JPS63503386A - 免疫グロブリンに対するＦｃレセプター - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 免疫グロブリンに対するＦｃレセプター本発明は、免疫グロブリンに対するＦｃ レセプターに関するものである。

ある観点において、本発明は、ＩｇＧに対するマウスおよびヒトＦｃレセプター をコード化するｃＤＮＡに関するものである。このマウスクローンは配列決定さ れ、そしてｍＲＮＡおよび細胞表面Ｆｃレセプターの発現が研究された。マウス Ｆｃレセプターは、２つの相同の細胞外領域（これらはまた免疫グロブリン超科 ［ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ　］のメンバーに相同するものである。〉を有する、 ３０１アミノ酸トランスメンブラン糖タンパクである。このＦｃレセプターは、 Ｎ結合グリコジル化［ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎコの４つの部位および長い９ ４アミノ酸サイトプラスミツク　テールを有する。ｍＲＮＡのノーザン　アナリ シス　［Ｎｏｒｔｈｅｒｎａｎａｌｙｓｉｓ　］　、免疫複合体結合、ならびに 細胞系およびトランスフェクタントの血清学的研究は、ｃＤＮＡクローンによっ てコード化されるレセプターは、マウスＩｇＧ２ｂに結合し、そして他の免疫グ ロブリンにはほとんど結合しないことを示した。ヒトＦｃ（ガンマ）ＲｃＤＮＡ クローンがまた単離され、そしてベータ１およびアルファの両方のマウスＦｃＲ に核酸およびアミノ酸の双方のレベルで著しい相同をもつグリコジル化トランス メンブラン分子をコード化するものであることが見い出された。

本発明は、免疫グロブリンのＦｃ部分に対する、そしてＡＴＣＣ６７４１４、Ａ ＴＣＣ６７４１５あるいはＡＴＣＣ６７４１６から誘導される、レセプターを提 供するものである。

本発明は、免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターを提供するものであり 、該レセプターは、マウスおよびヒト免疫グロブリンのＦｃ部分に結合する能力 を発揮するものである。　゛ 該レセプターは、好ましくは抗体類および免疫複合体類に結合する能力を示し、 ４０〜７０キロドルトンの大きさを有し、約１．８、約２゜０、約１．９、約１ ．４、または約２．４キロベースのｍＲＮＡから形成され、そしてシスティン（ Ｃｙｓ）残基の実質的に規則的に離間された２つの対、２もしくは４ポテンシヤ ル　Ｎ結合グリコジル化部位を含むものである。本発明は免疫グロブリンに対す る、そして上記レセプターと少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０ ％、さらに好ましくは少なくとも６０％の相同を有するレセプターを含むもので ある。

−例において、該レセプターは以下のアミノ酸配列を含むものである。

（ａ　）　ｍｅ↑Ｉｅｕ　Ｉｅｕ　ｔｒｐ　ｔｈｒ　ａｌａ　ｖａｔ　Ｉｅｕ　 ａｓｎ　Ｉｅｕ　ａｌａａｌａ　ｇｌｙ　ｔｈｒ　ｈｉｓ　ａｓｐ　ｌｅｕ　ｐ ｒｏ　ｌｙｓ　ａｌａ　ｖａｌ　ｖａｌ　１ｙｓｌｅｕ　ｇｌｕ　ｐｒｏ　ｐｒ ｏ　ｔｒｐ　ｉｌｅ　。

（ｂ　）　ｇｌｕ　ｇｌｎ　ｔｈｒ　ａｒｇ　ｌｅｕ　ｓｅｒ　ａｓｐ　ｐｒｏ 　ｖａｔ　ａｓｐ　Ｉｅｕａｌｙ　ｖａｔ　ｉｌｅ、 （ｃ　）　ｌｙｓ　ｇｌｙ　ｓｅｒ　Ｉｅｕ　ｐｌｙ　ａｒｇｔｈｒ　Ｉｅｕ　 ｈｉｓ　ｏｌｎ　５ｅｒｌｙｓ　ｐｒｏ　ｖａｌ　ｔｈｒ　ｉｌｅ　ｔｈｒ　ｖ ａｔ　ｇｌｎ　ｇａｙ　ｐｒｏ　Ｉｙｓおよび（ｄ　）　ｇｌｕ　ａｌａ　ｇｌ ｕ　ａｓｎ　ｔｈｒ　ｉｌｅ　ｔｈｒ　ｔｙｒ　ｓｅｒ　ｌｅｕ　Ｉｅｕｌｙｓ 　ｈｉｓ　ｐｒｏ　ｇｌｕ　ａｌａ　ｌｅｕ　ａｓｐ　ｇｌｕ　ｇｌｕ　ｔｈｒ 　ｇｌｕ　ｈｉｓ　。

好適な一例においては、該レセプターは以下のアミノ酸配列の少なくともひとつ を含むものである。

（ａ　）　Ｍｅｔ　ＧＩＵ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　ｖａｔ　Ｈｉｓ 　Ｖａｌ　ｐｈｅ　ＳｅｒＡｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｈｉｓ　Ｍｅｔ　 Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　ＶａｔＬｅｕ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ａ ｌａ　Ａｌａ　Ｇｌｙ。

（ｂ　）　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｈｉｓ　Ａｓｎ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ 　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　５ｅｒＴｈｒ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ｐｈｅ　Ｈｉｓ　Ａｓｎ　 Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　５ｅｒＧｌｎ　Ｖａｔ　Ｇｌｎ　Ａ ｌａ　Ｓｅｒ　丁ｙｒ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　ＶａｔＡｓ ｎ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　。

（ｃ　）　Ｃｙｓ　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ 　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　ＡｒｇＩｌｅ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｈｉｓ　Ａｓｎ　 Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｖａｔ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ旧ｓ　Ｈｉｓ　丁ｙｒ　Ｓｅ ｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　ＡｌａＡｓｎ 　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ 　。

（ｄ　）　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ａｌａ 　Ａｌａ　Ｖａｔ　ＴｈｒＧｌｙ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｌａ　 Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ｉｌｅ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　ＶａｌＳｅｒ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｔ ｙｒ　Ｌｅｕ　。

（ｅ　）　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｎ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｌｅｕ 　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　ＡｓｎＰｒｏ　Ａｓｐ　Ｈｉｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｍｅｔ　 Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　丁ｈｒ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　ＧｌｕＧｌｕ　Ｖａｌ　ｃｒｙ　Ｇ ＩＵ　Ｔｙｒ＾ｒｑ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙｃｒｙ　５ｅｒＶａｔ　 Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　 Ｌｅｕ　ＧｌｕＰｒｏ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ａ ｓｎ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　ＬｅｕＧｌｕ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｌｙ ｓ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　ｌ１ｅＴｈｒ　Ｔｙｒ 　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｌｅｕ 　ＡｓｐＧｌｕ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ｇｌｎ　 Ａｓｎ　Ｈｉｓ　Ｉｌｅ　。

（ｆ）ＮＳＧＰＲＮ　ＬＷＬＬＱＰＬＴＶＬＬＬＬＡＳＡＤＳＱＡ＾　。

（ｇ）ＣＱＧＡＲ３ＰＥＳＤＳＩＱ賢ＦＨＮＧＮＬＩＰＴＨＴＱＰＳＹＲＦＫＡ ＮＮＮＤＳＧＥＹ丁Ｃ１（ｈ）ＣＨ３ＷＫＤＫＰＬＶＫＶＴＦＦＯＮＧＫＳＯＫ ＦＳ　ＲＬ　Ｄ　Ｐ　Ｔ　Ｆ　Ｓ　Ｉ　Ｐ　ＯＡ　Ｎ　１１　Ｓ　ＨＳ　Ｇ　Ｄ 　Ｙ　ＨＣ。

（ｉ）ＳＰＨＧ　Ｉ　ＩＶＡＶＶ　ＩＡＴＡＶＡＡ　ＩＶＡＡＶＶＡＬＩＹＣ。

（ｊ）ＲＫＫＲＩＳＡＮＳＴＤＰＶＫＡＡＱＦＥＰＰＧＲＱＨＩＡＩＲＫＲＯＬ ＥＥＴＮＮＤＹＥＴＡＤＧＧＹＨＴＬＮＰＲＡＰＴＤＤＫＮＩＹＬＴＬＰＰＮＤ ＨＶＮＳＮＮ。

本発明はまた、上記レセプターあるいはそのフラグメントに関しコード化するた めに適用される、または上記レセプターあるいはそのフラグメントに関しコード 化するために適用される物質を産生ずる、ヌクレオチド配列、遺伝子、ｃＤＮＡ クローンあるいはこれらのためのベクターを提供するものである。

本発明はまた、上記レセプターのリーダー配列、細胞外領域、トランスメンブラ ン領域もしくは細胞内領域に関しコード化するために適用される、または上記レ セプターのリーダー配列、細胞外領域、トランスメンブラン領域もしくは細胞内 領域に関しコード化するために適用される物質を産生ずる、ヌクレオチド配列、 遺伝子、ｃＤＮＡクローンあるいはこれらのためのベクターを提供するものであ る。

本発明はまた、ＡＴＣＣ６７４１４、ＡＴＣＣ６７４１５またはＡＴＣＣ６７４ １６中に取込まれ、そして免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターあるい はそのフラグメントに関しコード化し得るｃＤＮＡクローン、遺伝子、あるいは ヌクレオチド配夕Ｉ丁、ならびにＡＴＣＣ６７４１４、ＡＴＣＣ６７４１５また はＡＴＣＣ６７４１６からなる物質を提供するものである。

好ましいヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子、あるいはこれらを含み そして免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターに関してコード化し得るベ クターは、以下のヌクレオチド配列を含むものである。

（ａ　）　ＡＴＧ　ＣＴＡ　ＣＴＣＴＧＧ　ＡＣＡ　ＧＣＣＧＴＧ　ＣＴＡ　Ａ ＡＴ　ＣＴＴ　ＧＣ丁丁Ｃ丁　ＧＧＧ　ＡＣＴ　ＣＡＴ　ＧＡＴ　ＣＴＴ　ＣＣ Ａ　ＡＡＧ　ＣＣＴ　ＧＴＣＧ丁ＣＡＡＡ　ＣＴＣＧＡＧ　ＣＣＣＣＣＧ　ＴＧ Ｇ　ＡＴＣ。

（ｂ　）　ＧＡＧ　ＣＡＧ　ＡＣＣＣＧＣＣＴＣＡＧＣＧＡＣＣＣＴ　ＧＴＡ　 ＧＡＴ　ＣＴＧＧＧＡ　ＧＩＧ　ＡＴＴ　。

（ｃ　）　ＡＡＡ　ＧＧＡ　ＡＧＴ　ＣＴＡ　ＧＧＡ　ＡＧＧ　ＡＣＡ　ＣＴＧ 　ＣＡＣＣＡＧ　ＴＣＣＡＡＧ　ＣＣＴ　ＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴ　ＧＴＣＣ ＡＡ　ＧＧＧ　ＣＣＣＡＡＧおよび（ｄ　）　ＧＡＧ　ＣＣＴ　ＧＡＧ　ＡＡＣ ＡＣＧ　ＡＴＣＡＣＣＴＡＣＴＣＡ　ＣＴＣＣＴＣＡＡＧ　ＣＡＴ　ＣＣＣＧＡ Ａ　ＧＣＣＴＴＧ　ＧＡＴ　ＧＡＡ　ＧＡＡ　ＡＣＡ　ＧＡＧ　ＣＡＴ　。

好ましい例において、ヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子あるいはこ れらを含むベクターは、以下のヌクレオチド配列の少なくとも１つを含むもので ある。

（ａ　）　ＡＴＧ　ＧＡＧ　ＡＧＣＡＡＣＴＧＧ　ＡＣＴ　ＧＴＣＣＡＴ　ＧＴ Ｇ　ｆｆＣＴＣＡＣＧＧ　ＡＣＴ　ＴＴＧ　ＴＧＣＣＡＴ　ＡＴＧ　ＣＴＡ　Ｃ ＴＧ　ＴＧＧ　ＡＣＡ　ＧＣＣＧＴＧ　ＣＴＡＡＡＴ　ＣＴＴ　ＧＣＴ　ＧＣＴ 　ＧＧＧ　。

（ｂ）　丁ＧＣＧＡＡ　ＧＧＧ　ＡＣＣＣＡＣＡＡＣＣＣＴ　ＧＧＧ　ＡＡＣＴ ＣＴ　ＴＣＴＡＣＣＣＡＧ　ＴＧＧ　ＴＴＣＣＡＣＡＡＴ　ＧＧＧ　ＡＧＧ　Ｔ ＣＣＡＴＣＣＧＧ　ＡＧＣＣＡＧＧＴＣＣＡＡ　ＧＣＣＡＧＣＴＡＣＡＣＧ　Ｔ ＴＴ　ＡＡＧ　ＧＣＣＡＣＡ　ＧＴＣＡＡＴ　ＧＡＣＡＧＴ　ＧＧＡ　ＧＡＡ　 ＴＡＴ　ＣＧＧ　ＴＧＴ　。

（Ｃ）　ＴＧＣＣＡＴ　ＡＧＣＴＧＧ　ＡＧＧ　ＡＡＣＡＡＡ　ＣＴＡ　ＣＴＧ 　ＡＡＣＡＧＧＡＴＣＴＣＧ　ＴＴＣ丁ＴＣＣＡＴ　６６丁　ＧＡＡ　ＡＡＡ　 丁ＣＣＧＴＧ　ＡＧＧ　ＴＡＴ　ＣＡ丁丁ＡＣＴＡＣＡＧＴ　ＡＧＴ　６６丁　 ＴＴＣＴＣＴ　ＡＴＣＣＣＣＡＡＡ　ＧＣＣＡＡＣＣＡＣＡＧＴ　ＣＡＣＡＧＴ 　ＧＧＧ　ＧＡＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣ。

