロルヒドリン２１ｍｌを加え、４０度で撹拌下１時間反応させた。反応終了後、充分に水洗し、エポキシ活性化セルロースゲルを得た。上記のペプチドＰ２ ０．５ｍｇを０．０５Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ１０．０）０．５ｍｌに溶解し、０．０１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えてｐＨ１０に再調整し、全量を１．０ｍｌとした（ペプチド溶液）。０．４ｍｌの上記エポキシ活性化ＧＣＬ２０００ｍにペプチド溶液を加えて３７度で５時間振盪した後、充分量のＰＢＳ（１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む１０ｍＭリン酸緩衝液）で洗浄し、吸着材１（ＧＣＬ２０００ｍ−Ｐ２）を得た。
（実施例２） ペプチドＰ８および吸着材２（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ−Ｐ８）の調製
アミノ酸配列が、ＣＥＱＡＡＴＳ（配列番号８）であるペプチドを、実施例１と同様に合成・精製した（ペプチドＰ８）。
前処理したＣＮＢｒ活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ（球状タンパク質の排除限界分子量＞２０００万、アマシャム バイオサイエンス社）（２．０ｍｌ）に、上記のペプチドＰ８ ２０ｍｇをカップリングバッファー５．０ｍｌに溶解したもの（ペプチド溶液）を、製品添付の取扱説明書に従ってカップリングさせ、吸着材２（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ−Ｐ８）を得た。
（実施例３） ペプチドＰ１４および吸着材３（Ｋａｃ−Ｐ１４）の調製
アミノ酸配列が、ＣＡＳＤＩＶＥＧＬＹＩＶＬＡＥＲ（配列番号１４）であるペプチドを、実施例１と同様に合成・精製した（ペプチドＰ１４）。
セルロース系多孔質硬質ゲルで球状タンパク質の排除限界分子量５００万の当社試作品Ｋａｃ９０ｍｌに水を加え全量を１８０ｍｌとしたのち、２Ｍ水酸化ナトリウム６０ｍｌを加え４０度とした。これにエピクロルヒドリン２１ｍｌを加え、４０度で撹拌下１時間反応させた。反応終了後、充分に水洗し、エポキシ活性化セルロースゲルを得た。上記のペプチドＰ１４ ５０ｍｇを０.０５Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ１０.０）２．０ｍｌに溶解し、０.０１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えてｐＨ１０に再調整し、全量を４．０ｍｌとした（ペプチド溶液）。上記エポキシ活性化Ｋａｃ（０．５ｍｌ）にペプチド溶液を加えて３７度で２時間振盪した後、充分量のＰＢＳ（１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む１０ｍＭリン酸緩衝液）で洗浄し、吸着材３（Ｋａｃ−Ｐ１４）を得た。
（実施例４） 吸着材４（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ−Ｐ５）の調製
アミノ酸配列が、ＣＧＬＤＮＧＬＤＮ（配列番号５）であるペプチドを、実施例１と同様に合成・精製した（ペプチドＰ５）。
前処理をしたＥＡＨ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ（球状タンパク質の排除限界分子量＞２０００万、アマシャム バイオサイエンス社）（０．４ｍｌ）に、上記のペプチドＰ５ ８．０ｍｇをカップリングバッファー３．０ｍｌに溶解したもの（ペプチド溶液）を、製品添付の取扱説明書に従ってカップリングさせ、吸着材４（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ−Ｐ５）を得た。
（実施例５） ペプチドＰ２２および吸着材５（Ｋａｃ−Ｐ２２）の調製
アミノ酸配列が、ＣＥＱＡＡＴＳＬＡＴＬＹＮＬＥＱＹＡＮ（配列番号２２）であるペプチドを、実施例１と同様に合成・精製した（ペプチドＰ２２）。
