JPWO2004091660A1

JPWO2004091660A1 - Ｌｋｌｆ／ｋｌｆ２遺伝子発現促進剤

Info

Publication number: JPWO2004091660A1
Application number: JP2005505426A
Authority: JP
Inventors: 児玉　龍彦; 龍彦児玉; 滋森川
Original assignee: Kowa Co Ltd; Nissan Chemical Corp
Current assignee: Kowa Co Ltd; Nissan Chemical Corp
Priority date: 2003-04-17
Filing date: 2004-04-14
Publication date: 2006-07-06
Anticipated expiration: 2024-04-14
Also published as: EP1614429A1; TW200505482A; EP1614429A4; WO2004091660A1; JP4719572B2; US20060276486A1

Abstract

１．本発明は、メバロン酸代謝経路を阻害する物質の有効量を投与することを特徴とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法に関する。

Description

本発明は、血管に関連する疾患、例えば糖尿病、労作狭心症、不安定狭心症、安静狭心症、心筋梗塞、粥状動脈硬化症、血管内皮機能障害、ＰＴＣＡ後の再狭窄、過敏性肺炎、間質性肺炎、気道狭窄、気道閉塞、眼底出血（網膜静脈閉塞症、飛蚊症等）、脳血管性痴呆、脳梗塞、脳出血、くも膜下出血、痔等の治療・症状緩和に有用な、クルッペルライクファクター２（ｌｕｎｇＫｒｕｐｐｅｌ−ｌｉｋｅｆａｃｔｏｒ／ＫＬＦ２、以下ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２と略す）遺伝子発現促進剤に関する。

ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２は、プロリン繰り返し配列、活性部位、核内局在シグナル、及びジンクフィンガー部分の構造を有する転写調節因子蛋白質である（ＫｏｚｙｒｅｖＳＶらＦＥＢＳＬｅｔｔ．１９９９Ａｐｒ１；４４８（１）：１４９−５２）。ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２の作用としては、血球の分化に重要であること（ＫｕｏＣＴらＧｅｎｅｓＤｅｖ．１９９７１１（２２）：２９９６−３００６、ＡｎｄｅｒｓｏｎＫＰらＭｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．１９９５１５（１１）：５９５７−６５）や、血管内皮細胞と平滑筋細胞の重要な情報伝達因子であること（ＭｏｎａｊｅｍｉＨらＴｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．２００１８６（１）：４０４−１２）、また、Ｔｃｅｌｌの増殖を抑制し、細胞の大きさや蛋白合成を抑制し、細胞表面の活性因子を減少させること（ＢｕｃｋｌｅｙＡＦらＮａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１２（８）：６９８−７０４）、さらには血管の安定化に必須であること（ＫｕｏＣＴらＧｅｎｅｓＤｅｖ．１９９７１１（２２）：２９９６−３００６）等が知られている。
一方、粥状動脈硬化症の初期病変は、血流が大きく変化する血管の湾曲部や分岐部に高発することが知られている。その発生原因として、血流の血管内皮に及ぼす剪断応力（ｓｈｅａｒｓｔｒｅｓｓ）が関与しているといわれているが、最近の報告によると、ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２はｓｈｅａｒｓｔｒｅｓｓにより血管内皮細胞から発現し（ＤｅｋｋｅｒＲＪらＢｌｏｏｄ２００２１００（５）：１６８９−９８）、粥状動脈硬化症の発生に対して抑制的に関わることが指摘されている（ＫａｒｉｎＡｒｋｅｎｂｏｕｔＥらＴｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．２００３８９（３）：５２２−９）。このように、血管内皮細胞から発現するＬＫＬＦ／ＫＬＦ２は、血管由来の病変に対して抑制的に作用することが推測される。
従って、ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子の発現を促進することにより、動脈硬化症をはじめとする、血管に関連する疾患の症状の緩和、あるいは治療ができることが期待されるが、これまで、ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子の発現を促進する物質は、生理的なものも含めて全く知られていない。