（ｄ）　丁ＴＡ　ＣＣＡ　ＧＴＡ　ＴＴＧ　ＡＣＡ　ＡＴＴ　ＧＴＧ　ＧＣＴ　 ＧＣＴ　ＧＴＣＡＣ丁丁ＧＧ　ＡＴＴ　ＧＣＴ　ＧＴＣＧＣＡ　ＧＣＣＡＴＴ　 ＧＴＴ　ＡＴＴ　ＡＴＣＣＴＡ　ＧＴＡ　ＴＣＣＣＴＧ　ＧＴＣＴＡＴ　ＣＴＣ 。

（ｅ　）　ＡＡＧ　ＡＡＡ　ＡＡＧ　ＣＡＧ　ＧＴＴ　ＣＣＡ　ＧＣＴ　ＣＴＣ ＣＣＡ　ＧＧＡ　ＡＡＣＣＣＴ　ＣＡＴ　ＣＡＣＡＧＧ　ＧＡＡ　ＡＴＧ　ＧＧ Ａ　ＧＡＡ　ＡＣＣＣＴＴ　ＣＣＡ　ＧＡＧ　ＧＡＡＧＴＡ　ＧＣＴ　ＧＡＧ　 ＴＡＣＡＧＡ　ＣＡＧ　ＣＣＣＴＣＴ　ＧＧＧ　ＧＧＣＴＣＡ　ＧＴＧ　ＣＣ丁 丁ＴＣＡＧＣＣＣＡ　ＧＧＧ　ＣＣＴ　ＣＣＡ　丁ＣＴ　ＧＧＡ　ＣＴＧ　ＧＡ Ｇ　ＣＣＡ　ＡＣＡ　ＡＧＣＡＧＣＡＧＣＣＣＡ　ＴＡＣＡＡＴ　ＣＣＴ　ＣＣ Ｔ　ＧＡＴ　ＣＴＧ　ＧＡＡ　ＧＡＡ　ＧＣＴ　ＣＣＣＡＡＡ　ＡＣＴ　ＧＡＧ 　ＧＣＴ　ＧＡＧ　ＡＡＣＡＣＧ　ＡＴＣＡＣＣＴＡＣ丁ＣＡ　ＣＴＣＣＴＣＡ ＡＧ　ＣＡＴ　ＣＣＣＧＡＡ　ＧＣＣＴＴＧ　ＣＡＴ　ＧＡＡ　ＧＡＡ　ＡＣＡ 　ＧＡＧ　ＣＡＴ　ＧＡＴ丁ＡＣＣＡＡ　ＡＡＣＣＡＣＡＴＴ　丁ＡＧ。

（ｆ　）　６６丁　丁ＣＣＧＧＴ　ＣＣＣＡＧＡ　ＡＡＣＣＴＧ　ＴＧＧ　ＣＴ Ｇ　ＣＴＴ　ＣＡＡＣＣＡ　ＴＴＣＡＣＡ　ＣＴＴ　ｆｆＧ　ＣＴＧ　ＣＴＧ　 ＣＴＣＣＣＴ　ＴＣＴ　ＧＣＡ　ＧＡＣＡＧ丁丁ＡＡ　ＧＣＴ　ＧＣＡ　。

（ｇ　）　ＴＧＣＣＡＧ　ＧＧＧ　ＧＣＴ　ＣＧＣＡＧＣＣＣＴ　ＧＡＧ　ＡＧ ＣＧＡＣＴＣＣＡＴＴ　ＣＡＧ　ＴＧＧ　ＴＴＣＣＡＣＡＡＴ　ＧＧＧ　ＡＡＴ 　ＣＴＣＡＴＴ　ＣＣＣＡＣＣＣＡＣＡＣＧ　ＣＡＧ　ＣＣＣＡＧＣＴＡＣＡＧ Ｇ　ＴＴＣＡＡＧ　ＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＡＴ　ＧＡＣＡＧＣＧＧＧ　ＧＡＧ　 ＴＡＣＡＣＧ　ＴＧＣ。

（ｈ　）　ＴＧＣＣＡＣＡＧＣ丁ＧＧ　ＡＡＧ　ＧＡＣＡＡＧ　ＣＣＴ　ＣＴＧ 　ＧＴＣＡＡＧＧＴＣＡＣＡ　ｆｆＣＴＴＣＣＡＧ　ＡＡＴ　ＧＧＡ　ＡＡＡ　 ＴＣＣＣＡＧ　ＡＡＡ　ＴＴＣ丁ＣＣＣＧＴ　ＴＴＧ　ＣＡＴ　ＣＣＣＡＣＣＴ ＴＣＴＣＣＡＴＣＣＣＡ　ＣＡｉＸ　ＧＣＡ　ＡＡＣＣＡＣＡＧＴ　ＣＡＣＡＧ Ｔ　ＧＧＴ　ＧＡＴ　ＴＡＣＣＡＣ丁ＧＣ。

（ｉ　）　ＴＣＡ　ＣＣＡ　ＡＴＧ　ＧＧＧ　ＡＴＣＡＴＴ　ＧＴＧ　ＧＣＴ　 ＧＴＧ　ＧＴＣＡＴＴＧＣＧ　ＡＣＴ　ＧＣＴ　ＧＴＡ　ＧＣＡ　ＧＣＣＡＴＴ 　ＧＴＴ　ＣＣＴ　ＧＣＴ　ＧＴＡ　ＧＴＧ　ＧＣＣＴＴＧ　ＡＴＣＴＡＣＴＧ Ｃ。

（ｊ　）ＡＧＧ　ＡＡＡ　ＡＡＧ　ＣＧＧ　ＡＴＴ　ＴＣＡ　ＧＣＣ６６丁　Ｔ ＣＣＡＣＴ　ＧＡＴＣＣＴ　ＧＴＧ　ＡＡＧ　ＣＣＴ　ＧＣＣＣＡＡ　ＴＴＴ　 ＧＡＧ　ＣＣＡ　ＣＣＴ　ＧＧＡ　ＣＣＴ　ＣＡＡＡＴＧ　ＡＴＴ　ＧＣＣＡＴ ＣＡＧＡ　ＡＡＧ　ＡＧＡ　ＣＡＡ　ＣＴＴ　ＧＡＡ　ＧＡＡ　ＡＣＣＡＡＣＡ ＡＴ　ＧＡＣＴＡＴ　ＧＡＡ　ＡＣＡ　ＧＣＴ　ＧＡＣＧＧＣＧＧＣＴＡＣＡＴ Ｇ　ＡＣＴ　ＣＴＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧ　ＧＣＡ　ＣＣＴ　ＡＣＴ　ＧＡＣＧＡ Ｔ　ＡＡＡ　ＡＡＣＡＴＣＴＡＣＣＴＧＡＣＴ　ＣＴＴ　ＣＣＴ　ＣＣＣＡＡＣ ＧＡＣＣＡＴ　ＧＴＣＡＡＣ６６丁　ＡＡＴ　ＡＡＣＴＡＡ。

本発明は、上記したような免疫グロブリンのＦｃ部分、およびＦｃ部分に結合す る能力に実質的に有害な影響をもたらすものではないアミノ酸の削除、添加ある いは置換によりまたは化学的方法により変容、あるいは放射変更された免疫グロ ブリンのＦｃ部分に対するレセプターならびに、上記したようなものに関するヌ クレオチド配列、遺伝子、ｃＤＮＡクローンあるいはベクターおよび、免疫グロ ブリンのＦｃ部分あるいはそのフラグメントに対するレセプターに関しコードす る能力に実質的に有害な影響をもたらすものではないヌクレオチドの削除、添加 あるいは置換によりまたは科学的方法により変容された、もしくは照射変更され たヌクレオチド配列、遺伝子、ｃＤＮＡクローンあるいはベクターヘト拡張され るものである。

好ましい観点の記載 ＦｃレセプターＦｃＲは免疫系のホメオスタシスに包含される細胞膜糖タンパク の主要なグループを形成する。すべての免疫グロブリン（Ｉｇ）クラスに対して 特異的なレセプターはすでに明白とされており、そして極めて多様な胞および非 造血細胞において見い出されている（ホブシャー　［Ｈｕｂｓｃｈｅｒｌら、１ ９７１年；ディックラ−［Ｄｉｃｋｌｅｒ］、１９７６年；トウサイ［ＴＳａｌ ／］ら、１９８０年；アンクレス［υｎｋｌｅｓｓｌら、１９８１年）。これら のレセプターの主要なロールは、Ｉｇ分子のＦｃ領域を介して（Ｉｇ＞に結合す るためであり、そしてこの相互作用を通じて広範な生物学的効果が仲介される。

これらはマクロファージ（レスリ−［Ｌｅｓｌｉｅｌ、　１９８０年）および好 中球（カプロン［Ｃａｐｒ。

Ｏ］ら、１９８４年）による免疫複合体の食作用、ならびに膜結合あるいは単独 Ｆｃレセプターによる抗体産生の直接的あるいは非直接的規制（ヨドイ［Ｙｏｄ ｏｉ］ら、１９８０年；フリットマン［Ｆｒｉｄｍａｎｌら、１９８１年ニコル シュ［ＫＯＩＳＣ旧ら、１９８３年）を含むものである。マウス系において、免 疫複合体の結合に重要であるＩ　ｇＧ＋　／　Ｉ　ｇＧ２ｂ　（Ｆ　ｃ（ガンマ ）１／（ガンマ）２ｂＲ）に対するレセプターの分析に努力が注がれた。さらに 構造的および機能的レベルの両方でこれらのレセプターを研究するため、ならび に、他のＦｃＲに対するそれの関係を研究するために、われわれはＦｃ（ガンマ ）Ｒ遺伝子の遺伝的多量性を明白とするモノクローナル抗り、ｙ−１７，２抗体 を製造した（ヒップス［旧ｂｂｓｌら、１９８５年）。この抗体は、われわれが 、１、部分アミノ酸を単離および決定する２、ベータＩＦｃ　（ガンマ）Ｒレセ プターをコード化するｐＦｃ２４およびｐＦｃｌ１３と命名されたＣＤＮＡの完 全なヌクレオチド配列を単離および決定する ３、異なる細胞タイプにおける多重ＦＯＲトランスクリプト（これらの異なるト ランスクリプトはベータ２およびアルファと命名される）の存在をノーザン　ア ナリシスによって示す ４、マウスＦｃＲｃＤＮＡおよびオリゴヌクレオチドプローブ（ｐＦｃｌ１３　 ＤＮＡ配列に基づく）を用いて、マウスＦｃＲと相同するヒトＦｃＲをコード化 するｐＦｃ３．Ｇ１３．１および３．４７と命名されたｃＤＮＡクローンを単離 する ためのレセプターを免疫学的に精製するために用いられた。

物質および方法 モノクローナル抗体：モノクローナル抗Ｌｙ−１７，２およびＬｙ−２，１抗体 は、すでに記載されている（ヒップス［旧ｂｂｓｌら、１９８５年；ホガルス（ Ｈｏｏａｒｔｈｌら、１９８２年〉。精製された抗体からのＦ（ａｂ−）２フラ グメントの調製は（１６）に記載されるようにして行なわれた。２゜４　Ｇ２抗 体はまたすでに記載されている（アンクレス　１９７９年）。

ＦｃガンマＲの精製：Ｊ７７４マクロファージ細胞（２Ｘ１０１０）は（ＣＢＡ ＸＢＡＬＢ／ｃ）マウスから得られた腹水から採取され、そして１％アプロチニ ン（シグマ、ミズーリー州セントルイス）および１ｍＭフェニルメチルフルフォ ニル　フルオライド（シグマ、ミズーリー州セントルイス）を含む冷リン酸緩衝 食塩水（ＰＢＳ）１０．５％Ｎｏｎ１ｄｅｔ　Ｐ−４０（ＰＢＳｌｏ、５％ＮＰ ４０）、ｐ）１７．４中にて迅速に分解された。別の２Ｘ１０’、！胞が１２５ ■で表面標識され、そしてこの冷溶解物とともにプールされた。４℃で１時間の 溶解の後に、該溶解物は清澄化され、そしてセファロース４Ｂに接合された抗ｔ 、、ｙ−１７，２抗体くファラマシア、スウェーデン　アッパサラ）と４℃で１ 時間インキュベートされた。免疫吸着体は、０゜６Ｍ　ＮａＣ，Ｑ　、０．０１ ２５Ｍ　ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７゜４中で３回、ＰＢＳｌｏ、５％ＮＰ４０、ｐＨ ７，４中で３回、そしてさらに１００ｍＭトリス−ＨＣｆＩ、ｐＨ８゜０に溶解 された０、５％デオキシコール酸塩中で３回洗浄された。該免疫吸着体はカラム 中に充填され、そして結合物質が、０．１Ｍトリエチルアミン、ｐＨ１１，５に 溶解した０、５％ドデシル硫酸ナトリウム（ＮａＤｏｄＳＯ４）で溶出され、そ して凍結乾燥された。

ＦｃガンマＲ調製物の純度は、ＮａＤｏｄＳＯ４／ポリアクリルアミドゲル電気 泳動法（ＮａＤｏｄＳＯ４／ＰＡＧＥ）によって評価され、またタンパク質はク ーマツシュブルー染色によっであるいはオートラジオグラフィーによって検知さ れた。

タンパク質配列分析：タンパク質試料は、配列決定の前にカルボキシアミドメチ ル化され、そしてエタノール沈澱された。簡単に述べると、試料は５０ｍＭホウ 酸、０．１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳおよび１０ｍＭジチオトレイトール、ｐＨ８，０ （ＮａＯＨ）中に溶解され、そして６０℃で１時間加熱された。ヨウ化アセトア ミドが、２２ｍＭの最終濃度まで添加され、そして試料は暗室にて室温で１５分 間インキュベートされた。５０ｍＭエタノールを含有する水冷却エタノールが添 加され、そしてタンパク質は一２０℃で２時間沈澱させられた。沈澱物は遠心分 離により集められ、ＣＦｚ　Ｃ０ＯＨ中に溶解され、そしてアプライド　バイオ システムス　４７０Ａ　シーケンサ−［Ａｐｐｌｉｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　 ４７０Ａ　５ｅｑｕｅｎＣｅｒｌ　（フォスターシティ、米国カリフォルニア州 ）を用いる自動エドマン分解によって配列決定された。このシーケンシングおよ びフェニルチオハイダントイン　アミノ酸同定技術は、すでに詳細に述べられて いる。

