JPS6348454A - 多層分析素子 - Google Patents
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、液体を試料とし、その中のアナライト(分析
目標成分)を定量するフィルム状多層分析素子に関する
。
目標成分)を定量するフィルム状多層分析素子に関する
。
シート状又はフィルム状の分析素子は、分析試薬や必要
な操作の一部を、素子中にドライの形で組込み、液体試
料をその上に、点着させることで、簡便かつ迅速に液体
試料中のアナライトを分析することが可能である。これ
ら分析素子のうち、単層のもので試薬を担持する層の材
料として、1紙、メンブレンフィルター等を用いるもの
(特公昭56−4198号、米国特許第3bo709s
号等)がある。
な操作の一部を、素子中にドライの形で組込み、液体試
料をその上に、点着させることで、簡便かつ迅速に液体
試料中のアナライトを分析することが可能である。これ
ら分析素子のうち、単層のもので試薬を担持する層の材
料として、1紙、メンブレンフィルター等を用いるもの
(特公昭56−4198号、米国特許第3bo709s
号等)がある。
また、単なる積層やはく離を前提とした非−体型多層分
析素子として、ガラスフィルターやメンブレンフィルタ
ーを用いたり(特開昭49−11595号)、2枚のP
紙の上に網をかけたもの(特開昭54−151096号
、米国特許第3526480号)などが知られている。
析素子として、ガラスフィルターやメンブレンフィルタ
ーを用いたり(特開昭49−11595号)、2枚のP
紙の上に網をかけたもの(特開昭54−151096号
、米国特許第3526480号)などが知られている。
これら単層あるいは単なる積IiI型多層の分析素子は
、半定量用として用いられているが、定量用としては十
分な信頼性を得ているとはいいがたい。
、半定量用として用いられているが、定量用としては十
分な信頼性を得ているとはいいがたい。
液体不浸透性、光透過性支持体上に複数の層を配置し、
かつ各層間が流体接触という言葉で示される各層が隙間
なく接着された状態で積層された多層分析素子が、特公
昭!!−21677号、特開昭55−164359号、
同55−90859号、同57−197466号、同5
7−101761号、同57−101760号各公報等
に開示されている。これらは、透明支持体の片側に、多
孔性展開層及び機能層が多膚状に配置されはく離できな
い状態で一体化されている。多孔性展開層は最外層、す
なわち最上層に位置し、液体試料が点着供給される層で
、点着された液体試料を展開作用、すなわち、試料の容
量にほぼ比例して液が広がる。換言すれば、単位面積当
シはぼ一足量の試料が分布するように、点着供給された
液体試料を広げる作用をする層で、展延層又は計i(メ
ータリング)層とも称せられ、この層によって展開され
た液体試料は、直ちに1下層に位置する機能層に均一に
(単位面積当りほぼ一定量の試料が分布するように)供
給される。
かつ各層間が流体接触という言葉で示される各層が隙間
なく接着された状態で積層された多層分析素子が、特公
昭!!−21677号、特開昭55−164359号、
同55−90859号、同57−197466号、同5
7−101761号、同57−101760号各公報等
に開示されている。これらは、透明支持体の片側に、多
孔性展開層及び機能層が多膚状に配置されはく離できな
い状態で一体化されている。多孔性展開層は最外層、す
なわち最上層に位置し、液体試料が点着供給される層で
、点着された液体試料を展開作用、すなわち、試料の容
量にほぼ比例して液が広がる。換言すれば、単位面積当
シはぼ一足量の試料が分布するように、点着供給された
液体試料を広げる作用をする層で、展延層又は計i(メ
ータリング)層とも称せられ、この層によって展開され
た液体試料は、直ちに1下層に位置する機能層に均一に
(単位面積当りほぼ一定量の試料が分布するように)供
給される。
機能層とは、代表的には試薬層であり頁に、反応層、検
出層、元遮へい層、元反射層、f過励、半透明層、バリ
ヤー層、トラップ層、吸水層、前処理層、マイグレーシ
ョン阻止層、その他多くの種類があり、分析に必要な試
薬や機能を受けもつものである。展開層も機能層も一層
一機能の場合と一層多機能の場合とがある。例えば展開
層が分析試薬の一部を含んでいて、試薬層を兼ねること
もあり、また分析試薬の全部を含んでいて試薬層と反応
層とを兼ねる展開層であることもある。
出層、元遮へい層、元反射層、f過励、半透明層、バリ
ヤー層、トラップ層、吸水層、前処理層、マイグレーシ
ョン阻止層、その他多くの種類があり、分析に必要な試
薬や機能を受けもつものである。展開層も機能層も一層
一機能の場合と一層多機能の場合とがある。例えば展開
層が分析試薬の一部を含んでいて、試薬層を兼ねること
もあり、また分析試薬の全部を含んでいて試薬層と反応
層とを兼ねる展開層であることもある。
各NIt−構成するための材料として、展開層は、特公
昭53−21677号公報記載のプラッシュポリマー看
、特開昭55164559号公報に記載の織物、編物、
特開昭57−197466号公報記載のバラバラの繊維
及び反応性高分子材料から成る繊維展開層、及び特開昭
55−90859号、同57−101760号、同57
