JPS6394986A - Ｒ−２，２−ｒ↓１，ｒ↓２−１，３−ジオキソラン−４−メタノ−ルの製造方法 - Google Patents

Ｒ−２，２−ｒ↓１，ｒ↓２−１，３−ジオキソラン−４−メタノ−ルの製造方法

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JPS6394986A
JPS6394986A JP62112254A JP11225487A JPS6394986A JP S6394986 A JPS6394986 A JP S6394986A JP 62112254 A JP62112254 A JP 62112254A JP 11225487 A JP11225487 A JP 11225487A JP S6394986 A JPS6394986 A JP S6394986A
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methanol
nocardia
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rhodococcus
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JP62112254A
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マウロ　アッティリオ　ベルトラ
アルテュール　フリートリッヒ　マルクス
ヘイン　シモン　コーゲル
フォルケルト　パール　クラーセン
ガレス　トーマス　フィリップス
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Gist Brocades NV
Shell Internationale Research Maatschappij BV
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Gist Brocades NV
Shell Internationale Research Maatschappij BV
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Publication date
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、支配的にあるいは実質的に完全に−Ｒ２−異
性体からなる２、２−Ｒ１，Ｒ２−１，３−ジオキソラ
ン−４−メタノールの製造方法に関する。
（従来の技術） Ｒ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メ
タノールは農学および薬学的製品を調製するための重要
な出発物質である〔例えば、Ｊ、ユロツァック（Ｊｕｒ
ｏｚａｋ　）等、テトロへドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒ
ｏｎ　）　、１９８６　、↓１−２．４４７−４８８を
参照のこと〕。
近年、Ｒ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−
４−メタノールは、多数の生物学的に活性な製品および
特にキラル薬物の調製用の重要な出発化合物として興味
の対象となってきた。キラル出発物質を用いて、光学的
に純粋な形状で生物学的に活性な製品を調製することは
極めて有利であり、合成方法の正確な計画並びにその効
率的な実施を可能とするものである。Ｒ−２，２−ジメ
チル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールはＣ３−
シントンの重要な例であり、しかも他の多くのＣ３−シ
ントン（Ｓｙｎｔｈｏｎ　）の製造用の原料化合物とし
て使用され、該池の０３−シントンはキラル形成単位と
してを機合成に広く利用されている。例えば、Ｒ−２，
２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール
は池のキラルシントン、単糖類、その誘導体および他の
ポリヒドロキシル系およびより複雑な構造の生物学的に
活性な製品の合成に利用できる。より複雑な構造の製品
の合成の例はβ−ブロッカ−または光学的に純粋なβ−
ラクタム系の製造である。
（発明が解決しようとする問題点） 従って、２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４
−メタノールのヱー立体異性体の立体選択的合成のため
に経済的に魅力ある収率を与え、工業的規模で利用する
ことのできる方法に対する大きな要求が依然として存在
する。そこで本発明はこのような方法を提供することを
目的とするものである。立体選択的なＲ−立体異性体の
調製は微生物または該微生物由来の物質を用いることに
より有利に実施できることを見出した。また、２゜２　
　Ｒ１，Ｒ２１，３−ジオキソラン−４−メタノールの
一部、−異性体は、これら微生物あるいは該微生物由来
の物質を用いることにより有利にＲ−２，２−Ｒ１，Ｒ
２−１，３−ジオキソラン−４−カルボン酸に転化し得
ることがわかった。
（問題点を解決するための手段） 本発明はＲ−異性体に富む２．２−Ｒ１，Ｒ２−１，３
−ジオキソラン−４−メタノールの製造方法を提供する
ものである。ここで、Ｒ１およびＲ２はＨまたは場合に
より置換されたまたは分岐したアルキル基、もしくはＲ
１およびＲ２はこれらが結合している炭素原子と共に炭
素環（場合により置換されている）を形成する。該製造
方法はＲ−およびニー２．２−Ｒ１，Ｒ２−１，３−ジ
オキソラン−４−メタノールの混合物を、該混合物中の
一部−２．２−Ｒ，，Ｒ２−１．３−ジオキソラン−４
−メタノールが玉−異性体に富む２，２−Ｒ１，Ｒ２−
１，３−ジオキソラン−４−メタノールを与えるように
消費するのに十分な時間Σ２．２　　ｎｌ、Ｒｚ　　　
１，３−ジオキソラン−４−メタノールの立体選択的消
費能を有する微生物または該微生物由来の物質の作用に
付す工程を含むことを特徴とするものである。少なくと
も主−２，２−Ｒ１，ＲＺ−１，３−ジオキソラン−４
−メタノールの８０重量％、好ましくは少なくとも９０
重量％、より好ましくは実質的に全てを消費して、ニー
異性体に富む２，２．２−Ｒ１，Ｒ。
−１，３−ジオキソラン−４−メタノールまたは実質的
に純粋なニー異性体を得ることが望ましい。
ニー異性体に富む２，２．１−Ｒ１、ＲＺ−１，３−ジ
オキソラン−４−メタノールに転化された生成物は少な
くとも部分的に華離されおよび／または他の光学活性化
合物の合成用の出発物質として使用される。有利には、
Ｒ１およびＲ２は炭素原子数６以下のアルキル基または
これらの炭素環は炭素原子ｖＪ、８以下である。Ｒ５お
よびＲ２は同一であることが好ましい。このように、化
合物中にはこれ以上の不斉は与えられない。より好まし
くは、Ｒ１およびＲ２は炭素原子数１〜３のアルキル基
であり、あるいはこれらが結合している炭素原子と共に
炭素原子数５または６の炭素環を形成する。
上述の如く、２．２−Ｒ１，Ｒ２−１，３−ジオキソラ
ン−４−メタノールの−Ｒ−−および旦−異性体混合物
はλ異性体に富む２，２，２　　Ｒ＋　、Ｒ２−１，３
−ジオキソラン−４−メタノールに転化することが可能
である。このように、該混合物の一部のみを後の反応に
使用できる。例えば、５０重量％の且−異性体および５
０重量％の盈異性体の混合物から始めて、２，２　　Ｒ
１，Ｒ２１，３−ジオキソラン−４−メタノールのわず
かに％を有用な様式で入手できる。本発明の一態様によ
れば、Ｓ　　２，２　　Ｒ−２，２−Ｒ１、Ｒｚ　　　
１，３−ジオキソラン−４−メタノールをＲ２，２Ｒ−
２，２−Ｒ１、Ｒｚ−１，３−ジオキソラン−４−カル
ボン酸に有利に転化できる。
こうして、尺−異性体に富む２，２，２　　Ｒ＋　、Ｒ
ｚ−１，３−ジオキソラン−４−メタノールの３周製が
可能であるのみならず、同時に−３，−異性体に富む２
．２−Ｒ１、Ｒ２−１，３−ジオキソラン−４−カルボ
ン酸を調製することも可能である。このように、実質的
に全てのＲ−およびＳ−２，２−Ｒ１，Ｒ２１，３−ジ
オキソラン−４−メタノールが分離かつ使用できる。上
記のＲ−異性体に富む２．２−Ｒ１，Ｒ２−１，３−ジ
オキソラン−４−カルボン酸は多くの生物学的に活性な
製品の製造用の出発化合物として使用でき、あるいはＳ
−異性体に富む２．　２−Ｒ１，Ｒ２−１，３−ジオキ
ソラン−４−メタノールに転化することができ、これも
同様に重要な出発化合物である。
用語“立体選択的消費能を有する微生物”とは、例えば
細菌、酵母、カビ類を意味する。適当な細また、新規な
遺伝的物質の導入によりＳ−２゜２　　Ｒ１，Ｒ２１，
３−ジオキソラン−４−メタノールの消費能を得た微生
物は“立体選択的消費能を有する微生物”として具体化
される。これは任意のスクリーニングされた微生物から
の立体選択的消費に対し応答性のポリペプチド、酵素を
コード化するクローン化遺伝子を、他の微生物、特にエ
シェリヒア　コリ　（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　　　ｃ
ｏｌｉ　）に移すことにより達成できる。他の微生物は
サラ属に属するものであり得る。クローン遺伝子は、Ｓ
−２，２−Ｒ１、Ｒ２−１，３−ジオキソラン−４−メ
タノール、好ましくはＳ−２，２−ジメチル−１，３−
ジオキソラン−４−メタノールを消費し得る酵素をコー
ド化する能力につき選択することができる。また、これ
らは立体選択的消費する酵素をコード化する既に選択さ
れた遺伝子との交叉−ハイブリダイゼーションによって
も選別できる。
これらの微生物は有利には、例えばポリマーゲル上に固
定化することができる。この固定化は、生細胞、死細胞
および／または休止細胞を用いて実施することができる
が、更にこれら細胞から誘導された適当な酵素を用いて
もよく、この場合高い特異的活性が必要とされる場合に
は、ある程度まで精製することができる。
従って、“微生物または該微生物由来の物質”なる用語
により、微生物（死、生または休止細胞）、場合により
濃縮または精製された該微生物からの抽出物を意味する
ものとする。例えば、酵素および場合によりこれは例え
ば人工的または天然の補因子との組合せが使用できる。
醗酵掌上不活性な細胞もΣ−２．２−Ｒ，，Ｒ，−１．
３−ジオキソラン−４−メタノールの消費のために使用
できる。細胞または細胞由来の酵素は適当な条件下で五
−異性体を消費できることがわかった。微生物またはそ
の由来物質は数回に亘り使用でき、かつ少なくとも２週
間に亘り活性である。補基質（例えばグルコース）がな
い場合においてさえ、これら微生物は活性を維持できる
。Ｒ２，２Ｒ＋。
Ｒ２−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを１−異
性体に富むようにすることは、適当なバッファー（例え
ば、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸、トリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタンまたは燐酸カリウ
ム）並びに生理塩溶液中で実施できる。貯蔵後、誘発細