実施例３と同様の方法で、当社試作品Ｋａｃのエポキシ活性化セルロースゲル（９０ｍｌ）を得た。上記のペプチドＰ２２ ５０ｍｇを０.０５Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ１０．０）２．０ｍｌに溶解し、０．０１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えてｐＨ１０に再調整し、全量を５.０ｍｌとした（ペプチド溶液）。上記エポキシ活性化Ｋａｃ１．０ｍｌにペプチド溶液を加えて３７度で３時間振盪した後、充分量のＰＢＳ（１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む１０ｍＭリン酸緩衝液）で洗浄し、吸着剤５（Ｋａｃ−Ｐ２２）を得た。
（実施例６） ペプチドＰ１５の合成
アミノ酸配列がＣＡＳＤＩＶＥＧＩＹＬ（配列番号１５）ペプチドを、実施例１と同様に合成・精製した（ペプチドＰ１５）。
（実施例７） ペプチドＰ２１の合成
アミノ酸配列がＣＱＨＩＬＧＳＤＩＶＥＧＩＹＬ（配列番号２１）であるペプチドを、実施例１と同様に合成・精製した（ペプチドＰ２１）。
（実施例８） ペプチドＰ１４のＩＢＰ結合能力
実施例３で得られたペプチドＰ１４の解離定数（ＫＤ）をBIAcore up grade（ビアコア社）、解析ソフトBIA evaluation version 3.0（ビアコア社）を用いて測定した。
センサーチップCM5 research grade （ビアコア社）へのリガンド固定化は、アミンカップリング法で行った。すなわち、上記ペプチドを２０ｍＭ炭酸緩衝液（ｐＨ８．５）に溶解（５００μｇ／ｍｌ）し、流速５μｌ／ｍｉｎで１００μｌをフローセルに流した。固定化されたペプチド量は２００ＲＵ（ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｕｎｉｔ）であった。
アナライトには可溶性インスリンレセプター（ＳＩＲ）としてRecombinant Human Insulin Receptor (28-956)（GT/TECHNE corp.）を使用し、１バイアル５０ｍｇにＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（２５０ｍｌ）を加えよく溶解し（１０００ｎＭ溶液）、１０倍希釈で１００ｎＭ溶液を調製した。順次２倍希釈していき１００ｎＭ〜０．７８１ｎＭの８濃度を調製し、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液 （１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０） （ビアコア社）をランニング溶液として流速１０μｌ／ｍｉｎで流して測定を行い、センサーグラムを得た。
得られたセンサーグラムに対してフィッティングを行い、ペプチドとＳＩＲの結合速度定数（９．７Ｅ＋０３）、解離速度定数（１．５Ｅ−０２）から解離定数ＫＤ＝１．６Ｅ−０６を得た。
（実施例９） ペプチドＰ１５のＩＢＰ結合能力
実施例６で得られたペプチドＰ１５の解離定数（ＫＤ）をBIAcore up grade（ビアコア社）、解析ソフトBIA evaluation version 3.0（ビアコア社）を用いて測定した。
センサーチップCM5 research grade（ビアコア社）へのリガンド固定化は、アミンカップリング法で行った。すなわち、上記ペプチドを２０ｍＭ炭酸緩衝液（ｐＨ８．５）に溶解（５００μｇ／ｍｌ）し、流速５μｌ／ｍｉｎで１００μｌをフローセルに流した。固定化されたペプチド量は１３０ＲＵであった。
アナライトにはＳＩＲとしてRecombinant Human Insulin Receptor (28-956)（GT/TECHNE corp.）を使用し、１００ｎＭ溶液から順次２倍希釈していき１００ｎＭ〜０．７８１ｎＭの８濃度を調製し、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液をランニング溶液として流速１０μｌ／ｍｉｎで流して測定を行い、センサーグラムを得た。
得られたセンサーグラムに対してフィッティングを行い、ペプチドとＳＩＲの結合速度定数（８．６Ｅ＋０２）、解離速度定数（２．０Ｅ−０２）から解離定数ＫＤ＝２．４Ｅ−０５を得た。
（実施例１０） ペプチドＰ２１のＩＢＰ結合能力
実施例７で得られたペプチドＰ２１の解離定数（ＫＤ）をBIAcore up grade（ビアコア社）、解析ソフトBIA evaluation version 3.0（ビアコア社）を用いて測定した。
