JPS6353512B2 - - Google Patents
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- JPS6353512B2 JPS6353512B2 JP3082281A JP3082281A JPS6353512B2 JP S6353512 B2 JPS6353512 B2 JP S6353512B2 JP 3082281 A JP3082281 A JP 3082281A JP 3082281 A JP3082281 A JP 3082281A JP S6353512 B2 JPS6353512 B2 JP S6353512B2
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
- G01N33/559—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody through a gel, e.g. Ouchterlony technique
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
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Description
一般に各種抗原に抗体が結合すると抗体分子に
分子変容がおこり、ここに補体が存在するとこの
抗体に補体が結合し活性化され補体は消費され
る。この反応を補体結合反応といい、この反応を
応用して消費された補体量から間接的に抗体価又
は抗原価を測定する試験法を補体結合試験法とよ
ばれている。この試験法はウイルス及び細菌感染
症における血清学的検査に広く利用されているも
のである。然しながら従来この試験を実施するに
際し、その度毎に抗原又は抗体、補体、溶血素、
ヒツジ赤血球等を至適使用濃度に調整しなければ
ならないと共に溶血素とヒツジ赤血球から感作赤
血球を作製しなければならなかつた。又マイクロ
プレートの穴の中にドロツパーで希釈液としてベ
ロナール緩衝液を滴下し、抗体又は抗原を含む試
料をダイリユーターにて２倍階段希釈を行い、更
に至適濃度の抗原又は抗体と補体をドロツパーに
て添加し、４℃において12時間程度反応せしめた
後、更に感作赤血球をドロツパーにて添加し36℃
において１時間反応させ、マイクロプレートを遠
心器により低速遠心を行い感作赤血球の溶血の有
無或はその度合を肉眼にて観察して抗体価又は抗
原価を測定しているものであつた。従つて極めて
煩雑な操作を必要とすると共に試料の抗体価又は
抗原価を２倍階段希釈の終末値で表示するという
雑駁な測定によるために試料間の相対値が不明瞭
となるおそれがあつた。 本発明はかかる欠点を改善せんとして鋭意研究
を行つた結果、長期間安定な寒天プレート内にお
いて補体結合反応を行わせることにより抗体価又
は抗原価を測定する方法を見出したものである。
即ち本発明方法は抗原又は抗体の何れか一方と感
作赤血球を含有する寒天プレート内に抗体又は抗
原の何れか一方を含む試料を該寒天プレートと該
試料間の抗原と抗体とが相互に組合されるように
埋め込み、この上に補体フイルムを載置して単純
拡散法に基く抗原抗体反応を行い、次いで溶血反
応を行つた後、ここに生成せる環状体の径を測定
することを特徴とするものである。 本発明方法の１例を図面により詳細に説明す
る。 2.0〜2.5％アガロース10〜20容、至適使用濃度
の抗原又は抗体0.5〜2.0容及び1.0〜2.5％感作赤
血球10〜20容を40〜45℃の恒温槽内にてよく混合
し、厚さ1.0〜2.5mmになるように水平台のシヤレ
ー又はこれに類するものに注入し、室温にて固化
せしめて寒天プレート１をうる。なおこの場合希
釈液としてゼラチン0.01％、NaN30.02％を含む
ベロナール緩衝液（PH7.3〜7.5）を使用する。 然る後試料注入用穴２として例えば直径２〜４
mmになるようにゲルパンチアにてパンチし、密閉
容器に入れて２〜４℃に保存する。次いで該穴２
の中に抗体又は抗原を含む試料３を例えば５〜10
ml注入し、その上に支持体５の片面に補体６を乾
燥せしめて得た補体フイルム膜４を載置し2゜〜６