胞は直接−尺、−異性体に富む２，生成物への転化を可
能とすることがわかる。
より特定的に、盈−２，２−Ｒ１，Ｒ２−１，３−ジオ
キソラン−４−メタノールを消費する微生物はロドコッ
カス　１−ｔ’−（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ　　附旦）
、ａｌｋａｎｕｍ　）　　（この種のサンプルの１例は
承認番号１５１０８号としてＡＴＣＣに寄託されている
）、コリネバクテリウム　スペーシーズ（Ｃｏｒｙｎｅ
ｂａ−ｃｔｅｒｉｕｍ　　ａｐｅｃｉｅｓ　）　ＤＳ　
５　Ｌ　２２　　（この種の１例は承認番号２６６．８
７号としてＣＢＳに寄託さコラリナ（Ｎｏｃａｒｄｉａ
　　　ｃｏｒａｌｌｉｎａ）　　（この種の１例は承認
番号３１３３８号としてＡＴＣＣに寄託されている）、
ノカルディア　カニクルリア（Ｎｏｃａｒｄｉａ　　ｃ
ａｎｉｃｒｕｒｉａ）　　（この種の１例は承認番号３
１５４８号として、へＴＣＣに寄託されている）、ノカ
ルディア　バラフィナエ　（Ｎｏｃａｒｄｉａｐａｒａ
ｆｆｉｎａｅ）　　（この種の１例は承認番号２６６、
８７号としてＣＢＳに寄託されている）の各培養物を包
含する。
番号０３７３０号としてＩＦＯに寄託されている）およ
びロドコッカス　エキ（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ　　ｅ
ｑｕｉ）種（この種の１例は承認番号１２０３５号とじ
てＮＣＩＢに寄託されている）の培養物を含む。ロロド
クラウス種（この種の１例は承認番号９７０３号として
ＮＣＩＢに寄託されている）およびロドコッカス　ロド
クラウス種（この種の１例は承認番号２１１９７号とし
てＡＴＣＣに寄託されている）３８−２種（この種の１
例は承認番号１８０．８６号として１９８６年４月１８
日付でＣＢＳに寄託されている）およびロドコッカス　
エリスロポリスＳＣＬ３８−２Ｒ種（この種の１例は承
認番号１８０．８６号として１９８６年４月１８日付で
ＣＢＳに寄託されている）およびロドコッカスエリスロ
ポリスＳＣＬ３８−２Ｓ種（この種の１例は承認番号１
８０．８６号として１９８６年４月１８日付でＣＢＳに
寄託されている）の培養物を含む。コリネバクテリウム
　エキ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔ−ｅｒｉｕｍ　　朋旦）
の有利な培養物は、コリネバクテリｔ’）ムｘ土Ａ２３
６２種（この種の１例は承認番号２６４．８７号として
ＣＢＳに寄託されている）および、ジ」−ネバクテリウ
ム　ｌ−１−Ａ２４３１種（この種の１例は承認番号２
６３．８７号としてＣＢＳに寄託されている）の培養物
を包含する。
ノカルディア　エリスロポリス　（Ｎｏｃａｒｄ　１ａ
−Ｊ］μ■」ｗ上ｉｓ　）の有利な培養物は、ノカルデ
ィア　エリスロポリスＴ４８７種（この種の１例は承認
番号９１５８号としてＮＣＩＢに寄託されている）、ノ
カルディア　エリスロポリス種（この種の１例は承認番
号７４３号としてＤＳＭに寄託されている）およびノカ
ルディア　エリスロポリス種（この種の１例は承認番号
４２７７号としてＡＴＣＣに寄託されている）の培養物
を包含する。
さらに、ノカルディア　オーランティア（ＮＣＩＢ９５
５７）、ノカルディア　力ル力レア（ＮＣＩ［１８８６
３）、ノカルディア　力サアルデＹ９８５（ＣＢＳ２６
８．８７）、ノカルディア　グロベルラ（ＮＣＩＢ９１
５９）、ノカルディア　ラゴーサ（ＮＣＩＢ８９２６）
、およびマイコバクテリウム　ロドクラウス（ＮＣＩＢ
１１０６１）を含む。
本発明に従って生成される且−２，２−Ｒ，。
Ｒ２−１，３−ジオキソラン−４−メタノールは他の光
学的に活性な化合物の製造用の出発物質として使用でき
る。重要な可能性の一つはキラル薬剤の製造である。
旦−および且−２，２Ｒ＋　、Ｒ２１，３−ジオキソラ
ン−４−メタノールを光学的に活性な化合物に転化する
のに任意の適当な方法が利用できることは、当業者には
明らかであろう。
光学的に活性な化合物の製造に対する旦および且−２，
２Ｒ＋　、Ｒ２１，３−ジオキソラン−４−メタノール
の使用を示す例は、例えば、ジェイ、ユルクツアックＤ
ｕｒｃｚａｋ　）等１テトラ”ドロンレボ−）　（Ｔｅ
ｔｒａｈｅｄｒｏｎ　ｒｅｐｏｒｔ）　１１ｋ１１９５
〔テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　）　、１
９８６、±２．ｐ、４４７−４８８）およびテクニカル
インフォーメーション　ブレタン（Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ
Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ）　、２２
５．１９８３年９月、ジャンセン　シミ力（Ｊａｎｓｓ
ｅｎ　Ｃｈｉｍｉｃａ　　（ベルギー）〕から知られて
いる。
光学的に活性な化合物は薬学または農学製品において（
吏用できる。
本発明の方法の好ましい一態様によれば、Ｓ−２，２Ｒ
＋　、Ｒ２１，３−ジオキソラン−４−メタノールの立
体選択的消費能を有する微生物は約０．５〜１０日間培
養されなければならず、その後微生物細胞は液状栄養培
地中に懸濁され、Ｒ−およびｓ−２，２−Ｒ１，Ｒ２−
１，３−ジオキソラン−４−メタノール混合物が該細胞
の作用に付される。
上記の培養を０．５〜１０日間行った後、該細胞を培地
から単離し、次いで液状栄養培地中に該細胞を懸濁する
。
Ｓ　　２，２　　Ｒ１，Ｒ２１，３−ジオキソラン−４
−メタノールの選択的消費に使用する微生物を育生する
には、通常の、同化可能な炭素源（例えばグルコース、
ラクテート、スクロースなど）、同化可能な窒素源（例
えば硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモ
ニウムなど）を、有機栄養源（例えば酵母エキス、麦芽
エキス、ペプトン、肉エキスなど）および無機栄養源（
例えば痕跡量の燐酸塩、マグネシウム、゛カリウム、亜
鉛、鉄および他の金属）と共に含有する培地が利用でき
る。
場合により１またはそれ以上の成分に富む２，、ジャツ
ブ（Ｊａｐ　）培地が適当な培地として使用できる。以
下の組成のジャフプ培地が使用できる。即ち、大豆粉（
３０ｇ／ｌ）、硝酸ナトリウム（７，５ｇ／ｆｆ１）、
硫酸第１鉄・７１１ｚｏ（０，２８ｇ　／　１　）、く
えん酸ナトリウム（６ｇ／ｌ）およびフルクトース（１
２，５ｇ／＃）を含み、ｐＨを７．２に調節したもの。
この培地を用いる前に、１２０℃で２０分間滅菌処理す
ることが有利である。
もう一つの好ましい培地は、場合により１またはそれ以
上の成分に富むＹＰＤ−培地である。
ＹＰＤ−培地としては２０ｇ／βのバタトペプトン、１
０　ｇ／ｌの酵母エキスおよび２０　ｇ／ｌのグルコー
スを含有するものが使用できる。使用前に、培地を１１
０℃にて３０分間滅菌処理することが有利である。
更に別の好ましい培地は、場合により１またはそれ以上
の成分に富む２，ＧＹＭＢ−培地である。以下の組成の
ＧＹＭＢ−培地を使用できる。即ち、グルコース（１０
ｇ／ｌ＞　、ペプトン（５ｇ／ｌ、酵母エキス（３ｇ／
ｉり、麦芽エキス（３ｇ／β）を含むもの。これは使用
前に１２０℃にて２０分間滅菌処理に付すことが有利で
ある。
他の好ましい培地は、場合により１またはそれ以上の成
分に富む２，培地３３１０であり、以下の組成の番地３
３１０が使用できる。即ち、（Ｎｉｌ　４）ｚｓｏ　ａ
（１０ｇ／ｌ、ＮａＣｊ！　（１ｇ／＃）　、ＭｇＳＯ
４−７Ｈ２０（１ｇ／　Ｎ）　、ＫｚＨＩ’０４（５ｇ
／　Ａ）　、ＭｎＳＯ４・３ＨｚＯ（２，５ｍｇ／　＋
２）　、ＺｎＳＯ４７ＨｚＯ（２，５ｍｇ／　ｆ）、Ｆ
ｅ５Ｏａ　・７Ｈ２０（２，５ｍｇ／　ＩＩ　）　、Ｃ
ａＣｊｌ！　２（１２，５ｍｇ／ｊり　、ＣｕＳＯ４・
５ＨｚＯ（０，７５ｍｇ／　１）　、ＣｏＣｊｉ！ｚ・
６１１ｚＯ（０，７５ｍｇ／ｌ）　、ＨＪＯｔ（０，２
５ｍ１ｒ／／）、ＮａｚＭｏ０４・２ＨｚＯ（０，２７
５＊／ｌ）　、ＫＩ　（０，５ｍｇ／ｌ）、パントテン
酸カルシウム（０，８ｍｇ／ｌ）、イノシトール（４ｍ
ｇ／Ａ）、ニコチン酸（０，８ｍｇ／ｌ）、チアミンＨ
Ｃｆ　　（０，８ｍｇ／　ｌ　）　、ピリドキシン・＋
１（１（Ｑ、３■／ｌ、ｐ−アミノ安息香酸（０，４■
／１）、リボフラビン（０，４■／１）、葉酸（０，０
２■／１）、ビチオン（４μｇ＃）を含む培地。使用前
に、この培地を１２０℃にて２０分間滅菌処理すること
が有利である。その後、１１０℃にて３０分間滅菌処理
したグルコース（例えば５０　ｇ／ｌを添加する。
別の好ましい培地は、場合により１またはそれ以上の成
分に富む２，脱脂乳培地、例えば１０％の脱脂乳（脱脂
粉乳からのもの）を含む脱脂乳培地を使用でき、これは
使用に先立って１１０°Ｃにて３０分間滅菌処理するこ
とが有利である。
この脱脂乳培地の富化の例は、０．５％のラクテートま
たはＰＳ■塩またはこれらの組合せを含む。
以下の組成のＰＳＩＩＩ塩培地が使用できる。即ち、燐
酸二水素カリウム（２，１ｇ／ｌ、燐酸−水素アンモニ
ウム（１，０ｇ／ｊり、硫酸アンモニウム（０，９ｇ／
β）、塩化カリウム（０，２ｇ／β）、くえん酸ナトリ
ウム（０，２９ｇ／ｆ）　、硫酸カルシウム・２Ｈ２０
（０，００５ｇ／　ｌ　）　、硫酸マグネシウム・７Ｈ
２０（０，２ｇ／ｊ２）、硫酸第一鉄アンモニウム・６
Ｈ２０（２，５ｍｇ／　ｊ２）　、硫酸亜鉛・７Ｈ２０
（０，５ｍｇ／　Ｉｉ　）　、塩化マンガン・４Ｈ２０
（０，３ｍｇ／Ａ）、硫酸銅・５Ｈ２０（０，１５ｍｇ
／　ｌ　）、塩（ヒコバルト・６Ｈ２０（０，１５ｍｇ
／　（１）　、オルト硼酸（０，０５ｍｇ／β）、モリ
ブデン酸ナトリウム・２Ｈ２０（０，０５５ｍｇ／　ｊ
ｉ’　）およびヨウ化カリウム（０，１ｍｇ／　ｊｌ！
　）を含み、ｐＨを６．８に調節したもの。
二〇ＰＳＩ［Ｉ塩培地は、１２０℃にて３０分間滅菌し
た後使用することが有利である。
微生物の育生中は０〜４５℃の温度および３．５〜９の
ｐＨに維持することが好ましい。この微生物は２０〜３
７℃および５〜９のｐＨＯ下で育成することが好ましい
。これらの微生物の成長中に要求される好気的条件は、
酸素の併給が該微生物の代謝要件を満足するのに十分で
あれば、十分に確立された手続きのいずれによっても得
ることができる。これは、酸素を、適切には空気として
供給し、かつ場合によっては同時に反応液を振盪また撹
拌することにより有利に達成できる。微生物による旦−
２，２−Ｒ１，Ｒ２−１，３−ジオキソラン−４−メタ
ノールの消費中、該微生物は上述の通常の培地を用いて
成長段階におかれる。
微生物による盈−２，２−Ｒ１、ＲＺ−１，３−ジオキ
ソラン−４−メタノールの消費中、必要ならば同化可能
な炭素源（例えば、グルコース、ラクテート、スクロー
スなど）、必要ならば同化可能な窒素ａ　＜例えば、硫
酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム
）を、必要ならば有機栄養源（例えば、酵母エキス、麦
芽エキス、ペプトン、肉エキスなど）および必要ならば
無機栄養源（例えば、痕跡量の燐酸塩、マグネシウム、
カリウム、亜鉛、鉄および他の金属）と共に含有する通
常の培地を使用することができる。
有利には、λ−異性体の富化中、場合により１またはそ