ＦｃガンマＲペプチドの調製二ＦｃガンマＲペプチドは、親和精製されカルボキ シアミドメチル化されたＦｃガンマＲの試料を、スタフィロコッカス　アウレウ ス［３，ａｕｒｅｕｓ］Ｖ８プロテアーゼ（マイルス　ラボラドリース）　（ヒ ップスら、１９８６年）リシン−Ｃプロテイナーゼ（ボヒュリンガー　マンヘイ ム、マンヘイム、ＦＲＧの製造操作に基づく）、あるいは臭化シアン（ＣＮＢｒ ）を用いて消化することによって得られた。ペプチドはファラマシアファースト プロテインリクイド［Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ｆａｓｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１ｉｑ ｕｉｄｌ　（ＦＰＬＣ）を用いた逆相クロマトグラフィーにより精製された。プ ロテイナーゼ消化物質は、Ｐｅｐ　ＲＰＣＨＲ５１５（Ｃ２／Ｃｌ８）逆相カラ ム（ファラマシア）に適用され、一方、Ｐｒｏ　ＲＰＣＨＲ５／１０　（Ｃ１／ Ｃ８）逆相カラム（ファラマシア）はＣＮＢｒへプチニウムをバッファとして用 いた上昇直線アセトニトリル勾配で溶出され、２１４ｎｍでの吸収追跡がペプチ ドピークを検知するために行なわれた。選択されたと−ク留分は、次に、アセト ニトリルの洗浄勾配を用いるが、この場合はイオン抑制をもならすために０．１ ％（Ｖ／Ｖ）非緩衝ＣＦ３　Ｃ０ＯＨを含んで、同じカラムにおいて再度クロマ トグラツムにかけられた。

オリゴヌクレオチド　プローブの調製：オリゴヌクレオチドプローブは、アプラ イド　バイオシステムス　３８０Ａ　ＤＮＡ　シンセサイザー［Ａｐｐｌｉｅｄ 　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　３８０Ａ　ＤＮＡ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒｌを用い てホスホラミダイト法により合成された。オリゴヌクレオチドプローブは、逆相 ＨＰＬＣによって粗製混合物から精製され、そして［ガンマ３２ｐ］ＡＴＰおよ びＴ４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて２×１１０８ｄｐ／μｇに放射標識さ れた（マニアチス［）ｌａｎｉａｔｉＳＪら、１９８２年）。

ライブラリースクリーニング：マウス研究において用いられるｃＤＮＡライブラ リーは、エヌ　ガウン［Ｎ、　Ｇｏｕｇｈ１氏およびエイ　ダン［Ａ、　Ｄｕｎ ｎ１氏（ルドウィグ　インスティテウート　フォア　キャンサー　リサーチ［Ｌ ｕｄｗｉｇ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｃｅａｒｃｈｌ 　、オーストラリア国メルボルン）から懇意にも提供してもらった、および、ポ リＡ＋ｍＲＮＡを用いてＦｃＲ＋骨髄単球細胞系ＷＥＨＩ　３Ｂ（ガウンら、１ ９８５年）かへ形成されたものである。

該ｃＤＮＡは、ｐＪＬ３ベクターのＳａＣ■部位にＧＣ７−−ル結合され、そし てその結果、すべてのｃＤＮＡ挿入物はＥｃｏＲＩ部位に側面を接するものとな る。オリゴヌクレオチド　プローブ（第２．３表）は、ホスホラミダイト法（ウ ィナカーとドーパ−［Ｗｉｎｎａｋｅｒ　ａｎｄ　Ｄｏｒｐｅｒｌ　、１９８２ 年）を用いて形成され、そしてノーザン　アナリシスにおいて用いられるために ｍＲＮＡに追補された。ｃＤＮＡライブラリーは、Ｔ４　ポリヌクレオチド　キ ナーゼで〉１０°ｄｐｍ／μｇ　ＤＮＡまで末端標識されたオリゴヌクレオチド 　プローブを用いて、スクリーニングされた。

交雑形成（ハイブリダイゼーション）および洗浄条件は、既に記載されたような ものである（ヒップスら、１９８６年）。

ＲＮＡのノーザン　プロット　アナリシス［Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｂｌｏｔ　Ａｎ ａｌｙｓｉｓｌ　：ポリＡ”　ｍＲＮＡが試験室内培養マウス細胞および正常ヒ ト牌臓の溶解物から得られた。ポリＡ＋ｍＲＮＡ　（ポリＡ＋　５μｇあるいは 全ｍＲＮＡの可変量）が変性され、そして１％アガロースゲルフォルムアルデヒ ド中で電気泳動され、ナイロン膜へ移され、−晩交雑形成された（マニアチスら 、１９８２年）。ｃＤＮＡを用いての交雑形成は、５ｘＳＳＰＥ、５０％フォル ムアミド、０．１２５％脱脂粉乳および１μｇ／ｍｌ劣化ＤＮＡ中において、４ ２℃で１６時間行なわれな。フィルターは次にｌＸ５ＳＰＥ中で室温にて２回洗 浄され、さらに０．２×５ＳＰＥ中で５０℃にて１６時間２回洗浄された。オリ ゴデオキシヌクレオチド　プローブを用いての交雑形成は、５ｘＳＳＰＥ、６％ ＳＤＳ、１０×デンハーズ［０ｅｎｈａｒｄｓｌおよび１μｇ／ｍｌ劣化サケ精 液ＤＮＡ中において、４２°Ｃで行なわれた。フィルターは２ｘＳＳＰＥ中で室 温にいて２回、ついでｌＸ５ｓＰＥ中で４２℃にて２回洗浄された。ｃＤＮＡプ ローブはニックトランスレーションによって標識され、そして取込まれなかった 標識は、スピニングセファロースＧ５０カラム上に除去されたくマニアチスら、 １９８２年）。オリゴヌクレオチド　プローブは、Ｔ４ポリヌクレオチド　キナ ーゼを用いて３７℃で１時間かけて３２Ｐ−ＡＴＰにて末端標識され、そして交 雑形成混合物中に直接的に添加されたくマニアチスら、１９８２年）。

サウザン　アナリシス　：ＤＮＡはＣ５７Ｂ　Ｌ／６　マウス牌臓、ヒト胸腺お よび末梢血、から調製され（マニアチスら、１９８２年）、製造業者の指示（フ ァラマシア、スウェーデン国アッパサラ）に従い適当な制限酵素で消化されたＤ ＮＡ２０μｇが、０．５％アガロースゲル中で電気泳動され、ナイロン膜に移さ れ、そして、ランダムに感作されたもしくはニック　トランスレーションされた ｃＤＮＡを用いて、５ＸＳＳＣ１０，１％ＳＤＳ、５０％フォルムアミド、２０ ｍＭリン酸バッファ、ｐＨ６，８および０．１２５％脱脂粉乳中で、５５°Ｃで 一晩交雑形成された。

フィルターは、１ｘＳＳＣ１１％ＳＤＳ、０．１２５％脱脂粉乳中で４回洗浄さ れ、次いで０．２ＸＳＳＣ１０，１％ＳＤＳ中で５５℃で２回洗浄され、乾燥さ れそしてオートラジオダラムにかけられた。サウザン　アナリシスは、ｃＤＮＡ クローンｐＦｃ２４、ｐＦｃｌ１３、ＨＦｃ３゜４７、ＨＦｃ３．１およびＨＦ ｃ３．Ｏにおいて、Ｅｃ。

ＲＩ消化、１％アガロースゲル上での電気泳動（ナイロン膜への移送を追随する ）を伴ない行なわれた（ヒップスら、１９８６年）。ｐＦｃ２４またはｐＦｃｌ １３を含むフィルターは既述のごとく探査された（ヒップスら、１９８６年）。

ＨＦｃ３．１、ＨＦｃ３．ＯまたはＨＦｃ３．４７を含むフィルターは、ニック トランスレーション化ｃＤＮＡまたは末端標識オリゴヌクレオチドを用いて、２ ０％フォルムアミド、５ＸＳＳＣ１０，１％ＳＤＳ、０゜１２５％脱脂粉乳中で ３５℃で１６時間交雑形成することにより探査され、次いでｌＸ５ＳＣ中で３５ ℃にて洗浄された。

ＥＡロゼツト形成によるＦｃＲの検知：ヒツジ赤血球が、生理食塩水中で４回洗 浄された。詰込まれた細胞が、トリニトロンベンゼン　スルフ、オネート（リン 酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中１２．５ｍｇ／ｍｌ　）４ｍｌへ添加され、そしてｐ ＨがｐＨ７，２に調整された。混合物は、室温で２０分間インキュベートされ、 そして３回洗浄された。細胞は、ＩｇＧ２ｂ−ＥＡ、ＩｇＧｌ−ＥＡまたはウサ ギＩｇＧ−ＥＡを得るために、抗ＴＮＰ抗体（Ｋｌ、ＩｇＧ２ｂもしくはＡ３　 ＩｇＧ１、Ｄペス［ＬＯｐｅＺｌら、１９８３年）またはウサギＩｇＧ抗ヒツジ 赤血球の２０ｍ１中にサブヘム凝集希釈度［ｓｕｂｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａ ｔｉｎｇ　ｄｉｌｕｔｉｏｎｌで再懸濁された。室温で２０分間のインキュベー ションの後、細胞は２回洗浄され、そしてＰＢＳ＋５％ＢＳＡおよび１０ｍＭア ジド中に１％に再懸濁された。ＦｃＲの検知のためのＥＡロゼツト形成は次に感 作赤血球を用いて行なわれた（パリッシュとへイウッド［Ｐａｒｉｓｈ　ａｎｄ 　Ｈａｙｗｏｏｄｌ１９／Ｃマクロファージ腫瘍Ｊ７７４、Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／ 　ｃ牌臓単球細胞系ＷＥＨＩ３Ｂ、およびＡＫＲ胸腺腫に３６である。

細胞系は、ダルベツコ改変イーグル培地あるいはＲＰＭ　１１６４０（いずれも １０％胎児ウシ血清で追補される。）で試験管内において維持された。

Ｌｙ　１７　（ＦｃＲ）発現の血清学的検知二ｍ胞系はモノクローナル抗り、ｙ −１７，２抗体を用いて、そしてヒツジ抗マウスＩｇ被覆赤血球とロゼツト形成 されてＦｃＲ発現に関し試験された（ヒップスら、１９８５年；パリッシュとマ ツクンジー［Ｐａｒｉｓｈ　ａｎｄ　）ｌｃＫｅｎｚｉｅｌ　）。

ＤＮＡ配列決定：ｐＦｃ２４、ｐＦｃｌ１３のｃ　ＤＮＡ挿入物は、第３Ａ図に 概要されるシーケシング術に従い、Ｍ１３ｍｐ８、Ｍ１３ｍｐ９、あるいはＭ１ ３ｍｐ１８中にサブクローニングされた後に、マキサムとギルバート［Ｍａｘａ ｍ　ａｎｄ　Ｇ１１ｂｅｒｔｌ　（１９８０年）によって述べられた化学的開裂 あるいはセンガー　ジデオキシ　シーケンシング（センガー［Ｓａｎｇｅｒｌら 、１９７７年）のいずれかによって配列決定された。ヒトＦｃＲクローンのＣＤ ＮＡ挿入物もまた、Ｍ１３ベクター中にフラグメントをサブクローニングした後 に、ジデオキシ　ヌクレオチド法によって配列決定された。

ヒトＦｃＲｃＤＮＡの単離ニラムダｇｔ１ｏベクター中に形成されたヒト単球ラ イブラリー（ヒトＴＨＰ−１６胞系から得られた）が、ヒトＦｃ（ガンマ）Ｒｃ ＤＮＡを単離するために用いられた。並行スクリーニングが、マウスベータ１ｃ ＤＮＡクローン、およびマウスベータＩＦｃ（ガンマ）ＲｃＤＮＡのヌクレオチ ド配列から形成されたオリゴヌクレオチド　プローブのプールの双方を用いて行 なわれた。このプールはマウスにおけるヌクレオチド１３７〜１８５（Ｎ末端） 、ヌクレオチド５４５〜５７４（第２細胞外領域）およびヌクレオチド９５６〜 １０００（Ｃ末端）に一致する３つの非反復プローブからなるものであった。４ ラウンドのスクリーニングの後、マウスｃＤＮＡおよびオリゴヌクレオチド　プ ローブ　プールの双方で交雑形成されたいくつかのクローン（ＨＦｃ３．１．３ ゜０．３．４７）が、単離され、そしてさらに特徴づけされた。ＥＣｏＲ■消化 ラムダＤＮＡのサウザン　ハイブリダイゼーション　アナリシスは、マウスベー タＩＦｃ（ガンマ）ＲｃＤＮＡ　プローブが、すべてのクローンからのＣＤＮＡ 挿入物と交雑形成していることを確認させるものであった。ＥＣＯＲ■消化ＨＦ ｃ３．１．３．０．３゜４７のそれぞれ３つのマウスオリゴヌクレオチド　プロ ーブを用いてのサウザン　プロットの探査は、マウスＮ−末端ブローブのみが、 ＨＦｃ３．１．３．０からの挿入物と交雑形成し、そしてマウスＣ−末端プロー ブのみがＨＦｃ３゜４７からの１．９ｋｂ挿入物と交雑形成したことを示した。