本発明の目的は、血管に関連する疾患、例えば糖尿病、労作狭心症、不安定狭心症、安静狭心症、心筋梗塞、粥状動脈硬化症、血管内皮機能障害、ＰＴＣＡ後の再狭窄、過敏性肺炎、間質性肺炎、気道狭窄、気道閉塞、眼底出血（網膜静脈閉塞症、飛蚊症等）、脳血管性痴呆、脳梗塞、脳出血、くも膜下出血、痔等の治療・症状緩和に有効なＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤を提供することにある。
そこで本発明者らは、ヒトの培養細胞系を用いてＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現に影響を及ぼす物質を探索した結果、全く意外にもメバロン酸代謝経路を阻害する物質が、ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子の発現を促進する作用を有することを見出し、本発明を完成した。
また、本発明者らは上記メバロン酸代謝経路を阻害する物質の内、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤として知られている後記一般式（１）で表される化合物、そのラクトン体又はそれらの塩、特にピタバスタチンカルシウムが、ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子の発現を促進する作用を有することを見出した。
さらに、本発明者らはメバロン酸代謝経路を阻害する物質の内、ＦＴＩ−２７６等のファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤やＧＧＴＩ−２８６等のゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ阻害剤、あるいはＴｃｄＢ（ＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅＴｏｘｉｎＢ）等のグルコシルトランスフェラーゼにもＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進作用を有することを見出した。
すなわち、本発明は、メバロン酸代謝経路を阻害する物質を有効成分とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤を提供するものである。
また、本発明は、一般式（１）

（式中、Ｒ^１は有機基を示し、Ｘは−ＣＨ_２ＣＨ_２−又は−ＣＨ＝ＣＨ−を示し、Ｒ^２は水素原子又はアルキル基示す。）
で表される化合物、そのラクトン体又はそれらの塩を有効成分とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤を提供するものである。
また、本発明は、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤を有効成分とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤を提供するものである。
また、本発明は、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ阻害剤を有効成分とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤を提供するものである。
また、本発明は、グルコシルトランスフェラーゼを有効成分とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤を提供するものである。
また、本発明は、ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤製造のためのメバロン酸代謝経を阻害する物質の使用を提供するものである。
また、本発明は上記一般式（１）で表される化合物、そのラクトン体又はそれらの塩の、ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤製造のための使用を提供するものである。
また、本発明は、ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤製造のためのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤の使用を提供するものである。
また、本発明は、ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤製造のためのゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ阻害剤の使用を提供するものである。
また、本発明は、ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤製造のためのグルコシルトランスフェラーゼの使用を提供するものである。
また、本発明は、メバロン酸代謝経路を阻害する物質の有効量を投与することを特徴とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法を提供するものである。
また、本発明は上記一般式（１）で表される化合物、そのラクトン体又はそれらの塩の有効量を投与することを特徴とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法を提供するものである。
また、本発明は、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤の有効量を投与することを特徴とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法を提供するものである。
また、本発明は、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ阻害剤の有効量を投与することを特徴とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法を提供するものである。
さらにまた、本発明は、グルコシルトランスフェラーゼの有効量を投与することを特徴とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法を提供するものである。
本発明によれば、血管に関連する疾患、例えば糖尿病、労作狭心症、不安定狭心症、安静狭心症、心筋梗塞、粥状動脈硬化症、血管内皮機能障害、ＰＴＣＡ後の再狭窄、過敏性肺炎、間質性肺炎、気道狭窄、気道閉塞、眼底出血（網膜静脈閉塞症、飛蚊症等）、脳血管性痴呆、脳梗塞、脳出血、くも膜下出血、痔等の治療・症状緩和に有効なＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法を提供することができる。

図１は、ピタバスタチンカルシウムのＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子の発現を示す図である。
図２は、ピタバスタチンカルシウムのＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現に対するメバロン酸及びその各種代謝物の影響を示す図である。
図３は、メバロン酸代謝経路を阻害する物質のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現を示す図である。
図４は、メバロン酸代謝経路を阻害する物質のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現に対する濃度依存性を示す図である。