−101761号各公報に示される粒状構造物等が一般
的である。
昭53−21677号公報記載のプラッシュポリマー看
、特開昭55164559号公報に記載の織物、編物、
特開昭57−197466号公報記載のバラバラの繊維
及び反応性高分子材料から成る繊維展開層、及び特開昭
55−90859号、同57−101760号、同57
−101761号各公報に示される粒状構造物等が一般
的である。
また、機能層はゼラチン、ポリアクリルアミド、ポリビ
ニルピロリドン、ポリビニルアルコール、アガロース等
の親水性高分子材料、セルロース誘導体等を挙けること
が可能である。
ニルピロリドン、ポリビニルアルコール、アガロース等
の親水性高分子材料、セルロース誘導体等を挙けること
が可能である。
前述の多層分析素子の中で、オキシダーゼを用いて過酸
化水素を生成させ、この過酸化水素の作用により検知可
能な有色の物質を生成することのできる組成物(呈色試
薬)の組合せによって、定量全行うものがある。これら
は、例えばグルコース検出に用いられるトリンダー試薬
として知られる試薬組成物及びそれに類するものが挙け
られる。例えば、Ann、 C11n、 Bioche
m。
化水素を生成させ、この過酸化水素の作用により検知可
能な有色の物質を生成することのできる組成物(呈色試
薬)の組合せによって、定量全行うものがある。これら
は、例えばグルコース検出に用いられるトリンダー試薬
として知られる試薬組成物及びそれに類するものが挙け
られる。例えば、Ann、 C11n、 Bioche
m。
第6巻 第24頁〜第27頁(1969年)K記載の文
献、米国特許第5992158号F!AIIJU書、特
公昭56−45599号公報等の記載が参照される〇 この試薬組成物を用いた分析は溶血の影響があることが
知られている。これらは主として全血における赤血球中
のカタラーゼやヘムタンパクによる過酸化水素の消費作
用等に起因することが知られている。このような影響を
排除するための方法として、米国特許第3535069
号、同第5349006号、同第5862885号等各
明細VKは、カタラーゼ阻害剤金、オキシダーゼt−含
む試薬に含有させ、液体試料とオキシダーゼが反応時に
カタラーゼ活性を有する物質の影響を除去し、更に検知
可能な呈色試薬を含む試薬と反応させることが開示され
ている。
献、米国特許第5992158号F!AIIJU書、特
公昭56−45599号公報等の記載が参照される〇 この試薬組成物を用いた分析は溶血の影響があることが
知られている。これらは主として全血における赤血球中
のカタラーゼやヘムタンパクによる過酸化水素の消費作
用等に起因することが知られている。このような影響を
排除するための方法として、米国特許第3535069
号、同第5349006号、同第5862885号等各
明細VKは、カタラーゼ阻害剤金、オキシダーゼt−含
む試薬に含有させ、液体試料とオキシダーゼが反応時に
カタラーゼ活性を有する物質の影響を除去し、更に検知
可能な呈色試薬を含む試薬と反応させることが開示され
ている。
更に、特開昭59−I Q9192号公報には、多層分
析素子の展開層に近い層又は展開層にカタラーゼ阻害剤
を含有させることが開示されている。これIri該公報
によれば、展開層素材にカタラーゼ阻害剤溶液を含浸、
乾燥させるか、又はスプレーすることで展開層中にtV
させることができることが開示されている。これらは前
記米国特許と同様に溶血の影響を排除できる。
析素子の展開層に近い層又は展開層にカタラーゼ阻害剤
を含有させることが開示されている。これIri該公報
によれば、展開層素材にカタラーゼ阻害剤溶液を含浸、
乾燥させるか、又はスプレーすることで展開層中にtV
させることができることが開示されている。これらは前
記米国特許と同様に溶血の影響を排除できる。
しかしながら、カタラーゼ阻害剤は、過酸化水素を呈色
試薬によって検知可能な呈色物質に変化する際の触媒で
あるペルオキシダーゼをも阻害することが知られておタ
、呈色色素濃度を低下させ、その結果感[1著しく低下
させる。
試薬によって検知可能な呈色物質に変化する際の触媒で
あるペルオキシダーゼをも阻害することが知られておタ
、呈色色素濃度を低下させ、その結果感[1著しく低下
させる。
これによって、分析の精度すなわち同時再現性の悪化と
いう結果を引起す0 本発明の目的は、オキシダーゼにより生成する過酸化水
素の作用で検知可能な物質を与える反応性組成物試薬系
を含有する多層分析素子において、溶血の影響が排除さ
れた多層分析素子を提供することにおる。
いう結果を引起す0 本発明の目的は、オキシダーゼにより生成する過酸化水
素の作用で検知可能な物質を与える反応性組成物試薬系
を含有する多層分析素子において、溶血の影響が排除さ
れた多層分析素子を提供することにおる。
また本発明の目的は、カタラーゼ阻害剤を含有した多層
分析素子において、反射濃度低下、感度低下、ひいては
同時再現性の劣化を回避した一体型多層分析素子を提供
することにおる。
分析素子において、反射濃度低下、感度低下、ひいては
同時再現性の劣化を回避した一体型多層分析素子を提供
することにおる。
本発明を概説すれば、本発明は多層分析素子に関する発
明であって、液体不浸透性でかつ光透過性の支持体上に
、過酸化水素の作用を受けて検知可能な物質を生成する
