JPWO2005036122A1 - 相互作用分析方法及び相互作用分析装置 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明を適用することによって、物質間の相互作用を分析する方法(以下、単に「相互作用分析方法」と称する)を提供することができる。相互作用分析方法では、先ず、分離流路からの溶出時間が早い物質を含む第1溶液と分離流路からの溶出時間が遅い物質を含む第2溶液とを、分離流路に第2溶液及び第1溶液の順で導入する。また、相互作用分析方法では、第2溶液の一部を第1溶液に含まれる物質(溶出時間の早い物質)よりも後に分離流路に導入すればよく、例えば、第2溶液を所定の間隔で分離流路に導入するとともに、第2溶液を導入している間に第1の溶液を導入してもよい。
本発明を適用した相互作用分析装置は、上記「1.相互作用検出方法」で説明した方法を実現することができる装置である。例えば相互作用分析装置は、図1に示すように、溶液に含まれる物質群を分離して溶出する分離流路1を有する分離装置2と、分離流路1に導入する溶液等を保持する容器部3と、容器部3から前記分離流路に対して溶液を導入する導入装置4と、分離装置2から溶出した物質のクロマトグラムを検出する検出装置5と、装置全体の動作を制御する制御装置6とを備える。なお、本相互作用分析装置は、分離装置2、溶液部3、導入装置4及び検出装置5それぞれが制御装置を有するような構成であっても良い。
相互作用分析装置
本実施例で構築した相互作用分析装置は、分離流路1としてサイズ排除クロマトグラフィー用カラムTSKsuperSW2000(カラムサイズ1.0IDx10mm、1.0IDx30mmないしは1.0IDx100mm;Tosoh Corporation社製)を備える。また相互作用分析装置は、容器部3及び導入装置4としてオートインジェクター装置HTC−PAL(CTC Analytics AG社製)及びLCポンプ(Agilent1100、Yokogawa社製)を備える。さらに、相互作用分析装置は、検出装置5としてイオントラップ型質量分析計LCQdecaXP(ThermoQuest)を備える。
オートインジェクター装置HTC−PAL(CTC Analytics AG)は、5μL容量あるいは10μL容量のサンプルループ、10μL容量のシリンジ、および、クーリングユニット付きのサンプルトレイを備える。容量100μLのコニカルインサートを挿入した2mLスクリューバイアルに第1溶液を50μLずつ分注し、セプタム付きスクリューキャップを取り付けた後、54バイアル用ラックに並べてサンプルトレイの1つにセットした。また、第2溶液を各ウェルに40μLずつ分注しアルミシールで覆った384well−マイクロプレートを別のサンプルトレイにセットした。サンプルトレイの温度は10℃に設定した。
1)シリンジ内部洗浄(溶媒1:50%メタノール水溶液)
2)シリンジ内部洗浄(溶媒2:MiliQ水)
3)サンプルシーケンスで指定されたウェルから第二物質(群)溶液 1μL吸引
4)エアー 0.5μL吸引
5)シリンジ外部洗浄(溶媒1:50%メタノール水溶液)
6)シリンジ外部洗浄(溶媒2:MiliQ水)
7)サンプルシーケンスで指定されたバイアルから第一物質(群)溶液 1μL吸引
8)インジェクションポートへ2.5μLインジェクト
9)シリンジ内部洗浄(溶媒1:50%メタノール水溶液)
10)シリンジ内部洗浄(溶媒2:MiliQ水)
9)インジェクションポート洗浄(溶媒1:50%メタノール水溶液)
10)インジェクションポート洗浄(溶媒2:MiliQ水)
ただし、第一物質溶液、第二物質溶液、および、エアーの容量は変更可能である。
(2)LCポンプ(Agilent1100)及びイオントラップ型質量分析計LCQdecaXPの構成
サイズ排除クロマトグラフィー用カラムTSKsuperSW2000をオートインジェクターのインジェクションバルブの出口ポートに接続し、カラムの下流側はTeeコネクター(ピークミキシングティー;ジーエルサイエンス株式会社)を経由してイオントラップ型質量分析計LCQdecaXPのESIプローブに接続した。また、LCポンプ(Agilent1100)のクォータナリーポンプ(Qポンプ)からのカラム平衡化溶液の送液ラインをオートサンプラーのインジェクションバルブの入り口ポートに接続し、バイナリポンプ(Bポンプ)からのコンディショニング溶液の送液ラインをTeeコネクターに接続した。そして、クォータナリーポンプからカラム平衡化溶液として10mM 酢酸アンモニウム水溶液を40μL/minで送液し、バイナリポンプ(Bポンプ)からコンディショニング溶液として、ポジティブイオンモード測定の場合には0.5%ギ酸/メタノール溶液、ネガティブイオンモード測定の場合には0.5%アンモニア/メタノール溶液を10μL/minで送液した。また、相互作用分析のpHを安定化させる必要がある場合には、クォータナリーポンプから送液する平衡化溶液の10mM 酢酸アンモニウム水溶液に、PIPES緩衝液、ADA緩衝液、HEPES緩衝液、Bis−Tris−塩酸緩衝液、あるいは、Tris−塩酸緩衝液(pH7.5)などの緩衝液を必要に応じて添加した。
