JPS6383027A - ス−パ−オキシドジスムタ−ゼの分離法 - Google Patents
ス−パ−オキシドジスムタ−ゼの分離法Info
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- JPS6383027A JPS6383027A JP61224866A JP22486686A JPS6383027A JP S6383027 A JPS6383027 A JP S6383027A JP 61224866 A JP61224866 A JP 61224866A JP 22486686 A JP22486686 A JP 22486686A JP S6383027 A JPS6383027 A JP S6383027A
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Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は赤血球中のスーパーオキシドジスムターゼ（以
下ＳＯＤと略記する）の分離法に関するものであり、更
に詳しくはヘモグロピン等の夾雑タンパク質を除去して
ＳＯＤを分離する、ＳＯＤの分離法に関するものである
。
下ＳＯＤと略記する）の分離法に関するものであり、更
に詳しくはヘモグロピン等の夾雑タンパク質を除去して
ＳＯＤを分離する、ＳＯＤの分離法に関するものである
。
赤血球中にはＳＯＤが微量含まれているが、ヘモグロピ
ン等の夾雑タンパク質が多く含まれておりその精製は容
易でない。赤血球中の酵素を精製するための方法として
は有機溶媒を添加し不要タンパク質を除去する方法が知
られている。
ン等の夾雑タンパク質が多く含まれておりその精製は容
易でない。赤血球中の酵素を精製するための方法として
は有機溶媒を添加し不要タンパク質を除去する方法が知
られている。
土橋等は（ＴｓｕｃｈｉｈａｓｈｉｏＭ、、 Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、 Ｚ。
ｈｅｍ、 Ｚ。
１４０ ６５（１９２３））赤血球に水を加えて溶血し
、溶血液にクロロフォルム／エタノールを添加し、ヘモ
グロピンを沈澱除去し、水層ＫＳＯＤ等の酵素を抽出し
ている。
、溶血液にクロロフォルム／エタノールを添加し、ヘモ
グロピンを沈澱除去し、水層ＫＳＯＤ等の酵素を抽出し
ている。
公開特許公報昭５６−１４８２８７は血球溶液にアルコ
ールを添加、さらに水を添加してヘモグロピンを遠心除
去する方法を開示している。
ールを添加、さらに水を添加してヘモグロピンを遠心除
去する方法を開示している。
以上のような方法は多量の有機溶媒を使用するため、工
秦的に酵素を精製するためには、溶媒の回収設備等の大
掛かりな設備が必要となる。
秦的に酵素を精製するためには、溶媒の回収設備等の大
掛かりな設備が必要となる。
公開特許公報昭５５−５１２０６は、赤血球に銅、亜鉛
等の２価の金属塩を加え、熱処理してＳＯＤ活性を有す
るオルゴテインを単離する方法を開示している。この方
法は、加熱工程を含み、その加熱工程および精製段階で
ＳＯＤ活性が大きく低下する問題がある。
等の２価の金属塩を加え、熱処理してＳＯＤ活性を有す
るオルゴテインを単離する方法を開示している。この方
法は、加熱工程を含み、その加熱工程および精製段階で
ＳＯＤ活性が大きく低下する問題がある。
公開特許公報昭５７−１２９９３は、赤血球を遷移金属
および無機中性塩存在下にて加熱し、生ずる沈澱を除去
し、ＳＯＤを単離する方法を開示している。この方法は
タンパク質分離工程に、上記の方法と同じ様に加熱工程
が入り、ＳＯＤの活性回収率に問題がある。
および無機中性塩存在下にて加熱し、生ずる沈澱を除去
し、ＳＯＤを単離する方法を開示している。この方法は
タンパク質分離工程に、上記の方法と同じ様に加熱工程
が入り、ＳＯＤの活性回収率に問題がある。
本発明は上述した公知技術の問題点を解決しようとする
ものである。
ものである。
本発明者らは赤血球に水を加えて得た溶血液中のヘモグ
ロピンは中性では安定であるが、酸性もしくは塩基性下
で放置すると変成し、上清中に酵素類が抽出されること
を見出し、すでに特許出願している。さらに研究をすす
めた結果、ヘモグロピンを変成沈澱除去した上澄九金属
塩を溶解し、弱酸性になった溶液をふたたび中性、もし
くは弱アルカリ性にすれば残存している不要タンパク質
を沈澱として除去できＳＯＤを高収率で分離することが
できることを発見した。
ロピンは中性では安定であるが、酸性もしくは塩基性下
で放置すると変成し、上清中に酵素類が抽出されること