℃において16〜24時間単純拡散法に基く抗原抗体
反応を行う。なお補体フイルム膜４を載置する理
由は補体５を寒天プレート１の面に一様に拡散せ
しめるためである。次いで34〜37℃において１〜
５時間加温することにより抗原抗体反応区域７に
おいて補体６がより多く消費されるため感作赤血
球は溶血しないが、未反応区域８においては補体
６が消費されないため感作赤血球は溶血する。而
して試料中の抗体又は抗原の量に応じて不溶血の
環状体が鮮明に生成するから、この環状体の径を
測定し、その値を２乗することにより抗体価又は
抗原価を容易に測定することが出来る。 このように本発明方法は極めて簡単な操作によ
り試料中の抗体又は抗原の量に応じて不溶血の環
状体が生成しうるため、この径を測定するのみで
よいと共に必要に応じて試料と同時に従来方法に
よる抗体又は抗原価が既知で、その価が異る数種
の標準溶液を同時に測定して得られる環状体の径
を測定し、その２乗した数値と抗体価又は抗原価
とにより標準直線を作製し、次に試料の環状体を
同様に計算して上記標準直線より従来方法の表示
による抗体価、又は抗原価を求めることも出来
る。 次に本発明の実施例について説明する。 実施例 １ インフルエンザウイルスHI抗体の測定 2.2％アガロース８ml、抗原としてインフルエ
ンザウイルスＡ／熊本／37／79H1N1のWhole
virion（HA価１：5120）0.75ml、２％感作赤血球
6.25mlを夫々40〜45℃の恒温槽内でよく撹拌し、
水平台上のシヤーレ（径8.5mm）に注入し室温に
て安定化させて寒天プレートをえた。次に該プレ
ートに試料注入用穴として径３mmのものを15mm間
隔にて16ケ所パンチし、この穴中に非働化済の人
血清10μを注入し、その上に補体フイルム膜を
載置して４℃、18時間反応せしめた。更に36℃に
おいて２時間加温して環状体を生成せしめた。こ
の環状体の径を測定し、２乗して計算し抗体価を
測定した。その結果は第１表に示す通りである。 このようにインフルエンザウイルスのWhole
virionを抗原として使用するとウイルスの表在抗
原即HAが反応することにより従来のHI価と相関
するものであつた。 又例えば血清No.11、12、13、14の如く従来方法
で一様にHI価128倍と測定された血清でも本発明
方法によればそれぞれ54.8、64.0、67.2、70.6と
なり血清間の相対値がより明瞭になつた。
分子変容がおこり、ここに補体が存在するとこの
抗体に補体が結合し活性化され補体は消費され
る。この反応を補体結合反応といい、この反応を
応用して消費された補体量から間接的に抗体価又
は抗原価を測定する試験法を補体結合試験法とよ
ばれている。この試験法はウイルス及び細菌感染
症における血清学的検査に広く利用されているも
のである。然しながら従来この試験を実施するに
際し、その度毎に抗原又は抗体、補体、溶血素、
ヒツジ赤血球等を至適使用濃度に調整しなければ
ならないと共に溶血素とヒツジ赤血球から感作赤
血球を作製しなければならなかつた。又マイクロ
プレートの穴の中にドロツパーで希釈液としてベ
ロナール緩衝液を滴下し、抗体又は抗原を含む試
料をダイリユーターにて２倍階段希釈を行い、更
に至適濃度の抗原又は抗体と補体をドロツパーに
て添加し、４℃において12時間程度反応せしめた
後、更に感作赤血球をドロツパーにて添加し36℃
において１時間反応させ、マイクロプレートを遠
心器により低速遠心を行い感作赤血球の溶血の有
無或はその度合を肉眼にて観察して抗体価又は抗
原価を測定しているものであつた。従つて極めて
煩雑な操作を必要とすると共に試料の抗体価又は
抗原価を２倍階段希釈の終末値で表示するという
雑駁な測定によるために試料間の相対値が不明瞭
となるおそれがあつた。 本発明はかかる欠点を改善せんとして鋭意研究
を行つた結果、長期間安定な寒天プレート内にお
いて補体結合反応を行わせることにより抗体価又
は抗原価を測定する方法を見出したものである。
即ち本発明方法は抗原又は抗体の何れか一方と感
作赤血球を含有する寒天プレート内に抗体又は抗
原の何れか一方を含む試料を該寒天プレートと該
試料間の抗原と抗体とが相互に組合されるように
埋め込み、この上に補体フイルムを載置して単純