れ以上の成分に富むジャツブ培地、ＹＰＤ培地、培地３
３１０または脱脂乳培地（上記のような）が使用できる
。好ましくは（上記のような）１またはそれ以上の成分
に富む２，ＧＹＭＢ培地が使用される。
微生物は、例えば同化し得る炭素源を除外するか、ある
いは窒素源を除外することにより、非成長段階に保つこ
とができる。この段階中温度は０〜４５℃およびｐＨは
３．５〜９に維持することができる。
微生物を２０〜３７°Ｃの温度およびｐＨを５〜９に保
つことが好ましい。この段階中に必要とされる好気的条
件は、酸素の供給が該微生物の代謝要件を満たすのに十
分である場合には、任意の十分に確立された手続きに従
って得ることができる。
これは、酸素を、適切には空気として供給し、かつ場合
によっては同時に反応液を振盪または攪拌することによ
り最も有利に達成することができる。
上記のような転化の後、Ｒおよびすべての残留盈−２，
２−Ｒ，，Ｒ，−１，３−ジオキソラン−４−メタノー
ルは、次にこのような製品に対しそれ自体公知の任意の
手順に従って回収し、精製することができる。
これらの微生物は寒天傾斜培地上に維持し、５０％グリ
セリン中で凍結し、もしくは凍結乾燥することができる
。必要ならば、これらの微生物を十分に確立された手順
のいずれか、例えば（プレイン　ハート　インヒユージ
ョン）、に従って予備培養することができ、ここでは微
生物を回転式振盪器内で３０℃にて２４時間ブイヨンま
たはＢＨＩ中でインキュベートすることができる。以下
の組成のブイヨン培地が利用できる。即ち、ラブ　レム
コ（Ｌａｂ　Ｌｅｍｃｏ　）　Ｌ　２９　（肉エキス、
オ■ キソイド（０ｘｏｉｄ　））　　（９ｇ／　＃）　、バ
クトベプトン（Ｂａｃｔｏｐｅｐｔｏｎｅ）　　（１０
ｇ　／　Ｒ）および塩化ナトリウム（５ｇ／ｊりを含み
、ｐＨを７．６に調節した培地。この培地は１２０”Ｃ
にて２０分間滅菌した後使用することが有利である。
■ ０．０３７ｇ／ｊ２のＢＨＩ　　（オキソイド（Ｏｘｏ
ｉｄ　））を含有し、ｐＨを７．０に調整したＢＨＩ（
プレインハート　インヒユージョン）培地を使用できる
。
この培地は１２０℃にて２０分間滅菌した後使用するこ
とが有利である。
微生物としては、盈−２，２−Ｒ１、Ｒ２−１，３−ジ
オキソラン−４−メタノールの消費中に旦−２，２−Ｒ
１，Ｒ２−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを使
用するものを使用することが好ましい。
（実施例） 以下、本発明を以下の実施例に従って更に説明する。
実施例１ 四ドｍｌ−／力ｘ　　ｘ＋　　（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕ
ｓ　ｅｑｕｉ）ＮＣＩＢ１２０３５を、１０％の脱脂乳
培地１００版を含む数個のバッフルフラスコ（容１５０
０ｍ）中で、３０℃にて４８時間成長させた。その後、
各フラスコに玉、−ミー−２，２−ジメチル−１，３−
ジオキンラン−４−メタノール１２０／’を添加し、更
に２４．４８および９６時間インキュベートした。明記
した各時点において３つのフラスコ（３００Ｍ培養物）
を連続抽出操作により抽出した。抽出物をシリカゲルカ
ラム上で精製し、旋光計を用いて、旋光度を測定した。
ここで、セルは２２℃に維持された光路長１または１０
ｃｍ（容量０、５−５　”　）のものであり、溶媒とし
てはエタノールを用いた。
旋光度は５８９ｎｍ（ナトリウムのＤ−線）にて記録し
た。
鏡像体分布はユーロピウム（ＨＦＣ）３　ＣＥｕｒｏｐ
ｉｕｍ（ＨＦＣ）　３〕　シフト剤を用いたＮＭＲによ
り測定した。
結果は以下の第１表に示す。
第１表 ２４　　　９５．５　　−５　７５２５４８　　　６１
．１　　−９．７１００　０９６　　　５４．０　　−
１０．１１００　０実施例２ ０ドコツ力ス　エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕ
ｓｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）　　Ｓ　ＣＬ　３８−２
　　（ＣＢ　５Ｌ７９．８６）を実施例１と同嘩に成長
させた。１２０バのＲ１５−２，２−ジメチル−１，３
−ジオキソラン−４−メタノールを添加した後、更に１
２．２４および４８時間インキニベーションした。２．
２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール
の抽出、精製および測定を実施例１のように実施した。
結果を以下の第２表示す。
第２表 インキｌペーション　　　２，２−ジメチル−１，３−
ジオキソラン　α。　　　鏡イ象体分布時間（ｈｒ、）
　　　　−４−メタノールの量（ｍｇ）　　　　　　　
　　　　％Ｒ％Ｓ１２　　　　　　　　　　　　　　９
３．６　　　　　　　　　−８．８　　　　９３　　　
　　７２４　　　　　　　　　　　　　　７７．８　　
　　　　　　　−１０．４　　１００　　　　　０４８
　　　　　　　　　　　　　　６９．１　　　　　　　
　　−９．８　　　１００　　　　　０実施例３ ０ドコン力ス　エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕ
ｓｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）　　Ｓ　ＣＬ　３８−２
　　（ＣＢ　３１７９．８６）を、先ず１０％の脱脂乳
培地２５だを含む容量１００だの数個のバッフルフラス
コ内で３０℃にて４８時間育生し、その後膣培養物に１
．−ミー−２゜２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−
４−メタノールを添加した。各一群のフラスコに，Ｒ２
Ｓ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４＝メ
タノールを種々の初濃度、即ち夫々１．２．２．４．４
．８および９．６ｇ／βて添加した。所定の時点で各群
のフラスコの一つずつを取出し、抽出し、分析した。４
．８ｇ／βｑ旦、−巨−−２．２−ジメチル−１，３−
ジオキソラン−４−メタノールまで゛は、添加量の半分
が４８時間以内に消費された。９．６ｇ／／では、且、
Ｓ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メ
タノールの１７２が消費されるのに９６時間以上を要し
た。消費される２、２−ジメチル−１，３−ジオキソラ
ン−４−メタノールの殆どがΣ一槽構造もつであろうと
仮定したので、上記の実験事実に基く新たな実験を行い
、多量の−Ｒ−２．２−ジメチル−１，３−ジオキソラ
ン−４−メタノールを３周製した。
ロドコッカス　エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕ
ｓｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）　Ｓ　ＣＬ　３８−２を
４８時間育生した、１０％の脱脂乳培地ｉｏｏＴＭ当で
含む容量５００だのパンフルフラスコ１２本に、全体で
５、７６　ｇの且、盈−２，２−ジメチル−１，３−ジ
オキソラン−４−メタノールを分配した。次いで、この
培養物を更に３０℃にて９６時間インキュベートした。
全体積約１．２１から、残留２．２−ジメチル−１，３
−ジオキソラン−４−メタノールを実施例１および２に
記載のように抽出しかつ精製した。１．５ｇの２，２−
ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを分
離した。このもののＮＭＲ測定では、これが−Ｒニー構
造であり、１００％の純粋な鏡像体であることがわかっ
た。
実施例４ １７９．８６）を、１０％の脱脂乳培地５００′／１１
を含有する３つの容量２βのバッフルフラスコ内にて、
３０℃で４８時間成長させた。全体で７．２ｇのｌ。
Ｓ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メ
タノールをこれら培養物に分配し、かつ更に９６時間イ
ンキュベートした。残りの−２，２−ジメチル−１，３
−ジオキソラン−４−メタノールの抽出および精製を実
施例１〜３に記載のように行った。
１．４ｇの且−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラ
ン−４−メタノールを回収した。これはＮＭＲ測定によ
れば１００％の純粋な鏡像体であることがわかった。
実施例５ ０ドコソカス　エリスロポリス　（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃ
ｕｓ肛パ紅並蛙亘）の３種の変種ＳＣＬ３８−２．ＳＣ
Ｌ３８−２ＳおよびＳＣＬ３８−２Ｒの夫々を、実施例
１記載の脱脂乳培地２００Ｖ中で４８時間育生させた。
バイオマスの乾燥重量を測定し、これら３種のすべてに
つきこれが等しいことがわかった。この培養物を３０力
！づつ分割し、１００Ｎのバッフルフラスコに入れた。
このようにして、各々の種の培養物を３０ＴＭの異る５
種の培養物に分けた。これらの培養物に６０ＩＩｉのＲ
，Ｓ−２゜２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−
メタノールを添加し、更にインキュベートした。異る時
点（第３図参照）で、各々の変種の一つの培養物をとり
、抽出し、残った２、２−ジメチル−１，３−ジオキソ
ラン−４−メタノールを分析した。
鏡像体分布は、Ｎ、Ｏ−ビス−（トリメチルシリル）−
トリフルオロアセタミド（ＢＳＴＦＡ）とのジアステレ
オマーを形成することにより決定した。該ジアステレオ
マーはキラル錯化カラム上で分離した。これら３つの変
種につき明白な違いはみられなかった。
第３表 ＳＣＬ３ｇ−２ｆｌ　　　　　　　　　　　ＳＣ１，３
Ｂ−２３５ｃＬ３１３−２（ｈｒ、）　ＲＳ　　％Ｒ％
ＳＲＳ％Ｐ％Ｓｌｌ　Ｓ％Ｒ９６Ｓ００．５５０．５５
５０５００．５７０．５４５０５００．５５０．５５５
０５０３０．５７０．５７５０５００．５５０．５５５
０５０　ｏ、ｓ４ｏ、５３５０５０６０．５７０．４９
５４４６０．５７０．５２５３４７０．５６０．４７５
５４５８０．５７０．３Ｂ　６０４００．５７０．３９
５９４］　０．５７０．３５６２３Ｂ２４０、．４６０
．００１００００．４９０．００１００００．４５０．
００１０００実施例６ 本例は、且−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン
−４−メタノールからの盈−メトプロロール、β−ブロ
ッカ−の製造を開示する。本例は、他の光学活性物質の
合成用の出発物質としてλ−２，２−ジメチル−１，３
−ジオキソラン−４−メタノールを使用できることを立
証する。
Ｒ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン＝４−メ
タノールからのｉ−２，２−ジメチル−メタンスルホニ
ルクロリド１．２７ｈｌ　（１５，５ｍｍｏ＃ｅ）とメ
チレンクロリド４７？／との混合物を５分間かけて攪拌
し、冷却したメチレンクロリド７だとトリエチルアミン
２．６７Ｍ　（１８，７ｍｍｏｆｆｉｅ）と旦−２゜２
−ジメチル−・１．３−ジオキソラン−４−メタノール