センサーチップCM5 research grade（ビアコア社）へのリガンド固定化は、アミンカップリング法で行った。すなわち、上記ペプチドを２０ｍＭ炭酸緩衝液（ｐＨ８．５）に溶解（５００μｇ／ｍｌ）し、流速５μｌ／ｍｉｎで１００μｌをフローセルに流した。固定化されたペプチド量は２７０ＲＵであった。
アナライトにはＳＩＲとしてRecombinant Human Insulin Receptor (28-956)（GT/TECHNE corp.）を使用し、１００ｎＭ溶液から順次２倍希釈していき１００ｎＭ〜０．７８１ｎＭの８濃度を調製し、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液をランニング溶液として流速１０μｌ／ｍｉｎで流して測定を行い、センサーグラムを得た。
得られたセンサーグラムに対してフィッティングを行い、ペプチドとＳＩＲの結合速度定数（５．１Ｅ＋０４）、解離速度定数（６．０Ｅ−０１）から解離定数ＫＤ＝１．２Ｅ−０５を得た。
実施例８〜１０の結果を下記表１にまとめる。実施例８〜１０のＳＩＲに対する解離定数（ＫＤ）値は１．０Ｅ−０４以下であり、ＩＢＰ吸着材用リガンドとしては十分な結合能力を有する。
Figure 2006019015
本発明は、本明細書におけるＩＢＰを吸着する能力を有する各種ペプチド、および、それらペプチドを用いた医薬品、吸着体などを利用し、主に、糖尿病その他疾患の病因となるインスリン抵抗性の改善に利用され得るものである。

Claims (15)

  1. 下記式（Ｉ）のアミノ酸配列を含むペプチド：
    Ｘ０１−［Ｘ０２−Ｌ−Ｘ０３−Ｘ０４−Ｘ０５−Ｘ０６−Ｎ−［Ｘ０７］m］n−Ｘ０８ （Ｉ）
    （式中、
    Ｘ０１＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここで、アミノ基はアセチル基またはビオチン基で置換され得る；
    Ｘ０２＝Ｑ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｎ、または欠失；
    Ｘ０３＝Ｅ、またはＤ
    Ｘ０４＝Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｑ、または欠失；
    Ｘ０５＝Ｙ、Ｆ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、または欠失；
    Ｘ０６＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｓ、または欠失；
    Ｘ０７＝スペーサー、リンカー、または欠失；
    Ｘ０８＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここで、カルボキシル基はアミド基、または遊離酸で置換され得る；
    ｍは０以上の整数；
    ｎは１以上の整数を表す。ただしアミノ酸配列がＱＬＥＮＹＣＮとなる場合をを除く。）
  2. 下記式（II）のアミノ酸配列を含むペプチド：
    Ｕ０１−［Ｅ−Ｑ−Ｕ０２−Ｕ０３−Ｕ０４−Ｕ０５−［Ｕ０６］m］n−Ｕ０７ （II）
    （式中、
    Ｕ０１＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここでアミノ基は、アセチル基、またはビオチン基で置換され得る；
    Ｕ０２＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｓ、または欠失；
    Ｕ０３＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｍ、Ｓ、または欠失；
    Ｕ０４＝Ｔ、Ｆ、Ｈ、Ｓ、Ｗ、Ｙ、または欠失；
    Ｕ０５＝Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、または欠失；
    Ｕ０６＝スペーサー、リンカー、または欠失；
    Ｕ０７＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここで、カルボキシル基はアミド基、または遊離酸で置換され得る；
    ｍは０以上の整数；
    ｎは１以上の整数を表す。ただしアミノ酸配列がＥＱＣＣＴＳＩＣとなる場合を除く。）
  3. 下記式（III）のアミノ酸配列を含むペプチド：