反応性組成物を含む試薬層、及び該試薬層の上方に多孔
性展開層を有する分析素子において、該試薬層がカタラ
ーゼ活性阻害剤を含有し、過酸化水素を検知可能な呈色
物質に変換させる物質が、該試薬層よシも、より該展開
層に近い側の層及び/又は該展開層に含有されているこ
とを特徴とする。
明であって、液体不浸透性でかつ光透過性の支持体上に
、過酸化水素の作用を受けて検知可能な物質を生成する
反応性組成物を含む試薬層、及び該試薬層の上方に多孔
性展開層を有する分析素子において、該試薬層がカタラ
ーゼ活性阻害剤を含有し、過酸化水素を検知可能な呈色
物質に変換させる物質が、該試薬層よシも、より該展開
層に近い側の層及び/又は該展開層に含有されているこ
とを特徴とする。
本発明者らは、実験を重ねた結果、カタラーゼ活性阻害
剤全上記試薬層に含有させ、かつ、過酸化水素を検知可
能な呈色物質に変換させる物質を、該試薬層よりも、よ
り該展開層は近い側の層及び/又は展開層に含有させる
ことにより前記欠点が解消されることを見出して本発明
に到達した。
剤全上記試薬層に含有させ、かつ、過酸化水素を検知可
能な呈色物質に変換させる物質を、該試薬層よりも、よ
り該展開層は近い側の層及び/又は展開層に含有させる
ことにより前記欠点が解消されることを見出して本発明
に到達した。
本発明の多層分析素子に用いられるカタラーゼ活性阻害
剤は、公知の27タラーゼ活性を阻害するものであれば
良く、例えばシアン化合物、アジド化合物、フッ素化合
物、ギ酸及びその塩、酢駿及びその塩、アミノトリアゾ
ール類、アスコルピン酸、2価鋼イオン、セミカルバジ
ド、ピラゾール、ジエチルジチオカルバミン酸塩、亜硝
酸塩、N−エチルマレイミド等を挙げることができる。
剤は、公知の27タラーゼ活性を阻害するものであれば
良く、例えばシアン化合物、アジド化合物、フッ素化合
物、ギ酸及びその塩、酢駿及びその塩、アミノトリアゾ
ール類、アスコルピン酸、2価鋼イオン、セミカルバジ
ド、ピラゾール、ジエチルジチオカルバミン酸塩、亜硝
酸塩、N−エチルマレイミド等を挙げることができる。
特に、アジド化合物、フッ素化合物、アミノトリアゾー
ル類、酢酸塩等は阻害効果が強く好ましい。
ル類、酢酸塩等は阻害効果が強く好ましい。
これらカタラーゼ活性阻害剤の添加量は、1×10″″
1〜I X 10−4モル/m3でよく、好ましくは5
X 1 0−2〜I X 1 0−3モル/rn”
である。
1〜I X 10−4モル/m3でよく、好ましくは5
X 1 0−2〜I X 1 0−3モル/rn”
である。
本発明の多層分析素子は、水不浸透性でかつ光透過性の
支持体上に、過酸化水素の作用を受けて検知可能な物質
を生成する反応性組成物全室む試薬層、及び多孔性展開
層を必須の構成層として有するが、必要に応じて他の機
能を有する機能層(例えば、元反射層、−退潮、バリャ
−層、マイグレーション阻止層等)、若しくは構造補助
層(例えば接着層等)を有していても良い。
支持体上に、過酸化水素の作用を受けて検知可能な物質
を生成する反応性組成物全室む試薬層、及び多孔性展開
層を必須の構成層として有するが、必要に応じて他の機
能を有する機能層(例えば、元反射層、−退潮、バリャ
−層、マイグレーション阻止層等)、若しくは構造補助
層(例えば接着層等)を有していても良い。
前記カタラーゼ活性阻害剤は試薬層に含有される。該阻
害剤を試薬層に含有させることにより、均一に含有され
、大面積をとっても、その位置に依存せず、均一に分布
させることができる0 オキシダーゼの関与の下に生成したH2Ch k、検知
可能な呈色物質に変換させるためには、ペルオキシダー
ゼ様活性又は過酸化物活性を示す物質が必要である。一
般にペルオキシダーゼが用いられるが、他に合成ペルオ
キシダーゼ、ヘミン、メトヘモグロビン、オキシヘモグ
ロビン、ヘモグロビン、ヘモクロモータン、アルカリヘ
マチン、ヘミン誘導体、スルホシアン酸鉄、タンニン酸
鉄、フェロシアン化鉄、クロム酸塩等も本発明の実施に
有用である。
害剤を試薬層に含有させることにより、均一に含有され
、大面積をとっても、その位置に依存せず、均一に分布
させることができる0 オキシダーゼの関与の下に生成したH2Ch k、検知
可能な呈色物質に変換させるためには、ペルオキシダー
ゼ様活性又は過酸化物活性を示す物質が必要である。一
般にペルオキシダーゼが用いられるが、他に合成ペルオ
キシダーゼ、ヘミン、メトヘモグロビン、オキシヘモグ
ロビン、ヘモグロビン、ヘモクロモータン、アルカリヘ
マチン、ヘミン誘導体、スルホシアン酸鉄、タンニン酸
鉄、フェロシアン化鉄、クロム酸塩等も本発明の実施に
有用である。
上記、ペルオキシダーゼ様活性又は過酸化物活性を示す
物質は試薬層よりも、展開層に近い側の層又は展開層に
含有される。この含有方法は多孔性展開層の態様によっ
て、種々の方法がとれる。
物質は試薬層よりも、展開層に近い側の層又は展開層に
含有される。この含有方法は多孔性展開層の態様によっ
て、種々の方法がとれる。
多孔性展開層としては特開昭57−197466号公報
に開示されている、バラバラの繊維及び反応性高分子か
ら成る繊維展開層、特公昭53−21677号公報に開
示された、非繊維質多孔性媒体層、いわゆるプラッシュ
・ポリマー層、特開昭57−101760号及び同57
−101761公報公報に開示された粒子が直接又は低