加えて、ＨＦｃ３．ｌ、ＨＦｃ３．ＯおよびＨＦｃ３．４７からのＤＮＡ挿入物 は交差交雑形成を起していた。

ＤＮＡ挿入物は、生成され、そして組替えプラスミドを得るためにベクターｐＪ Ｌ４中にサブクローニングされた。

結果と討論 参照文は、次のように図面の図について行なわれている。

図面の説明 第１図、Ｊ７７４　マクロファージ細胞のＩｇＣの１次元Ｎ　ａ　Ｄ　ｏ　ｄ　 Ｓ　０４　／　Ｐ　Ａ　Ｇ　Ｅ分析。大きさの単位は、ＫＤａである。（Ａ＞表 面からのＦｃガンマＲ免疫沈降は、Ｊ７７４細胞をヨウ化した。免疫沈降は、抗 Ｌｙ−２，１Ｆ（ａｂ’　＞２　（レーン１）またはは抗Ｌｙ−１７，２Ｆ（ａ ｂ’＞２（レーン２）で行なわれた。（Ｂ）アフィニイティの代表的な製剤のＮ 　ａ　Ｄ　ｏ　ｄ　Ｓ　Ｏ４／　Ｐ　Ａ　Ｇ　Ｅとコーマ−シー染色は、タンパ ク質の配列化とペプチドの生成に使用されるＦｃＲを精製した。１〜６レーンは 、アフィニティカラムから溶出した物質の有効な分画を示す（Ｃ）。

アフィニティのＮａＤｏｄ８０４　／ＰＡＧＥオートラジオグラフは、１２５Ｉ −標識ＦｃＲを精製した。１〜６レーンは、前記Ｂに関しても同じである。

第２図、ｐＦｃ２４とｐＪＬ３のサウザンプロット分析。

ｐＦｃ２４　（レーンＢ、Ｄ、Ｆ）またはｐＪＬ３　（レーンＡ、Ｃ，Ｅ）の１ つのマクロファージは、ＥｃｏＲＩで消化され、１％アガロースゲル中で電気泳 動を受けた。ＤＮＡは、ニトロセルロース上に移させられ、［３２Ｐ］標識プロ ーブ１（レーンＡ、Ｂ）、［３２ｐｌプローブ２（レーンＣ，Ｄ＞と［３２Ｐ’ ｌプローブ３（レーンＥ、Ｆ）でハイプツト化を受けた。ｐＢＲ３２２ＤＮＡ　 Ｈｉｎｆｌフラグメントは、ｐＦｃ２４のＣＤＮＡ挿入物の大きさを評価するた めのマーカーとして使用された（Ｋｂで表わされている）。ｐＪＬ３の相対位置 は、同様に示される（５゜４９Ｋｂ）。

第３図、（Ａ＞クローンｐＦｃ２４とｐＦｃｌ１３ののＣＤＮＡ挿入物に対する 部分制限マツプと配列化戦略。表示の制限酵素部位は、ＡがＡｌｕＩ、ＢがＢａ ｍＨＩ、ＥがＥｃｏＲＩＳが５ａｕ３Ａ１、そして■がＰ　ｖ　ｕ　ＩＳである 。

表示のＥｃｏＲＩ部位は、ｐＪＬ３ベクターの多クローン化部位に存在する。斜 線領域は、信号配列をエンコード化し、そして成熟タンパク質相配列をコード化 する配列を示し、囲みの中に在る。

５′から３′への非翻訳領域配列は、実線で示され、一方非配列非翻訳領域は、 点線で示される。配列は、ＰｓｃＩ部位を除いて全制限部位を交差して得られ、 コード化領域の両鎖は完全に配列化した。

（Ｂ）ｐＦｃｌ　１３でコード化されたマウスＦｃＲのヌクレオチドと予想アミ ノ酸配列。アミノ酸は、タンパク質配列化で予想されたアミノ末端Ｔｈｒにおい て始まる１０からなる１組のライン上に番号がつけられる［ヒップス等（Ｈｉｂ ｂｓ　ｅｔ　ａｌ）　、　１９８６］。ヌクレオチドは、ライン末端に番号がつ けられ、５′と３′の非翻訳領域は、終結タイプで示される。信号配列は、残基 −２９から−に番号がつけられ、トライスメンブラン領域（Ｔｍ）は、点線でア ンダーラインされている。配列は、アミン末端配列（ＮＨ２）と免疫精製化Ｆｃ Ｒから単離されたペプチド（Ｌ９．Ｖ１７゜２Ｖ１６，２Ｖ８．ＣＮＢＲ，Ｌ５ ．Ｌ３．Ｌ４．ＶＩＯ。

■１１）のアミノ酸配列に等しい配列に対応して実線でアンダーラインされてい る［ヒップス（旧ｂｂｓ　ｅｔ　ａｔ、、）　１９８６］。他の表記は次のよう である。Ｏは各ドメインの最初のＣｙｓ、Ｏは各ドメインの第２のＣｙｓ、Ｎ− 結合グリコシレージョン（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）部位。

ｐＦｃ２４のヌクレオチド配列は、ｐＦｃｌ１３の６１〜１０２３のヌクレオチ ドにｃＤＮＡを挿入して具体化される。

第４図、Ｆｃ（ガンマ）Ｒドメイン（ドメイン１のアミノ酸５〜１１６とドメイ ン２のアミノ酸１１８〜１７５）相互及びＩｇ関連分子と比較したアミノ酸配列 。同一残基は囲まれており、「−」は、配列する目的のために列が切られている ことを示す。（Ａ）ＦｃＲドメインは、互いに整列され、＋６と切断部６のマト リックスバイアスのアリン（ＡＬＩＧＮ）プログラムを用いて最高スコアーを与 えた。（Ｂ）両ＦｃＲドメインの最初のＣｙｓ残基を囲むアミノ酸配列とＩｇと Ｉｇ関連分子ドメインの対応する最初のＣｙｓのＣｙｓ残基との配列。ＦｃＲド メインと他の配列に一般的なアミノ酸は囲まれている。■２はＭＯＰＣ１０４Ｅ （Ａｐｅｌｌａ、１９７７）、　ＶｋはＭＯＰＣ１４９（Ｎｉｓｈｉｏｋａａｎ ｄＬｅｄｅｒ、　１９８０）　、Ｔ４はＬ３Ｔ４　（Ｃｌａｓｓｏｎ　ｅｔ　ａ ｔ　１９ＢＢ。

丁ｏｕｒｉｅｉｌｌｅ　ｅｔ　ａｌ、１９８６．　Ｇ、Ｃ１ａｒｋ、Ｎ、Ｄｅａ ｃｏｎ　ＰｅｒｓｏｎａｌＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）　、Ｎ−ＣＡＭはニュ ートラル　セル　アドヒージョン　モレキュラー（Ｈｅｍｐｅｒｌｙ　ｅｔ　ａ ｌ、　１９８６）　。

ポリＩｇＲはポリＩｇレセプター（）ｌｏｓｔｏｖ　ｅｔ　ａｌ、　１９８４） である。（Ｃ）抗ジゴキシン抗体から誘導された■とを除いてＦｃＲドメインの 第２Ｃｙｓを囲む配列とＩｇとＩｇ関連分子ドメイン第２Ｃｙｓとの整列（Ｎｏ ｖｏｔｎｙ　ａｎｄ　ｔ（ａｒ。

ｏｌｉｅｓ、　１９８３　）一般的な残基は、上記のように囲まれている。（Ｄ ）ＦｃＲドメインからのＪ様配列とヒト（Ｅｎ（Ｉｅｌｈａｒｄ　ａｎｄ　Ｈｉ ｌｓｃｈｍａｎｎ、　１９７５）とマウス（＾ｐｅｌｌａ、１９７７）からのラ ムダＪ領域との整列。

第５図、マウス細胞系におけるＦｃＲｍＲＮＡ転写分析。

（ａ）ＦｃＲ赤白血病Ｆ４Ｎ　（ａ＞またはＦｃＲ＋ＷＥＨＩ　３Ｂ細胞（ｂ） からのＲＮＡのノーイン　プロットは、ｐＦｃ２４の８４０塩基対ＢａｍＨＩ− ＥｃｏＲＩフラグメントでプローブした（多クローニング部位のＥｃｏＲＩ部位 ）。（Ｂ）ＦｃＲ十細胞系、即ちＷＥＨＩ３Ｂ　（ａ）。

Ｊ７７４　マクロファージ細胞（ｂ）、Ｋ３６Ｔリンパ腫（Ｃ）そしてＦｃＲ− 細胞Ｆ４Ｎ　（ｄ）；からのポリＡ＋ＲＮＡのノーインプロットは、ｐＦｃｌｌ Ｂ中のヌクレオチド５４２−６７４に対応するオリゴデオキシヌクレオチドでプ ローブした。２８ｓと１８ｓ　ｒＲＮＡの位置が示される。

第６図、ＦｃＲ遺伝子のサウザン分析。

Ｃ５７ＢＬ／Ｂマウスからの牌１ｉＤＮＡは、（ａ）ＨｉｎｄｌＩＩ、（ｂ）Ｅ ｃｏＲＩまたは（ｃ）ＲｓｔＩで消化され、ｐＦｃ２４の８４０　ｂｐ　Ｂａｍ ＨＩ−ＥｃｏＲＩフラグメントでプローブした（　ｔｅｇｅｎｄ　第３図参照こ と）。分子の大きさのマーカーは、Ｋｂ（旧ｎｄｌｌＩはラムダファージ第７図 、ヒトＦｃＲクローンＨＦｃ３，１　（ａ＞とＨＦｃ３．４７　（ｂ）のサウザ ンプロット分析。ＨＦｃ３．１またはＨＦｃ３．４７ＤＮＡは゛、ＥｃｏＲＩで 消化され、１％アガロースゲル中定電気泳動処理れ、原料物質及び方法に従って ナイロン　メンブランに移され、Ａ（ｐＦｃ２４ｃＤＮＡ）、Ｂ　（プローブ１ ．５＞、Ｃ（プローブ１゜１０）、Ｄ（プローブアルファ）またはＥ（プローブ １゜０）でハイブリダイズされた。ＨＦｃｆ３．１への１．５Ｋｂ　ｃＤＮＡの 挿入およびＨＦｃ３．４７への１．９Ｋｂ挿大の位置は各図の右側に示される。

第８図、ＨＦｃ３．１によりコード化されたヒトＦｃＲのヌクレオチドと予想ア ミノ酸配列。ヌクレオチドは１０個づつ番号がつけられ、翻訳配列はヌクレオチ ド配列上に見い出される。アミノ酸はライン上に番号がつけられ、１番はＮ末端 残基を示す。不完全な信号配列は残基−１まで点線でアンダーラインされている ２つのグリコシレージョン（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）部位は星印でマーク され単一疎水性トランスメンブラン領域は実線でアンダーラインされている。

ジスルフィド結合中に含まれるシスティン残基は、丸で囲まれている。「イント ロン類似」配列は垂直矢印間に存在する。

第９図、ＨＦｃ３．１ｃＤＮＡでコード化されたヒトＦｃＲとマウスアルファお よびベータＩＦｃ（ガンマ）Ｒとの相同。ヒトＦｃＲヌクレオチドのマウスアル ファ（Ａ＞とベータ１　（Ｂ）　Ｆｃ　（ガンマ）Ｒの両方による整列。配列中 切断部（点線で示されている）は整列を最適とするために導入された。ＨＦｃ３ ．１でコード化されたヒトＦｃＲとアルファＦｃＲ（Ａ）またはベータ１（Ｂ） に一般的なアミノ酸残基は、星印で示される。ヒト（ＨＦｃ３．１）、マウスア ルファまたはベータＦｃＲリーダー配列、細胞外ドメイン、トランスメンブラン 　ドメインと細胞質ドメインは、垂直矢印間の配列で示される。細胞外ドメイン （ｓ−ｓ結合に含まれる）内のシスティン（Ｃ）残基は、実線の円で固定される 。

第１０図、２つの非電なりＨＦｃ３．４７フラグメントから誘導されたＨＦｃ３ ．４７とｃＤＮＡの部分ヌクレオチド配列と予想アミノ酸配列とマウスのベータ （１または２）ＦｃＲにおける相同領域の固定。ＨＦｃ３．４７ヌクレオチドと アミノ酸配列は、Ａの上側配列として、Ｂの下側配列として示される。ひし形（ ダイヤモンド）はヌクレオチドが同一であることを示し、一方星印はアミノ酸が 同一であることを示す。配列中の「Ｘ」は未知の残基を示す。

第１１図、ＨＦｃ３．０でコード化されたヒトＦｃＲのヌクレオチドと予想アミ ノ酸配列。ヌクレオチドは、１０個ごとに番号を付され、翻訳配列はヌクレオチ ド配列上に見い出される。アミノ酸はラインに番号が付され、１番はＮ末端残基 を示す。不完全な信号配列は、−１残基まで点線でアンダーラインされている。

２つのグリコシレージョン（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）部位は星印が付され 、単一疎水性トランスメンブラン領域は実線でアンダーラインされている。ジス ルフィド結合中に含まれるシスティン残基は丸で囲まれている。

第１２図、ＨＦｃ３、ＯｃＤＮＡでコード化されたヒトＦｃＲとマウスアルファ とベータＩ　ＦｃＲとの相同。ヒ）ＦｃＲヌクレオチドとマウスアルファ（Ａ＞ とベータ１（Ｂ）ＦｃＲの両方との整列。ＨＦｃ３．Ｏでコード化されたヒトＦ ｃＲとアルファＦｃＲ（Ａ）またはベータ１（Ｂ）に一般的なアミノ酸残基には 星印が付けられている。

ヒト（ＨＦｃ３．Ｏ＞マウスアルファまたはベータＦｃＲリーダー配列、細胞外 ドメイン、トランスメンブラン　ドメインと細胞質ドメインは、垂直矢印間の配 列で示される。

細胞外ドメイン（ｓ−ｓ結合中に含まれたもの）のシスティン（Ｃ）残基は、実 線の円で同定される。

第１３図、正常なヒト牌臓から単離され、ＨＦｃ３．１からのｃＤＮＡ挿入でプ ローブされた全ＲＮＡのノーザンプロット分析。２８ｓと１８ｓリポソーム状Ｒ ＮＡが示されている。Ａは２０μｇＲＮＡ負荷、Ｂは５μｇ　ＲＮ　Ａ負荷そし てＣは無負荷（ＲＮＡＪである。