    Ｚ０１−Ｚ０２−Ｓ−Ｚ０３−Ｚ０４−Ｖ−Ｅ−Ｚ０５−Ｚ０６−Ｙ−Ｚ０７−Ｚ０８−Ｚ０９−Ｚ１０−Ｚ１１−Ｚ１２ （III）
    （式中、
    Ｚ０１＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここでアミノ基は、アセチル基、ビオチン基で置換され得る；
    Ｚ０２＝Ｇ、Ａ、または欠失；
    Ｚ０３＝Ｈ、Ｄ、またはＥ；
    Ｚ０４＝Ｌ、Ｉ、またはＶ
    Ｚ０５＝Ａ、Ｇ、Ｉ、ＬまたはＶ；
    Ｚ０６＝Ｌ、Ａ、Ｉ、またはＶ
    Ｚ０７＝Ｌ、Ｉ、またはＶ
    Ｚ０８＝Ｖ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、または欠失；
    Ｚ０９＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｌ、または欠失；
    Ｚ１０＝Ｇ、Ａ、または欠失；
    Ｚ１１＝Ｅ、Ｄ、または欠失；
    Ｚ１２＝Ｒ、Ｋ、または欠失を表す。ただしアミノ酸配列がＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲとなる場合を除く。）
  4. 前記式（III）において、
    Ｚ０１＝Ｃ、Ｋ、または欠失；ここでアミノ基は、アセチル基、ビオチン基、スペーサー、またはリンカーで置換され得、または欠失することもある；
    Ｚ０２＝Ｇ、Ａ、または欠失（ただしＺ０１＝Ｃのとき、Ｚ０２＝Ａ、または欠失）；
    Ｚ０３＝Ｈ、Ｄ、またはＥ（ただしＺ０２＝Ｇのとき、Ｚ０３＝Ｄ、またはＥ）；
    Ｚ０４＝Ｉ、またはＶ
    Ｚ０５＝Ｇ、Ｉ、Ｌ、またはＶ；
    Ｚ０６＝Ｌ、Ａ、Ｉ、またはＶ；
    Ｚ０７＝Ｌ、Ｉ、またはＶ（ただしＺ０６＝Ｌのとき、Ｚ０７＝Ｉ、またはＶ）；
    Ｚ０８＝Ｖ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、または欠失（ただしＺ０７＝Ｌのとき、Ｚ０８＝Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、または欠失）；
    Ｚ０９＝Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｌ、または欠失；
    Ｚ１０＝Ｇ、Ａ、または欠失（ただしＺ０８＝ＶかつＺ９＝Ｃのとき、Ｚ１０＝Ａ、または欠失）；
    Ｚ１１＝Ｅ、Ｄ、または欠失（ただしＺ９＝ＣかつＺ１０＝Ｇのとき、Ｚ１１＝Ｄ、または欠失）；
    Ｚ１２＝Ｒ、Ｋ、または欠失（ただしＺ１０＝ＧかつＺ１１＝Ｅのとき、Ｚ１２＝Ｋ、または欠失）
    である、請求項３記載のペプチド。
  5. 請求項１記載のペプチドを水不溶性担体に固定した、インスリン結合たんぱく質の吸着材。
  6. 請求項２記載のペプチドを水不溶性担体に固定した、インスリン結合たんぱく質の吸着材。
  7. 請求項３記載のペプチドを水不溶性担体に固定した、インスリン結合たんぱく質の吸着材。
  8. 請求項４記載のペプチドを水不溶性担体に固定した、インスリン結合たんぱく質の吸着材。
  9. 前記水不溶性担体が多孔質である、請求項５〜８のいずれかに記載のインスリン結合たんぱく質の吸着材。
  10. 前記水不溶性担体が、その排除限界分子量が１５万以上１０００万以下である、請求項９に記載のインスリン結合たんぱく質の吸着材。
  11. 前記水不溶性担体が親水性である、請求項５〜８のいずれかに記載のインスリン結合たんぱく質の吸着材。
  12. 体液中に存在するインスリン結合たんぱく質を吸着するために用い得る、請求項５〜８のいずれかに記載の吸着材。
  13. 請求項５〜１２のいずれかに記載の吸着材が、液体の入口、出口を有する容器内に含まれ、そして該吸着材の容器外への流出防止手段が備えられているインスリン結合たんぱく質の吸着装置。
  14. 請求項５〜１２のいずれかに記載の吸着材と、インスリン結合たんぱく質を含有する液体とを接触させる工程を包含するインスリン結合たんぱく質の吸着方法。
  15. 前記インスリン結合たんぱく質を含有する液体が、血液、血漿または他の体液である請求項１４に記載の吸着方法。

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