本発明で使用するメバロン酸代謝経路を阻害する物質とは、アセチル−ＣｏＡ→アセトアセチル−ＣｏＡ→ＨＭＧ−ＣｏＡ→メバロン酸→メバロニル−５−リン酸→メバロニル−５−ピロリン酸→イソペンテニルピロリン酸→ゲラニルピロリン酸→ファルネシルピロリン酸→スクアレン→スクアレンエポキシド→ラノステロール→（デスモステロール又はラソステロール）→コレステロールの主経路の他、（イソペンテニルピロリン酸又はファルネシルピロリン酸）→ゲラニルゲラニルピロリン酸→ゲラニルゲラニル化タンパク質群（例えば、ＲｈｏＡＢ、Ｒａｐｌａ、Ｒａｃ、Ｃｄｃ４２等のＲｈｏタンパク質ファミリー等）の経路、及び、ファルネシルピロリン酸→ファルネシル化タンパク質群（例えば、Ｒａｓ、ＲｈｏＢ等）の経路を含む、メバロン酸代謝に関わるあらゆる代謝経路を阻害する物質が含まれる。このうち、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ阻害剤、グルコシルトランスフェラーゼが好ましく、中でもＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、特にピタバスタチンまたはその塩が最も好ましい。
本発明で使用する一般式（１）で表される化合物、そのラクトン体又はそれらの塩は、高脂血症治療薬として有用なＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤として知られている化合物である。
一般式（１）で表される化合物のＲ^１で示される有機基は、置換基を有していてもよい環構造を有する有機基が好ましい。
環構造を有する有機基としては、インドリル基、インデニル基、ピリジル基、ピロロピリジル基、ピラゾロピリジル基、チエノピリジル基、ピリミジル基、ピラゾリル基、ピロリル基、イミダゾリル基、インドリジル基、キノリル基、ナフチル基、ヘキサヒドロナフチル基、シクロヘキシル基、フェニルシリルフェニル基、フェニルチエニル基又はフェニルフリル基が挙げられ、特にヘキサヒドロナフチル基、インドリル基、ピリジル基、ピリミジル基、ピロリル基又はキノリル基が好ましい。
これらの環構造を有する有機基に置換していてもよい置換基としては、ヒドロキシ基、直鎖、分岐鎖又は環状のアルキル基、アルキルオキシアルキル基、アルキルカルボニルオキシ基、アルキル置換アミノ基、置換アルキルスルホニルアミノ基、置換フェニルスルホニルアミノ基、アルキル、フェニル等が１個又は２個置換していてもよいカルバモイル基、ハロフェニル基、アルキルフェニル基、アルコキシフェニル基、フェニル基、オキソ基等が挙げられる。
これらの環構造を有する有機基に置換してもよい置換基のうち、炭素数１〜６の直鎖、分岐鎖又は環状アルキル基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基、炭素数１〜４のアシルオキシ基、炭素数１〜４のアルキル置換アミノ基、炭素数１〜４のアルキル置換炭素数１〜４のアルキルスルホニルアミノ基、炭素数１〜４のアルキル置換フェニルスルホニルアミノ基、炭素数１〜４のアルキル置換カルバモイル基、フェニル置換カルバモイル基、フルオロフェニル基、ブロモフェニル基、ヨードフェニル基、メチルフェニル基、エチルフェニル基、メトキシフェニル基、エトキシフェニル基又はフェニル基が好ましく、特にイソプロピル基、シクロプロピル基又はｐ−フルオロフェニル基が好ましい。
Ｒ^１で示されるアルキル基としては、炭素数１〜６の直鎖、分岐鎖又は環状アルキル基が挙げられる。
ラクトン体は、対応する一般式（１）で表される化合物を、常法、例えば酸性条件下にラクトン化することにより得られる。
一般式（１）で表される化合物及びそのラクトン体の塩は、生理学的に許容し得る塩であって、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、フェネチルアミン塩等の有機アミン塩又はアンモニウム塩等が挙げられるが、ナトリウム塩、カルシウム塩がより好ましい。
これらの化合物は、例えば米国特許第４，７３９，０７３号及びヨーロッパ特許出願公開第１１４，０２７号；ヨーロッパ特許出願公開第３６７，８９５号；米国特許第５，００１，２５５号、第４，６１３，６１０号、第４，８５１，４２７号、第４，７５５，６０６号、第４，８０８，６０７号、第４，７５１，２３５号、第４，９３９，１５９号、第４，８２２，７９９号、第４，８０４，６７９号、第４，８７６，２８０号、第４，８２９，０８１号、第４，９２７，８５１号、第４，５８８，７１５号；及びＦ．Ｇ．Ｋａｔｈａｗａｌａ，ＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＲｅｖｉｅｗｓ，１１，１２１−１４６（１９９１）、ヨーロッパ特許出願公開第３０４，０６３号；ヨーロッパ特許出願公開第３３０，０５７号、米国特許第５，０２６，７０８号、第４，８６８，１８５号；ヨーロッパ特許出願公開第３２４，３４７号；ヨーロッパ特許出願公開第３００，２７８号；米国特許第５，０１３，７４９号、第５，８７２，１３０号、第５，８５６，３３６号、米国特許第４，２３１，９３８号、米国特許第４，４４４，７８４号、米国特許第４，３４６，２２７号、米国特許第５，３５４，７７２号、米国特許第５，２７３，９９５号、米国特許第５，１７７，０８０号、米国特許第３，９８３，１４０号、日本国特許第２，６４８，８９７号、米国特許第５，２６０，４４０号、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，５，４３７，（１９７７）、日本国特許第２，５６９，７４６号、ヨーロッパ特許第３０４，０６３号、米国特許第５，８５６，３３６号等に記載されている。
本発明のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法の有効成分としては、ロバスタチン（米国特許第４，２３１，９３８号：（＋）−（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−３，７−ジメチル−８−［２−［（２Ｒ，４Ｒ）−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル］エチル］−１−ナフチル（Ｓ）−２−メチルブチレート）、シンバスタチン（米国特許第４，４４４，７８４号：（＋）−（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−３，７−ジメチル−８−［２−［（２Ｒ，４Ｒ）−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル］エチル］−１−ナフチル２，２−ジメチルブタノエート）、プラバスタチン（米国特許第４，３４６，２２７号：（＋）−（３Ｒ，５Ｒ）−３，５−ジヒドロキシ−７−［（１Ｓ，２Ｓ，６Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−６−ヒドロキシ−２−メチル−８−［（Ｓ）−２−メチルブチリルオキシ］−１，２，６，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