分子化合物を介して結合され次粒子結合体、特開昭55
−90859号公報に開示された粒子と接着剤微粒子か
ら成る粒状構造物、特開昭55−164556号公報記
載の親水化処理された織物等が挙けられる。
に開示されている、バラバラの繊維及び反応性高分子か
ら成る繊維展開層、特公昭53−21677号公報に開
示された、非繊維質多孔性媒体層、いわゆるプラッシュ
・ポリマー層、特開昭57−101760号及び同57
−101761公報公報に開示された粒子が直接又は低
分子化合物を介して結合され次粒子結合体、特開昭55
−90859号公報に開示された粒子と接着剤微粒子か
ら成る粒状構造物、特開昭55−164556号公報記
載の親水化処理された織物等が挙けられる。
上記展開層には、ペルオキシダーゼ様活性又は過酸化物
活性を示す物質は、上記展開層の形態、積層方法等によ
って分散、溶解など各棟の方法によって官有させること
ができる。
活性を示す物質は、上記展開層の形態、積層方法等によ
って分散、溶解など各棟の方法によって官有させること
ができる。
例えば、繊維展開層や、非繊維質多孔性媒体層、粒子結
合体及び粒状構造体において、有機溶媒を用いて積層す
る場合、前記活性を示す物質は分散によって含有される
。上記物質はそのま1分散されてもよいが、特にペルオ
キシダーゼ、ヘモグロビン誘導体のようなタン白質の場
合、特願昭60−19324号明細書に記載のごとく、
上記活性を阻害しないタン白質、例えばウシ血清アルブ
ミン等と混合し、活性タン白質を気腫して、分散するこ
とが好ブしい。
合体及び粒状構造体において、有機溶媒を用いて積層す
る場合、前記活性を示す物質は分散によって含有される
。上記物質はそのま1分散されてもよいが、特にペルオ
キシダーゼ、ヘモグロビン誘導体のようなタン白質の場
合、特願昭60−19324号明細書に記載のごとく、
上記活性を阻害しないタン白質、例えばウシ血清アルブ
ミン等と混合し、活性タン白質を気腫して、分散するこ
とが好ブしい。
4f4、水、及び前記活性物質を溶解することが可能な
有機溶媒で前述の多孔性展開層を積層する場合は、その
塗布液中に前記活性を示す物質を同時に溶解し積層すれ
ば良い。
有機溶媒で前述の多孔性展開層を積層する場合は、その
塗布液中に前記活性を示す物質を同時に溶解し積層すれ
ば良い。
更にプラッシュポリマー層としてのメンブレンフィルタ
ー、親水化処理された織物のように、あらかじめ多孔性
の膜であるものは、前記活性を示す物質の溶液に、該多
孔性膜を浸漬し、乾燥した後に積層することができる。
ー、親水化処理された織物のように、あらかじめ多孔性
の膜であるものは、前記活性を示す物質の溶液に、該多
孔性膜を浸漬し、乾燥した後に積層することができる。
轟然のことながら、アナライト分析のために必要な#累
や緩衝剤を含有することができる0過酸化水素の存在で
、検知可能な変化を生じる呈色組成物は、任意に適当な
組成物を用いることができる。使用しうる代表的な例と
しては、必要に応じて発色剤と共に下記の物質を含むも
のが挙げられる。
や緩衝剤を含有することができる0過酸化水素の存在で
、検知可能な変化を生じる呈色組成物は、任意に適当な
組成物を用いることができる。使用しうる代表的な例と
しては、必要に応じて発色剤と共に下記の物質を含むも
のが挙げられる。
モノアミン類、例えばアニリン及びその誘導体、ジアミ
ン類、例えば0−フェニレンジアミン、ベンジジン等、
フェノール類、?’lJ、tハフエノール、チモール、
クレゾール、ナフトール等、ポリフェノール類、例えば
カテコール、グアヤコール、ピロガロール等、芳香族カ
ルボン酸、例えばサリチル酸、没食子酸等、ロイコ染料
、例えばロイコマラカイトグリーン、米国特許第408
9747号明細書に記載されているトリアリールイミダ
ゾール類及びトリアリールメタン類(B、E、 パブ
(B、E、 Babb )及びり、S、 ダニx 、
n、 (D、阻Danie1)らの名で1984年5月
21日にIflllBされた米国特許出願用61250
9号明細書に記載されているものを含む〕、着色した染
料、例えば2,6−ジクロロフエノールインドフェノー
ル、種々の生物学的物質、例えばエピネフリン、7ラボ
ン酸、チロシン等、及びその他、臨床化学における轟業
者に公知のもの。
ン類、例えば0−フェニレンジアミン、ベンジジン等、
フェノール類、?’lJ、tハフエノール、チモール、
クレゾール、ナフトール等、ポリフェノール類、例えば
カテコール、グアヤコール、ピロガロール等、芳香族カ
ルボン酸、例えばサリチル酸、没食子酸等、ロイコ染料
、例えばロイコマラカイトグリーン、米国特許第408
9747号明細書に記載されているトリアリールイミダ
ゾール類及びトリアリールメタン類(B、E、 パブ
(B、E、 Babb )及びり、S、 ダニx 、
n、 (D、阻Danie1)らの名で1984年5月
21日にIflllBされた米国特許出願用61250
9号明細書に記載されているものを含む〕、着色した染
料、例えば2,6−ジクロロフエノールインドフェノー
ル、種々の生物学的物質、例えばエピネフリン、7ラボ
ン酸、チロシン等、及びその他、臨床化学における轟業
者に公知のもの。
特に有用な呈色組成物は、前記のロイコ染料及び特に米
国特許明細畜に記載されたトリ了り−ルイミダゾール含
有物である。