拡散法に基く抗原抗体反応を行い、次いで溶血反
応を行つた後、ここに生成せる環状体の径を測定
することを特徴とするものである。 本発明方法の１例を図面により詳細に説明す
る。 2.0〜2.5％アガロース10〜20容、至適使用濃度
の抗原又は抗体0.5〜2.0容及び1.0〜2.5％感作赤
血球10〜20容を40〜45℃の恒温槽内にてよく混合
し、厚さ1.0〜2.5mmになるように水平台のシヤレ
ー又はこれに類するものに注入し、室温にて固化
せしめて寒天プレート１をうる。なおこの場合希
釈液としてゼラチン0.01％、NaN30.02％を含む
ベロナール緩衝液（PH7.3〜7.5）を使用する。 然る後試料注入用穴２として例えば直径２〜４
mmになるようにゲルパンチアにてパンチし、密閉
容器に入れて２〜４℃に保存する。次いで該穴２
の中に抗体又は抗原を含む試料３を例えば５〜10
ml注入し、その上に支持体５の片面に補体６を乾
燥せしめて得た補体フイルム膜４を載置し2゜〜６
℃において16〜24時間単純拡散法に基く抗原抗体
反応を行う。なお補体フイルム膜４を載置する理
由は補体５を寒天プレート１の面に一様に拡散せ
しめるためである。次いで34〜37℃において１〜
５時間加温することにより抗原抗体反応区域７に
おいて補体６がより多く消費されるため感作赤血
球は溶血しないが、未反応区域８においては補体
６が消費されないため感作赤血球は溶血する。而
して試料中の抗体又は抗原の量に応じて不溶血の
環状体が鮮明に生成するから、この環状体の径を
測定し、その値を２乗することにより抗体価又は
抗原価を容易に測定することが出来る。 このように本発明方法は極めて簡単な操作によ
り試料中の抗体又は抗原の量に応じて不溶血の環
状体が生成しうるため、この径を測定するのみで
よいと共に必要に応じて試料と同時に従来方法に
よる抗体又は抗原価が既知で、その価が異る数種
の標準溶液を同時に測定して得られる環状体の径
を測定し、その２乗した数値と抗体価又は抗原価
とにより標準直線を作製し、次に試料の環状体を
同様に計算して上記標準直線より従来方法の表示
による抗体価、又は抗原価を求めることも出来
る。 次に本発明の実施例について説明する。 実施例 １ インフルエンザウイルスHI抗体の測定 2.2％アガロース８ml、抗原としてインフルエ
ンザウイルスＡ／熊本／37／79H1N1のWhole
virion（HA価１：5120）0.75ml、２％感作赤血球
6.25mlを夫々40〜45℃の恒温槽内でよく撹拌し、
水平台上のシヤーレ（径8.5mm）に注入し室温に
て安定化させて寒天プレートをえた。次に該プレ
ートに試料注入用穴として径３mmのものを15mm間
隔にて16ケ所パンチし、この穴中に非働化済の人
血清10μを注入し、その上に補体フイルム膜を
載置して４℃、18時間反応せしめた。更に36℃に
おいて２時間加温して環状体を生成せしめた。こ
の環状体の径を測定し、２乗して計算し抗体価を
測定した。その結果は第１表に示す通りである。 このようにインフルエンザウイルスのWhole
virionを抗原として使用するとウイルスの表在抗
原即HAが反応することにより従来のHI価と相関
するものであつた。 又例えば血清No.11、12、13、14の如く従来方法
で一様にHI価128倍と測定された血清でも本発明
方法によればそれぞれ54.8、64.0、67.2、70.6と
なり血清間の相対値がより明瞭になつた。
【表】
【表】
実施例 ２
インフルエンザウイルスCF抗体の測定
抗原として従来のインフルエンザウイルスＢ型
CF抗原（抗原価１：32）を使用した以外はすべ
て実施例１と同様にして抗体価を測定した。 その結果は第２表に示す通りであり、従来の方
法によるCF価と相関するものであつた。 更に実施例１と同様に血清間の相対値が従来の
方法より明瞭になつた。
CF抗原（抗原価１：32）を使用した以外はすべ
て実施例１と同様にして抗体価を測定した。 その結果は第２表に示す通りであり、従来の方
法によるCF価と相関するものであつた。 更に実施例１と同様に血清間の相対値が従来の
方法より明瞭になつた。
【表】
【表】
実施例 ３
マイコプラズマCF抗体の測定
抗原として従来のマイコプラズマCF抗原（抗