上述したMixing−in−Columnメソッドを用いて、サンプルシーケンスで指定したウェルおよびバイアルから第2溶液と第1溶液とをこの順で連続自動注入した。すなわち、一例としては、オートインジェクターのシリンジで、第2溶液1μLの次に、0.5μLの空気からなる間隙試料を挟んで、第1溶液1μLを吸引した。次いで、シリンジに連続吸引された計2.5μLのサンプルをサンプルループに注入した後、インジェクションバルブを切り替えてインジェクションポートからサイズ排除クロマトグラフィー用カラムへ第2溶液−間隙試料−第1溶液の順で導入し、同時に、質量分析計での質量クロマトグラムの測定を開始した。所定時間の質量クロマトグラムの測定が終わると、サンプルシーケンスに従って、順次、次の第2溶液と第1溶液を同様に吸引し、相互作用分析の組み合わせ検定を実施した。ただし、第1溶液、第2溶液、および、エアーの容量は変更可能である。
(サンプル調製)
第1溶液として、タンパク質を次の組成で含有する水溶液を調製した。なお、以下の説明において、第1溶液に含まれる物質を第一物質と呼ぶ。
第一物質なし(Reference)
10mM ADA緩衝液(pH6.5)
100μM CaCl2
第1溶液(b);
第一物質Bovine Calmodulin
100μM Bovine Brain Calmodulin(Calbiochem;Code.208694)
100μM CaCl2
第1溶液(c);
第一物質Human FKBP12
100μM Human FKBP12
10mM ADA緩衝液(pH6.5)
第2溶液として、低分子化合物を次の組成で含有する水溶液を調製した。なお、以下の説明において、第2溶液に含まれる物質を第二物質と呼ぶ。
第二物質なし(Reference)
5% DMSO
50μM Cyanocobalamin(Reference)
第2溶液(b);
第二物質J−8
100μM J−8
50μM Cyanocobalamin(Reference)
5% DMSO
第2溶液(c);
第二物質FK506
50μM FK506
50μM Cyanocobalamin(Reference)
5% DMSO
(測定および結果)
上述した相互作用分析装置およびMixing−in−Columnメソッドを用いて、第2溶液と第1溶液とをこの順でTSKsuperSW2000に導入し、各化合物(第一物質及び第二物質)のマスクロマトグラムを測定した。その結果を図3−1〜−6及び4−1〜−3に示す。
(サンプル調製)
第一物質を含む第1溶液として、タンパク質を次の組成で含有する水溶液を調製した。
第一物質なし
500uM ADA緩衝液(pH6.5)
第1溶液(b);
第一物質Bovine Calmodulin
50μM Bovine Calmodulin
500μM ADA緩衝液(pH6.5)
100μM CaCl2
第1溶液(c);
第一物質Human Calmodulin
50μM Human Calmodulin
500μM ADA緩衝液(pH6.5)
100μM CaCl2
複数の第二物質(第二物質群)を含む第2溶液として、低分子化合物を次の組成で含有する水溶液を調製した。
第二物質群なし
5% DMSO
38種の第2溶液(b);(それぞれが5〜8個の化合物を多重化した第二物質群を含む38種の第2溶液)
第二物質群あり
各25μM 5〜8種類の化合物
5% DMSO
ここで、第2溶液(b)として、それぞれ5〜8個の化合物を第二物質群として含む38種の第2溶液(Multi02−001〜Multi02−038)を用いた。例えば、Multi02−001の第2溶液には、Muliti02−001A、001B、001C、001D、001E、001F、001G、001Hとコード番号が付された8個の化合物(第二物質)が各々25μM濃度で含有されており、これらが第二物質群を構成している。そのように290個の化合物(第二物質)を多重化して、Multi02−001〜Multi02−038の38種の第2溶液を調製した。