（ＮＭＲによれば光学的に純粋である）１、８１　ｇ　
（１３，７ｍｍｏ／ｅ）との混合物に加えた。
この且−異性体は実施例１〜５に記載の手順で調製した
。
２２℃にて１１７２時間攪拌を続け、次いで更にメタン
スルホニルクロリド（０，１５Ｍ）およびトリエチルア
ミン（０，５７Ｍ）を添加した。冷凍器内に一夜放置し
た後、該混合物をメチレンクロリドおよびＩＮ重炭酸ナ
トリウム溶液と共に振盪した。
有機相をＩＮ重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、濾過しか
つ蒸発させて、褐色油状物として２．７８　ｇのＳ−２
，２−ジメチル−４−（メタンスルホニルオキシメチル
）−１，３−ジオキソランを得た。
これはそのまま後の工程で使用した。
ｐ−（２−メトキシエチル）−フェノール（２，２ｇ　
：　１４．４７ｍｍｏｆｆｅ）を、乾燥Ｎ、　Ｎ−ジメ
チルホルムアミド１０だと水素化ナトリウム０．３８　
ｇ（１５，８＋ｎ＋ｎｏβｅ）との混合物を冷却（反応
混合物を１００℃以下に保つために）しかつ撹拌した中
に添加した。
次に、２．７８　ｇの粗製−ミー一２．２−ジメチル−
４−（メタンスルホニルオキシメチル）−１，３＝ジオ
キソランを添加し、得られた混合物を撹拌し、１００℃
の油浴中で１１７２時間加熱した。
２２℃まで冷却した後、該混合物をＩＭの重炭酸ナトリ
ウム溶液中に注ぎ、エーテルで抽出した。
エーテル抽出物をＩＮ水酸化ナトリウム、１Ｍ重炭酸ナ
トリウム、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥
し、濾過し、蒸発させて、油状物としてＳ−２，２−ジ
メチル−４−（ｐ　−（２−メトキシエチル）−フェニ
ルオキシメチル〕−１，３−ジオキソラン３．２０　ｇ
を得た。これはそのまま次の工程で使用した。
３、２０　ｇの粗製旦−２，２−ジメチル−４−（ｐ−
（２−メトキシエチル）−フェニルオキシメチル）−１
，３−ジオキソラン、１５篇のメタノール、ｌＯＴ／ｌ
の水および０．５７Ｍの３６％塩酸の混合物を２２℃に
て１時間攪拌した。更に０．５　Ｍの３６％塩酸を添加
した後、１７２時間攪拌を続け、次にＩＯりの１Ｍ炭酸
ナトリウムを添加し、混合物を減圧濃縮した。
残渣をエーテルで抽出し、抽出物をブラインで洗浄し、
濾過し、蒸発させて油状物として粗製の表記化合物２．
６ｇを得た。これは更に処理することなく次工程で使用
した。
ンの製造 ２．６ｇの粗製Ｓ−３−（ｐ−（メトキシエチル）−フ
ェニルオキシ）−１，２−プロパンジオールと１０だの
３３％臭化水素酸との混合物の酢酸溶液を２２℃にて１
１八時間攪拌した。
次に該混合物を１００　Ｗの１Ｍ炭酸ナトリウム中に注
ぎ、ジエチルエーテルで抽出した。抽出物を１Ｍ炭酸ナ
トリウム、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥
し、濾過し、蒸発させて、油状物として表記化合物３．
６５ｇを得た。これはそのまま使用された。
ＪＩＬ−１−ブロモ−２−アセトキシ−３−〔−（２−
メトキシエチル）−フェニルオキシ〕−プロパンからの
５−ｐ−（２−メトキシエチル）粗製の−３，−１−ブ
ロモ−２−アセトキシ−３−［：ｐ−（２−メトキシエ
チル）−フェニルオキシヨープロパン３．６５ｇ、乾燥
１．２−ジメトキシエタン６５だおよび粉末水酸化カリ
ウム２．２ｇ（３９，３ｍｍｏ　ｆｌ　ｅ）の混合物を
２２℃にて２０時間撹拌した。冷凍殿内で２日間放置し
た後、ＩＭの重炭酸ナトリウム（５０ｔ１１）を加え、
この混合物を減圧濃縮し、エーテルで抽出した。
この抽出物をＩＭ重炭酸ナトＩ）ラムおよびブラインで
洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。
濾過後、濾液を蒸発させて油状物２．０４　ｇを得た。
これを、溶出液としてエーテル／ヘキサン＝１：１およ
びエーテル／エタノール＝２０：１を用いたメルクファ
ーティッヒゾイレ（ＭｅｒｃｋＦｅｒｔｉｇｓｉｕｌｅ
）　Ｃを充填したシリカゲルカラム上で精製した。エポ
キシド含有画分を併合し、蒸発させて油状物としてＬ３
１ｇの表記化合物を得た。
５Ｌ−ｐ−（２−メトキシエチル）フェニルグリシジル
エーテルか゛の１−１−イソプロピル７１．３１　ｇ　
　（６，３ｍｍｏ／ｅ）の５−ｐ−（２−メトキシエチ
ル）フェニルグリシジルエーテル、１０篇のエタノール
および５だのイソプロピルアミンの混合物を５５℃の水
浴中で１１７２時間加熱した。
この混合物を蒸発して、固体として表記化合物１．６７
ｇを得た。（＋）−α−メトキシ−α−トリフルオロメ
チル−フェニル酢酸の酸クロリドでサンプルを処理した
後、得られたアミドをＮＭＲにかけ、わずかに０．７重
量％の旦−異性体が存在することが示された。
実施例７ ０ドコツ力ス　エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕ
ｓｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）　Ｓ　ＣＬ　３８−２を
、３１容量の醗酵器内で、５倍に濃縮したＧＹＭＢ培地
中で、９０１．７ｈの空気を供給しつつ育生した。この
培地を攪拌し、ｐＨを６．８〜７．２に保った。接種物
として、正常ＧＹＭＢ培地上で育成した４８時間令のロ
ドコッカス　エリスロポリス培養物１５版を用いた。
６５時間の育生後、培養物（ＬＫＢウルトロスペック（
ＩＪＩｔｒｏｓｐｅｃ）　　４０５０の光路長１ｃｍの
セル内で、６００ｎｍでの光学密度３７を有する）を、
１５ｇ０−足、Ｓ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキ
ソラン−４−メタノールと共に４時間インキユベートシ
た。次いてｐＨを７．５まで高め、８ＭのＲ１５−２，
２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール
を含む給餌中（供給速度２．２ｇ／ｈ）　、４Ｎ　Ｎｆ
１４０Ｈを供給することにより一定に保った。退−およ
びＳ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−
メタノールの種々の濃度のものを、３だの醗酵ブロスを
エクストレラット（Ｅｘｔｒｅｌｕｔ）　−３カラム（
メルクｎｒ、　１５３７２）上に溶出することによりア
ッセイした。少なくとも５分後に、カラムを１２だの酢
酸エチルで溶出した。
この手順は２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−
４−メタノールの定量的抽出をもたらした。
このアルコールのジアステレオマーヲＢｓＴＦＡ　　（
実施例５参照）により形成した。２種の鏡像体の比はキ
ラル錯化カラムの使用により測定できたく第４表）。
第４表 −Ｒエニー、２−ジメチルー１．３−ジオキソラン−４
−メタノールの、ラセミ混合物を供給して育生したロド
コッカス　エリスロポリスの醗酵ブロス中の鏡像体過剰
率 供給開始後の時間（ｈｒ、）　　　Ｒ鏡像体のｅ、ｅ、
”０　　　　　　　　　０．４３ ２０　　　　　　　　　０．９４ ２６　　　　　　　　　０．９７ ２９　　　　　　　　　０．９７ ｅ、ｅ、　：鏡像体過剰率（ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃ
　ｅｘｃｅｓｓ）供給は２９時間継続した。その時点で
、該ブロスは２４．３ｇ／Ｉ！の−Ｒエニー、２−ジメ
チルー１，３−ジオキソラン−４−メタノールおよび０
．３７ｇ／ｌの五−鏡像体を含んでいた。供給中、酸の
一定の製造がみられた。この生成酸は２．２−ジメチル
−１，３−ジオキソラン−４−カルボン酸であることが
ＮＭＲによって同定された。１３ＯＮＭＲスペクトルは
以下のシグナルを示した。
１　　　　　　　　　δ（１）ｐｍ／ＴＭＳ“）ＣＯＯ
ＨＣ＋　　　　１８０．１１ ■ Ｃａ１１３．００ Ｃ２、Ｃ，２７，４３；２７．０３ ＊ＴＭＳ＝テトラメチルシラン 実施例８ ６１のロドコッカス　エリスロポリスＳＣＬ３８−２　
（ＣＢ　５Ｌ７９．８６）の培養物を、ＩＯＡ容量の醗
酵器内で培地３３１０上で育生させた。細胞は３０℃で
培養し、培地を攪拌し、空気を供給しく３６０　Ａ／ｈ
）　、ｐＨを４ＮＮｌｌ□ＯＨまたは４Ｎａｔ（□ＳＯ
，で６．８〜７．２に調節した。培養物の光学密度が６
００ｎｍで６０に達した時点で、１０ｇ／！のＲ，Ｓ−
２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノ
ールを添加した。−Ｓ−一鏡像体の完全消費後、再度１
０　ｇ／／ｌのλ、盈−２．２−ジメチルー１．３−ジ
オキソラン−４−メタノールを添加した。得られた最終
アルコールは旦−鏡（数体の鏡像体過剰率０．９７であ
った。最終的なブロス（５，５Ａ）は２．２−ジメチル
−１，３−ジオキソラン−４−メタノール４７．０　ｇ
を含んでいた。
実施例９ ５００”のＧ　Ｙ　Ｍ　Ｂ培地を含む容量２１の振盪フ
ラスコを、振盪フラスコ内でＢＨＩ培地上で育成したロ
ドコッカス　エリスロポリスＳＣＬ３８−２　（ＣＢ３
１７９．８６）の２４時間培養物１０版で接種した。細
胞を３０℃にて４８時間成長させた。
培養物を５ｇ／ｌ退、Ｓ−２．２−ジメチル−１，３−
ジオキソラン−４−メタノール中で５．５時間インキュ
ベートすることにより誘発させた。その後、細胞を遠心
により収穫した。得られたベレットを種々のバッファー
中に再懸濁させ、表５に示す最終濃度とした（第５表参
照）。
各懸濁液１００版を容量５００版のバッフル振盪フラス
コに移し、様々な時点で−Ｒ−２．２−ジメチルー１，
３−ジオキソラン−４−メタノールを添加した。兄−お
よびＳ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４
−メタノールの濃度を、ｊＱ　？ｒ：Ｊ液の酢酸エチル
抽出物中でアッセイした。この抽出の抽出回収率は４０
％であることがわかった。第５表に示した結果は、残留
細胞懸濁物が多量の−Ｒ−２．２−ジメチルー１，３−
ジオキソラン−４−メタノールを生成し得ることを示し
ている。
第　　５　　表 Ｒ，Ｓ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４
−メタノールの添加計画および種々のバッファーの細胞
懸濁物のインキュベーション中のＲ鏡像体の測定された
過剰率 ｎ、ｍ、　”測定せず。
ｅ、ｅ、　＝鏡像体過剰率 １）：　ＭＯＰＳ＝　（３−（Ｎ−モルホリノ〕プロパ
ンスルホン酸） ２）ニドリス−トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン ３）：新たに且、五−２，２−ジメチル−１，３−ジオ
キソラン−４−メタノールを添加する前４）：細胞懸濁
物１および且のインキュベーションは、新たな量のＲ，
Ｓ−２，２−ジメチルーエ。
３−ジオキソラン−４−メタノールを添加する前には元
の体積の５０％で継続した。
５）　：　２１０時間後。
６）：２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−
メタノールに対するｌ：１酢酸エチル抽出の４０％抽出
回収率を仮定した。
実施例１０ ロドコッカス　エリスロポリスＳＣＬ３８−２（ＣＢ　
