JPS6341410A - 植物代謝物に対して走化性反応を示す微生物による植物の処理法 - Google Patents

植物代謝物に対して走化性反応を示す微生物による植物の処理法

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JPS6341410A
JPS6341410A JP62193858A JP19385887A JPS6341410A JP S6341410 A JPS6341410 A JP S6341410A JP 62193858 A JP62193858 A JP 62193858A JP 19385887 A JP19385887 A JP 19385887A JP S6341410 A JPS6341410 A JP S6341410A
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plasmid
microorganism
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JP62193858A
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チヤールス・エツチ．シヨウー
マーチン・デイ．ワトソン
アリソン・エム．アシユビイ
アンドリユー・ジエイ．エム．リチヤーズ
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Imperial Chemical Industries Ltd
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は植物の処理法、特に・たｖしそ葺に限定さｎる
ものではないが・植物に有害生物殺滅〆活性物質（ｐｅ
ｓｔｉｃｉｄｅｓ　）、以下農薬又は農薬活性物質とい
う、之とえば殺菌剤及び殺虫剤、を施用することによっ
て該植物を昆虫類及び菌類等の攻撃から保ｄする方法に
関するものである。
植物に農薬を施すための慣用的な方法はいずれも農薬を
所望の場所に正確に施用することが実行困難であり、し
比がって農薬は通常たとえば噴霧によって広域伝播的か
つでたらめ的な様式で施用されてきたので、その結果と
して多くの場合、農薬を植物の所望の場所に正確に施用
し得るか又は個々の植物が有害生物による攻＊を受ける
場合にのみ発射され得ると仮定した場合に必要であるよ
りも多量の農薬を植物の周囲に施さなければならないと
いう不都合が多、つた。
問題点を解決する之めの手段１作用及び効果本発明はあ
る種の微生物が植物代謝物 （ｒｎｅｔａｂｏｌｉｔｅｇ　）に対して走化性又は化
学走性反応すなわち応答（ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ　ｒ
ｅｓｐｏｎａｅ　）　　を示すこと及び該微生物が植物
の所望の部位において又はその近くにおいて処理物ＪＪ
Ｘを放出又は産生ずるのを仲介する（　ｍｅｄｉａｔｅ
　）ように修正され得ることの知見に基づくものである
。本発明に従う処理物質の産生は、か＼る処理物質の産
生が一般に所要の場合にのみかつ所望の部位においての
み達成されるので・従来技術の方法の不都合？回避し得
るものである。本発明の方法は、もつとも総括的にいえ
ば、か＼る微生物を被処理植物に又はその付近に施すこ
とからなる。
したがって、第一の本発明は、植物に又は植物の周囲環