−１−ナフチル］ヘプタン酸）、フルバスタチン（米国特許第５，３５４，７７２号：（３ＲＳ，５ＳＲ，６Ｅ）−７−［３−（４−フルオロフェニル）−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸）、アトルバスタチン（米国特許第５，２７３，９９５号：（３Ｒ，５Ｒ）−７−［２−（４−フルオロフェニル）−５−イソプロピル−３−フェニル−４−フェニルカルバモイル−１Ｈ−ピロル−１−イル］−３，５−ジヒドロキシヘプタン酸）、セリバスタチン（米国特許第５，１７７，０８０号：（３Ｒ，５Ｓ）−エリスロ−（Ｅ）−７−［４−（４−フルオロフェニル）−２，６−ジイソプロピル−５−メトキシメチル−ピリジン−３−イル］−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸）、メバスタチン（米国特許第３，９８３，１４０号：（＋）−（１Ｓ，３Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，８ａＲ）−１，２，３，７，８，８ａ−ヘキサヒドロ−７−メチル−８−［２−［（２Ｒ，４Ｒ）−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル］エチル］−１−ナフチル（Ｓ）−２−メチルブチレート）、ロスバスタチン（米国特許第５，２６０，４４０号、日本国特許第２，６４８，８９７号：７−［４−（４−フルオロフェニル）−６−イソプロピル−２−（Ｎ−メチル−Ｎ−メタンスルホニルアミノピリミジン）−５−イル］−（３Ｒ，５Ｓ）−ジヒドロキシ−（Ｅ）−６−ヘプテン酸）、ピタバスタチン（米国特許第５，８５６，３３６号、日本国特許第２，５６９，７４６号：（３Ｒ，５Ｓ，６Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル］−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸、又はそれらの塩等が好ましく、特にピタバスタチン又はその塩が好ましい。
本発明で使用するファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤としては、ＦＴＩ−２７６、ＦＴＩ−２７７、ＦＰＴＩｎｈｉｂｉｔｏｒＩ、ＦＰＴＩｎｈｉｂｉｔｏｒＩＩ、ＦＰＴＩｎｈｉｂｉｔｏｒＩＩＩ、ＦＴａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒＩ、ＦＴａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒＩＩ、ＦＴａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒＩＩＩ、ＦＴａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒＩＶ（いずれもＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）等が挙げられる。
また、本発明で使用するゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ阻害剤としては、ＧＧＴＩ−２８６、ＧＧＴＩ−２８７、ＧＧＴＩ−２９７、ＧＧＴＩ−２９８、ＧＧＴＩ−２１３３、ＧＧＴＩ−２１４７（いずれもＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ社製）等が挙げられる。
また、本発明で使用するグルコシルトランスフェラーゼとしては、ＴｃｄＢ（ＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅＴｏｘｉｎＢ）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｓｏｒｄｅｌｌｉｉｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｔｏｘｉｎ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｓｏｒｄｅｌｌｉｉｌｅｔｈａｌｔｏｘｉｎ（いずれもＳｉｇｍａ社製）等が挙げられる。
本発明のメバロン酸代謝経路を阻害する物質、中でも前記化合物（１）、そのラクトン体及び該化合物又はラクトン体の塩、あるいはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ阻害剤及びグルコシルトランスフェラーゼ等は、ヒト細胞においてＬＫＬＦ／ＫＬＦ２のｍＲＮＡの発現を有意に促進するので、本発明のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法に有用であり、ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２が関与する疾患の処置、特に血管に関連する疾患の処置に有用である。
またメバロン酸代謝経路を阻害する物質、中でも前記化合物（１）、そのラクトン体及び該化合物又はラクトン体の塩、あるいはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ阻害剤及びグルコシルトランスフェラーゼ等を用いれば、ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２が関与する実験系の開発、新規な医薬のスクリーニング等が可能となる。
本発明におけるメバロン酸代謝経路を阻害する物質、中でも前記化合物（１）、そのラクトン体及び該化合物又はラクトン体の塩、あるいはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ阻害剤及びグルコシルトランスフェラーゼ等の投与経路としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は静脈内注射剤、筋肉内注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤等による非経口投与が挙げられる。
またこのような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、この有効成分を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を１種又はそれ以上と適宜組み合わせて用いることができる。
これらの投与経路のうち、経口投与が特に好ましい。
例えば前記化合物（１）の経口投与用製剤の調製にあたっては、有効成分の安定性を考慮してｐＨを調整（特開平２−６４０６号、日本国特許第２，７７４，０３７号、ＷＯ９７／２３２００号等）するのが好ましい。
これらの医薬の投与量は、患者の体重、年齢、性別、症状等によって異なるが、通常成人の場合、有効成分を一般式（１）で表される化合物として、一日０．０１〜１０００ｍｇ、特に０．１〜１００ｍｇを、１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。