国特許明細畜に記載されたトリ了り−ルイミダゾール含
有物である。
他の好ましい呈色組成物は、酸化可能な顕色化合物と反
応して色の変化を生じうる色形成発色剤を含むものであ
る。有用な色形成発色剤は、米国特許第4251629
号、同第4260679号及び同第4396714号各
明細嘗、公報昭58−.22200号公報、ヨーロッパ
特許出願第68556号明細書、英国特許第21078
65号明細書及び特公昭58−898号公報に記載され
ているものを含めて置換アニリン類(すなわち、トルイ
ジン類)を含むものである。代表的な酸化可能な顕色化
合物には、ベンジジン及びその同族体、p−フェニレン
ジアミン、p−アミノフェノール、アミノアンチピリン
、例えば4−アミノアンチピリン等が含まれる。好まし
い顕色化合物は4−アミノアンチピリンである0 更に上記4−アミノアンチピリンに代表される顕色化合
物を含む水素供与性化合物は、試薬層より上層の展開層
を含む層にその一部又は全部を含有されていることが好
ましい。それによって、不望の感度低下を阻止すること
ができる。
応して色の変化を生じうる色形成発色剤を含むものであ
る。有用な色形成発色剤は、米国特許第4251629
号、同第4260679号及び同第4396714号各
明細嘗、公報昭58−.22200号公報、ヨーロッパ
特許出願第68556号明細書、英国特許第21078
65号明細書及び特公昭58−898号公報に記載され
ているものを含めて置換アニリン類(すなわち、トルイ
ジン類)を含むものである。代表的な酸化可能な顕色化
合物には、ベンジジン及びその同族体、p−フェニレン
ジアミン、p−アミノフェノール、アミノアンチピリン
、例えば4−アミノアンチピリン等が含まれる。好まし
い顕色化合物は4−アミノアンチピリンである0 更に上記4−アミノアンチピリンに代表される顕色化合
物を含む水素供与性化合物は、試薬層より上層の展開層
を含む層にその一部又は全部を含有されていることが好
ましい。それによって、不望の感度低下を阻止すること
ができる。
本発明に組込むことが可能なオキシダーゼ酵素としては
、グルコースオキシダーゼ、ウリカーゼ、コレステロー
ルオキシダーゼ、ザルコシンオキシダーゼ、ピルビン駿
オキシダーゼ、グリセリンオキシダーゼ、グリセロリン
酸オキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、乳酸オキシダー
ゼ等が挙けられる。
、グルコースオキシダーゼ、ウリカーゼ、コレステロー
ルオキシダーゼ、ザルコシンオキシダーゼ、ピルビン駿
オキシダーゼ、グリセリンオキシダーゼ、グリセロリン
酸オキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、乳酸オキシダー
ゼ等が挙けられる。
更に、アナライトとして、コレステロールのように疎水
性の化合物であって試薬層に代表される親水性ポリマー
マトリックス中に拡散することが困難な化合物の場合、
オキシダーゼ酵素テあるコレステロールオキシダーゼは
展開層あるいは展開層に隣接する層に含有することが好
ましいが、この場合本発明が好ましく適用される一例と
して挙げられる。
性の化合物であって試薬層に代表される親水性ポリマー
マトリックス中に拡散することが困難な化合物の場合、
オキシダーゼ酵素テあるコレステロールオキシダーゼは
展開層あるいは展開層に隣接する層に含有することが好
ましいが、この場合本発明が好ましく適用される一例と
して挙げられる。
これらオキシダーゼ酵素は、アナライトに従って選択さ
れ、また他の酵素と組合せて使用される。更に、好まし
いpH範囲及び濃度の緩衝剤と組合せて使用するのが、
当然望ましいことである。
れ、また他の酵素と組合せて使用される。更に、好まし
いpH範囲及び濃度の緩衝剤と組合せて使用するのが、
当然望ましいことである。
以下、本発明を実施例により更に具体的に説明するが、
本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例−1
下引き済み、厚さ180μmの透明なポリエチレンテレ
フタレート支持体上に、下記の組底の試薬層を塗布乾燥
した。
フタレート支持体上に、下記の組底の試薬層を塗布乾燥
した。
ゼラチン 15..0997m”
アジ化ナトリウム 第1表参照4−
アミノアンチピリン塩敵塩 α823 f /
m”1.7−シヒドロキシナフタレン α6
12F/m”ジメドン α13
797m”リン酸カリウム緩衝液(pH6,7へ6.9
) 五2271/mエアルカノールXC(商品名
) 25047m”1.2−ビス(ビニ
ルスルホニル)エタン 100 M9/ m”か
ら放る乾燥膜厚16μmの試薬層。
アジ化ナトリウム 第1表参照4−
アミノアンチピリン塩敵塩 α823 f /
m”1.7−シヒドロキシナフタレン α6
12F/m”ジメドン α13
797m”リン酸カリウム緩衝液(pH6,7へ6.9
) 五2271/mエアルカノールXC(商品名
) 25047m”1.2−ビス(ビニ
ルスルホニル)エタン 100 M9/ m”か
ら放る乾燥膜厚16μmの試薬層。
上記試薬層上に、下記のごとく調製した塗布液を塗布し
展開層とした。
展開層とした。
キシレン300fにトリトンx−1oo(商品名、ロー
ム アンド ハース社)の13002を溶解し、更にス