境に植物代謝物に対して走化性反応を示し得る微生物を
施し、そこで該微生物を走化性の結果として植物に向っ
て移動させ、その結果植物上に又はその隣接部位に農薬
活性物質を供与又は形成させることからなる植物に農薬
活性物質を供与する方法を提供するものである。本明細
書において、用語“代謝物”は通常の代謝産物のみなら
ず・細胞壊死・病気又は損傷の結果としての植物組織の
破壊の間に形成される産生物をも包含する意味で使用す
るものとする。
原因による損傷又は昆虫又は菌類の攻撃に起因する損傷
に応答して植物によって放出される代謝物であることが
でき、その場合該微生物は損傷を受は念植物に誘引され
る傾向があり、かくして植物に近接して、特にその損傷
帯域に、所望の農薬物質の供与又は形成が達成される。
微生物の存在は種々の方法で農薬物質の供与又は形成を
も九らし得る。次とえば、本発明の好ましい一実施態様
によれば、農薬物質は一種又はそれ以上の染色体遺伝子
又は非染色体遺伝子の、好ましくは組換え体ＤＮＡ技術
によって組立てられ九かつ本発明の方法に使用される微
生物？形質転換するのに使用される遺伝子の形質発現（
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　）　　の生成物（産物）である
。
農薬物質を形成するように形質発現される一種又はそれ
以上の遺伝子は微生物が走化性反応を示す植物代謝物と
同一の代謝物によって好都合に誘導され得る。
したがって、微生物が走化性反応を示す植物代謝物は農
薬物質を形成するように形質発現さｎる一ａｔ又はそれ
以上の遺伝子の誘導物質としても作用し得るものであり
、この場合には、微生物が走化性の結果として植物に誘
引されるのみならず、前述の植物代謝物（閣々の植物に
より合致した比較的高濃度で存在するものと考えられる
）の存在もまた農薬物質の形成を誘導するであろう。
上述した方法の一施に使用される形質転換された微生物
はそれ自体新規である。したがって本発明はさらに・植
物代謝物に対して走化性反応を示し得るかつ農薬として
活性なポリペプチドについて暗号付けする（　ｃｏｄｉ
ｎｇ　ｆｏｒ）誘導性の染色体遺伝子又は非染色体遺伝
子を含有する形質転換され之微生物を提供するものであ
る。
本発明はさらに、か＼る微生物の形成のための形質転換
に有用なプラスミド、すなわち複製部位・植物代謝物に
よって活性化されるように修正され念遺伝子誘導配列及
び該遺伝子鋳導配列の制御下で農薬として活性なポリ４
デチドを形成する遺伝子からなるプラスミド；及びか＼
るプラスミド中に見出される新規ＤＮＡ塩基配列を提供
する。
走化性反応を示し得る微生物の使用に必ずしも関連する
ものではない本発明の別の様式によれば、ａ薬物質は一
種又はそれ以上の染色体遺伝子又は非染色体遺伝子の形
質発現によって直接又は間接的に該農薬物質を形成し得
る微生物を所定の環境中Ｖこ導入しセして該一種又はそ
れ以上の遺伝子の誘導物質全被処理植物又はその近接域
に施すことによって植物に供与され得る。
本発明は特に植物の根の病気及び害虫、之とえば線虫、
穀類（ｃｏｒｎ　）　　の根の害虫（ｒｏｏｔ　ｗｏｒ
ｍ）等の防除用に適用し得るものである。
本発明の方法の実施に際し、微生物は土壌中に潜伏し次
状態で保有することができそして植物の損傷又は有害生
物による攻撃に応答して活性化されて農薬物質を産生ず
るようになるものであり得る。別法によれば、微生物は
前述したごとき誘導物質を施すことによって活性化する