上述した相互作用分析装置及びMixing−in−Columnメソッドを用いて、第2溶液と第1溶液とをこの順でTSKsuperSW2000にそれぞれ1μLずつ導入し、各化合物(第一物質及び第二物質群)のマスクロマトグラムを測定した。クロマトグラムに差異が認められたケースのクロマトグラム結果を図5−1〜−4に示す。図5−1〜−4から分かるように、第二物質群に含まれる化合物のうちMulti02−022E、Multi02−023G、Multi02−026C、Multi02−038Gの4つの化合物において、Calmodulinを含まないコントロール(a)に比して、ウシ(b)およびヒト(c)のいずれのCalmodulinを第一物質として場合にも、特異的なマスクロマトグラムの変化が観測された。すなわち、これら4つの化合物に関するクロマトグラムは、Calmodulinを第一物質とした場合に立ち上がり(図5−1〜−5中破線で示す位置)が早まっていた。これは、カラム内においてCalmodulinが多重化された第二物質群を追い越し、その時にこれら4つの化合物がCalmodulinと相互作用した結果、カラムから早く溶出したことを示している。
相互作用分析装置
実施例2では、実施例1の装置構成を一部改変して、複数の第1溶液を注入するための装置構成とした。
オートインジェクターはHTC−PAL(CTC Analytics AG)を用い、10μL容量のサンプルループを用いる以外は、実施例1と同じ構成とした。
1)シリンジ内部洗浄(溶媒1:50%メタノール水溶液)
2)シリンジ内部洗浄(溶媒2:MiliQ水)
3)サンプルシーケンスで指定されたウェルから第二物質(群)溶液 1μL吸引
4)エアー 0.2μL吸引
5)シリンジ外部洗浄(溶媒1:50%メタノール水溶液)
6)シリンジ外部洗浄(溶媒2:MiliQ水)
7)サンプルシーケンスで指定されたバイアルから第一物質(群)溶液 1μL吸引
8)シーケンス4)〜7)を必要回数(n回)繰り返す。
10)シリンジ内部洗浄(溶媒1:50%メタノール水溶液)
11)シリンジ内部洗浄(溶媒2:MiliQ水)
12)インジェクションポート洗浄(溶媒1:50%メタノール水溶液)
13)インジェクションポート洗浄(溶媒2:MiliQ水)
ただし、第一物質溶液、第二物質溶液、および、エアーの容量は変更可能である。
〔測定例3〕実施例2のMixing−in−Columnメソッドを用いた複数タンパク質の相互作用分析
(サンプル調製)
第1溶液として、タンパク質を次の組成で含有する水溶液を調製した。なお、以下の説明において、第1溶液に含まれる物質を第一物質と呼ぶ。
第一物質なし(Reference)
10mM ADA緩衝液(pH6.5)、
100μM CaCl2
第1溶液(b);
第一物質Bovine Calmodulin
100μM Bovine Brain Calmodulin(CaM;Calbiochem社製)
100μM CaCl2
第1溶液(c);
第一物質Human FKBP12
100μM Human FKBP12
10mM ADA緩衝液(pH6.5)
第1溶液(d);
第一物質Human Serum Albumin
100μM Human Serum Albumin(HSA;Sigma社製)
10mM ADA緩衝液(pH6.5)
第二物質を含む第2溶液として、低分子化合物を次の組成で含有する水溶液を調製した。
第二物質なし(Reference)
5% DMSO
50μM Cyanocobalamin(Reference)
第2溶液(b);
第二物質J−8
100μM J−8
50μM Cyanocobalamin(Reference)
5% DMSO
第2溶液(c);
第二物質FK506
50μM FK506
50μM Cyanocobalamin(Reference)
5% DMSO
第2溶液(d);
第二物質Ascomycin
50μM Ascomycin
50μM Cyanocobalamin(Reference)
5% DMSO
(測定および結果)
実施例2に例示された装置およびMixing−in−Columnメソッドを用いて、第2溶液と複数の液体試料からなる第1溶液とをTSKsuperSW2000に導入し、各化合物(第一物質及び第二物質)のマスクロマトグラムを測定した。本例では以下の順序で各溶液を導入した。なお、各溶液の間には気体からなる間隙試料(エアー)を介在させた。
・第2溶液(c)→第1溶液(d)→第1溶液(d)
・第2溶液(c)→第1溶液(c)
・第2溶液(c)→第1溶液(c)→第1溶液(d)