第１４図、ヒトＦｃＲ遺伝子のサウザンプロット分析。

ヒト胸腺ＤＮＡ　（Ａ）とヒト抹消白血球ＤＮＡ　（Ｂ）は１　（ＨｉｎｄｌＩ Ｉ）　２　（Ｐｖｕ　ＩＩ）　、３　（ＥｃｏＲＩ）と４（ＰＳｔＩ）で消化さ れ、ＨＦｃ３．１からのｃＤＮＡ挿入でプローブされた。分子の大きさのマーカ ー（旧ｎｄｌＩＩはＲＮＡを消化しな）は示される。

全長ｃＤＮＡクローン単離 Ｆｃ（ガンマ）Ｒは、抗Ｌｙ−１７．２抗体を用いて均質に精製された（第１図 ）。タンパク質とペプチド配列化の研究は、分子の１／３を配列化し得る（第１ 表）。タンパク質配列（第２表）から構成された全部が一致するオリゴデオキシ ヌクレオチドプローブは、ｃＤＮＡクローン（ｐＦｃ２４＞を単離するために使 用された。サウザン分析は、ｐＦｃ２４のｃＤＮＡ挿入物がプローブと反応する ことを立証した（第２図）。ｐＦｃ２４の５′と３′末端のマクサム−ギルバー ト（Ｈａｘａｍ−Ｇｉ　Ｉｂｅｒｔ）配列化法（第３Ａ、Ｂ図）は、全リーダー 配列又は枠内末端（ｉｎｆｒａｍｅ　ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ）コドンがそれぞ れ５′と３′末端において明らかではないためそれが全長ではないことを示した 。全長ＣＤＮＡクローン、即ちｐＦｃｌ１３　（第３図）は、ＷＣＨＩ　３Ｂラ イブラリーをｐＦｃ２４の５′と３′末端のヌクレオチド配列から構成されたオ リゴデオキシヌクレオチドプローブ再プローブして単離された。ヌクレオチド１ ４０〜１８７（プローブ１．５＞、または９５９〜１０００（プローブ１．８） 第３Ｂ図、第３表）と両プローブがハイブリダイズするクローンに対応するプロ ーブは、最終的に単離された。ｐＦｃ　１１３のｃＤＮＡ挿入物は、ｐＦｃ２４ がたった９６２ｂｐであるのに対し、約２．０キロｐｂであるが、ヌクレオチド ６１〜１０２３のｐＦｃｌ１３で完全に行なわれる。

ヌクレオチドとアミノ酸配列 ｐＦｃｌ１３ヌクレオチド配列から予想されるアミノ酸配列（第３Ｂ図）は、成 熟ＦｃＲが３０１のアミノ酸から成るメンブラン分子であり、かつ２９のアミノ 酸リーダー配列で合成されることを示す。予め免疫精製ＦｃＲから配列化された １１のへブチドの１０のアミノ酸配列は、ｐＦｃｌ１３ｃＤＮＡでコード化され ることが見い出されたく第３Ｂ図、Ｈｉｂｂｓ　ｅｔ　ａｌ、　１９８６）。ペ プチドの配列化の間に多くのアミノ酸残基を誤って呼ぶことは、ペプチドＬ５と ＣＮＢＲの配列とｃＤＮＡクローンからの領域の予想配列が異なることによる。

同様に、ＣＮＢＲペプチドは予想されたＭｅｔではなくてＴｒｐが優先するが、 ＣＮＢＲは酸溶液中でＴｒｐ残基のＣ末端で開裂するだろうということが知られ ている。（Ｏｚｏｌｓ　ｅｔ　ａｔ、　１９７７）コ。

多くの他の重要な観察は、予想アミノ酸配列からなしえ゛る。第１に、２８のア ミノ酸の単一トランスメンブラン領域は、Ｌｅｕ１８０から配列Ｌｙｓ２０９− Ｌｙｓ２１０−Ｌｙｓ２１１に拡大し、９４のアミノ酸長細胞質領域を１７９細 胞外アミノ酸から分離する。第２に、ＦｃＲ分子の細胞外部分は２組の通常配置 のＣｙｓ残基、即ち、４１のアミノ酸によりお互いから分離したＣｙｓ２８とＣ ｙｓ７０の第１組と４３のアミノ酸により分離されたＣｙｓ　１０９とＣｙｓ１ ５３の第２組を含む。この通常の配列は、細胞外部分が二つのジスルフィド結合 ドメインに編成されることを示唆する（後述の相同、参照のこと）。第３に、ポ テンシャルＮ結合グリコシレージョン（Ｏ１ｙｃｏｓｙｌａｔ　１ｏｎ）部位は 、２つグリコシレージョン部位がそれぞれ想像上のドメインに位置し、レセプタ ーの細胞外領域に存在する。

これらのポテンシャルグリコシレーション部位は、炭水化物付着の真正な部位で あることが証明された（Ｇｒｅｅｎ　ｅｔ　ａＩ、　１９８５　ａｎｄ　ｓｅｅ 　”Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ　５ｔｒｕｃｔｕｒａｌ　Ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｏｆ　 Ｍｕｒｉｎｅ　ＦＣＲ”） ねずみＦｃＲの相同 ＦｃＲ分子内のアミノ酸配列を比較する（Ｄａｙｏｆｆ　ＡＬＩＧＮプログラム 、Ｄａｙｈｏｆｆ　ｅｔ　ａｌ、　１９８３）と、細胞外ドメインにおいて重大 な内部相同があることが判った（第４図）。

変異データマトリックスを使用すると、スコアリングは、確立されたタンパク質 料においてアミノ酸置換に要求された変異の大きさに基づく。最適配列用スコア ーは、その後、２配列の整列化用の細孔スコアーが初期配列の不規則化後に多く の整列化用のスコアーより膀れる、標準偏差数として表わされる（Ｄａｙｈｏｆ ｆ　ｅｔ　ａｌ　１９８３）　。Ｃｙ　ｓ残基対を囲むドメイン境界の任意な設 定は、アミノ酸５〜８６　（ＦｃＲドメイン１）とアミノ酸８８〜１７５　（Ｆ ｃｒドメイン２）とを整列すると、アリン（ＡＬＩＧＮ）スコアー７、ＩＳＤの 同一残基を２９％与える、即ちかかる整列の生ずる割合が偶然には〉１０Ｂであ りかつ単一ドメインの縦の複製を意味することを示した。かかる繰返しドメイン 構造は、ＩｇとＩｇ超利を含む関連分子において明らかである（−１１１ｉａｍ ｓ　１９８５）。他の分子に可能な相同をさらに調査するために、我々は、多く の核酸とタンパク質データベースのコンピューター検索を行なった。検索の結果 、ＦｃＲドメイン１がねずみクラスＩＩ抗原、特にＩ−Ｅベータのベータ２ドメ イン類似のＩｇに最も相同があり、８．３３Ｄという極めて高いアリンスコアー を与えることが示された。クラスＩＩ抗原に関する相同に加えて、ＦｃＲドメイ ンの他の特徴は、Ｉｇ超科メンバーへの関係を示す。Ｉｇ超科メンバーへの相同 は原理的に残基について見られる。システィン残基７０と１５３を取り囲む配列 は、ＩｇＶｇ域ドメインにおいてジスルフィド結合Ｃｙｓ残基のあたりの全体一 致の配列（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｔｙｒ−Ｘ−Ｃｙｓ）の代表であることが示された。加 えて、Ｃｙｓ残基２８と１０９と側面を接する配列は、Ｉｇ鎖と他のＩｇｇ連分 子の■領域におけるミアノ末端の近くのジスルフィド結合Ｃｙｓを示した。

さらに、Ｃｙｓ２８から１３残基下流に位置するＴｒｐ残基とＣｙｓ１０９から １３残基下流に位置するＰｈｅ残基は、Ｉｇｇ似構造のこの位置において一般に 観察される。

同様にこれらの特徴を有するＩｇ関連分子’ｒｈｙ−ｔとＣＤ４は、鎖内ジスル フィド結合を含むことが実験的に見い出された（Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ　Ｇ ａｇｎｏｎ、　１９８２；　Ｃ１ａｓｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、　１９８６ａ）。

従って、免疫グロブリンに対するレセプターがリガンドを有する発展的家系を示 すが、全ＩｇとＦｃＲドメインとを比較するとそれらが発展期において相対的に 早く分岐すべきことを示し、相同重複が少ないことを示すのは明らかである。Ｍ ＨＣクラスＩＩ分子に関する高度のホモロジーは、細胞表面上のクラス１１分子 を有するあるＦｃＲの軽度の物理的会合において興味がある（Ｄｉｃｋｌｅｒ　 ａｎｄ　５ａｃｈｓ、　１９　）。

ポリＩｇレセプターに加えて（前記参照）、同様に我々は他のＩｇＧｇ合分子の 相同を考えた。ブドウ球菌性タンパク質に対するＦｃＲドメイン相同のないこと が見い出された（ＳｊＯｄａｈｌ、　１９７７）。ここに記載のＦｃ（ガンマ） Ｒレセプターは、Ｇｌｙ２４１からＰｒｏ２４９への細胞質尾部における一系列 ９アミノ酸を除いて、他のベータＩＦｃ（ガンマ）Ｒに強い相同がある。第３Ｂ 図に示されるヌクレオチドとアミノ酸配列間の差異は、３つのヌクレオチドの除 去により生じるであろう。Ｆｃ（ガンマ）Ｒのベータ１型のヌクレオチドと予想 アミノ酸配列は、第３Ｂ図に示されたものである。加えてＦｃ（ガンマ）Ｒの他 の型は、ここに記載のＦｃＲに強い相同、即ちほぼ継ぎ合わせ変形を示す。継ぎ 合わせ部位は、ＦｃＲのベータ１とベータ２型が細胞外ドメンと同じであること を示す細胞外ドメインに従ってその領域に生ずる。ＦｃＲの第３形態は、ｃＤＮ Ａクローニング研究により同様に同定され、そしてアルファＦｃＲと指定された 。成熟アルファタンパク質は、ここに記載のレセプターからのわずかな変化、即 ちリガンド結合ドメインのアミノ酸含量の約７％の変化を示す。３つの変位（α 、β１．β２）のドメインにおける主要な特徴の全ては、保護される（即ち４Ｎ −結合炭水化物、側鎖、２組のシスティン残基）。Ｆｃ（ガンマ）Ｒの分子分析 をするねずみのＦｃＲが一連の高い相同を有するタンパク質であることが明らか に示される。Ｉｇ結結合タンパ資質タンパク質Ａとここに記載のＦｃＲ）は全て 、リガンド結合の安全性と特異性に必要である繰り返しリガンド結合ドメインを 有する。

ねずみＦｃＲの付加的な構造上の特徴 我々は、精製Ｆｃ（ガンマ）Ｒ中の隣接した対のシスティン残基がジスルフィド 結合に含まれることを示した。タンパク質は、アフィニティクロマトグラフイー で精製され、ジチオドレイトール（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）でジチオス ルフィド結合を還元する前後のいずれかにタンパク質分解酵素で消化される。

消化物は、逆相クロマトグラフィーでその後分別される。

非還元Ｆｃ（ガンマ）Ｒの消化物の中には存在するが消化還元Ｆｃ（ガンマ）Ｒ に存在しないペプチドは、配列化され、そしてジスルフィド結合ペプチドに対応 することが示された。得られた結果からは、Ｃｙｓ２８がＣｙｓ７０にジスルフ ィド結合されており、そしてＣｙｓ１０９と１５３がジスルフィド結合に含まれ ることが示された。

広範なペプチドの配列化は、マウスＦｃ（ガンマ）Ｒにおける４つの可能なＮ− 結合グリコシレーション部位が炭水化物付加の事実真正な部位であることも決定 した。このことは、ペプチド配列において予想された位置にアスパラギンが存在 しないことにより判定された。

ｍＲＮＡの発現 細胞系におけるＦｃＲ発現の分析は、ノーザンブロッティングによりその後行な われた。２つのｍＲＮＡ転写は、ニック翻訳ｃＤＮＡを用いてポリＡ”ｍＲＮＡ をＷＥＷＨｌ　３Ｂ細胞系からプローブすると明らかであった（第５Ａ図）。こ れらの転写は、ＦｃＲ−細胞系Ｆ４Ｎには無かった。細胞結合において特異性と 発現の両方に関してＦｃＲ不均−性がある（Ｄｉｃｋｅｒ　１９７６；　Ｕｎｋ ｌｅｓｓ　ｅｔ　ａｔ、　１９８１　：丁ｅｉｌｌａｕｄ　ｅｔ　ａｌ、　１９ ８５）ので異なる結合細胞系からのｍＲＮＡは、オリゴデオキシヌクレオチドプ ローブ（プローブ１．１０＞（ヌクレオチド５４５〜５７４に対応する）を用い て、ＷＥＨＩ３Ｂ細胞で再転写にハイブリダイズすること（第５Ｂ図、トラック ａ）が調べられた（第５Ｂ図）。

ノーザンプロットは、再転写が骨髄単球性細胞系ＷＥＨＩ３Ｂに存在するけれど も、低級Ｍｒ種がＪ７７４マクロファージ細胞（第５Ｂ図、トラックｂ）におい て支配的であり高級Ｍｒ種のみが検出し得るけれどもＦｃＲ＋Ｔリンパ種に３６ は完全に無かった。異種細胞系において多Ｆｃ（ガンマ）ＲｍＲＮＡ転写（α、 β１、β２と称され、β１はここに記載のｐＦｃｌ１３でコード化されたものと 同じである）も同様に注目された。