ことができる・本発明に従って供与又は形成され得る農
薬物質の例は菌類の細胞壁を消化（ｄｉｇｅｓｔ　）　
　ｌ、得るキチナーゼ類、グルカナーゼ類及びマンナナ
ーゼ類又は菌類及び昆虫類の他の成分、たとえばセラシ
ア　Ｗ　ルセ７センス（５ｅｒｒａｔｉａ　ｍａｒｃｅ
ｓｃｅｎｓ　）のギチナーゼ、のような農薬として活性
である酵素類を包含する。
本発明に従って供与又は形成され得る農薬としルターエ
ンＶト中シン（δ−内毒素）を包含する殺虫性蛋白質で
ある。
本発明に従って供与され又は形成さ些得る農薬としての
活性をもつ物質のさらに別の一群はトリプシン阻害剤及
びα−アミラーゼ阻害剤のような酵素阻害剤である。
本発明に従って供与され又は形成され得る農薬物質のさ
らに別の一群は昆虫の神経分泌ペプチド（ｎｅｕｒｏｐ
ｅｐｔｉｄｅｍ　）　又は−ｅテｆ　Ｙ　ｔ、　ＡＩ　
４　ｙ’ＪＡ又ｔｒｉか＼るペプチド類の阻害活性保有
類似物質である。
本発明に従って供与又は形成され得る農薬物質のさらに
別の一群は所与の環境からｍ類又は昆虫類の発育に必要
な必須元素又は必須発育因子を除去する物質である。か
＼る物質の例は鉄担持物質ｆｌｒし鉄輸送物質（シブ０
フ、ｔア、　　５ｉｄｅｒｏｐｈｏｒｅａ）であり、か
＼る物質は植物中で産生され又は植物に近接する環境に
供与される際、病原体の発育（増殖）に必要な金属イオ
ンをキレート化することによって病原体の発育を阻止し
得る作用を果すものである・この様式で作用する物質の
別の例は植物の生育環境中におけるピオチンの欠乏を惹
起し、し九がってビオチン依存型病原菌の発育全阻害す
るアビジン及びストレプトアビジンを包含する。
本発明に従って微生物を植物に向って移動させ、その結
果農薬物質を供与又は形成させる友めの別の機構は微生
物が植物にフィトアレ中シン又は他の既知の殺虫性植物
代謝物を産生せしめる誘発因子として作用する場合であ
る。
あるいはまた、微生物の種属は植物の損傷の治癒を促進
し得る物質、友とえば植物生長調整剤又はセルロース、
を産生せしめ得るものであることができ、その場合植物
の損傷部位に微生物によって産生されたセルロースはそ
の損傷部位をふさぐように作用し得る。し念がって１本
発明はさらに、植物に又は植物の周囲環境に植物代謝物
に対して走化性反応を示し得るかつ植物の損傷の治癒を
促進し得る物質を産生じ得る微生物を施し、そこで該微
生物を走化性の結果として植物に向って移動させ、その
結果、植物の損傷部位に前記植物の損傷の治癒を促進し
得る物質を供与し又は形成させることからなる植物の損
傷の治（復ヲ促進する方法を提供する。
本発明の方法に従って使用される微生物が走化性反応を
示し得る植物代謝物の例はつざのものを包含する： アセトシリンゴン α−ヒドロキシ了セトシリンゴン ３．４−ジヒド０千シ安息香ｒＩｔ（プロトカテク酸）
カテコール パニリルアルコーん ３．４−ジヒドロ中ジベンズアルデヒドフェルラ酸 トラウマチン酸 バニリン酸 ギペレん酸 インドール酢酸 バニリン ｐ−ヒドロ中シ安息香酸 β−レゾルシン酸 ピロガロール（照性没食子酸） 没食子酸 ルテオリン アビゲニン 糖　　　類 本発明の方法は何等特定の微生物の使用に限定されるも
のではないが、アグロバクテリウム属。
の菌は土壌環境中に天然に存在するものであり・したが
って土壌中に生存するに適するもので）する。
本発明者らは特にオクトピンＴｉ　　プラスミドｐＴｉ
Ｂ６ｓ３金保有（ｈａｒｂｏｕｒ　）　ｆ　ｂ菌株Ｃ５
ｆ３　Ｃ１（ｐＴｉＢ６ｓ３）はフェノール性の植物損