を見出し、すでに特許出願している。さらに研究をすす
めた結果、ヘモグロピンを変成沈澱除去した上澄九金属
塩を溶解し、弱酸性になった溶液をふたたび中性、もし
くは弱アルカリ性にすれば残存している不要タンパク質
を沈澱として除去できＳＯＤを高収率で分離することが
できることを発見した。
本発明に使用する原料血液は赤血球を溶出させて、ｐＨ
変化を行いヘモグロピン等のＳＯＤ以外のタンパク質を
除去したものである。しかし、その様な溶液中にも変成
が不十分なため沈澱せずに溶解して残存するヘモグロピ
ン等の不要なタンパク質がある。その様なタンパク質は
、そのコンフォメイションが変化していると考えられ、
その変化の差を利用すれば変性の度合いの大きい残存ヘ
モグロピン等のタンパク質とＳＯＤを分離できると考え
られる。そこで我々は適当量の（１０〜１００ ｍＭ
）＠、鉄、マンガン等遷移金属またはアルミニウム、亜
鉛等の両性金属の塩を該溶液に加え、溶液のｐＨをそれ
らの金属がイオン化し溶解し、なおかつＳＯＤが変性し
ないｐＨ領域２〜５好ましくは五５に調整し、その後加
えた金属イオンが水酸化物として沈澱し、同時に沈澱し
た不要タンパク質が再溶解しないｐＨ領域６〜９に調整
し、ＳＯＤの分離を行った。ここで溶液を酸性にする方
法はｃｌ−、ｓｏ”−等の金属塩を該溶液に溶解すれば
、そのｐＨは２〜４となり特別の方法は必要としないが
、ＯＨ−等の金属塩を用いる場合は、塩酸。
変化を行いヘモグロピン等のＳＯＤ以外のタンパク質を
除去したものである。しかし、その様な溶液中にも変成
が不十分なため沈澱せずに溶解して残存するヘモグロピ
ン等の不要なタンパク質がある。その様なタンパク質は
、そのコンフォメイションが変化していると考えられ、
その変化の差を利用すれば変性の度合いの大きい残存ヘ
モグロピン等のタンパク質とＳＯＤを分離できると考え
られる。そこで我々は適当量の（１０〜１００ ｍＭ
）＠、鉄、マンガン等遷移金属またはアルミニウム、亜
鉛等の両性金属の塩を該溶液に加え、溶液のｐＨをそれ
らの金属がイオン化し溶解し、なおかつＳＯＤが変性し
ないｐＨ領域２〜５好ましくは五５に調整し、その後加
えた金属イオンが水酸化物として沈澱し、同時に沈澱し
た不要タンパク質が再溶解しないｐＨ領域６〜９に調整
し、ＳＯＤの分離を行った。ここで溶液を酸性にする方
法はｃｌ−、ｓｏ”−等の金属塩を該溶液に溶解すれば
、そのｐＨは２〜４となり特別の方法は必要としないが
、ＯＨ−等の金属塩を用いる場合は、塩酸。
硫酸等の鉱酸、酢酸、ギ酸等の有機酸などを用いて行う
。この酸性溶液を中性にする方法は、苛性ソーダ水酸化
カリウムおよびアミン等を用いて行、 − う。
。この酸性溶液を中性にする方法は、苛性ソーダ水酸化
カリウムおよびアミン等を用いて行、 − う。
本発明をさらに詳細に説明するために、実施例を上げる
が、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではな
い。
が、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではな
い。
実施例１
原料溶液（８０Ｄ比活性１０Ｕ／Ｉｎ９）５０ｒｎｔに
硫酸銅５水和塩α４９（３ｚｍｍｏ１／ｌ＞を加える。
硫酸銅５水和塩α４９（３ｚｍｍｏ１／ｌ＞を加える。
溶液のｐＨは、４．８となった。
１Ｎ苛性ソーダを滴下攪拌してｐＨをＺＯに調整した。
沈澱物を遠心除去後、上澄溶液中のＳＯＤ活性をＪ、
′Ｍ、ＭＣＣ０ｒｄらの方法（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃ，
ｈｅｍ、 。
′Ｍ、ＭＣＣ０ｒｄらの方法（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃ，
ｈｅｍ、 。
２４４、扁２２．６０４９（１９６９））に従って測定
したＳＯＤ活性は原料液中の８０係であった。さらにタ
ンパク質量をＢ１０ｒａｄ試薬で測定し、上澄液中のＳ
ＯＤ比活性を求めると８００ Ｕ／Ｉｎｔであった。
したＳＯＤ活性は原料液中の８０係であった。さらにタ
ンパク質量をＢ１０ｒａｄ試薬で測定し、上澄液中のＳ
ＯＤ比活性を求めると８００ Ｕ／Ｉｎｔであった。
実施例２
実施例１にて使用したと同じ原料溶液５０ｓｄに、塩化
第二鉄六水和物の１Ｍ水溶液を１−加えた。
第二鉄六水和物の１Ｍ水溶液を１−加えた。
溶液のｐＨの値は２．５となった。１Ｎ苛性ソーダを加
え溶液のｐＨを７に調整し沈澱物を遠心除去後、上清溶
液のＳＯＤ比活性を測定すると１５０Ｕ／■であり、Ｓ
ＯＤの活性は原料液中のものの７０チを保持していた。
え溶液のｐＨを７に調整し沈澱物を遠心除去後、上清溶