Ｓ　１７９．８６）を、５濃度度のＧＹＭＢ培地６１を
含むＩＯＺ容量の醗酵器内で成長させた。こ培地を攪拌
し、通気（３６０Ｊ／ｈ）　Ｌ、３ｏ″Ｃ１ｐ１１６．
８〜７．２に保った。この培養物は育生４８時間後に、
光学密度３ｏをもち、ｌＯｇ／ｌのＲ２５−２，２−ジ
メチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールと共に
５時間インキュベートすることにより誘発させた。この
誘発培養物からの細胞は遠心により収穫した。得られた
ベレットの一部をｐ）１７．５に４ＮＮａＯ）１で調節
した１、５１の生理塩水（光学密度０．Ｄ、＝６２）中
に懸濁させた。この懸濁物を３１の醗酵器容器に移した
。３０℃でインキュベートし、攪拌し、９ＯＮ空気／ｈ
で通気した。Ｉｇ／ｊ！の且、Ｓ−２，２−ジメチル−
１，３−ジオキソラン−４−メタノールを添加して酸性
とした。４ＮのＮａＯＨおよび８Ｍの汎、旦−２゜２−
ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを夫
々含有する供給物を以下のようにして自動的に調節した
。即ち、該供給物は、ｐ）ｌが７．５以下に減少する場
合は同一の速度で行い、かつｐＨが７．５以上に増大す
る場合は停止する。この工程を９９時間Ｎ！続した。次
いで、細胞を回転沈降させ、１．５ｅの新たな生理塩水
に再）コ濁し，Ｒ２Ｓ−２，２−ジメチル−１，３−ジ
オキソラン−４−メタノールおよびＮａＯＨの供給物を
上記第１工程と同様に今回は１４２時間調節した。第３
の工程を同じ条件下で、９２時間行った。但し、最後の
２１時間はｐＨが７．５以下に減少した時にはＮａ０Ｉ
Ｉのみを供給した。第６表に示す結果は、残留細胞懸濁
が鏡像体的に純粋なＲ−２，２−ジメチル−１，３−ジ
オキソラン−４−メタノールを生成し得ることを示す。
第６表 １　９９　６０．７　　０．３１　　７３．５２　１４
２　　　　３８．６　　　　　　０．９０　　　　　測
定されず３　　９２　　　　　　　１３．２’　　　　
　　　　　０．９９　　　　　　　　　同　　上ｅ、ｅ
、　＝鏡像体過剰率 １）２．２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メ
タノールの濃度は実施例７に記載のように測定した。
２）２．２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カ
ルボン酸の濃度は、この酸を定量的にグリセリン酸に転
化した後測定した。これは２．２−ジメチル−１，３−
ジオキソラン−４−カルボン酸を含有する醗酵ブロスを
ＨＣｉ、と共に１時間インキュベートすることにより行
った。遠心後、上澄液中のグリセリン酸の濃度をアッセ
イした。
但し、その前に該上澄液を）ＩＰＬＣカチオン交換器（
カラム：アミネックス（Ａｍｉｎｅｘ）　ＨＰ　Ｘ　８
７　Ｈバイオラド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）　　１２５　０１
４０）上で溶出した。
実施例１１ 実施例１０に記載のようにして得た４８時間令のロドコ
ッカス　エリスロポリスＳＣＬ３８−２（ＣＢ　３１７
９．８６）の培養物をＬｏｇ／／！のＲ，Ｓ−２，２−
ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールと共
に６時間インキュベートした。
この誘発培養物に３０ｇの且、旦−２，２−ジメチル−
１，３−ジオキソラン−４−メタノールを供給し、ｐＨ
を７．５に調節した後、夫々４ＮＮａＯＨおよび８Ｍ　
直、旦−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４
−メタノールを含む２種の供給物を、実施例１０に記載
のように、ｐｌ＋が７．５以下に減少する毎に供給した
。
この工程を５２時間続けた。最終ブロスは、Ｒ−異性体
（ｅ、ｅ、　＝　０．９２　）に対し５４．４　ｇ　／
　７！の２．２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４
−カルボン酸を含んでいた。この酸の濃度は実施例１０
のようにアッセイした。
２．２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボ
ン酸の鏡像体純度の測定は、過剰量の旦−（＋）−１−
（１−ナフチル）エチルアミンの存在下で核酸のＮＭＲ
スペクトルにおける一０１１３シグナルの分離に基き行
った。２つのメチルシグナルが１．３０および１．１５
ｐｐｍに夫々現われ（Ｓ−鏡像体による）、夫々１．１
０および１．０５　ｐｐｍに現われる２つのメチルシグ
ナルは−Ｒ−−鏡像体によるものである。Ｎ−およびＲ
−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カル
ボン酸に対する一ＣＨｆｆ共鳴吸収の割当ては転化−Ｒ
−および盈−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン
−４−メタノールの比による。
正確な−ＣＨ，＋共鳴吸収の位置は添加されたキラル溶
媒和剤の量により変化する可能性がある。
実施例１２ 実施例１０におけるようにして得た、４８時間令のロド
コッカス　エリスロポリスＳＣＬ３８−２　（ＣＢ　３
１７９．８６）の６１培養物を、ＬＯｇ／ｌの且、−ミ
ー−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メ
タノールと共に６時間インキュベートした。
インキュベーション後、細胞および培養液を遠心により
分離し、該細胞を、ｐＨ７，５に調節した６１の生理塩
水に再懸濁した。この塩水は１５ｇ／ｌの１．盈−２，
２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール
を含んでいた。夫々４ＮＮ　ａ　ＯＩＩおよび８Ｍ　　
Ｒ，Ｓ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４
−メタノールを含有する２種の供給物を２９時間に亘り
、実施例１０に記載のように、ｐＨが７．５以下に減少
した各時点で供給した。
最終細胞）懸濁物は２７．９ｇ／！！の２，２−ジメチ
ル−１，３−ジオキソラン−４−カルボン酸を含み、こ
れは鏡像体過剰率０．８８であった。この酸の濃度およ
び光学純度は実施例１１に記載のようにアッセイした。
実施例１３ ５００ｍｊ！のＧＹＭＢ培地を含む容量２１の振盪フラ
スコ内で、振盪フラスコ中にてＢＨＩ培地上で生長させ
たロドコッカス　エリスロポリスＳＣＬ３８−２　（Ｃ
Ｂ３１７９．８６）の２４時間令の培養物１０ｍｊ！を
インキュベートした。この細胞を３０℃にて４８時間生
長させた。この培養物を５　ｇ／／！の尺、旦−２，２
−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール中
で６時間インキュベートすることにより誘発させた。
培養物のＩＩｌから得た細胞を、２５０ｍＪの１Ｍ　　
ＭＯＰＳバッファー（ｐＨ＝７．５）または２５０ｍ１
の１Ｍ燐酸カリウムバッファー（ｐＨ＝７．５）のいず
れかに再懸濁した。生成懸濁物を２１のバッフル振盪フ
ラスコに移し、−Ｒ工、Ｓ−２，２−ジメチル−１，３
−ジオキソラン−４−メタノールを様々な時点で添加し
た。Ｒ−およびＳ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキ
ソラン−４−カルボン酸の濃度は実施例１１に記載のよ
うにアッセイした。
第７表に示した結果は、休止細胞懸濁物が大量のＲ−２
，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボン
酸を生成できることを示す。
実施例１４ 振盪フラスコ内のロドコッカス　エリスロポリス　ＳＣ
Ｌ３８−２　（ＣＢ３１７９．８６）培養物をＧＹＭＢ
培地上で４８時間生長させ、次いで５ｇ／ｌのＲ，Ｓ−
２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノ
ールと共に５時間インキュベートした。この誘発培養物
を遠心し、得られた細胞ペレットを４つの部分に分割し
た。この部分Ａ、ＢおよびＣを生理塩水中に別々に懸濁
させ、一つの部分りを１０％グリセリンを含む生理塩水
中に懸濁させた。懸濁液Ｃを凍結乾燥した。サンプルＡ
およびＣを４℃にて２８時間インキュベートし、サンプ
ルＢおよびＣを一１８℃にてインキュベートした。イン
キューベート後、サンプルＣを元の体積の生理塩水中に
再懸濁した。他の）懸濁物を解凍した。得られたすべて
の懸濁物の細胞を沈降させ、１００ｍ１のＩＭＭＯＰＳ
（実施例９参照）中に再懸濁した。ここでＭＯＰＳはｐ
Ｈ＝７．５であり１０ｇ／ｌの尺、Σ−２．２−ジメチ
ルー１，３−ジオキソラン−４−メタノールを含んでい
た。
全ての懸濁物の６００　ｎｍでの光学密度は２８であっ
た。これら懸濁物を５００＋ｎ／のハソフル振盪フラス
コに移し、３０℃にて振盪、皿中でインキュベートした
。Ｒ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−
メタノールの鏡像体過剰率の増大は、これら細胞がこの
化合物の五−鏡像体を依然として転化できることを示し
ている（第８表参照）。
第８表 転化温度Ｔ　後処理　各経過時間後のＲ−２，２−（”
Ｃ）　　　　　　　　ジメチル−１，３−ジオキソラン
−４−メタノールのｅ、ｅ。
１　ｈｒ、　　２　ｈｒ、　　３　ｈｒ、　　４　ｈｒ
。
４　　　　　　　　０．０５　０．１１　０．１６　０
．２２４　　凍結乾燥　　０．０６　０．１０　０，１
４　０．２１−１８　　　　　　　　０．０３　０．０
８　０．１１　０．１５−１８　　　　１０χグリセリ
ン　　　　０．０７　　０．１５　　０，２３　　０．
３４実施例１５ 第９表に掲載した微生物を、２５ｍ１のＧＹＭＢ／ＭＯ
ＰＳ培地を含む１００ｍ６のパフフルフラスコ中で３０
℃にて４８時間成長させた。濃縮したＧＹＭＢ培地に、
ｐＨ７，０のＭＯＰＳ　（３−（Ｎ−モルホリノ）プロ
パンスルホン酸〕溶液を添加し、元のＧＹＭＢ培地中で
１００ｍＭのバッファーを得た。
この成長培養物に、約４．８ｇ／６のＲ，Ｓ−２゜２−
ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを添
加し、該培養物を更に８．２４および４８時間インキュ
ベートした。指示した各時点において、各微生物の培養
物２つを等量の酢酸エチルで抽出した。これにより、存
在する２、２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−
メタノールの約４０％という抽出回収率を達成した。次
いで、別々の各培養物から抽出された化合物を処理し、
実施例５に記載のようにしてキラル錯化カラムで分析し
た。結果を以下の第９表に示す。
インキエヘーション時間 微生物 コリネバクテリウム　アルカヌム （ＡＴＣＣ２１１９４） コリネバクテリウム　エキ Ａ　　２３６２　（ＣＢ　Ｓ　２６４．８７）コリネバ
クテリウム　ｘｌ Ａ　　２４３１　　（ＣＢ　Ｓ　２６３．８７）コリネ
バクテリウム　ハイドロ力ルポクラスタス（ＡＴＣＣ１