・第2溶液(c)→第1溶液(d)→第1溶液(c)
測定結果を図6−1〜−5に示す。図6−1〜−5に示したように、FK506(第二物質)の次に、エアー、HSA、エアー及びHSAの順でカラムに導入した場合には、FK506の次に、エアー及びADA緩衝液を導入した場合と比べて変化が認められない。一方、FK506の次に、エアー、HSA、エアー及びFKBP12の順でカラムに導入した場合、及びFK506の次に、エアー、FKBP12、エアー及びHSAの順でカラムに導入した場合においては、FK506の次に、エアー及びFKBP12の順でカラムに導入した場合と同様にFK506のマスクロマトグラムにピーク(図6−3〜−5中矢印で示すピーク)が出現した。すなわち、導入された複数の液体試料のうちで、FKBP12を含む液体試料がカラム内でFK506を追い越した時に、FK506の一部がFKBP12と結合してタンパク質と共にカラムから溶出したことを示している。したがって、第2溶液に続いて複数の液体試料からなる第1溶液を順次導入した場合であっても、複数の液体試料のうちいずれかに第二物質と相互作用する物質が含まれていれば、その相互作用を検出できることが明らかとなった。
・第2溶液(b)→第1溶液(d)→第1溶液(d)
・第2溶液(b)→第1溶液(b)
・第2溶液(b)→第1溶液(b)→第1溶液(d)
・第2溶液(b)→第1溶液(d)→第1溶液(b)
測定結果を図7−1〜−3に示す。図7−1〜−3に示したように、J−8(第二物質)の次に、エアー、HSA、エアー及びHSAの順でカラムに導入した場合には、J−8の次に、エアー及びADA緩衝液を導入したした場合と比べて変化が認められない。一方、J−8の次に、エアー、HSA、エアー及びCaMの順でカラムに導入した場合、及びJ−8の次に、エアー、CaM、エアー及びHSAの順でカラムに導入した場合においては、J−8の次に、エアー及びCaMの順でカラムに導入した場合と同様にJ−8のマスクロマトグラムの立ち上がり(図7−1〜−3中矢印の位置)が早まった。これは、導入された複数の液体試料のうちで、Calmodulinを含む液体試料がカラム内でJ−8を追い越した時に、J−8の一部がCalmodulinと相互作用してカラムから早く溶出したことを示している。したがって、第2溶液に続いて複数の液体試料からなる第1溶液を順次導入した場合であっても、複数の液体試料のうちいずれかに第二物質と相互作用する物質が含まれていれば、その相互作用を検出できることがこの例からも明らかとなった。
・第2溶液(c)→第1溶液(d)→第1溶液(d)→第1溶液(d)
・第2溶液(c)→第1溶液(c)→第1溶液(d)→第1溶液(d)
・第2溶液(c)→第1溶液(d)→第1溶液(c)→第1溶液(d)
・第2溶液(c)→第1溶液(d)→第1溶液(d)→第1溶液(c)
測定結果を図8−1〜−5に示す。図8−1〜−5に示すように、FK506(第二物質)の次に、エアー、HSA、エアー、HSA、エアー及びHSAの順でカラムに導入した場合には、FK506の次に、エアー、ADA緩衝液、エアー、ADA緩衝液、エアー及びADA緩衝液の順で導入した場合と比べて変化が認められない。一方、三つの液体試料のうちいずれか一つにFK506(第二物質)と相互作用する物質が含まれている場合には、FK506のマスクロマトグラムにピーク(図8−3〜−5中矢印で示すピーク)が出現した。この結果からも、第2溶液に続いて複数の液体試料からなる第1溶液を順次導入した場合であっても、複数の液体試料のうちいずれかに第二物質と相互作用する物質が含まれていれば、その相互作用を検出できることが明らかとなった。
相互作用分析装置
実施例3では、図2−2に示したように、1次元目の分離流路(分離用カラム)の下流に2次元目の分離流路(相互作用解析用カラム)を配設し、第1溶液を第1インジェクターから1次元目の分離流路1に導入し、その1次元目の分離流路1からの溶出分画を第2インジェクターから導入される第2溶液とともに2次元目の分離流路1に導入し、その2次元目の分離流路1から溶出する第2溶液中に含まれる物質のクロマトグラムを検出して、第2溶液中の物質が1次元目のどの溶出分画と相互作用しているかを判定する相互作用分析装置を構築した。具体的に本例の相互作用分析装置は、1次元目の分離流路1としてサイズ排除クロマトグラフィー用カラムTSKsuperSW3000(カラムサイズ1.0IDx100mm;Tosoh Corporation社製)を備え、2次元目の分離流路1としてサイズ排除クロマトグラフィー用カラムTSKsuperSW2000(カラムサイズ1.0IDx30mm;Tosoh Corporation社製)を備える。また、本例の相互作用分析装置は、容器部3及び導入装置4としてオートインジェクター装置Waters2777サンプルマネージャー(CTC Analytics AG社製)及びLCポンプAgilent1100(Yokogawa Analytical Systems社製)及びMicro21LC(日本分光社製)を備える。さらに、本例の相互作用分析装置は、検出装置5としてイオントラップ型質量分析計LCQdecaXP(Thermoelectron社製)を備える。