以下に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

正常ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を３×１０^５ｃｅｌｌｓ／１０ｃｍｄｉｓｈに蒔いた２日後に、ピタバスタチンカルシウム（図中Ｐｉｔと表示）を１．１μｍｏｌ／Ｌになるように添加した。コントロールには、ピタバスタチンカルシウムの溶媒であるジメチルスルホキシド（終濃度０．００６６ｖ／ｖ％）を添加した。添加後８時間後に、「ＩＳＯＧＥＮ」（商標名、日本ジーン社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。以下の操作は、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社の使用手順書に従った。すなわち、得られた全ＲＮＡより常法に従い、ｍＲＮＡを精製し、これを元にｃＤＮＡを合成した。さらにｉｎｖｉｔｒｏ転写によりビオチン標識ｃＲＮＡを合成し、精製した後、熱処理により断片化し、遺伝子発現解析に用いるための断片化ｃＲＮＡを調整した。
遺伝子発現解析方法：断片化ｃＲＮＡを、「ＨｕｍａｎＧｅｎｏｍｅＦｏｃｕｓＡｒｒａｙ」（商標名、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）に注入し、４５℃、１６時間ハイブリダイゼーションを行った。洗浄後、フィコエリスリン標識したストレプトアビジン及びビオチン化ストレプトアビジン抗体による染色を施し、「ＧｅｎｅＣｈｉｐ^ＴＮ用スキャナー」（商標名、ＨｅｗｌｅｔｔＰａｃｋａｒｄ製）にて遺伝子発現情報を取り込んだ。得られた情報はＧＥＮＥＣＨＩＰＳＯＦＴＷＡＲＥ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）にて解析し、発現量を比較した。
測定結果を図１に示す。
ＨＵＶＥＣにおいて、サンプル添加８時間後のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子の発現は、コントロールでは発現量で２７１であるのに対し、ピタバスタチンカルシウム添加群では７６１と有意に促進された。また、このピタバスタチンカルシウム添加の効果は、ゲラニルゲラニルピロリン酸（ＧＧＰＰ）１０μＭの添加によって３５５まで減少した。従って、その作用機序としてＲｈｏ因子ファミリーが関与していることが示唆された。