チレン−グリシジルメタクリレート共重合体(重合比9
:1)24.5Fを溶解した。J!Kかくはん中に、コ
レステロールオキシダーゼ、コレステロールエステラー
ゼ及びベルオキクダーゼ含有ウシ血清アルブミン2.4
f(ウシ血清アルブミン1tに対して、コレステロール
オキシダーゼ、コレステロールエステラーゼを共に10
00IU含M1及びペルオキシダーゼを4500IU含
有)全添加し、かくはんを行った。
ム アンド ハース社)の13002を溶解し、更にス
チレン−グリシジルメタクリレート共重合体(重合比9
:1)24.5Fを溶解した。J!Kかくはん中に、コ
レステロールオキシダーゼ、コレステロールエステラー
ゼ及びベルオキクダーゼ含有ウシ血清アルブミン2.4
f(ウシ血清アルブミン1tに対して、コレステロール
オキシダーゼ、コレステロールエステラーゼを共に10
00IU含M1及びペルオキシダーゼを4500IU含
有)全添加し、かくはんを行った。
P紙粉末(300メツシュ以上) 1o ty
y7.、xトリトンX −1001too t/m’
ペルオキシダーゼ 15500117
m”コレステロールオキシダーゼ 30000
7m”コレステロールエステラーゼ 5000
U/ m”牛血清アルブミン I
OOf /m’から成る乾燥膜厚300μmの展開層
@更に、比較分析素子+11として前記試薬層の組成に
、ペルオキシダーゼを1550007m”になるように
添加し、かつ展開層中のペルオキシダーゼを除き、かつ
、展開層にカタラーゼ活性阻害剤溶液を第1表に示す量
になるようにスプレーを行った。
y7.、xトリトンX −1001too t/m’
ペルオキシダーゼ 15500117
m”コレステロールオキシダーゼ 30000
7m”コレステロールエステラーゼ 5000
U/ m”牛血清アルブミン I
OOf /m’から成る乾燥膜厚300μmの展開層
@更に、比較分析素子+11として前記試薬層の組成に
、ペルオキシダーゼを1550007m”になるように
添加し、かつ展開層中のペルオキシダーゼを除き、かつ
、展開層にカタラーゼ活性阻害剤溶液を第1表に示す量
になるようにスプレーを行った。
上記本発明の分析素子+11、+21.比較分析素子(
1)に総コレステロール量が180.300゜450
”97 dlの血清を用い、10tdt−点着し、37
℃7分間インキュベーションを行った後、546nmの
フィルターを用い、反射ls度を測定した。反射濃度の
同時再現性の測定結果を第2表に示す。更にヒト全血か
ら赤血球を分離し、超音波処理を行って溶血させ、赤血
球膜を除去してヘモグロビン溶液とし、ヘモグロビン量
が0.50.100,200.300.500q7dt
になるように添加を行った。ただし、この時の総コレス
テロール量は180■7eLtになるようにした。同様
に点着、インキュベーションの後、546nmで反射濃
度を測定した。結果を第3表に示す。
1)に総コレステロール量が180.300゜450
”97 dlの血清を用い、10tdt−点着し、37
℃7分間インキュベーションを行った後、546nmの
フィルターを用い、反射ls度を測定した。反射濃度の
同時再現性の測定結果を第2表に示す。更にヒト全血か
ら赤血球を分離し、超音波処理を行って溶血させ、赤血
球膜を除去してヘモグロビン溶液とし、ヘモグロビン量
が0.50.100,200.300.500q7dt
になるように添加を行った。ただし、この時の総コレス
テロール量は180■7eLtになるようにした。同様
に点着、インキュベーションの後、546nmで反射濃
度を測定した。結果を第3表に示す。
第 1 表
第 2 表
(各n=10)
第 5 表
以上の結果より、本発明の分析素子は、十分な感度、及
び良好な同時再現aを有している。
び良好な同時再現aを有している。
更に赤血球の溶血に対して、どのレベルにおいても、溶
血がない血清に対して、反射濃度の変動が認められない
。
血がない血清に対して、反射濃度の変動が認められない
。
これに対して、比較分析素子は、コレステロール高値で
、反射濃度の低下が著るしく十分な感度があるとはいい
難い。また、溶血の影響も十分に排除しているとは言い
難いことは明らかである。
、反射濃度の低下が著るしく十分な感度があるとはいい
難い。また、溶血の影響も十分に排除しているとは言い
難いことは明らかである。
実施例−2
実施例−1と同様に下塗り済み、厚さ180Am のポ
リエチレンテレフタレート支持体上に前記組成で試薬層
、展開層を積層した。但し、アジ化ナトリクムは試薬層
にα64f/m”で官有させ、更に試薬層中の4−アミ
ノアンチピリン・塩酸塩は第4表に示し良量で各層に含
有させた。更に試薬層と展開層の間に第2の試薬層を積
層した。第2の試薬Mは、バインダーとしてルビスコー
ルMA−28(商品名、BASFより購入、N−ビニル
ピロリドンと酢酸ビニルの2二Bの共重合体)1.5t
/m”及び4−アミノアンチビリンを含有させた。同様
に童は第4表に示した。
リエチレンテレフタレート支持体上に前記組成で試薬層
、展開層を積層した。但し、アジ化ナトリクムは試薬層
にα64f/m”で官有させ、更に試薬層中の4−アミ
ノアンチピリン・塩酸塩は第4表に示し良量で各層に含
有させた。更に試薬層と展開層の間に第2の試薬層を積
層した。第2の試薬Mは、バインダーとしてルビスコー