オートインジェクター装置Waters2777(CTC Analytics AG)は、40μL容量のサンプルループが接続された第1インジェクターと10μL容量のサンプルループを接続した第2インジェクターの2つのインジェクターを備え、10μL容量のシリンジおよびクーリングユニット付きのサンプルトレイを備える。容量100μLのコニカルインサートを挿入した2mLスクリューバイアルに第1溶液を50μLずつ分注し、セプタム付きスクリューキャップを取り付けた後、54バイアル用ラックに並べてサンプルトレイの1つにセットした。また、第2溶液を各ウェルに40μLずつ分注しアルミシールで覆った384well−マイクロプレートを別のサンプルトレイにセットした。サンプルトレイの温度は10℃に設定した。
サンプル数が多い場合には、以下同様に、Inj1とInj2を交互に繰り返して、第1溶液の次に第2溶液をインジェクトするサンプルシーケンスを作成した。
(2)LCポンプ(Agilent1100)及びLCポンプ(micro21LC)及びイオントラップ型質量分析計LCQdecaXPの構成
LCポンプ(Agilent1100)のバイナリポンプ(Bポンプ)からのカラム平衡化溶液の送液ラインをオートインジェクターWaters2777の第1インジェクターの入り口ポートに接続した。また、1次元目のサイズ排除クロマトグラフィー用カラムTSKsuperSW3000(ID1.0x100mm)を第1インジェクターの出口ポートに接続し、カラムの下流側はNanotight Y Connector(Upchurch Scientific)の片方の入り口ポートに接続し、その出口ポートを2次元目のサイズ排除クロマトグラフィー用カラムTSKsuperSW2000(ID1.0x30mm)の上流のカラム端に接続した。一方、LCポンプ(Agilent1100)のクォータナリーポンプ(Qポンプ)からのカラム平衡化溶液の送液ラインを第2インジェクターの入り口ポートに接続し、その出口ポートからのラインを前記Nanotight Y Connector(Upchurch Scientific)のもう1つの入り口ポートに接続した。前記2次元目のサイズ排除クロマトグラフィー用カラムTSKsuperSW2000の下流側はTeeコネクター(ピークミキシングティー;ジーエルサイエンス株式会社)を経由してイオントラップ型質量分析計LCQdecaXPのESIプローブに接続した。そして、micro21Lc(日本分光)からのコンディショニング溶液の送液ラインをTeeコネクターに接続した。
上述した二次元のMixing−in−Column法を用いて、バイアルおよびサンプルウェルから第1溶液と第2溶液とをこの順で連続自動分注し、第2溶液中の物質のマスクロマトグラムを測定した。すなわち、一例としては、第1インジェクターから第1溶液を1次元目の分離流路1(分離用カラム)に注入した後、第2インジェクターから第2溶液を2次元目の分離流路1(相互作用解析用カラム)に一定の間隔で繰り返し注入した。その結果、第1溶液に含まれる物質がその物質特性に従って1次元目の分離流路1(分離用カラム)から所定の溶出時間で溶出し、第2インジェクター2から一定の間隔で繰り返しインジェクトされている第2溶液とNanotight Y Connectorで合流して2次元目の分離流路1(相互作用解析用カラム)に導入された。
(サンプル調製)
第一物質溶液として、タンパク質を次の組成で含有する水溶液を調製した。
10mM 酢酸アンモニウム水溶液(pH6.7)、
(b)第一物質Human Serum Albumin
100μM Human Serum Albumin(HSA;Sigma社製)
第二物質溶液として、低分子化合物を次の組成で含有する水溶液を調製した。
5% DMSO
(b)第二物質 Warfarin
100μM Warfarin
5% DMSO
(測定および結果)