正常ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を６×１０^４ｃｅｌｌｓ／６ｗｅｌｌｐｌａｔｅに蒔いた４日後に、ピタバスタチンカルシウム（１μｍｏｌ／Ｌ、図中Ｐｉｔと表示）及び、メバロン酸（１００μｍｏｌ／Ｌ、図中ＭＶＡと表示）、ファルネシルピロリン酸（１０μｍｏｌ／Ｌ、図中ＦＰＰと表示）、ゲラニルゲラニルピロリン酸（１０μｍｏｌ／Ｌ、図中ＧＧＰＰと表示）またはコレステロール（１０μｍｏｌ／Ｌ、図中Ｃｈｏと表示）のメバロン酸及びその各種代謝物を添加した。なおコントロールとして、薬物無添加群（終濃度０．１％のＤＭＳＯ）を、対照群としてピタバスタチンカルシウム（１μｍｏｌ／Ｌ）単独添加群も用意した。各薬物添加８時間後に「ＩＳＯＧＥＮ」（商標名、日本ジーン社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。得られた全ＲＮＡから逆転写酵素を用いてＤＮＡを合成し、以下のプライマーを用いてＡＢＩＰＲＩＳＭ７０００ＳｅｑｕｅｎｃｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で測定した。Ｋｒｕｐｐｅｌ−ｌｉｋｅｆａｃｔｏｒ２（ＫＬＦ２）：ｔｈｅｆｏｒｗａｒｄｐｒｉｍｅｒ（ＴＣＴＣＴＣＣＣＡＣＣＧＧＧＴＣＴＡＣＡＣ：配列番号１）；ｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｐｒｉｍｅｒ（ＧＣＡＧＡＣＡＧＴＡＣＡＡＡＴＴＡＡＧＧＣＣＣＴＴＡ：配列番号２）ａｎｄｔｈｅＴａｑＭａｎｐｒｏｂｅ（ＡＧＡＧＧＡＴＣＧＡＧＧＣＴＴＧＴＧＡＴＧＣＣＴＴＧＴ：配列番号３）。内部標準：ｔｈｅｆｏｒｗａｒｄｐｒｉｍｅｒ（ＧＣＴＧＧＡＡＧＴＡＣＣＡＧＧＣＡＧＴＧＡ：配列番号４）；ｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｐｒｉｍｅｒ（ＴＣＣＧＧＴＡＧＴＧＧＡＴＣＴＴＧＧＣＴＴＴ：配列番号５）ａｎｄｔｈｅＴａｑＭａｎｐｒｏｂｅ（ＴＣＴＴＴＣＣＴＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＡＧＧＧＴＧＧＣＴ：配列番号６）。
結果を図２に示す。ピタバスタチンカルシウム単独添加群では、対薬物無添加群比６９３％のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現の増加が見られた。この増加は、メバロン酸、ファルネシルピロリン酸、ゲラニルゲラニルピロリン酸の添加により、減少したが、コレステロールには影響されなかった。従って、ピタバスタチンカルシウムによるＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現の促進は、メバロン酸代謝経路の中でも、最終産物であるコレステロール以外の中間産物により減少することが判明した。

正常ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を６×１０^４ｃｅｌｌｓ／６ｗｅｌｌｐｌａｔｅに蒔いた４日後に、ピタバスタチンカルシウム（１μｍｏｌ／Ｌ、図中Ｐｉｔと表示）、ＦＴＩ−２７６（１０μｍｏｌ／Ｌ、図中ＦＴＩと表示）、ＧＧＴＩ−２８６（１０μｍｏｌ／Ｌ、図中ＧＧＴＩと表示）、ＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅＴｏｘｉｎＢ（５０ｎｇ／ｍｌ、図中ＴｃｄＢと表示）の各薬物、及びコントロールとしてＤＭＳＯ（終濃度０．１％）を添加した。添加２４時間後に「ＩＳＯＧＥＮ」（商標名、日本ジーン社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。測定は実施例２と同様に行った。
結果を図３に示す。メバロン酸代謝経路を阻害する各薬物はＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現に対し、いずれもコントロール比５４４％〜２１５７％と強い発現促進作用を示した。

正常ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を６×１０^４ｃｅｌｌｓ／６ｗｅｌｌｐｌａｔｅに蒔いた４日後に、ピタバスタチンカルシウム（０．１，１，１０μｍｏｌ／Ｌ、図中Ｐｉｔと表示）、ＦＴＩ−２７６（０．１，１，１０μｍｏｌ／Ｌ、図中ＦＴＩと表示）、ＧＧＴＩ−２８６（０．１，１，１０μｍｏｌ／Ｌ、図中ＧＧＴＩと表示）の各薬物、及びコントロールとしてＤＭＳＯ（終濃度０．１％）を添加した。添加８時間後及び２４時間後に「ＩＳＯＧＥＮ」（商標名、日本ジーン社製）を用いて全ＲＮＡを抽出した。測定は実施例２と同様に行った。
図４に示すごとく、メバロン酸代謝経路を阻害する各薬物はＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現に対し、いずれも濃度依存的な促進作用があることが判明した。