ルMA−28(商品名、BASFより購入、N−ビニル
ピロリドンと酢酸ビニルの2二Bの共重合体)1.5t
/m”及び4−アミノアンチビリンを含有させた。同様
に童は第4表に示した。
第 4 表
上記本発明の分析素子(3)〜(7)に実施例−1と同
様に総コレステロール量が180.300.450岬7
dtの血清を用い、10μtを点着し、37℃7分間、
インキュベーションを行った後、546nmのフィルタ
ーを用いて、反射111度を測定した。反射濃度の同時
再現性を第5表に示し九。次いで実施例−1と同様にヒ
ト全血から赤血球を分離し、超音波処理を行い溶血させ
、赤血球膜を除去しヘモグロビン溶液とし、総コレステ
ロールtが180岬/dtでかつヘモグロビン量が0,
50,100.200.500、s o o vxt7
dtになるように調製した。この検体を用い、同様に1
0μを点着、7分間57℃インキュベーションの後、5
46nmで反!N濃度t−測定し穴。結果を第6衣に示
した。
様に総コレステロール量が180.300.450岬7
dtの血清を用い、10μtを点着し、37℃7分間、
インキュベーションを行った後、546nmのフィルタ
ーを用いて、反射111度を測定した。反射濃度の同時
再現性を第5表に示し九。次いで実施例−1と同様にヒ
ト全血から赤血球を分離し、超音波処理を行い溶血させ
、赤血球膜を除去しヘモグロビン溶液とし、総コレステ
ロールtが180岬/dtでかつヘモグロビン量が0,
50,100.200.500、s o o vxt7
dtになるように調製した。この検体を用い、同様に1
0μを点着、7分間57℃インキュベーションの後、5
46nmで反!N濃度t−測定し穴。結果を第6衣に示
した。
第5表
(谷n=10)
第 6 表
以上の結果より、本発明の分析素子(3)〜(41Fi
良好な感度、同時再現性を有するのみならず、実施例−
1で示した本発明の分析素子(2)に比しても良好な感
度を示していることが明らかでらる0 更に、溶血による血中のカタラーゼの影響も認められな
いことが、第6表から明らかである。
良好な感度、同時再現性を有するのみならず、実施例−
1で示した本発明の分析素子(2)に比しても良好な感
度を示していることが明らかでらる0 更に、溶血による血中のカタラーゼの影響も認められな
いことが、第6表から明らかである。
実施例−3
下塗り済み、厚さ180μmの透F3Aなポリエチレン
テレフタレート支持体上に、下記組成の試薬層を塗布し
た。
テレフタレート支持体上に、下記組成の試薬層を塗布し
た。
ゼラチン 109/m”ウリカ
ーゼ(酵母由来)250U/m”フタル酸ジプチル
&7f/m”ホウ酸塩緩衝剤(pH
a5 ) 7.5 t/rn”アジ化
ナトリウム α12697m”か
ら成る乾燥膜厚約15μmの試薬層 更に、上記試薬層上に、下記組成の展開層を塗布した。
ーゼ(酵母由来)250U/m”フタル酸ジプチル
&7f/m”ホウ酸塩緩衝剤(pH
a5 ) 7.5 t/rn”アジ化
ナトリウム α12697m”か
ら成る乾燥膜厚約15μmの試薬層 更に、上記試薬層上に、下記組成の展開層を塗布した。
粉末2紙(300メツシュ以上) 105
t/m”トリ)7X−1001(1297m” ペルオキシダーゼ(西洋ワサビ由来) 7
000U/m”アスコルピン酸オキシダーゼ(キュウリ
由来) 10000U/m’から放る乾燥膜厚約30
0μmの展開層上記の尿酸分析素子を、本発明の分析素
子(8)とした。
t/m”トリ)7X−1001(1297m” ペルオキシダーゼ(西洋ワサビ由来) 7
000U/m”アスコルピン酸オキシダーゼ(キュウリ
由来) 10000U/m’から放る乾燥膜厚約30
0μmの展開層上記の尿酸分析素子を、本発明の分析素
子(8)とした。
不発明の分析素子(8)に、尿酸濃度が4・5岬/az
。
。
9、51q/d!、 、 1己5η/dtのヒト血清
を、10μを点着し、37℃7分間インキュベーション
を行った後、546nmのフィルターを用い反射濃度を
測定した。更に、尿酸濃度9.5 Wli/(1tのヒ
ト血清に、カタラーゼ(シグマ社友)が、O8,U/m
/、1000 B、、U/ゴ、2500 S、U/鴫5
000 B、07m、10000 S、U/−になるよ
うに添加した血清を用い同様に測定を行つ九〇結果を第
7表及び第8表に示す。
を、10μを点着し、37℃7分間インキュベーション
を行った後、546nmのフィルターを用い反射濃度を
測定した。更に、尿酸濃度9.5 Wli/(1tのヒ
ト血清に、カタラーゼ(シグマ社友)が、O8,U/m
/、1000 B、、U/ゴ、2500 S、U/鴫5
000 B、07m、10000 S、U/−になるよ
うに添加した血清を用い同様に測定を行つ九〇結果を第
7表及び第8表に示す。
第 7 表
第 8 表
以上のように本発明の分析素子は尿酸分析においても良
好な感度を有し、血中カタラーゼの影響を受けないこと
が明らかである。
好な感度を有し、血中カタラーゼの影響を受けないこと
が明らかである。
実施例−4
実施例−1で示した本発明の分析素子の試薬層のアジ化
ナトリウムを、下記第9表に示したカタラーゼ活性阻害
剤に代えた以外は同一の分析素子を作成した。
ナトリウムを、下記第9表に示したカタラーゼ活性阻害
剤に代えた以外は同一の分析素子を作成した。
これらコレステロール分析素子を、本発明の分析素子(