５１０８） コリネバクテリウム ｓ　ｐ、　ＤＳ　　５１２２　（ＣＢＳ　２６５．８７
）ノカルディア　カニクルリア （ＡＴＣＣ３１５４８） ノカルディア　コラリナ （ＡＴＣＣ３１３３８） ノカルディア　エリスロポリス （Ｔ　　４８７／ＮＣＩＢ　　９１５８）ノカルディア
　エリスロポリス （ＤＳＭ　　７４３） ノカルディア　エリスロポリス （ＡＴＣＣ４２７７） ノカルディア　パラフィナエ （ＮＣＩＢ　　１１２７７） ノカルディア　スペーシーズ ＤＳ　　５１２３　（ＣＢＳ　２６６．８７）蚤工表 ｇ／ｌ°％Ｒ％Ｓ　　　　ｇ／ｌ”Ｖ６Ｒ％Ｓ　　　　
ｇ／Ｊ”　％Ｒ％Ｓ１．２　　　８２　　１８　　　　
０．３２　　１００　　０　　　　０．１６　　１００
　　０２．２　　　５３　　４７　　　　０．９５　　
９９　　１　　　　０．８６　　９９　　１１．４　　
　７４　　２６　　　　０．８１　　１００　　０　　
　　０．６２　　１００　　０１．６　　　６１　　４
９　　　　０．８３　　１００　　０　　　　０．４１
　　１００　　０１．９　　　５６　４４　　　　０．
９０　　１００　　０　　　　０．７４　　１００　　
００．９１　　１００　　０　　　　０．５０　　１０
０　　０　　　　０．２７　　１００　　０１．７　　
　５９　　４１　　　　０．８５　　１００　　０　　
　　０．４５　　１００　　０１．７　　　６７　　３
３　　　　０．６８　　１００　　０　　　　０．５Ｂ
　　　１００　　０１．３　　　９５　　５　　　　１
．１　　１００　　０　　　　０．６１　　１００　　
０１．２　　　９８　　１　　　０．８４　　９９　　
１　　　　０．５５　　９９　　１２．２　　　５３　
４７　　　　０．８６　　９９　　１　　　　０．４８
　　９９　　１１．８　　　６３　３７　　　　０．９
８　　１００　　０　　・　　０．７２　　１００　　
　０インキユベ一シヨン時間 微生物 ロドコッカス　エリスロポリス ｓｅｔ、３８−２　　（ＣＢ３１７９．８６）ロドコッ
カス　ロドコッカス （ＮＣＩＢ　　９７０３） ロドコッカス　ロドコッカス （ＡＴＣＣ２１１９７） コリネバクテリウム　スペーシーズ Ｔ　　１３００　　（ＣＢＳ　２６７．８７）マイコバ
クテリウム　ロドコッカス （ＮＣＩＢ　　１１０６１） ノカルディア　オーランティア （ＮＣＴＢ　　９５５７） ノカルディア　力ルカレア （ＮＣＩＢ　　８８６３） ノカルディア　力サアルデ Ｔ　　９８５　（ＣＢＳ　２６８．８７）ノカルディア
　グロベルラ （ＮＣＩＢ　　９１５９） 掲載の全値は２つの結果の平均である。
＊　掲載の抽出量は低い抽出回収率に基づ＜捲夕第９表
（続き） ｇ／ｌ１１＝％Ｒ％Ｓ　　　ｇ７１２″１％Ｒ％Ｓ　　
　ｇ＃！”％Ｒ％ＳＬ、２　　　Ｂ９　１１　　　０．
８６　９９　１　　　０．６１　９９　　１１．２　　
８８　１２　　　０．５９　９９　１　　　’０．２４
　９９　　１２．２　　５０　５０　　　０．８９　９
９　１　　　０．６０　９９　　１ｎ、ｄ、　　ｎ、ｄ
、ｎ、ｄ、　　　１．３　　９８　２　　　１．２　１
００　　０２．３　　５０　５０　　　１；４　　　Ｂ
７　１３　　　１．０　１００　　００．９１　１００
”　　ＯＯ，８４１００００，４７１０００１，７７６
２４１，２１００００，９７１０００２，０５３４７ｎ
、ｄ、　　ｎ、ｄ、　　ｎ、ｄ、　　　１．０　　９９
　　１１．７　　５９　４１　　　１．１　１００　０
　　　１．４　１００　　０２．４　　５４　４６　　
０．６３　９９　１　　　０．５４　１００　　０（に
対して補正されていない。
実施例１６ 第１０表に示された微生物を実施例１５記載のように育
生させた。しかし，Ｒ２Ｓ−２，２−ジメチル−１，３
−ジオキソラン−４−メタノールの代りに、今回は約２
．４または４．８ｇ／ｆｆの−Ｒ工。
Ｓ−２，２−ペンチシン−４−ヒドロキシメチル−１，
３−ジオキソラン（グリセリンシクロヘキサノン誘導体
）を該成長させた培養物に添加した。
インキュベーションは２４または４８時間行なった。抽
出、処理および分析は実施例５および１１に記載のよう
に行なった。
このグリセリンシクロヘキサノン誘導体の抽出収率は１
００％であると見積もられた。
１００　ｍｌ　　（０，９６モル）のシクロヘキサノン
、１３０　　ｍｌ　（２，０８モル）のグリセリン、３
００ｍｋのヘキサンおよび５ｇの４−トルエンスルホン
酸−水和物の攪拌された混合物を還流し、一方で凝縮水
層を２０時間に亘り分離した。４　ｍｌのトリエチルア
ミンを添加した後、該混合物を減圧濃縮し、残渣を水／
ジエチルエーテルで振盪した・該水層をジエチルエーテ
ルで抽出し、エーテル抽出液を併合し、３０％の塩化ナ
トリウムで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し
、蒸発させて１５３ｇの残渣を得た。これを真空蒸留し
て表記化合物１１３．６　ｇを得た。
蒸上 微生物　　　　　　　　　　　　添加基質　　　ＡＣｇ
／１２＞ 打 コリネバ′クテリウム　エキ Ａ　　２４３１　　（ＣＢＳ　２６３．８７）　　　　
　　４．８　　　　　ｎノカルディア　エリスロポリス （ＡＴＣＣ４２７７）　　　　　　　　　２．４　　　
　　ｎロドコッカス　エキ （ＩＦＯ０３７３０）　　　　　　　　　２．４　　　
　　ｎロドコッカス　ロドクラウス （ＮＣ■Ｂ　　９７０３）　　　　　　　　　４．８　
　　　１掲示の全値は、＊を付した値（これは単一の実
彫の平均値である。
ｎ、ｄ、＝測定されず。
′ンキュベーション　　　　インキュベーション２４時
間　　　　　　　　　４８時間 り出量　％Ｒ％Ｓ　　　　抽出量　％Ｒ％Ｓ：　／　１
　）　　　　　　　　　　（ｇ　／　Ｒ）、ｄ、　　　
　　　　　　　　　３．１　　　８１　　１９、ｄ、　
　　　　　　　　　　　０．４３　　１００　　　０、
ｄ、　　　　　　　　　　　　１．４０　９４６．５　
　１００　　０　　　　　ｎ、ｄ。
、ｄ、　　　　　　　　　　　　０．５　　　９１　　
　７趣から得た値である）を除き２つの結果実施例エフ 第１１表に記載の微生物を実施例１５および１６におけ
るように育生した。本例では２．２−ブチレン−４−ヒ
ドロキシメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノー
ル（グリセリンシクロペンタノン誘導体）を育生した培
養物に添加した。この培養物を更に２４および４８時間
インキュベートした。抽出、処理および分析は上記のよ
うに行なった。
このグリセロールシクロペンタノン誘導体の抽出回収率
は１００％と見積もられた。
８８ｎ＋４！（１モル）のシクロペンタノン、１４０ｍ
　ｌ　　（２，２４モル）のグリセリン、３００ｍｊ＋
のヘキサンおよび５ｇの４−トルエンスルホン酸−水和
物の混合物を攪拌しかつ還流し、一方で凝縮水層を２８
時間に亘り分離した。冷却し、４　ｍｌのトリエチルア
ミンを添加した後、得られる混合物を減圧濃縮し、ジエ
チルエーテル／水と共に振盪した・該水層をジエチルエ
ーテルで３回抽出し、併合したエーテル抽出液を水およ
び塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させ
て残渣１１７ｇを得た。これを真空蒸留して表記化合物
１０５ｇを得た。
微生物　　　　　　　　　　　　　添加基質（ｇ／ｌ コリネバクテリウム　アルカヌム （ＡＴＣＣ２１１９４）　　　　　　　　４．８ノカル
デイア　パラフィナエ （ＮＣＩＢ　　１１２７７）　　　　　　　　４．８０
ドコン力ス　エリスロポリス ＳＣＬ３８−２　（ＣＢＳ１７９．８６）　　　　　２
．４０トコ・ノカス　ロドクラウス （ＮＣＩＢ　　９７０３）　　　　　　　　　４．８掲
載した全値は２つの結果の平均値であｎ、ｄ、−測定さ
れず。
一一大 インキュベーション　　　　インキュベーション２４時
間　　　　　　　　　４８時間 抽出量　％Ｒ％Ｓ　　　　抽出量　％Ｒ％Ｓ（ｇ／（１
）　　　　　　　　　　＜ｇ／１２＞１．６　　　８８
　　１２　　　　０．６６　　　９１　　９ｎ、ｄ、　
　　　　　　　　　　　１．６　　　１００　　００．
５７　　１００　　０　　　’　　ｎ、ｄ。
２．４　　　９９　　１　　　　１．８　　　１００　
　０ｎ、ｄ、　　　　　　　　　　　　２．３　　　９
７　　３る。
実施例１８ ０ドコツ力ス　ロドクラウス菌株　Ｎ　ＣＩ　Ｂ１２Ｏ
３および菌株　ＡＴＣＣ２１１９７を実施例１５および
１６の如く育生させた。本例では２．２−ジエチル−４
−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン（グリセリ
ンペンタノン誘導体）を育生した培養物に添加し、更に
２４４時間インキュベートた。抽出、処理および分析は
上述のように実施した。
このグリセリンペンタノン誘導体の抽出収率は１００％
と見積もられた。結果は第１２表に示す。
８５＋ｎβ　（０，８０５モル）の３−ペンタノン、４
戸 １０４　ｍｌ　　＜１．６８％ル”）　　のグリセリン
、２５０ｍβのへキサンおよび４ｇの４−トルエンスル
ホン酸−水和物の混合物を撹拌し、これを還流し、一方
で凝縮水層を１８時間に亘り分離した。冷却後、４ｍｌ
のトリエチルアミンを添加し、得られる混合物を減圧濃
縮した。残渣をジエチルエーテル／水と共に振盪した。
水層をジエチルエーテル（３倍量）で２度抽出し、併合
した抽出液を水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム
で乾燥し、濾過し、蒸発させて残渣４８ｇを得た。これ
を真空蒸留して表記化合物の２つの両分を夫々１１．５
０ｇおよび６．１２ｇ得た。
実施例１９ コリネバクテリウム　エキ　Ａ２４３１（ＣＢ　Ｓ　２
６３．８７）　　同スペーシーズ　ＤＳ　　５１２２＜
ｃ　Ｂ　Ｓ　２６５．８？）およびノカルディア　スペ
ーシーズ　ＤＳ　　５１２３　（ＣＢ　Ｓ　２６６．８
７）を実施例１５および１６において前記したように育
生させた。本例では２．４　ｇ　／　１の４−ヒドロキ
シメチル−１，３−ジオキソラン（グリセリンホルムア
ルデヒド誘導体）を育生した培養物に添加した。次いで
この培養物を更に６時間インキュベートした。
その後、該細胞を遠心によりプロスから分離し、上澄を
エクスターライト（Ｅｘｔｅｒｌｙｔ）　　　３−カラ
ム〔メルク（Ｍｅｒｃｋ）　ｎｒ、　１５３７２　）　
）により溶出した。次いで、カラムをＧＣ−分析のため
に酢酸エチルで溶出した。この手順を用いて抽出回収率
を５０％として見積もった。結果を第１３表に示す。
宅 〇ｃ＋ＩＩ −Ｂ−１盈−４−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソ
ラン １０４　ｇ　　（０，７８モル）の且、盈−２，２−ジ
メチル−４−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン
、５００ｍｊ２のベンゼン、８６　ｇ　　（１，５３モ
ル）の粉末化水酸化カリウムおよび１７５　ｍｌ（１，
５２モル）のベンジルクロリドを含む機械的攪拌混合物
を１７時間還流し、一方凝縮水層を分離（１４ｎｕの水
を分離）した。冷却後、この混合物を水洗し、１Ｍ炭酸
水素ナトリウムおよび塩水で夫々洗浄し、硫酸マグネシ
ウムで乾燥し、濾過し、蒸発させて、２８７ｇの粗製ベ
ンジルエーテルを得た。これを３０Ｏｎ／！のメタノー