ｍＲＮＡ転写と表面ＦｃＲとの関係 ｍＲＮＡ転写と表面Ｆｃ（ガンマ）Ｒ発現との関係を立証するために、我々は、 ベータ１、ベータ２とアルファ転写（第３表）に特異なオリゴヌクレオトチドブ ローブを使用するノーザン分析によりｍＲＮＡ転写の存在を調べ、このことは免 疫複合結合（ラビットＩｇＧと各種ＩｇＧ同位体を使用する）と比較し、細胞が 表面のＬｙ−１７，２十または２．４Ｇ２＋である（第４表）かどうかを調べた 。

得られた結果から、唯ベータルセプターを発現する細胞がＩｇＧ１／ＩｇＧ２Ｂ およびラビットＩｇＧ被覆赤血球と結合し得るために、ベータＩＦｃ　（ガンマ ）ＲがＩｇＧ　１／２　ｂ　、異種ＩｇＧと可能な他のＩｇＧ用レセプターであ ることが示される（第４表）。加えて、Ｋ３６細胞は、同一であることが示され たＬｙ−１７，２＋と２．４Ｇ２＋分子を有し、Ｆｃ（ガンマ）Ｒ分子上のエピ トープである（Ｕｎｋｌｅｓｓ、　１９７９；　Ｈｉｂｂｓ　ｅｔ　ａｔ、　１ ９８５；Ｈｏｌｍｅｓ　ｅｔ　ａｔ、　１９８５）。さらに、これら分子の抗体 は、ＩｇＧ１／２ｂとラビットＩｇＧ複合体の細胞表面への結合を完全に抑制す る。

このようにベータ１変異体は、Ｆｃ結合能力と２．４Ｇ２とＬｙ−１７，２抗体 により検出されるエピトープを有する分子をコードすべきである。Ｌｙ−１７， ２と２．４０２エピトープの両者は、この研究において両抗体がアミノ酸配列化 用の分子を精製するために使用されるので、β１とβ２分子上に存在することが 明らかである。最後に、ここに記載のｐＦｃｌ　１３ｃＤＮＡ　（ｐＫＣ３ベク ター中）は、細胞表面（第４表）のＦｃＲ（Ｌｙ−１７，２）を発現し、このク ローンが免疫グロブリン結合ＦｃＲをコード化することを示すＦｃＲ陰性ＬＴＡ −５細胞にトランスフェクトされた。アルファおよびベータ２レセプターと抗体 および免疫複合体との相互作用は、まだ正確に測定されていない。ＷＥＨＩ　３ ＢとＪ７７４細胞の両者は、ＩｇＧ１／２ｂとラビットＩｇＧ複合体とに結合し 、Ｌｙ−１７゜２である（第４表）けれども、アルファおよびベータ１ｍＲＮＡ 転写を発現し、唯Ｊ７７４細胞がベータ２ｍＲＮＡを発現する。ｃＤＮＡ発現実 験がレセプター特異性規定のために必要であるけれども、アルファ、ベータおよ びベータ２レセプターは免疫複合体に同一結合特性を有するだろう。

サウザンプロット分析 サウザンハイブリダイゼーション研究は、ｍＲＮＡとタンパク質レベルで観察さ れた不均一性がゲノムにおいても明らかである（第６図）かどうか決定すべく行 なわれた。

ＨｉｎｄｌＩＩまたはＰｓｔＩで消化されたねずみ牌臓ＤＮＡをプローブする（ 第６図、トラックａ、ｃ）とｃＤＮＡがハイブリダイズする２つのフラグメント が生じた。Ｅｃ。

ＲＩ　（）−ラックｂ）で消化すると、同様に２つの主要な、そして多くの他の 弱いハイブリダイズ化フラグメントを生じた。このように、強く保護された遺伝 子の唯単−のまたは数個の複製がゲノム中に存在するだろう。血清学上の研究で 示されるレセプターの不均一性と同様に、多重量ＲＮＡの存在は、レセプターが 一連の均質タンパク質であろうということを示す。

ヒトＦｃ（ガンマ）ＲｃＤＮＡクローンの単離ヒトＦｃがマウスおよびヒト免疫 グロブリンと結合し、かつマウスＦｃＲと多くの類似性を有する（Ｄｉｃｋｌｅ ｒ、　１９７６；　Ａｎｄｅｒｓｏｎ　ａｎｄ　Ａｂｒａｈａｍ、　１９８０； 　Ｋｕｌｃｚｙｃｋｉ　ｅｔ　ａｔ、　１９８１；　Ｐｅｒｕｓｓｉａ　ｅｔ　 ａｔ、　１９８３；　Ｄｏｒｒｉｎｇｔｏｎ　ａｎｄ　Ｋｌｅｉｎ、　１９８３ ）ので、核酸およびアミノ酸レベルで保護する高度の構造上および機能上の相同 があるであろう。このように我々は、マウスｃＤＮＡ　ｐＦｃ２４およびオリゴ ヌクレオチド、プローブ１．５，１．６．１．１０　（第３表）の組み合せを使 用してヒト急性単核細胞性白血病細胞ＴＨＰ−１から単離されたｍＲＮＡから構 成されたライブラリーをスクリーンした。ＨＦｃ３．Ｏ，ＨＦｃ３．ｌおよびＨ Ｆｃ３．４７を含むあるクローンが単離された。その結果（第７図）から、 １、ｐＦｃｌ１３　ｃＤＮＡがＨＦｃ３．１およびＨＦｃ３．４７のｃＤＮＡ挿 入物にハイブリダイズした。

２、プローブ１．５がＨＦｃ３．１ｃＤＮＡにハイブリダイズしたがＨＦｃ３． ４にはハイブリダイズしなかった。

３、プローブ１．１０が弱（ＨＦｃ３．１ｃＤＮＡにハイブリダイズしたが、Ｈ Ｆｃ３．４７にはしなかっな。

４、プローブαがクローンにもハイブリダイズしなかった。

５．１０−ブ１．６がＨＦｃ３．４７にハイブリダイズしたがＨＦｃ３．１には しなかったことが示された、プローブ１．６を除いたいずれのプローブも、ラム ダアームにハイブリダイズした（プローブ１．６のラムダアームへのハイブリダ イゼーションはサウザン転移前の不完全消化によるものであった。）。ＨＦｃ３ ．１とＨＦｃ３．４７　ｃＤＮＡクローンとマウスｃＤＮＡとの好ましい相同は ヌクレオチド配列化によりその後確認された。

ヒトＦｃＲｃＤＮＡの特徴 ヒトｃＤＮＡ挿入はプラスミドベクターにザブクローンされた。ｃＤＮＡコード 化ヒトＦｃ（ガンマ）Ｒの完全なヌクレオチド配列とその予想アミノ酸配列は、 第８図に示される。クローンＨＦｃ３．１は成熟Ｆｃ（ガンマ）タンパク質およ び多くのリーダー配列をコード化する配列と同様に全コード化配列をも含む。ヌ クレオチドとアミノ酸レベルでマウスＦｃＲ配列とＨＦｃ３．１配列の両者に見 られる高度の相同は、このクローンがヒトＦｃＲをコード化することを確める。

マウスアルファおよびベータＩＦｃＲ配列と整列されたヒトＦｃＲの完全なアミ ノ酸配列は、図示されている（第９Ａ、Ｂ図）。切断部は、整列を最適化するた めに導入された。ＨＦｃ３．１でコード化されたヒトＦｃＲの不完全なリーダー 配列は、マウスアルファＦｃＲ（アミノ酸の５６％保護）（第９Ａ図リーダー配 列に強く相同するが、マウスベータＩＦｃ（ガンマ）Ｒリーダー配列（第９Ｂ図 ）への相同を生じない。ヒトＦｃ（ガンマ）ＲＮ末端は、マウスアルファＦｃ（ ガンマ）ＲＮ末端配列への相同に基づいて予想されたＮ末端と第１システィン残 基間の領域は、ねずみベータ１とアルファＦｃ（ガンマ）Ｒのそれぞれに７１％ と７３％のアミノ酸相同を示す二種間で最も強く保護された領域である（第９Ａ 、Ｂ図）。

マウスとヒトのＦｃＲ間の残っている細胞外部分に高いレベルのアミノ酸保護も ある。マウスのように、細胞外領域は２つのジスルフィド結合ドメインに分けら れる最初の一組のシスティン残基は、４１のアミノ酸で分けられ、第二組は４３ のアミノ酸で分けられている。両ジスルフィド結合ドメインは、マウスベータ１ およびアルファＦｃ（ガンマ）Ｒに強い相同を生ずる。最初のドメインのアミノ 酸配列を比較すると、ヒトＦｃＲとマウスαおよびベータＦｃ（ガンマ）Ｒの両 者間に約５６％保護を示す（第９Ａ、Ｂ図）。同様にヒトＦｃ（ガンマ）Ｒとマ ウスアルファおよびベータＦｃＲ間の第２ドメインにおいてアミノ酸の約５６％ 保護がある。

２つのポテンシャルＮ結合グリコシレージョン部位は、ヒトＦｃＲ（名ドメイン の１つ）（第８図）の細胞外領域に存在し、４部位のうちの対応する２つは、マ ウスアルファおよびベータＩＦｃ　（ガンマ）Ｒの両方に存在する（第３Ｂ図） 。ヒトＦｃ（ガンマ）Ｒは、残基２１９から親水性停止転移配列Ａｒｇ　（２４ ５）−Ｌｙｓ　（２４６）−Ｌｙｓ　（２４７＞　−Ａｒｇ　（２４８＞から延 びる２８のアミノ酸トランスメンブラン領域を有する（第８図）。このトランス メンブラン配列は、マウスベータＩＦｃ　（ガンマ）Ｒに強い相同を示す（５０ ％アミノ酸相同）が、マウスアルファＦｃ（ガンマ）Ｒレセプターのトランスメ ンブランに相同を示さない（第９Ａ、Ｂ図）。

フレーム末端コドンにおいては、７５アミノ酸細胞形質内ドメインを産生ずるこ とがヌクレオチド１０４０において見い出された。両方のマウスＦｃ（ガンマ） Ｒの細胞形質ドメインとヒｔ−Ｆｃ（ガンマ）Ｒとの比較は、ヌクレオチドまた はアミノ酸のいずれにも同一性を示さなかった（第９Ａ、Ｂ図）。マウスとヒト Ｆｃ（ガンマ）Ｒ細胞形質ドメインとの間に得られた非常に低いレベルの相同と 同様に、マウスとヒトＦｃＲ配列との間に別の明確な相異が観察された。ヒトＦ ｃＲ配列は、２つの細胞外ドメイン間の３９のアミノ酸の挿入を起こす補足的な １１７のヌクレオチドを含んだ（第８図）。この配列は、マウスＦｃＲには無く （第３Ｂ、９Ａ、Ｂ図）、イントロン配列を表わしているだろう。このことは、 マウスゲノムクローンの配列化から推測される。

このヒトＦｃ（ガンマ）Ｒと、細胞外ドメインにおけるアルファおよびベータ１ マウスＦｃ（ガンマ）Ｒの両方への強い相同は、ヒトＦｃＲがマウスＩｇＧと結 合し、およびマウスＦｃＲがヒトＩｇに結合するという事実を表し得る。ヒトＨ Ｆｃ３．ＩＦｃＲの細胞形質ドメインは、唯一ただひとつであり、マウス　アル ファ、ベータ１またはベータ２細胞形質ドメインへの類似性は生じない。この相 異は、これらの決定されるまたは突然変異の高い割合であり得る領域におけるヒ トおよびマウス　タンパク質の発展的発散（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ　ｄｉｖ ｅｒｇｅｎｃｅ）を反映するマウスおける相同性産生物の存在を意味する。

ＨＦｃ３．４７の部分的ヌクレオチド配列はまた、マウスＦｃＲとの相同を表わ す（第１０図）、、２つのオーバラップしていないフラグメントは、配列され第 １７ラグメントは、ベータＩＦｃＲにおける対応する配列（ヌクレオチド６２９ 〜７３３）と８０％ヌクレオチド相同を現わした。

この配列は、ベータ２およびアルファにおける同様の配列に存在する。第２のフ ラグメントは、ベータ１ＦｃＲのヌクレオチド９５９〜１０１５とともに７２％ ヌクレオチド相同であり、この配列はまた、ベータ２ＦｃＲに存在するがアルフ ァＦｃＲには存在しない。

補足的変異配列はまた、第１１図に配列を示すＴＨＰ−１ライブラリーＨＦｃ３ ．Ｏからも得られた。ＨＦｃ３゜１と同様ＨＦｃ３゜０は、マウス　アルファお よびベータＦｃＲレセプターと強く相同するタンパク質をコード化する（第１２ Ａ、Ｂ図）。ヌクレオチド配列ＨＦｃ３．Ｏは、ＨＦｃ３．Ｏにおいて削除され た２つのジスルフィド結合ドメイン間の広い区域（ＨＦｃ３．１におけるヌクレ オチド３３８〜４５５〉を除いてＨＦｃ３．１と同一である。

ＨＦｃ３．Ｏでコード化されたタンパク質は、各々Ｎ−結含炭化水素に対する付 着部位を有する２つのジスルフィド結合ドメインから成る細胞外リガンド結合領 域を有する。

加えて、コード化タンパク質は、２８アミノ酸トランスメンブラン領域および７ ５アミノ酸細胞形質尾部を有する。

トランスメンブラン領域は、６７％同一アミノ酸残基の全相同を有しまたトラン スメンブラン領域は、２８アミノ酸の１４がマウス　ベータ１およびベータ２膜 内外領と同一である（第１２Ａ、Ｂ図）。

ヒト　ＦｃＲｍＲＮＡの発現二ノーザン　プロットを実施し正常ヒト胛臓におけ るＦｃＲ発現を分析した。２つのｍＲＮＡ　トランスクリプトが正常ヒト胛臓か らの総量ＲＮＡをｐＨＦｃ３．１からのｃＤＮＡ挿入でブロービング後現われた （第１３図）。ヒト牌臓における少なくとも２つのパイブリダイジングｍＲＮＡ の存在は、マウスと同様１またはそれ以上の遺伝子のいずれかから生じる多数の ヒト　タンパク質があることをおそらく示す。