実施例3に例示された装置および2次元のMixing−in−Columnメソッドを用いて、第一物質を第1インジェクターからTSKsuperSW3000(カラムサイズ1.0IDx100mm;Tosoh Corporation)に導入し、第二物質を第2インジェクターからTSKsuperSW2000(カラムサイズ1.0IDx30mm;Tosoh Corporation)に導入し、Warfarin化合物のマスクロマトグラムを測定した。結果を図10−1〜−6に示す。
Claims (27)
- 分離流路からの溶出時間が早い物質を含む第1溶液と、当該分離流路からの溶出時間が遅い物質を含む第2溶液とを、前記第1溶液の少なくとも一部を前記第2溶液の少なくとも一部よりも後に分離流路に導入する工程と、
上記分離流路から溶出する物質に関するクロマトグラムを検出する工程と
を含む相互作用分析方法。 - 検出したクロマトグラムと、第1溶液に含まれる物質及び/又は第2溶液に含まれる物質が他の物質と相互作用していない場合のクロマトグラムとを比較する工程を更に含み、
これらクロマトグラム間に差異が生じている場合には、第1溶液に含まれる物質と第2溶液に含まれる物質との間に相互作用が存在すると判定することを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。 - 前記分離流路が、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、金属キレートクロマトグラフィー、電気泳動管及び電気浸透流管からなる群から選ばれる少なくとも1のクロマトグラフィーであることを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。
- 前記クロマトグラムを、質量検出器、分光検出器、UV検出器、蛍光検出器、発光検出器、屈折検出器及び電気化学検出器からなる群から選ばれる少なくとも1の検出器で検出することを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。
- 前記第1溶液及び/又は前記第2溶液は、複数の物質を含むことを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。
- 前記クロマトグラムは、前記第1溶液及び/又は前記第2溶液に含まれる物質の質量に基づいて検出されるマスクロマトグラムであることを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。
- 前記第1溶液及び/又は前記第2溶液は複数の物質を含み、これら複数の物質に関する多重化されたクロマトグラムを検出することを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。
- 前記第1溶液及び前記第2溶液を異なる液量で分離流路に導入することを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。
- 前記第1溶液の分離流路に対する導入量と比較して前記第2溶液の導入量を2倍以上とすることを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。
- 分離流路に前記第1溶液の少なくとも一部を前記第2溶液の少なくとも一部よりも後に分離流路に導入する工程では、第2溶液の導入後、第1溶液の導入前に、気体又は液体の間隙試料を導入することを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。
- 前記第1溶液及び/又は前記第2溶液は複数の液体試料からなり、これら複数の液体試料を連続して導入することを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。
- 前記分離流路がn次元(n≧2、整数)で構成され、(m−1)次元の分離流路(2≦m≦n、整数)から溶出した分画をm次元目の分離流路に導入する工程をm=2からm=nまで繰り返し、
上記クロマトグラムを検出する工程では、n次元の分離流路から溶出する物質に関するクロマトグラムを検出することを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。 - (m−1)次元の分離流路から溶出した分画に前記第1溶液に含まれる物質が含まれている場合には、m次元の分離流路に第2溶液を導入した後に当該分画を導入し、