9)、(ト)とした。
9)、(ト)とした。
第 9 表
上記本発明の分析素子(9)、αQに、実施例−1と同
様にして総コレステロール量が180.300、45
oHI!/azの血清を用い、10μtを点着し、37
℃7分間インキュベーションを行った後、546nmの
フィルターを用い反射濃度?:測足した。結果を第10
表に示す。
様にして総コレステロール量が180.300、45
oHI!/azの血清を用い、10μtを点着し、37
℃7分間インキュベーションを行った後、546nmの
フィルターを用い反射濃度?:測足した。結果を第10
表に示す。
第10茨
更に、同様にヘモグロビン量が、0.50.100.2
00,300.snowq、”azになるように添加し
た、総コレステロール量が18011v/dtの血清を
用い、同様に10μを点着の後、37℃7分間インキュ
ベーションし、その後546nmで反射濃度を測定した
。結果を第11表に示す。
00,300.snowq、”azになるように添加し
た、総コレステロール量が18011v/dtの血清を
用い、同様に10μを点着の後、37℃7分間インキュ
ベーションし、その後546nmで反射濃度を測定した
。結果を第11表に示す。
第11表
以上の結果より、カタラーゼ活性阻害剤を、フッ化ナト
リウム又はアミノトリアゾールに代えた場合でも本発明
の分析素子は溶血の影響を十分に排除していることが明
らかである。
リウム又はアミノトリアゾールに代えた場合でも本発明
の分析素子は溶血の影響を十分に排除していることが明
らかである。
以上説明したように、本発明の分析素子によれば、溶血
の影響が排除されると共に、感度低下ひいては同時再現
性の劣化を回避することができるという顕著な効果が奏
せられる。
の影響が排除されると共に、感度低下ひいては同時再現
性の劣化を回避することができるという顕著な効果が奏
せられる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、液体不浸透性でかつ光透過性支持体上に、過酸化水
素の作用を受けて検知可能な物質を生成する反応性組成
物を含む試薬層、及び該試薬層の上方に多孔性展開層を
有する分析素子において、該試薬層がカタラーゼ活性阻
害剤を含有し、過酸化水素を検知可能な呈色物質に変換
させる物質が、該試薬層よりも、より該展開層に近い側
の層及び/又は該展開層に含有されていることを特徴と
する分析素子。 2、該過酸化水素を検知可能な呈色物質に変換させる物
質が、ペルオキシダーゼ、合成ペルオキシダーゼ、ヘミ
ン、メトヘモグロビン、オキシヘモグロビン、ヘモグロ
ビン、ヘモクロモーゲン、アルカリヘマチン、ヘミン誘
導体、スルホシアン酸鉄、タンニン酸鉄、フェロシアン
化鉄及びクロム酸塩よりなる群から選択した少なくとも
1種の物質である特許請求の範囲第1項記載の分析素子
。 3、該カタラーゼ活性阻害剤が、シアン化合物、アジド
化合物、フッ素化合物、ギ酸及びその塩、酢酸及びその
塩、アミノトリアゾール類、アスコルピン酸、2価銅イ
オン、セミカルバジド、ピラゾール、ジエチルジチオカ
ルバミン酸塩、亜硝酸塩及びN−エチルマレイミドより
なる群から選択した少なくとも1種の物質である特許請
求の範囲第1項記載の分析素子。 4、該過酸化水素を検知可能な呈色物質に変換させる物
質がペルオキシダーゼであり、かつ該カタラーゼ活性阻
害剤が、アジド化合物、フッ素化合物、アミノトリアゾ
ール類及び酢酸塩よりなる群から選択した少なくとも1
種の物質である特許請求の範囲第1項記載の分析素子。 5、該過酸化水素の作用を受けて検知可能な物質を生成
する反応性組成物のうち水素供与体は、該試薬層及び/
又は該試薬層より上方の層に含有されている特許請求の
範囲第1項〜第4項のいずれか1項に記載の分析素子。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP19199586A JPS6348454A (ja) | 1986-08-19 | 1986-08-19 | 多層分析素子 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP19199586A JPS6348454A (ja) | 1986-08-19 | 1986-08-19 | 多層分析素子 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6348454A true JPS6348454A (ja) | 1988-03-01 |
Family
ID=16283862
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP19199586A Pending JPS6348454A (ja) | 1986-08-19 | 1986-08-19 | 多層分析素子 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6348454A (ja) |
-
1986
- 1986-08-19 JP JP19199586A patent/JPS6348454A/ja active Pending
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