傷壽出液・アセトシリンゴンに対して明確な走化性金示
すことを認め九〇 アゾロバクテリ９ム　ツメファシェンスの菌株類が双葉
子植物に腫瘍を誘発させる能力はＴ　−ＤＮＡと命名さ
れたＤＮＡの小断片（ｓｅｇｍｅｎｔ　）の転移によっ
てもたらされるものであることは既に報告されている。
その作用の過程は腫瘍誘発性（Ｔｉ）プラスミド上のＴ
−ＤＮＡの左側（すなわちその上流側又は５′側）に位
置する毒性（ピ九しンス）域又はｗｉｔ領域と呼ばれる
４０＝？ロペース（ｋｂ）竜りターに関係する。植物の
損傷はｖｉｒ遺伝子銹導・植物ｉ抱へのＴ−ＤＮＡ転移
及び究極的ｆｋｔａ瘍の形成を包含する複線な一連の作
用を提起する。
損ｆｊｈｔ−受けた植物組織は芳香族及び脂肪族の両系
ａ（Ｄ化合物の混合物（ｃｏｎｇｌｏｍｅｒａｔｅ　）
　　を滲出する。放出される芳香族化合物の例としては
アセトシリノコ９ン（４−７セチルー２．６−ジメト牛
ジフェノール、略号ＡＳ）、　　α−ヒドロキシアセト
シリンコ９ン［ａ−（Ｚ−ヒドロ卆ジアセチル）−２，
６−ジットΦジフェノール〕及ヒパニリルアルコールを
慶・げることができ、これらはいずれもリグニンの生合
成の前厄体又は分解生成物として存在するものである。
Ａｓ　　は分子［１９６，化学組収Ｃ１０Ｈ１２０４を
もつ構造式：ハフエノール系化合物であり、パニリんア
ルコールは分子艙１５４．化学、′ｆ！ｉ成Ｃ８Ｈ，。
０．をもつＨ’を造式： のフェノール系化合物である。脂肪族化合物の例は傷ホ
ルモン類、たとえばトラウマチンａ（トランス−２−ド
デセンジ力ルＩン酸）及びインドール酸１ｌｌ（ＩＡＡ
）を包含する。
本発明に従って使用されるアグロパクテリ９ムツメファ
シエンス穏の菌株は無毒性又は弱毒性（１マ１ｒｕｌｅ
ｎｔ　）であるＴｉ　　プラスミドの変異体を保有する
ことが好ましい。すなわち使用される菌株は走化性反応
を示すが被処理植物中にいわゆるクラウンが−ル（植物
層温）症状を誘発し得ないものであることが好ましい、
か＼るプラスミドは１デイスーアームド（ｄｉａ　−ａ
ｒｍｅｄ　）　”、’−ｒ　ｚ　ｂち“安全化され友°
テラスミドとも呼ばれて論る。
篤くべきことに、Ｔｉ　　デラスミドヲ有するアグロバ
クテリウム　ツメファシェンス種の菌株は＋Ｑ　　モル
程度の低い植物代謝物誘引物質濃度で走化性反応を示す
ことが認められた。この１度はｖｉｒ遺伝子を誘導する
ことが認めらｎているか＼る代謝物の濃度よりも２桁低
い水準である。
の遺伝子産物について暗号付けするＤＮＡ分節（セグメ
ント）を導入することによって形成され九組換えプラス
ミドを保有する微生物の菌株を植物に又は植物に近接す
る環境に施さｎる選定された微生物として使用すること
を包含するものである。か＼るＤＮＡ分節、すなわち部
分（セグメント）は一種又はそれ以上のｖｉｒ遺伝子の
鯛節的制御下にあることが好ましく、そ九によって遺伝
子産物の形質発現をｖｉｒ遺伝子の活性化Ｖこ依存せ（
７め得る。Ｔｉ　　プラスミドそれ自体は安全化（ｄｉ
ｇａｒｍ）　　されていることが好ましい。
か＼る組換えプラスミドを組立てることによって、本発
明に従って使用するに際して比較的低濃度の植物代謝物
の存在において走化性効果を示しかつ代謝物を産生じつ
つある植物に向って移動し・かくしてより高濃度の代謝
物に遭遇し、それによってｖｉｒ遺伝子の誘導をも几ら
す結果として遺伝子産物の形質発現を生起せしめるよう
な微生物が産生され得る。前述したプラスミドを有する