(m−1)次元の分離流路から溶出した分画に前記第2溶液に含まれる物質が含まれている場合には、m次元の分離流路に第1溶液を導入する前に当該分画を導入することを特徴とする請求項12記載の相互作用分析方法。 - (m−1)次元の分離流路から溶出した分画に前記第1溶液に含まれる物質が含まれている場合には、m次元の分離流路に第2溶液を所定の間隔で導入するとともに当該分画を導入し、
(m−1)次元の分離流路から溶出した分画に前記第2溶液に含まれる物質が含まれている場合には、m次元の分離流路に第1溶液を所定の間隔で導入するとともに当該分画を導入することを特徴とする請求項12記載の相互作用分析方法。 - 前記第1溶液の少なくとも一部を前記第2溶液の少なくとも一部よりも後に分離流路に導入する工程では、前記第1溶液及び前記第2溶液の導入量が10μL以下であることを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。
- 前記第1溶液の少なくとも一部を前記第2溶液の少なくとも一部よりも後に分離流路に導入する工程では、前記第1溶液及び前記第2溶液の導入量が3μL以下であることを特徴とする請求項1記載の相互作用分析方法。
- 溶液に含まれる物質群を分離して溶出する分離流路を有する分離装置と、
前記分離流路からの溶出時間が早い物質を含む第1溶液及び前記分離流路からの溶出時間が遅い物質を含む第2溶液と有する容器部と、
前記容器部から前記分離流路に対して、前記第1溶液の少なくとも一部を前記第2溶液の少なくとも一部よりも後に分離流路に導入する導入装置と、
少なくとも前記導入装置の駆動制御を行う制御装置とを備え、
前記制御装置は、分離流路に第2溶液及び第1溶液の順で導入するように前記導入装置を制御することを特徴とする相互作用分析装置。 - 前記分離流路から溶出した物質のクロマトグラムを検出する検出装置を更に備えることを特徴とする請求項17記載の相互作用分析装置。
- 前記分離装置は、サイズ排除クロマトグラフィー装置、イオン交換クロマトグラフィー装置、アフィニティークロマトグラフィー装置、吸着クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー装置、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー装置、金属キレートクロマトグラフィー装置、電気泳動管装置及び電気浸透流管装置からなる群から選ばれる少なくとも1のクロマトグラフィー装置であることを特徴とする請求項17記載の相互作用分析装置。
- 前記検出装置は、質量検出器、分光検出器、UV検出器、蛍光検出器、発光検出器、屈折検出器及び電気化学検出器からなる群から選ばれる少なくとも1の検出器であることを特徴とする請求項18記載の相互作用分析方法。
- 前記制御装置は、第2溶液の導入後、第1溶液の導入前に、気体又は液体の間隙試料を導入するように前記導入装置を制御することを特徴とする請求項17記載の相互作用分析装置
- 前記容器部は、複数の第1溶液及び/又は複数の第2溶液を備えることを特徴とする請求項17記載の相互作用分析装置。
- 前記分離装置はn次元(n≧2、整数)で構成された分離流路を有し、
前記制御装置は、(m−1)次元の分離流路(2≦m≦n、整数)から溶出した分画をm次元目の分離流路に導入する工程をm=2からm=nまで繰り返すように制御することを特徴とする請求項17記載の相互作用分析装置。 - 前記制御装置は、(m−1)次元の分離流路から溶出した分画に前記第1溶液に含まれる物質が含まれている場合には、m次元の分離流路に第2溶液を導入した後に当該分画を導入し、(m−1)次元の分離流路から溶出した分画に前記第2溶液に含まれる物質が含まれている場合には、m次元の分離流路に第1溶液を導入する前に当該分画を導入するように制御することを特徴とする請求項23記載の相互作用分析装置。
- 前記制御装置は、(m−1)次元の分離流路から溶出した分画に前記第1溶液に含まれる物質が含まれている場合には、m次元の分離流路に第2溶液を所定の間隔で導入するとともに当該分画を導入し、
(m−1)次元の分離流路から溶出した分画に前記第2溶液に含まれる物質が含まれている場合には、m次元の分離流路に第1溶液を所定の間隔で導入するとともに当該分画を導入するように制御することを特徴とする請求項23記載の相互作用分析装置。 - 前記第1溶液及び前記第2溶液の導入量が10μL以下であることを特徴とする請求項17記載の相互作用分析装置。
- 前記第1溶液及び前記第2溶液の導入量が3μL以下であることを特徴とする請求項17記載の相互作用分析方法。
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