液のＳＯＤ比活性を測定すると１５０Ｕ／■であり、Ｓ
ＯＤの活性は原料液中のものの７０チを保持していた。
実施例３
実施例１で使用したと同じ原料溶液５０ｗｔＫ硫酸アル
ミニウム１４−１８水和物１．０９を加えた。
ミニウム１４−１８水和物１．０９を加えた。
溶液のｐＨ値は＆３となった。１Ｎ苛性ソーダを加え、
溶液のｐＨを７に調整し沈澱物を遠心分離除去後、上清
中のＳＯＤ比活性を測定すると２１５ＴＴ／ダであり、
ＳＯＤ活性は原料液中のものの７０％を保持していた。
溶液のｐＨを７に調整し沈澱物を遠心分離除去後、上清
中のＳＯＤ比活性を測定すると２１５ＴＴ／ダであり、
ＳＯＤ活性は原料液中のものの７０％を保持していた。
本発明の特徴は、血球中のＳｏＤを分離する上で、赤血
球中に共存する不要タンパク質例えばヘモグロピンをｐ
Ｆｒ調整、及び金属塩を加えることにより沈澱除去する
ところにある。得られたＳＯＤ溶液の比活性は１００〜
８００ Ｕ／■であり原料溶’ｆｉｌｃ １０ Ｕ／ｍ
９）と比較して純度は１０〜８０倍上がった。
球中に共存する不要タンパク質例えばヘモグロピンをｐ
Ｆｒ調整、及び金属塩を加えることにより沈澱除去する
ところにある。得られたＳＯＤ溶液の比活性は１００〜
８００ Ｕ／■であり原料溶’ｆｉｌｃ １０ Ｕ／ｍ
９）と比較して純度は１０〜８０倍上がった。
以上のようく、極めて簡単な操作により高純度のＳＯＤ
を得ることができる。
を得ることができる。
Claims (3)
- （１）赤血球よりスーパーオキシドジスムターゼを分離
する方法において、予め赤血球を溶血させ溶血液のｐＨ
を６．５以下にて処理してヘモグロピンを変成させた後
、該溶血液のｐＨを７〜８に調整することによりヘモグ
ロピンを沈澱除去する工程と、その上澄み液に金属塩を
加えて、さらにｐＨをふたたびコントロールすることに
より上澄に残存する不必要なタンパク質を沈澱除去する
工程との組み合わせからなることを特徴とするスーパー
オキシドジスムターゼの分離法。 - （２）金属塩かタンパク質とキレート結合し、酸性溶液
では溶解するが、中性およびアルカリ性では水酸化物と
なり沈澱するような遷移金属および両性金属の塩である
特許請求の範囲第１項記載の分離法。 - （３）金属塩添加後のｐＨコントロールを金属塩を溶解
することにより酸性になった溶液をｐＨ７〜８の中性に
することにより行い、それによって夾雑タンパク質およ
び金属イオンを沈澱除去する特許請求の範囲第１項また
は第２項記載の分離法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61224866A JPS6383027A (ja) | 1986-09-25 | 1986-09-25 | ス−パ−オキシドジスムタ−ゼの分離法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61224866A JPS6383027A (ja) | 1986-09-25 | 1986-09-25 | ス−パ−オキシドジスムタ−ゼの分離法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6383027A true JPS6383027A (ja) | 1988-04-13 |
Family
ID=16820394
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61224866A Pending JPS6383027A (ja) | 1986-09-25 | 1986-09-25 | ス−パ−オキシドジスムタ−ゼの分離法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6383027A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03226976A (ja) * | 1990-02-01 | 1991-10-07 | Amp Japan Ltd | 電気コネクタ及び電気コネクタ用コンタクト |
-
1986
- 1986-09-25 JP JP61224866A patent/JPS6383027A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03226976A (ja) * | 1990-02-01 | 1991-10-07 | Amp Japan Ltd | 電気コネクタ及び電気コネクタ用コンタクト |
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