選定された微生物はアグロバクテリウム　ツメファシェ
ンスそれ自体又はＴｉ　　プラスミドによって形質転換
され得る別の細菌ｌ属〔好ましくはダラム陰あることが
できる。
自然条件下でＴｔ　　プラスミドの複製を支持し得る細
菌ｍ属については、本発明に従う操作は植物代謝物に対
する認識部位、ｖｉｒ遺伝子及びマｉｒ遺伝子の制御下
における農薬物質の産生用の一種又はそれ以上の遺伝子
を包含する広い宿主域レプリコンを組立てることによっ
て促進され得ル。
以下本発明を図面を参照しつつさらに説明する。
第を図は広宿主域プラスミドを例示するものである。
第２図は中テナーゼについて暗号付けする遺伝子断片（
フラグメ７ト）ｔ−Ｖｔｒ遺伝子の制御下に置いて本発
明に従うＤＮＡ塩基配列を提供せしめ得る方法を説明す
るものである。
第３図は本発明に従う微生物の損傷さｎｆＣ植物への移
動及びその結果として生起する損儲植物近くのより高ａ
度の植物代謝物の存在ドでの農薬活性物質について暗号
付けする遺伝子の誘導を示すものである。
８４図及び５Ｘ５図はアセトシリンプン及ヒパニリルア
ルコールへの走化性が十Ｔｔプラスミドと−Ｔ４プラス
ミドとでいかに相違するかを示すグラフである。
第６図はｖｉｒａ力セントの製造工程を例示するもので
あり、第７図は中チナーゼカセットの製造工程を例示す
るものである。
第８図はｖｉｒＢ　　カセット及び中チナーゼカセット
からの本発明に従うプラスミドの形成を示すものである
。
第９図は本発明に従ヴ微生物に有用な第二のプラスミド
の形成を示すものである。
以下の実験結果から認め得るごとく、アグロ・９によっ
て決定される因子であるアセトシリンコ°ンに対して特
異的な走化性反応を示すことが実証され念。２’ｘし、
走化性それ自体はＴｉ　　プラスミドによって暗号付け
されるものではない。
実験の明細 ンス　Ｃ５８Ｃ’　（ｐＴｉＢ６ｓ　３　）　　［Ｈ，
Ｄｅ　Ｇｒａｖｅ。
Ｈ−Ｄｅｃｒａｅｍｅｒ、　Ｊ、　５ｅｕｒｉｎｃｌｃ
、　Ｍ、　Ｖａｎ　Ｍｏｎｔａｇｕ及びＪ、　５ｃｈｅ
ｌｌ　：　Ｐｌａｓｍｉｄ、　６．３２５　２４１３　
（１９ｇｌ）］；　Ｃ５８Ｃ（、ｐＤＶＢ　１００３　
Δ３１）　［Ｃ，Ｈ，Ｓｈａｗ、　Ｍ、Ｄ。
Ｗａｔａｏｎ、　Ｇ−Ｈ，Ｃａｒｔｅｒ及びＣ−Ｈ−Ｓ
ｈａｗ　；　Ｎｕｃｌ　。
Ａｃｆｄｓ　Ｒｅｓ’、、　１２．６０３１−６０４１
　（＋９８ａ）　）　；ＣＳ８　ＣＣＮ、　Ｖａｎ　Ｌ
ａｒｅｂｅｋｌ　Ｇ、　Ｅｎｇｌｅｒ、　Ｍ。
Ｈｏ１ｓｔｅｒｓ、　Ｓ、　Ｖａｎ　ｄｅｎ　Ｅｌｓａ
ａｌ（ｅｒ、　Ｉ＋Ｚａｅｎｅｎ。
Ｒ，Ａ、　５ｃｈＨｐｅｒｏｏｒｔ及びＪ、　５ｃｈｅ
ｌｌ　：　Ｎａｔｕｒｅ。
２５２、１６’？　−１７０（１９’７Ａ）　］及びエ
シェリヒア　コリ　（Ｅａｅｈｅｒｉｃｈｉａ　　ｃｏ
ｌｉ　　）　　ＭＣｌ０２２　　ＣＭ、　　Ｊ。
Ｃａａａｄａｂｈａｎ及びＳ、　Ｎ、　Ｃｏｈｅｎ　：
　Ｊ、　Ｍｏ１ｅｃ、　Ｂｉｏｌ、。
＋３８．１’ノ’？　−２０１（１９８０）　）であっ
た、菌株ｃ５Ｂ’壷まＴｌ　ｆラスミドを保有しない菌
株として選定しそしてエシェリヒア　コリの菌株はグリ
竜ロール塩類の培地ＶＣＭ合する本のであり（Ｊ、　Ａ
ｄｌｅｒ　：Ｊ、　Ｇｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｔｏｌ、、
　７４．７７−９１１９７３）参照）。
対照菌株として使用し友。
走化性培地（Ｊ、Ａｄｌｅｒ　　の前記文献参照）は使
用前にオートクレーブ処理した。アセトシリンゴン及ヒ