【配列表】

Claims

メバロン酸代謝経路を阻害する物質を有効成分とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤。
メバロン酸代謝経路を阻害する物質が次の一般式（１）

（式中、Ｒ^１は有機基を示し、Ｘは−ＣＨ_２ＣＨ_２−又は−ＣＨ＝ＣＨ−を示し、Ｒ^２は水素原子又はアルキル基示す）
で表される化合物、そのラクトン体又はそれらの塩である請求項１記載のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤。
Ｒ^１が、置換基を有していてもよいインドリル基、インデニル基、ピリジル基、ピロロピリジル基、ピラゾロピリジル基、チエノピリジル基、ピリミジル基、ピラゾリル基、ピロリル基、イミダゾリル基、インドリジル基、キノリル基、ナフチル基、ヘキサヒドロナフチル基、シクロヘキシル基、フェニルシリルフェニル基、フェニルチエニル基又はフェニルフリル基である請求項２記載のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤。
有効成分が、ロバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン又はそれらの塩である請求項２記載のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤。
有効成分が、ピタバスタチン又はその塩である請求項２記載のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤。
メバロン酸代謝経路を阻害する物質がファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤である請求項１記載のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤。
メバロン酸代謝経路を阻害する物質がゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ阻害剤である請求項１記載のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤。
メバロン酸代謝経路を阻害する物質がグルコシルトランスフェラーゼである請求項１記載のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤。
ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤製造のためのメバロン酸代謝経路を阻害する物質の使用。
一般式（１）

（式中、Ｒ^１は有機基を示し、Ｘは−ＣＨ_２ＣＨ_２−又は−ＣＨ＝ＣＨ−を示し、Ｒ^２は水素原子又はアルキル基示す）
で表される化合物、そのラクトン体又はそれらの塩のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤製造のための使用。
Ｒ^１が、置換基を有していてもよいインドリル基、インデニル基、ピリジル基、ピロロピリジル基、ピラゾロピリジル基、チエノピリジル基、ピリミジル基、ピラゾリル基、ピロリル基、イミダゾリル基、インドリジル基、キノリル基、ナフチル基、ヘキサヒドロナフチル基、シクロヘキシル基、フェニルシリルフェニル基、フェニルチエニル基又はフェニルフリル基である請求項１０記載の使用。
有効成分が、ロバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン又はそれらの塩である請求項１０記載の使用。
有効成分が、ピタバスタチン又はその塩である請求項１０記載の使用。
ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤製造のためのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤の使用。
ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤製造のためのゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ阻害剤の使用。
ＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進剤製造のためのグルコシルトランスフェラーゼの使用。
メバロン酸代謝経路を阻害する物質の有効量を投与することを特徴とするＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法。
メバロン酸代謝経路を阻害する物質が次の一般式（１）

（式中、Ｒ^１は有機基を示し、Ｘは−ＣＨ_２ＣＨ_２−又は−ＣＨ＝ＣＨ−を示し、Ｒ^２は水素原子又はアルキル基示す）
で表される化合物、そのラクトン体又はそれらの塩である請求項１７記載のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法。
Ｒ^１が、置換基を有していてもよいインドリル基、インデニル基、ピリジル基、ピロロピリジル基、ピラゾロピリジル基、チエノピリジル基、ピリミジル基、ピラゾリル基、ピロリル基、イミダゾリル基、インドリジル基、キノリル基、ナフチル基、ヘキサヒドロナフチル基、シクロヘキシル基、フェニルシリルフェニル基、フェニルチエニル基又はフェニルフリル基である請求項１８記載の方法。
有効成分が、ロバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン又はそれらの塩である請求項１８記載の方法。
有効成分が、ピタバスタチン又はその塩である請求項１８記載の方法。
メバロン酸代謝経路を阻害する物質がファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤である請求項１７記載のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法。
メバロン酸代謝経路を阻害する物質がゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ阻害剤である請求項１７記載のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法。
メバロン酸代謝経路を阻害する物質がグルコシルトランスフェラーゼである請求項１７記載のＬＫＬＦ／ＫＬＦ２遺伝子発現促進方法。