ＤＮＡ分析：胸腺および抹消血リンパ球（ＰＢＬ）からのヒトゲノムＤＮＡのサ ウザン分析は、同一の制限フラグメントが同様の制限酵素で消化された際、胸腺 およびＰＢＬ　ＤＮＡに存在することを示した。これは、胸腺細胞が大部分Ｆｃ Ｒ−およびＰＢＬが大部分ＦｃＲ＋である故ＦｃＲ遺伝子が再配列しないことを 示す。加えて、主要ハイブリダイジング制限フラグメントがほんの少しである故 、ヒトゲノムにおいて単一またはいくつかのコピーの高保護遺伝子があるらしい 。

ヒトＦｃＲは、マウスおよびヒト免疫グロブリンと結合できまたはマウスＦｃＲ と数多くの類似性を有するので［デックリア、　１９７６年；アンダーメンおよ びアブラハム。

１９８０年、クルスジクキら、１９８１年；ベルジャら１９８３年ニドリングト ンおよびフレ４フ、１９８３年（Ｄｉｃｋｌｅｒ、　１９７６；Ａｎｄｅｒｓｏ ｎ　ａｎｄ　Ａｂｒａｈａｍ、　１９８０．にｕｌｃｚｙｃｋｉ　ｅｔ　ａｌ、 　１９８１；Ｐｅｒｕｓｓｉａ　ｅｔ　ａｌ、　１９Ｂ３；　Ｄｏｒｒｉｎｇｔ ｏｎ　ａｎｄにＩｅｉｎ、　１９８３）］　。

核酸およびアミノ酸レベルで保護された高程度の構造的おび機能的相同性がある らしい。従って本発明者らは、マウスｃＤＮＡ　ｐＦｃ２４およびオリゴヌクレ オチド、プローブ１．５，１．６，１．１０の組合せを使用しく第３表）ヒト急 性単球性白血病細胞から単離されたｍＲＮＡから構成されるライブラリーをスク リーンした。ＨＦｃ３．１゜３．０および３．４７を含むいくつかのクローンを 単離した。各々のこれらのクローンから調整されたＤＮＡを消化するＥｃＲＩの サウザン分析はマウスベータ１ｃＤＮＡ（ｐＦｃ２４から）が各ＨＦｃクローン 、すなわちＨＦｃ３、Ｏ，ＨＦｃ３．４７およびＨＦｃ３．１である。　ｃＤＮ Ａ挿入物にハイブリダイゼーションしたことを示す。オリゴヌクレオチドプロー ブ１．５は、ＨＦｃ３．１および３．０のｃＤＮＡ挿入物に、またオリゴヌクレ オチドプローブ１．６、ＨＦｃ、３．４７のｃＤＮＡ挿入物にハイブリダイゼー ションした。ｃＤＮＡ挿入物を精製し、第７ａ図に要約した方法に従ってジデオ キシヌクレオチド法で配列化した。配列化後、これらのクローンは、マウスＦｃ （ガンマ）Ｒと相同性を示しまた実際Ｆｃ（ガンマ）Ｒを同定する。この方法お よび類似方法は、いかなる種のＦｃ（ガンマ）Ｒを単離するためにも使用し得る 。

配列の異なる部分の重要性（第３Ｂ、８．９，１１．１２図）： リーダー配列 細胞外領域 トランスメンブラン領域 細胞内領域（細胞質領域） リーダー配列 ベータＩＦｃＲにおける２９アミノ酸のリーダー配列は、小胞体を横切り初期タ ンパク質の転座を認める。この配列のキーポイントはその疎水性であり（Ｍ挿入 に必要とされる）二また１以上の疎水性（無極性）アミノ酸の置換、付加または 削除は、この機能を実質的に変えるものではない（後述のリスト参照）。

細胞外領域 細胞外領域（ＦｃＲ）は、１７９のアミノ酸より成る。

すなわちこれらの機能はＩｇ分子のＦｃ片として作用することである。この結合 部位はまだ同定されていないが、配列の性質の解釈が関連する： （ａ）ＦｃＲは、システィン残基によって２つのドメイン、ドメイン１　：Ｃｙ ｓ２８〜Ｃｙｓ７０．　ドメイン２Ｃｙｓ１９０〜Ｃｙｓ１５３に分割される。

これらドメインの両方は、これらが高い相同性であるようにＦｃＲ活性を示し得 る。各ドメインの中でアミノ酸のすべて若しくはほとんどは、これらが保存され る（２つのドメインは、ヒトおよびマウス中に保存される）とおりにＩｇ結合中 に包含される傾向がある。（ｉ＞従ってマウス配列が内部相同に対して比較され る際（すなわちドメイン１およびドメイン２）、これらは非常に類似する。（ｉ ｉ）さらにマウスのドメイン１がヒトのものと比較される場合：これらは４３の アミノ酸を含み、これらの２４は、全く同じであり、また同一部分において１９ の相違のうち８がただ１つのヌクレオチドが変化されるという穏かな変化を受け （ａｔｅ　）また変化の残りのうち、１つのうちの６が同一のアミノ基であり（ 以下参照）また１３が異なる基であった。

置換アミノ酸は、同じ基に属し、またそれ故、分子の第３構造を実質的に変えず またアミノ酸分類は以下のとおりである。

（ｉ）無極性アミノ酸：　Ａ、Ｖ、　Ｌ、　Ｉ、Ｐ、）ｌ、Ｖ（ｉｉ）塩基性ア ミノ酸二に、Ｒ，Ｈ （ｉｉｉ）酸性側鎖：ｊＤ にＶ）極性側鎖：Ｇ、　Ｎ、　Ｑ、　Ｃ，Ｓ、　Ｔ、　ＹＡ、ａｌａ＝ｌミニア ラニンｃｙｓ＝システィン；Ｄ。

ａｓ−アスパラギン酸、Ｅ、ｇｌｕ＝グルタミン酸；Ｆ。

ｐｈｅ−フェニルアラニン、ａ、ｇｌｙ−グリシン；■。

１１ｅ−インロイシン；に、１ｙｓ−リシン；Ｍ、ｍｅｔ＝メチオニン；Ｎ、ａ ｓｎ−アスパラギン、Ｐ、ｐｒｏ＝プロリン：Ｑ、ｇｌｎ＝グルタミン；Ｒ，ａ ｒｇ−アルギンニン；Ｓ、５ｅｒ−セリン；Ｔ、ｔｈｒ＝トレオニン；Ｖ、ｖａ ｌ−バリン；Ｗ、ｔｒｐ＝トリプトファン；Ｙ。

ｔｙｒ−シロシン。

トランスメンブラン領域 これは、２０のアミノ酸から成りマウスベータ（ｂｅｔａｌ）ＦｃＲにおけるＬ ｅｕ　１８０〜Ｌｙｓ２０９がら拡張する。これの鍵となる特徴は、この部位が 疎水性細胞膜と相互作用し細胞膜における分子をとどめることが必要とれさる配 列の疎水性の性質である。疎水性のため、疎水性のマイナー変化が続く、すなわ ち他方による一方の無極性アミノ酸の置換は、トランスメンブラン領域の本質的 機能を変えない。このような疎水性（無極性）アミノ酸がアラニン（Ａ）；バリ ン（■）；ロイシン（Ｌ）；イソロイシン（Ｉ）；プロリン（Ｐ）フェニルアラ ニン（Ｆ）：メチオニン（Ｍ＞およびトリプトファン（Ｗ＞であることは言うま でもない。

膜内領域 膜内領域は、信号透過に関与する。すなわちＩｇのＦｃがＦｃＲに結合した除骨 られる。信号伝達のモードは、未知である。ＦｃＲの有効配列を記載する；すな わち全配列の部分削除によって得られるこの配列の変化もまた信号伝達において 作用し得るらしい。ベータ２において接合からはずされた（ｓｐｌｉｃｅｄ　ｏ ｕｔ）ベータ１の領域は、これらの分子を発現する細胞において重要である。

本明細書の対象は、種々の物質が可能である：Ａ、配列変化 レセプターをコード化するヌクレオチド配列は可変である： １、遺伝子暗号ヌクレオチド変化の抗体のため、コード化アミノ酸の変化を生じ させる必要はない、例えばコドンＧＵＵは、各々単一コドンによって異なるコド ンＧＵＣ，ＧｔＪＡおよびＧＵＧをなすようなバリン残基を特定する。

２．２または３のヌクレオチド変化は同一アミノ酸を生じ得る。例えばコドンＵ ＵＡ、ＵＵＧ、ＣＵＵ、ＣＵＡおよびＣＵＧのすべては、ロイシンをコード化す る。コドンＡＧＵ、ＵＣＣ，ＵＣＵ、ＵＣＡおよびＵＣＧは、セリンをコード化 する。

３．１または２のヌクレオチドの変化は、タンパク質の機能を著しく影響するこ とが好ましくない保護アミノ酸変化を生じ得る。例えば、コドンＵＵＧは、ロイ シンを特定しまたはＡＵＵは、イソロイシンを特定する。またＵＧＧは、トリプ トファンを特定しまたｔＪＩＪＵは、フェニルアラニンを特定する。すべてが保 存的変化である。

４、対立遺伝子の変化。ヌクレオチド配列およびコード化タンパク質のアミノ酸 配列の変化並びに結果的に合成されたものは、同種の個々のメンバーの間に生じ 得る。これらの変化は、タンパク質をコード化するヌクレオチド配列の変化から 起こる。従って同じ遺伝子の異なる形態（対遺伝子という）は、わずかに異なる アミノ酸配列のタンパク質を産生ずるが、尚も同じ機能を示す。

５、変化は、コード化配列の多数の異なるセグメント［エクソン（ｅｘｏｎｓ） 　］から成る１遺伝子（成熟タンパク質をコード化するＤＮＡ）が、継ぎ合せが そんなにも大きく一定のエクソンから誘導されたＲＮＡの部分が排除されるＲＮ Ａを生ずる相異ｍＲＮＡ継ぎ合せの結果生ずる。エクソンの選択は、異なる細胞 タイプにおいて異なる。例えば、ベータ１およびベータ２は、ＦｃＲを形成しま たはアルファおよびアルファ′はＬｙ−２を形成する。

６、例えば免疫グロブリン結合のような同位機能を示すタンパク質は、関連遺伝 子から生じる。このような相同タンパク質は、相同性遺伝子よりコード化される 。これらの遺伝子は、ある遺伝子の複製によってまたは遺伝子転換によって生じ る。

７、変化は、以下によって計画的に導き出せる。

（ａ＞官能タンパク質をコード化するｃＤＮＡまたはゲノム　クローン中の関連 または未関連ＤＮＡの部分突然変異、再配列または挿入によってクローンｃＤＮ ＡまたはゲノムＤＮＡを突然変異すること。このような突然変異（変異）クロー ンは、本明細書に関連しては、Ｉｇ結合機能を有する変異タンパク質またはペプ チドを発生するために使用し得る。

（ｂ）分割産生物の修復／再配列を伴いまたは伴わす（インビトロ合成または正 常細胞合成タンパク質のいずれかからの）タンパク質の酵素分割によって。

（Ｃ）化学的変性によって。

（ｄ）放射線照射によって。

Ｂ、ＦｃＲタンパク質　部分の使用 本発明はまた、Ｉｇを結合する能力を有する合成または一般的に製造されたＦｃ Ｒタンパク質（ペプチド）および変異ペプチド類の区画の使用を含む。ＦｃＲタ ンパク質およびリーダー配列における第１メチオニンからタンパク質の最終のＣ 末端アミノ酸まで拡張されたその変異体。

Ｃ１他のＦｃＲの単離 核酸、タンパク質および機能レベルにおいて相同性である種の中のおよび種間の 他のＦｃＲ０実質的配列相同のためここに記載されるｃＤＮＡは、ヒト、マウス および他の種からＦｃＲをコード化する関連配列の単離を可能にする。

本発明の本質的新規性は、以下を含むがこれに限定されるものではない。

（ｉ）分子、ＩｇのＦｃ片に結合する能力を示すＦｃＲの記載。（ｉｉ）ヒトお よびマウスの両方において各々に相同を示す２細胞外ドメインの構造配列。（ｉ ｉｉ）ヒトおよびマウスにおけるこれらのドメインの類似性（ｉＶ）信号が異な る構造によって伝達され得ることを示すヒトおよびマウスにおける細胞内領域に おける相異。（Ｖ）レセプターに対してコード化するｃＤＮＡおよび他のＲＮＡ 物質。

第１表 ＦｃレセプターのＮ末端配列および Ｆｃレセプターペプチドのアミノ酸配列ＮＨ２末端　ＴＨＤＬＰＫＡＶＶＫＬＥ ＰＰＬ　３　ＫＧＳＬＣＲＴＬＨＱＳに Ｌ　４　ＫＰＶＴＩＴＶＱＧＰＫ Ｌ　５　ＫＳＶＲＨＨＹＳＳ−ＦＳＩＰＫＬ　９　ＫＡＶＶＫＬＥＰＰＷＩＱＬ ＶＫＶ　４　ＥＬＳ丁丁丁丁ＮＳＧ（Ｓ）Ｐ（Ｖ）（Ｋ）ＮＶ　８　ＥＱＴＲＬ ＳＤＰＶＤＬＧＶＩＶ　Ｉ　ＯＥＮＴＩＴＹＳＬＬＫＨＰＥＶ　１　１　ＥＡＥ Ｎ丁Ｉ丁ＹＳＬＬＫＨＰＥＶ１６　丁ＨＤＬＰＫＡＶＶにＬＥＰ−ＩＱＶＶ　１ 　７　丁ＨＤＬＰＫＡＶＶＫＬＥＰＰＷＩＯＶＣＮ　Ｂ　ｒ　−１）ＩＲＮＫＨ ＬＮＲＩＶＦＬ（Ｑ／Ｔ）Ｎ（Ｙ）　（に）ＩＩ　ＩＩは未指定残基を示す。