パニリルアルコール（いｆ　ｔＬ４．、　Ａｌｄｒｉｃ
ｈ　社製）は１過滅菌した。
２走化性試験 １００−フラスコ中のし一ブイヨンｌ０ｄｃｆｌｃ−晩
細菌培養した培養物から３　ｏ　ｏ　ａｔ　全接種して
５　？　Ｏｎｍで約０・０５の吸光度を得た。これらの
フラスコｔ−細菌細胞が対数増殖期、すなわち約１０　
−　の培養密度（１−のキュベツト中で５９０ｎｍｔ７
３吸光度（Ａ３９ｏ）　０．２〜０．３）に達するまで
振■培養した・ 得らｆｌ　ｆｃ培養物？１５°Ｃ−３６００９テＩ　Ｏ
分ＩＺ遠心分離しそしてベレットを走ｆヒ注媒質５−中
で洗滌しな。この洗滌処理と２回反りし念後、最終イレ
ツ″を１０−までの走化性媒質中に再懸濁させて約１０
−　の細菌濃度を得た。
Ｕ型ｔ７　（融点測定用毛管を曲げ加工しそし゛Ｃ両楡
を密封して得之）を顕Ｃ＆鏡用スライド及びカバースリ
ソデの間に置くことによって形成さｎた空所に細菌懸濁
物０．３−をピイットで移すことによって各ゾール中の
細菌濃度が１０　−　であるプールを形成した。多数の
分析２行なうためには、これらの顕１ａ鏡用スライドの
代りにノｊラスｔｙｉヲ使用した。
走化性媒質中の供試鉄質のｆｆ３液（１０−３〜！０−
１２Ｍ）（３，ｄ）を５μ乙の毛管中に吸上げさせそし
てその−４を真空グリースで密封し之。この分析の間中
、毛管は個子全用いて取扱い、セして（リンス処理する
ことなしに）その開口端が先端になるようにａＴＪ４懸
濁物を含むプール中に挿入した。
分析は霊湛で６０分間継続して行なつ之。
培養後１毛管をとり出しそしてその外面を洗滌びんから
の滅Ｓ蒸留水の細流で洗滌した。密封端を破壊して開放
しそして内容物ｔ−１ｍＭの食塩水中に稀釈化した　＋
　ｏ−５まで段階稀釈を行ないそして適当に選定し念各
稀釈液のＱ、ｌ−をＬ−寒天プレート上に拡展させた。
これらの寒天プレートを２８°Ｃで４８時間（又はエシ
ェリヒア　コリについては３７°Ｃで一晩）培養しセし
てコロニー数を数えた・分析は２回反復して行ないその
平均値を記録した。
結果 ｌ　　アセトシリンゴンに対する走化性アセトシリンが
ン（以下Ａｓ　　という）ヲエシエＣ’　（、１）ＤＵ
Ｂ　＋００３Δ３１）及びｃ　５ｇ　ｃ’の３種の菌株
について行なった走化性試験における誘引物質（ａｔｔ
ｒａｃｔａｎｔ　）　　として試験した。走化性媒質は
１０２２はＡＳ　　に対して走化性を示さなかったが、
既に知られている試験結果に合致して１０−５ＭのＬ−
アスノＪ？ルテートに対してはきわめて運動性で）、つ
た。
第４図に示されるごとく、試験し九３種のアグロバクテ
リウム属菌株はそれらの走化性反応において著しい相違
を示した。すなわちＣ５８Ｃ’株は種々の濃度において
細菌数の変動はきわめて僅かであることを示し友。しか
しながら、ｐＴｉＢ６Ｓ３又は１）ＤＵＢ　１００３Δ
３１　　を保有する同遺伝子型菌株の場合はこれとは異
なり・　１０−７　　で最大運動性を示す明確な用量応
答を与え・これは再現性を伴うものであつ几・このＡＳ
　　８度はｖｉｒ遺伝子の最大訪導を生ずる濃度より約
１００倍も低いものであった。
エシェリヒア　コリ及びアグロバクテリウムツメファシ
ェンス　ｃｓｇｃ　Ｖｃよって示されｆｃＡＳに対する
走化性反応（応答）の欠除はこの誘引物質に対する運動
における認識経路の少なくとも一部はＴｉ　　−プラス
タＰによって決定されるものであることを示唆している
（　Ａｓｈｂｙら、＋９８７）。
ユ　　バニリルアルコーｂに対する走化性トラウマチン