原価１：32）を使用した以外は実施例１と同様に
して抗体価を測定した。 その結果は第３表に示す通りであり、従来の方
法によるCF価と相関するものであつた。 更に実施例１、２と同様の血清間の相対値が従
来の方法より明瞭になつた。
原価１：32）を使用した以外は実施例１と同様に
して抗体価を測定した。 その結果は第３表に示す通りであり、従来の方
法によるCF価と相関するものであつた。 更に実施例１、２と同様の血清間の相対値が従
来の方法より明瞭になつた。
【表】
以上詳述した如く本発明方法によれば、その操
作が極めて簡単にして抗原又は抗体の有無及び抗
体価又は抗原価を正確に測定しうる等顕著な効果
を有する。
作が極めて簡単にして抗原又は抗体の有無及び抗
体価又は抗原価を正確に測定しうる等顕著な効果
を有する。
図面は本発明方法を実施するための概略説明図
である。 １……寒天プレート、２……試料注入用穴、３
……試料、４……補体フイルム膜、５……支持
体、６……補体、７……抗原抗体反応区域、８…
…未反応区域。
である。 １……寒天プレート、２……試料注入用穴、３
……試料、４……補体フイルム膜、５……支持
体、６……補体、７……抗原抗体反応区域、８…
…未反応区域。
Claims (1)
- １ 抗原又は抗体の何れか一方と、感作赤血球を
含有する寒天プレート内に抗体又は抗原の何れか
一方を含有する試料を、該寒天プレートと該試料
間の抗原と抗体とが相互に組合されるように埋込
み、この上に補体フイルムを載置して単純拡散法
に基く抗原抗体反応を行い、次いで溶血反応を行
つた後、ここに生成せる環状体の径を測定するこ
とを特徴とする抗原抗体反応の測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3082281A JPS57146163A (en) | 1981-03-04 | 1981-03-04 | Method for measuring reaction of antigen and antibody |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3082281A JPS57146163A (en) | 1981-03-04 | 1981-03-04 | Method for measuring reaction of antigen and antibody |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS57146163A JPS57146163A (en) | 1982-09-09 |
| JPS6353512B2 true JPS6353512B2 (ja) | 1988-10-24 |
Family
ID=12314390
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3082281A Granted JPS57146163A (en) | 1981-03-04 | 1981-03-04 | Method for measuring reaction of antigen and antibody |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS57146163A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0625764B2 (ja) * | 1984-03-24 | 1994-04-06 | 株式会社東芝 | 補体価測定方法 |
| JP5345347B2 (ja) * | 2008-07-15 | 2013-11-20 | 日立アロカメディカル株式会社 | 検体処理装置及び方法 |
-
1981
- 1981-03-04 JP JP3082281A patent/JPS57146163A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS57146163A (en) | 1982-09-09 |
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