（）は、不明確な指定を示す。

第２表 マウスＦｃレセプターのりシンー〇ペプチドのアミノ酸配列およびオリゴヌクレ オチドプローブの相当するヌクレオチド配列。オリゴヌクレオチドプローブは、 使用頻度に基づいて構成されまたｍＲＮＡの補体として合成された。

１３　（Ｌｙｓ）−Ｇｌｙ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−丁ｈｒ−Ｌｅｕ −旧ｓ−Ｇ！ｎ−３ｅｒ−Ｌｙｓ ブロー１１３°　υＵＣ−ＣＣＵ−ＡＧＧ−ＧＡＣ−ＣＣＵ−ＵＣＵ−ＵＧＧ− ＧＡＣ−ＧＵＧ−ＧＵＣ−ＡＧＧ−ＵＵＣ５゜ １４　（Ｌｙｓ）−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−丁ｈｒ−１１ｅ−丁ｈｒ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ −ＧＩｙ−ＰｒＯ−Ｌｙｓ プローブ　３　３’　ＵＵＣ−ＧＧＵ−ＧＡＣ−ＵＧＧ−ＵＡＧ−υＧＧ−ＧＡ Ｃ−ＣＵＣ−ＣＵＵ−ＧＧＵ−Ｌ５　（Ｌｙｓ　）−３ｅ　ｒ−Ｖａ　Ｉ　−Ａ ｒｇ−Ｔｙｒ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｔｙｒ−５ｅｒ−３ｅｒ−３ｅｒ−Ｐ ｈｅ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓプローブ　２３°　ＵｔｌＣ−ＡＧＧ− ＣＡＣ−ＵＣＵ−ＡＩＪＧ−ＣＣＵ−ＣＣＵ−ＡＵＧ−ＡＧＧ−ＡＧＧ−ＡＧＧ −ＡＡＧ−ＡＣＣ−ＵＡＧ−ＧＧＵ−ＵυＣ５’第３表 本研究に使用したオリゴヌクレオチドプローブｐＦｃ１１３　ｃＤＮＡ 名　称　配　列　における　相当 配 プローブ１゜５　５’ＡＣＧＧＧＧＧＣＴＣＧＡＧＴＴＴＧＡＣＣＡＣＡＧＣＣ １３５−１８２”■丁ＴＧＧＡＡＧＡＴＣＡＴＧＡＧＴＣＣＣＡＧ３’プローブ １゜６　５°丁ＴＣＧＧＧＡＴＧＣＴＴＧＡＧＧＡＧＴＧＡＧ丁ＡＧＧ　９５Ｂ −１０００“ＴＧＡＴＣＧＴＧＴＴＣＴＣＡＧＣＣＴＣ３゜プローブ１．１０　 ５°Ｇ丁ＧＧＴＴＧＧＣ丁ＴＴＧＧＧＧＡ丁ＡＧＡＧＡＡＡＴ　５４５−５７４ ”ＴＡＣＴ３′ プローブ　アルファ　５°ＡＧＧＧＡＧＡＡＡＧＣＡＧＴＧ丁ＧＧＴＡＣＣＡＧ ＡＣ３°　−プローブ　ベータ１　５’ＣＴＧＴＣＴＧＴＡＣＴＣＡＣＣＴＡＣ ＴＴＣＣＴＣＴＧ　８２１−８５０　″“ＡＡＧ プローブ　ベータ２　５’ＡＧＧＡＧＧＡＴＴＧＴＣＴＧＧＡＡＣＣＴＧＣＴＴ ３°　−’　ｍＲＮＡ補体配列 ″“本明細書およびヒブスら１９８６年（旧ｂｂｓ　ｅｔ　ａｔ　１９ＢＢ）か らの配列 第４　表 免疫複合体結合とＦｃＲｍＲＮＡ合成との比較細胞系　ＦｃＲｍＲＮＡ’　％Ｅ Ａ　ｏゼット″′　％Ｌｙ−１７＋　ｃｅｌｌｓｏ（タイプ）　’ＩＺ異体　１ ンマ　１／　ウサギＩｇに３６　ベータ１　＞９９　＞９９　＞９９（Ｔリンパ 球） −Ｆ旧　３Ｂ　アルファ、ベータ１　＞９９　＞９９　＞９９＋８１性単球） ｊ７７４　アルファ、ベータ１．＞９９　＞９９　＞９９ベータ２ （マクロファージ） トランスフェクトント＋　処置なし　処置なし　処置なし　７０“特定オリゴヌ クレオチドプローブ（第１表）を使用してノーザン（ＮＯｒｔｈｅｎ）分析にて 決定されたアルファ、ベータ１、ベータ２　ｍＲＮＡ複製。

”ＩｇＧ２ｂモノクローナル抗ＴＮＰ抗体またはウサギエｇＧ抗ヒツジ赤血球を 使用して決定された。％Ｅｔロゼッティング細胞（材料および方法参照）。

０抗Ｌｙ−１７，２モノクローナル抗体でロゼッティングしたヒツジ抗マウスＩ ｇより決定された。ロゼ・ント　フォーメーションの背景レベルを未分割抗体を 使用し決定しく５％であった。これらの細胞はまた、２．４Ｇ２抗体でテストさ れＬｙ−１７，２抗体への同一反応を示した。

＋ｐＦｃ　１１３ｃＤＮＡ挿入のＰｓｔ−１フラグメントをｐＫＣ３にてサブク ローンし、ＣａＣｆ）２法を使用してＬＴＡ−５中にトランスフェクトした。

ｐＦｃ２４．ｐＦｃｌ１３．ＨＦｃ３．ＯおよびＨＦｃ３゜４７としてここに記 載された物質の寄託は、公のメンバーに入るのを認める条件下で１９８７年５月 ２９日またはその付近にＡＴＣＣでまたはオーストラリア国、ビクトリア州、メ ルボルン、リトルロンスダール　ストリート４８１のキャンサー　インスティテ ユート（ピータ−マキュラム　クリニックとしても知られている）のジョージ　 ホジス博士にてなされた。

ＤＩ五１１ −５．４９ｋｂ ＡＢ　ＣＤ　’　ＥＦ Ｄ１υ１臣 ａ　ｂ　ａ　ｂｅｄ 品別二ニ ー４に−９・ 旦足蓼しハ Ａ　Ｂ　ＣＤ　Ｅ 月１霊り胆 Ａ　Ｂ　ＣＤ　Ｅ 特衣昭６３−５０３３８６　（２４） 八 月是霊り巳 二１霊り圧 手続ネ市正書（方式） ％式％ 国　籍　オーストラリア国 ６、補正の対象 （１）明細書および請求の範囲４翻訳文。

（２）「委任状」 明細書、請求の節回の浄書・別紙の通り社士士へ（内容に変更国際調査報告 Ｉ＋１ｒＰ１電−・＋１ムｏ１−【蟲１＠ＡＩＩ＠ＰＣＴＩＡＵ８７１Ｏ０１５ ９■ＩＩ−デー１１０内１＾ＩＯ＋□ζ烏Ｉ□０ＡＩＩ＠ＰＣＴ／Ａｕ８７１０ ０１５９［Ｇ！ＡＬ　ＡＰＰＩＪＣＡＩＴＴＧＩ　Ｎｉ＋、　■πＡＨ８７００ １５９

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 本発明を特定する請求の範囲は、次のとおりである。１．ＡＴＣＣ６７４１４、 ＡＴＣＣ６７４１５またはＡＴＣＣ６７４１６から誘導される免疫グロブリンの Ｆｃ部分に対するレセプター。 ２．マウスおよびヒト免疫グロブリンのＦｃ部分に結合する能力を発揮する免疫 グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 ３．抗体および免疫複合体のＦｃ部分に結合する能力を発揮する請求の範囲第２ 抗に記載のレセプター。 ４．４０〜７０キロドルトンのサイズを有する請求の範囲第２項に記載のレセプ ター。 ５．約１．８、約２．０、約１．９、約１．４または約２．４キロベースのサイ ズのｍＲＮＡから形成される請求の範囲第２項に記載のレセプター。 ６．Ｃｙｓ残基の実質的に離間された２つの対または２たまは４ポテンシャルＮ 結合グリコシル化部位を含む約２８０〜３０１アミノ酸から成る請求の範囲第２ 項に記載のレセプター。 ７．請求の範囲第１項または第２項のレセプターと少なくとも４０％、より好ま しくは少なくとも５０％、さらに好ましくは６０％の相同を有する免疫グロブリ ンのＦｃ部分に対するレセプター。 ８．アミノ酸配列； （ａ）【配列があります】， （ｂ）【配列があります】、および （ｃ）【配列があります】および （ｄ）【配列があります】。 を含む免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 ９．アミノ酸配列； 【配列があります】 を含む免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 １０．アミノ酸配列； 【配列があります】 を含む免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 １１．アミノ酸配列； 【配列があります】 を含む免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 １２．アミノ酸配列； 【配列があります】 を含む免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 １３．アミノ酸配列： 【配列があります】 を含む免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 １４．アミノ酸配列： 【配列があります】 を含む免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 １５．アミノ酸配列： 【配列があります】 を含む免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 １６．アミノ酸配列： 【配列があります】 を含む免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 １７．アミノ酸配列： 【配列があります】 を含む免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 １８．アミノ酸配列： 【配列があります】 を含む免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 １９．上記請求の範囲のいずれかのレセプターあるいはそのフラグメントに関し コード化するために適用されるまたはコード化するために適用される物質を産生 するヌクレオチド配列、遺伝子、ｃＤＮＡクローンあるいはこれらのためのベク ター。 ２０．請求の範囲１項ないし第１８項のいずれか１つに記載のレセプターのリー ダー配列、細胞外領域トランスメンブラン領域もしくは細胞内領域に関してコー ド化するために適用されるまたはコード化するために適用される物質を産生する ヌクレオチド配列、遺伝子、ｃＤＮクローンまたはこれらのためのベクター。 ２１．ＡＴＣＣ６７４１４，ＡＴＣＣ６７４１５またはＡＴＣＣ６７４１６の中 に取り込まれかつ免疫グロブリンまたはそのフラグメントのＦｃ部分に対するレ セプターに関してコード化することができるｃＤＮＡクローン、遺伝子あるいは ヌクレオチド配列。 ２２．ＡＴＣＣ６７４１４，ＡＴＣＣ６７４１５またはＡＴＣＣ６７４１６から なる物質。 ２３．ヌクレオチド配列； （ａ）【配列があります】， （ｂ）【配列があります】， （ｃ）【配列があります】および （ｄ）【配列があります】 を有するヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子またはこれらを含みかつ 免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターに関してコード化することができ るベクター。 ２４．ヌクレオチド配列； 【配列があります】 を有するヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子またはこれらを含みかつ 免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターに関してコード化することができ るベクター。 ２５．ヌクレオチド配列； 【配列があります】 を有するヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子またはこれらを含みかつ 免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターに関してコード化することができ るベクター。 ２６．ヌクレオチド配列； 【配列があります】 を有するヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子またはこれらを含みかつ 免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターに関してコード化することができ るベクター。 ２７．ヌクレオチド配列； 【配列があります】 を有するヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子またはこれらを含みかつ 免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターに関してコード化することができ るベクター。 ２８．ヌクレオチド配列； 【配列があります】 を有するヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子またはこれらを含みかつ 免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターに関してコード化することができ るベクター。 ２９．ヌクレオチド配列； 【配列があります】 を有するヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子またはこれらを含みかつ 免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターに関してコード化することができ るベクター。 ３０．ヌクレオチド配列； 【配列があります】 を有するヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子またはこれらを含みかつ 免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターに関してコード化することができ るベクター。 ３１．ヌクレオチド配列； 【配列があります】 を有するヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子またはこれらを含みかつ 免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターに関してコード化することができ るベクター。 ３２．ヌクレオチド配列； 【配列があります】 を有するヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子またはこれらを含みかつ 免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターに関してコード化することができ るベクター。 ３３．ヌクレオチド配列； 【配列があります】を有 するヌクレオチド配列、ｃＤＮＡクローン、遺伝子またはこれらを含みかつ免疫 グロブリンのＦｃ部分に対するレセプターに関してコード化することができるベ クター。 ３４．添付図面のいずれか１つに説明されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリ ンのＦｃ部分に対するレセプターまたは免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセ プターである数多くのアミノ酸配列。 ３５．免疫グロブリンのＦｃ部分に結合する能力を実質的に阻害することなくア ミノ酸の削除、付加または置換によってまたは化学的もしくは放射線照射変性に よって変性された請求の範囲第１項ないし第１８項および第３４項のいずれか１ つに記載された免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 ３６．添付図面のいずれか１つに説明されたヌクレオチド配列を有するまたは免 疫グロブリンもしくはそのフラグメントのＦｃ部分に対するレセプターに関して コード化するために適用されるヌクレオチド配列、遺伝子、ｃＤＮＡクローンま たはこれらに対するベクター。 ３７．免疫グロブリンまたはそのフラグメントのＦｃ部分に対するレセプターに 関してコード化する能力を実質的に阻害する影響を与えることなしに削除、付加 または置換によってあるいは化学的または放射線照射によって変性された請求の 範囲第１９項ないし第３３項および第３６項のいずれか１つに記載されたヌクレ オチド配列、遺伝子またはこれらのためのベクター。 ３８．ｐＦｃ２４，ｐＦｃ１１３，Ｈｃ３．０，Ｈｃ３．１またはＨｃ３．４７ から誘導された免疫グロブリンのＦｃ部分に対するレセプター。 ３９．ｐＦｃ２４，ｐＦｃ１１３，Ｈｃ３．０，Ｈｃ３．１またはＨｃ３．４７ から成る物質。 ４０．ｐＦｃ２４，ｐＦｃ１１３，Ｈｃ３．０，Ｈｃ３．１またはＨｃ３．４７ 中に取り込まれかつ免疫グロブリンまたはそのフラグメントのＦｃ部分に対する レセプターに関してコード化することができるｃＤＮＡクローン、遺伝子または ヌクレオチド配列。