ル、１００ｍｊ’の水および２０ｍ１の３６％塩酸の混
合物と共に１．５時間攪拌した。次に、この混合物を約
Ｌｏｇの水酸化ナトリウムを溶かした水溶液で中和し、
減圧濃縮した。得られた残渣をジエチルエーテルで抽出
し、この抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過しか
つ蒸発させて１６３ｇの残留物を得た。これをシリカ上
で精製して１１８ｇの−Ｒ，５−３−ベンジルオキシプ
ロパン−１，２−ジオールを得た。
８亥ジオールの１８．２　ｇ　（０，１モル）を５０ｍ
ｊ２のヘキサン、１０ｇのパラホルムアルデヒドおよび
０．５ｇのｐ−）ルエンスルホン酸−水和物と混合し、
攪拌し、４時間還流し、一方で凝縮水層を分離した。冷
却後、この混合物をＩＭの炭酸水素ナトリウム溶液およ
びプラインで洗浄し、濾過し、蒸発させて１７．７８ｇ
の−Ｒよ、旦−４−ベンジルオキシメチル−１，３−ジ
オキソランを得た。これに１００ｍ６のジエチルエーテ
ルおよび１．５ｇの１０％パラジウム担持炭素を混合し
、水素雰囲気下で４時間攪拌した。次に、触媒を濾別し
、濾液を蒸発し、ジエチルエーテルを用いてシリカ上で
精製して、８．０７ｇの表記化合物を得た。
実施例２０ ラウス（ＡＴＣＣ２１１９７）を上記のように（実施例
１５参照）４８時間育生させた。育生した培養物のいく
つかに、約４．８ｇ１ｌのＲ，Ｓ−２，２−ジメチル−
１，３−ジオキソラン−４−メタノールを添加し、更に
約５時間インキュベートして、−Ｂ工、旦−２，２−ジ
メチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールの分割
に対して通常応答性の酵素活性を誘発させた。誘発培養
物がらの細胞を次に遠心により収穫し、ｐＨ７，０の１
００ｍＭ　　ＭＯＰＳバッファーで洗浄し、同じバッフ
ァー中で２度濃縮して集め、その２５ｍ１のサンプルを
１０Ｏｎ／！のバッフルフラスコ中に入れた。
約５．０ｇ／ｌの且、Σ−２．２−ペンチレンー４−ヒ
ドロキシメチル−１，３−ジオキソラン（グリセリンシ
クロヘキサノン誘導体）を！？’Ａ液に添加し、これを
更に３０°Ｃにて一夜インキユベートした。次いで、こ
の懸濁物を抽出し、上記のように（実施例１５および１
６）に記載のように分析した。第１４表に示した結果は
、誘発細胞が立体特異的にグリセリンシクロヘキサノン
誘導体を転化できるが、非誘発細胞は該化合物を転化せ
ず、もしくは掻くゆっくりとしか攻撃しない。非誘発細
胞をも懸濁し、上記２種の化合物と共にインキュベート
したコントロール実験は何等分解を生じないことを示し
た。
微生物　　　　　　　　　　　　　　条件正規のアッセ
イ（３） インキュベーション冒 ロドコッカス　エリスロポリス　　ｔ　＝　５　ｈｒ。
ＳＣＬ３８　２　　（ＣＢＳ１７９．８６）　　　ｔ＝
２４ｈｒ。
バッフ薔−中の誘発本 インキュベーション− 正規のアッセイ（３） インキュベーション■ ロドコッカス　ロドクラウス　　　ｔ＝５ｈｒ。
ＡＴＣＣ２１１９７ｔ＝２４ｈｒ。
バッファー中の誘発本 インキュベーション− 掲載の値はすべて２つの結果の平均である。
＋１）　　ジメチル誘導体一旦、Ｓ−２，２−ジメチル
−１，定。抽出量は低抽出回収率により生ずる損失につ
き補正２（２）　　シクロヘキサノン誘導体＝兄、Σ−
２，２−ペンモ％の抽出回収率を仮定。
（３）正規のアッセイは実施例１５および１６で使用し
ノ表 基質 ジメチル誘導体（１１シクロヘキサノン誘導体（２）抽
出量　　％Ｒ％Ｓ　　　　抽出量　　％Ｒ％ＳＣｇ／Ｉ
ｌ）　　　　　　　　　　　（ｇ／＋２）奇問 １．４　　　　５７　　４３ ０．９６　　　１００　　　０　　　　　　５．４　　
　　５１　　４９■胞。
一夜。　　　０．９０　　１００　　０　　　　　３．
２　　　８１　　１９寺間 ２．２　　　５２　　４８ １．１　　　１００　　０　　　　　６．９．　　　５
２　　４８■胞。
一夜。　　　０．６１　　１００　　０　　　　４．１
７６．２４３−ジオキソラン−４−メタノール。約４０
％の抽出回収率を仮されていない。
ルンー４−ヒドロキシメチル＝１，３．−ジオキソラン
。約１００ヒような手続きである。
実施例２１ 実施例２０と同様な実験をノカルディア　、ｉ＝クルリ
ア（ＡＴＣＣ３１５４８）を用いて実施した。ここで，
Ｒ２Ｓ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４
−メタノールで誘発した細胞をＭＯＰＳバッファー中に
懸濁した。本例では、しかしながら、分割すべき基質は
−Ｂよ、Ｓ−２，２−ジエチル−４−ヒドロキシメチル
−１，３−ジオキソラン（グリセリンペンタノン誘導体
）であり、これを上記懸濁液に添加した。本例の結果は
第１５表に示しである。（実施例２０に記載のものと同
じコントロール実験をもこの基質を用いて行なった）。
実施例２２ を実施例１５および１６において既に述べたように成長
させた。本例では２．４ｇ／ｊ？の不斉化合物２−メチ
ル−２−イソブチル−４−ヒドロキシメチル−１，３−
ジオキソラン（グリセリンメチルイソブチルケトン誘導
体）を成長させた培養物に添加した。これらの培養物を
更に４８時間インキュベートした。その後、メチルトリ
クロリドを用いて抽出を行ない、ＮＭＲ分析用のサンプ
ルを調製した。ＮＭＲにより、４種の鏡像体を分割でき
、これら鏡像体間の比を決定した。２種の旦−異性体（
即ちこの誘導体のグリセリン部分のＣ２の構造に対する
Ｒ）からのシグナルは規準化合物としてＲ−２，２−ジ
メチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールから合
成されたグリセリンメチルイソブチルケトンＨ’？ｚ　
’４体を用いることにより決定できた。
結果を第１６表に示す。本例は不斉誘導体も分割できる
ことを示す。
第１６表 微生物　　　　　存在する種々の鏡像体の割合抽出−ｉ
Ｒ“／・・Ｓ′″／・・Ｒ“／・・Ｓ”／・・（ｇ／Ｊ
！　）　　χ　　　２　　　χ　　χコリネバクテリウ
ム　エキ　　　　１．１　　　　３９　　　　　０　　
　　　４６　　　　１５ＣＢ　　Ｓ　　２６３．８７ ■ドコフカス　エキ　　　　　　　１．８　　　　３５
　　　　　２　　　　　３５　　　　２８Ｉ　　Ｆ　Ｏ
０３７３０ 掲載の値は２つの実験の平均値である。
＊　４種の鏡像体（Ｒ／Ｒ，Ｒ／Ｓ、Ｓ／ＲおよびＳ／
Ｓ）のはじめのＲまたはＳなる名称はＳＲＢＭ誘導体グ
リセリン部分の０２に関連する。どのシグナルがＲ／Ｒ
鏡像体に起因するか、およびどのシグナルがＲ／Ｓに起
因するかを決定することはできなかった。
ワキシメチル−１，３−ジオキソランの製造６５　ｍｆ
ｔ　（０，５１７モル）のメチルイソブチルケトン、２
００ｎｌのヘキサン、７０　　ｍＥ　　（１，１２モル
）のグリセリンおよび３ｇの４−トルエンスルホン酸−
水和物の混合物を攪拌し、還流し、一方凝縮水層を４８
時間に亘り分離した。冷却後、トリエチルアミン（４ｍ
ｌを添加し、この混合物を真空下で蒸発させ、ジエチル
エーテル／水と共に振盪した。この水層をジエチルエー
テルで２度抽出（２ｘ）Ｌ、併合したエーテル抽出液を
水およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し
、濾過し、蒸発させて７０ｇの残渣を得た。これを真空
蒸留して６２ｇの表記化合物を得た。
、２−メチル−２−イソブチル−４−Ｒ−ヒドロキシメ
チル−１，３−ジオキソランの製造５．４８　ｍｌ　　
（４１，５ミリモル）のＲ−（−）−２゜２−ジメチル
−４−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン（ｅ、
ｅ、＝　０．９）、５０ｍ１のベンゼン、４．６ｇの粉
末状水酸化カリウムおよび１０ｍｊ２のベンジルクロリ
ドの攪拌された混合物をモレシーブ（ｍｏｌｅｓｉｅｖ
ｅ）　４　Ａ上で２３時間還流した。冷却後、この混合
物を夫々水、ＩＭの炭酸水素ナトリウムおよびブライン
で洗浄し、濾過し、蒸発させた。得られた残渣を、１５
ｎ＋ｊ２のメタノール、５ｍｊ２の水および１ｍｌの３
６％塩酸の混合物と共に１ｇ時間撹拌した。次に、この
混合物を水酸化ナトリウムで中和し、蒸発させ、ジエチ
ルエーテルで抽出した。この抽出液を硫酸マグネシウム
で乾燥し、濾過し、蒸発させて９．４０　ｇの油状物を
得た。これをシリカ上で精製して、６．５９ｇの旦−３
−ベンジルオキシ−プロパン−１，２−ジオールを得た
。
０．４ｇの該ジオール、１０＋ｎｊ！のベンゼン、１ｍ
ｌのメチルイソブチルケトンおよび３０ｍｇのｐ−トル
エンスルホン酸の混合物をモレシーブ４Ａ上で１８時間
還流した。冷却後、トリエチルアミン（５０ｍｆｆ）を
添加し、得られた混合物を水洗し、濾過し、蒸発させた
。得られた残渣を、１０ｍ１ｌのジエチルエーテル、０
．Ｉｎ／！のトリエチルアミンおよび０．２ｇの１０％
パラジウム担持炭素の混合物と混合し、水素雰囲気下で
１２時間攪拌した。この混合物を”；慮過し、濾液を蒸
発させて０．３４　ｇの表記化合物を得た。これはペン
ジルエーチルで汚染されていた。
実施例２３ ノカルディア　バラフィナエ　ＮＣＩＢ　　１１２７７
を実施例１において既に述べたように成長させた。本例
では、２．４　ｇ　／　１の不斉化合物２−メチル−４
−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン（グリセロ
ールアセタルデヒド誘導体）を培養物に添加し、更に１
５時間インキュベートした。次に、この細胞を遠心によ
りブロスから分離し・、上澄をエクスターライト（Ｅｘ
ｔｅｒｌｙｔ）　−３−カラム上で？容量させた。その
後、このカラムをＧＣ−分析のために酢酸エチルで溶出
した。このＧＣ−分析により４種の鏡像体が分離できた
。この手順を利用することにより、残されていた添加基
質の約８０％が抽出された。実施例２２におけるように
、且−異性体（即ち、この誘導体のグリセリン部分のＣ
２の構造に対するＲ）は、Ｒ−２゜２−ジメチル−１，
３−ジオキソラン−４−メタノールから合成されたグリ
セロールアセタルデヒド誘導体を規準化合物として用い
て命名できた。
結果を第１７表に示す。実施例２２におけるように、こ
の結果も不斉誘導体が分割できることを示している。
Ｒ，５−２−メチル−４−ヒドロキシメチル−１，３−
ジオキソラン（ラセミ型アセタルデヒド誘導体）の製造 ７０ｍＡのバラアセタルデヒド、４００ｍ／のヘキサン
、２００ｍｌ１のグリセリンおよび５．４ｇのｐ−）ル
エンスルホン酸−水和物の混合物を攪拌し、３×２４時
間還流し、一方で凝縮水層を分離した。冷却後、トリエ
チルアミン（５ｍｌ”）を添加し、得られた混合物を真
空下で濃縮し、得られた残渣を真空薫留（６５〜ｂ Ｈｇ）　Ｌ、て、１２９．７４　ｇの表記化合物と２−
メチル−５−ヒドロキシ−１，３−ジオキソランとの混
合物を得た。
約５０　ｇの該混合物をシリカ上で、ジエチルエーテル
を溶離液として用いて２度クロマトグラフィーに掛けて
、ラセミ型の表記化合物を９．４５　ｇ得たが、このも
のは７．５％の２−メチル−５−ヒドロキシ−１，３−
ジオキソランで汚染さ株ていた。
２−メチル−４−１御ヒドロキシメチルー１．３−ジオ
キソラン（Ｒ−アセタルデヒド誘導体）の製造 ０．４７　ｇ　（２，５８ミリモル）の）−３−ベンジ
ルオキシ−プロパン−１，２−ジオール、１０ｍｊ２の
ヘキサン、０．４ｎｌのバラアセタルデヒドおよび１５
■のｐ−）ルエンスルホン酸−水和物の混合物を攪拌し
、モレシーブ４Ａ上で１．５時間還流した。冷却した後
、トリエチルアミン１滴を加え、得られた混合物を水洗
し、濾過し、蒸発させた。
得られた残渣を、１０ｍ１のジエチルエーテルおよび０
．１５　ｇの１０％パラジウム担持炭素と混合し、水素
雰囲気下で３時間攪拌した。この混合物を濾過し、蒸発
させて、表記化合物１９５ｎｗを得た。
第１７表 微生物　　　　　存在する種々の鏡像体の割合抽出量Ｒ
“／・・Ｓ“／・・Ｒ”／・・Ｓ”／・・（ｇム０　　
χ　　　χ　　χ　　χ ツカルテイア　バラフィナエ　　　　０．２２　　　６
１　　　　　９　　　　３０　　　　　　ＯＮ　　ＣＩ
　　Ｂ　　１１２７７ これら値のすべては２つの結果の平均値である。
（１１回収中の損失に関し補正されていない。
（２）４種の鏡像体（Ｒ／Ｒ，Ｒ／Ｓ、Ｓ／ＲおよびＳ
／Ｓ）の初めのＲまたはＳは、上記誘導体のグリセリン
部分の０２に関連する。いずれのＧＣ−ピークがＲ／Ｒ
鏡像体に起因するか、およびいずれがＲ／Ｓに起因する
かは決定されなかった。

Claims (32)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）Ｒ−異性体に富む２，２−Ｒ＿１，Ｒ＿２−１，
    ３−ジオキソラン−４−メタノール（但し、該一般式に
    おいてＲ＿１およびＲ＿２はＨまたは場合により置換さ
    れたまたは分岐したアルキル基、またはＲ＿１およびＲ
    ＿２はこれらが結合している炭素原子と共に場合より置
    換された炭素環を形成する）の製造方法であって、 ￥Ｒ￥−および￥Ｓ￥−２，２−Ｒ＿１，Ｒ＿２−１，
    ３−ジオキソラン−４−メタノールの混合物を、該混合
    物中の￥Ｓ￥−２，２−Ｒ＿１，Ｒ＿２−１，３−ジオ
    キソラン−４−メタノールが消費されて、￥Ｒ￥−異性
    体に富む２，２−Ｒ＿１，Ｒ＿２−１，３−ジオキソラ
    ン−４−メタノールを与える時間、￥Ｓ￥−２，２−Ｒ
    ＿１，Ｒ＿２−１，３−ジオキソラン−４−メタノール
    を立体選択的に消費する能力を有する以下に規定する微
    生物または該微生物起源の物質の作用に付す工程を含む
    ことを特徴とする上記方法。
  2. （２）上記時間が上記￥Ｓ￥−２，２−Ｒ＿１，Ｒ＿２
    −１，３−ジオキソラン−４−メタノールの少なくとも
    ８０％を消費する時間であることを特徴とする特許請求
    の範囲第（１）項記載の方法。
  3. （３）上記時間が上記￥Ｓ￥−２，２−Ｒ＿１，Ｒ＿２
    −１，３−ジオキソラン−４−メタノールの少なくとも
    ９０％を消費するのに必要な時間であることを特徴とす
    る特許請求の範囲第（２）項に記載の方法。
  4. （４）実質的に純粋な￥Ｒ￥−２，２−Ｒ＿１、Ｒ＿２
    −１，３−ジオキソラン−４−メタノールを製造するこ
    とを特徴とする特許請求の範囲第（１）項〜第（３）項
    のいずれか１項に記載の方法。
  5. （５）上記アルキル基が６以下の炭素原子を含むか、ま
    たは上記炭素環が８以下の炭素原子を含むものであるこ
    とを特徴とする特許請求の範囲第（１）項〜第（４）項
    のいずれか１項に記載の方法。
  6. （６）上記Ｒ＿１およびＲ＿２が同一であることを特徴
    とする特許請求の範囲第（１）項〜第（５）項のいずれ
    か１項に記載の方法。
  7. （７）上記Ｒ＿１およびＲ＿２がＨまたは炭素原子数１
    〜３のアルキル基であるか、あるいはこれらが結合して
    いる炭素原子と共に炭素原子数５または６の炭素環を形
    成することを特徴とする特許請求の範囲第（１）項〜第
    （５）項のいずれか１項に記載の方法。
  8. （８）上記微生物が細菌、酵母またはカビであることを
    特徴とする特許請求の範囲第（１）項〜第（７）項のい
    ずれか１項に記載の方法。
  9. （９）上記微生物が細菌、好ましくはノカルディア属、
    ロドコッカス属、またはコリネバクテリウム属またはマ
    イコバクテリウム属に属するものであることを特徴とす
    る特許請求の範囲第（１）項〜第（７）項記載の方法。
  10. （１０）上記使用する微生物がロドコッカス　エキ、好
    ましくはロドコッカス、エキＮＣＩＢ１２０３５または
    ロドコッカス　エキＩＦＯ０３７３０であることを特徴
    とする特許請求の範囲第（９）項記載の方法。
  11. （１１）上記使用する微生物が、ロドコッカス　ロドク
    ラウス、好ましくはロドコッカス　ロドクラウスＮＣＩ
    Ｂ９７０３またはロドコッカスロドクラウスＡＴＣＣ２
    １１９７であることを特徴とする特許請求の範囲第（９
    ）項記載の方法。
  12. （１２）上記使用する微生物がロドコッカス　エリスロ
    ポリス、好ましくはロドコッカス　エリスロポリスＳＣ
    Ｌ（ＣＢＳ１７９．８６）、ロドコッカス　エリスロポ
    リスＳＣＬ３８−２Ｒ（ＣＢＳ１８０．８６）またはロ
    ドコッカス　エリスロポリスＳＣＬ３８−２Ｓ（ＣＢＳ
    １８１．８６）であることを特徴とする特許請求の範囲
    第（９）項記載の方法。
  13. （１３）使用する上記微生物がコリネバクテリウムエキ
    、好ましくはコリネバクテリウム　エキＡ２３６２（Ｃ
    ＢＳ２６４．８７）またはコリネバクテリウム　エキＡ
    ２４３４１（ＣＢＳ２６３．８７）であることを特徴と
    する特許請求の範囲第（９）項記載の方法。
  14. （１４）使用する上記微生物がコリネバクテリウムアル
    カヌム（ＡＴＣＣ２１１９４）であることを特徴とする
    特許請求の範囲第（９）項記載の方法。
  15. （１５）使用する上記の微生物がコリネバクテリウム　
    ハイドロカルボクラスタス（ＡＴＣＣ１５１０８）であ
    ることを特徴とする特許請求の範囲第（９）項記載の方
    法。
  16. （１６）使用する上記の微生物がコリネバクテリウムｓ
    ｐ．ＤＳ５１２２（ＣＢＳ２６５．８７）またはコリネ
    バクテリウムｓｐ．Ｔ１３００（ＣＢＳ２６７．８７）
    であることを特徴とする特許請求の範囲第（９）項記載
    の方法。
  17. （１７）使用する上記微生物がノカルディア　エリスロ
    ポリス、好ましくはノカルディア　エリスロポリスＴ４
    ８７（ＮＣＩＢ９１５８）、ノカルディア　エリスロポ
    リス（ＤＳＭ７４３）またはノカルディア　エリスロポ
    リス（ＡＴＣＣ４２７７）であることを特徴とする特許
    請求の範囲第（９）項記載の方法。
  18. （１８）使用する上記微生物がノカルディア　コラリナ
    （ＡＴＣＣ３１３３８）である特許請求の範囲第（９）
    項記載の方法。
  19. （１９）使用する上記微生物カリカルディア　カニクル
    リア（ＡＴＣＣ３１５４８）であることを特徴とする特
    許請求の範囲第（９）項記載の方法。
  20. （２０）使用する上記微生物がノカルディア　パラフィ
    ナエ（ＮＣＩＢ１１２７７）である特許請求の範囲第（
    ９）項記載の方法。
  21. （２１）使用する上記微生物がノカルディア　スペック
    ．ＤＳ５１２３（ＣＢＳ２６６．８７）であることを特
    徴とする特許請求の範囲第（９）項記載の方法。
  22. （２２）使用する上記微生物がノカルディア　オーラン
    ティア（ＮＣＩＢ９５５７）であることを特徴とする特
    許請求の範囲第（９）項記載の方法。
  23. （２３）使用する上記微生物がノカルディア　カルカレ
    ア（ＮＣＩＢ８８６３）である特許請求の範囲第（９）
    項記載の方法。
  24. （２４）使用する上記微生物がノカルディア　カサアル
    デＹ９８５（ＣＢＳ２６８．８７）である特許請求の範
    囲第（９）項記載の方法。
  25. （２５）使用する上記微生物がノカルディア　グロベル
    ラ（ＮＣＩＢ９１５９）である特許請求の範囲第（９）
    項記載の方法。
  26. （２６）使用する上記微生物がノカルディア　ラゴーサ
    （ＮＣＩＢ８９２６）である特許請求の範囲第（９）項
    記載の方法。
  27. （２７）使用する上記微生物がマイコバクテリウム　ロ
    ドクラウス（ＮＣＩＢ１１０６１）である特許請求の範
    囲第（９）項記載の方法。
  28. （２８）ロドコッカス　エリスロポリスＳＣＬ（ＣＢＳ
    １７９．８６）、ロドコッカス　エリスロポリスＳ　Ｃ
    Ｌ３８−２Ｒ（ＣＢＳ１８０．８６）、ロドコッカス　
    エリスロポリスＳＣＬ３８−２Ｓ（ＣＢＳ１８１．８６
    ）、コリネバクテリウム　エキＡ２３６２（ＣＢＳ２６
    ４．８７）、コリネバクテリウム　エキＡ２４３１（Ｃ
    ＢＳ２６３．８７）、コリネバクテリウムｓｐ．ＤＳ５
    １２２（ＣＢＳ２６５．８７）、ノカルディアスペック
    ．ＤＳ５１２３（ＣＢＳ２６６．８７）、コリネバクテ
    リウムｓｐ．Ｔ１３００（ＣＢＳ２６７．８６）および
    ノカルディア　カサアルデＴ９８５（ＣＢＳ２６８．８
    ７）からなる群から選ばれる微生物。
  29. （２９）使用する上記微生物が生細胞、死細胞または休
    止細胞として固定化されていることを特徴とする特許請
    求の範囲第（１）項〜第（２７）項のいずれか１項に記
    載の方法。
  30. （３０）上記￥Ｓ￥−２，２−Ｒ＿１，Ｒ＿２−１，３
    −ジオキソラン−４−メタノールが実質的に￥Ｒ￥−２
    ，２−Ｒ＿１、Ｒ＿２−１，３−ジオキソラン−４−カ
    ルボン酸に転化されることを特徴とする特許請求の範囲
    第（１）項〜第（２７）項および第（２９）項のいずれ
    か１項に記載の方法。
  31. （３１）上記特許請求の範囲第（１）項〜第（３０）項
    のいずれかに従って、￥Ｒ￥−異性体に富む２，２−ジ
    メチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールを調製
    する工程、次いで該￥Ｒ￥−異性体に富む２，２−ジメ
    チル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールをそれ自
    体公知の方法に従って￥Ｓ￥−異性体に富むメトプロロ
    ールに転化する工程を含むことを特徴とする￥Ｓ￥−異
    性体に富むメトプロロールの製造方法。
  32. （３２）特許請求の範囲第（３０）項に記載の方法に従
    って、￥Ｒ￥−２，２−Ｒ＿１、Ｒ＿２−１，３−ジオ
    キソラン−４−カルボン酸を￥Ｓ￥−２，２−Ｒ＿１、
    Ｒ＿２−１，３−ジオキソラン−４−メタノールに転化
    する工程を含む、￥Ｓ￥−異性体に富む２，２−Ｒ＿１
    、Ｒ＿２−１，３−ジオキソラン−４−メタノールの製
    造方法。
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