酸を走化性媒質中に１０−１〜１０″″１０Ｍの濃度範
囲に稀釈し友。走化性媒質は対照として作用させた。
及びｐＴｉＢ６ｓ３　を保有するその同遺伝子型菌株は
前記と同様に試験しそして両菌株ともにパニリルアルコ
ールに対して走化性上水した。第５図に示されるごとく
、Ｉ＆大の走化性は濃度ｔｏ　　　において生起した。
シ友がって、走化性はＴｉ　　プラスミドによって決定
される因子ではなく・アセトシリンゴンに対する走化性
は特異的で多・る。
双子葉植物〔タバコ、カラｙ　コニ（ｋａｌａｎｃｈｏ
ｅ）、すなわちペンケインウ科の草木な（へし低木〕及
び単子葉植物（コムギ）の根及び苗条（５ｈｏｏｔ　）
の抽出物についてアグロバクテリウム　ツメファシェン
ス　Ｃ５８Ｃ（ｐＤＵＢ　１００３Δ３１）を用いた実
験は各場合に走化性を示した。Ｔｉ　　プラスミドの存
在はコムイの苗条の抽出物に対して低論抽出＊ａ度で増
大した走化性を与えた、 実施例 つぎに本発明に従うプラスミーの組立て（ｃｏｎ−ｓｔ
ｒｕｅｔｉｏｎ）及び本発明の方法に有用な微生物を得
るために有用なプラスミｔを実施例によって例証する。
プロモーター領域ａプラスミーｐｓＭ　Ｊ　Ｏ上の／、
３キロベース（ｋｂ）のＨｉｎｄｌｌｌ切断片上に宮切
断片−る（　５ｔａｅｈｅｌら、（／？ｒＡ））。ｘｉ
明者うｈ　ｃれをプラスミｈ＊　ｐｕｃ　ｔり中にクロ
ーニングしてプラスミｆ　ｐＤＵＢ２　ｊ　ｔ　ｏを傅
た（第を図参照）、、この方法はこのプラスミド中のプ
ローＥニーターＥＩＵｔｉＨ訳開始（Ｓｈｉｎ・−Ｄ凰
Ｌｇａｒｎｏ　）配列のすべてを残して、ｖｉｒＢＩＩ
ｆ号付は配列（ｖｉｒＢ　ｃｏｄｉｎｇ　ａａｑｕｅｎ
ｅｏｓ）のすべてを該プラスミーからと９出すことを意
図してなされたものである。この意図［ｐＤＵＢ　＋２
　ｊ　／　０をＢａｍＨＩ及びＫｐｎＩで消化し、Ｒａ
ｍ）（Ｉ部位から暗号付は配列へのプラスミＰの一方向
的分解をエキソヌクレアーゼ■によって生起させ、つｂ
でムング　ビーン　ヌクレアーゼ（Ｍｕｎｇ　Ｂｅａｎ
　Ｎｕｅｌ＊ａｍｓ）（Ｈａｎｉｋｏｆｆ　（／　ｆ　
ｒ　＆　）　：　ｆ（ｏｈ＠ｉｍａｌ及びＰｏｈｌ　ｅ
（ｚ９ｚｘ））で処理することによって行なわれる。こ
のプラスミーをついで連結反ｍ　（ｌ　ｉｇａｔｉｏｎ
）によってＲａｍＨＩ　’Ｉンカー配列を結合させて再
循環せしめる。欠失（ｄａｌｓｔｌｏｎ）の程度１ｐＤ
ＵＢλ１１０誘導体上に直接プラスミーＤＮＡ配列を導
入しくＧ１１ｒｌら、（／　９　ｒ　Ｊ　）　：　Ｃｈ
＠ｎ及びＳｅａｂｕｒｇ　＊（ｌりｒｚ）〕そ（、てこ
れらの配列をＶｉｒＢｆロモーター構造についての既知
文献記載のデータと比較することによって測定される（
Ｄａｍら、（／９１ｒｌ、）１゜残存しているすべての
残留コシンにこの方法を反復することによって除去する
ことができる。これにエキソヌクレアーゼ■が既知の一
定の速度で作用するからである。適正なｐＤＵＢ　２　
ｊ　／　０誘導体中の生じ７’？　Ｈｌｎｄ［ｌ　−Ｂ
ａｍＨＩ断片（フラグメント）に任意の遺伝子の暗号付
は配列に融合されてアゲロバクチ１ｊウム　ツメファシ
ェンス中で形質発現ざ几る際該遺伝子をｖｉｒＢの制御
下に１くようにすることのできる°カセット”を形成す
る。
ｓｅのｎｓ　）のキチナーゼ遺伝子はすでにクローニン
グによって単離された（　Ｊｏｎｓｓら、（ｌりｒｉ、
、）〕。
プラスミーｐＣＨＩＴ　／　２　ｊ　／　ｒｘｇｅｌｙ
ＲＩ−Ｈｉｎｄｌｌ断片上にキ断片−ゼ遺伝子のすべて
を有してＡる（第７図参照）。実施％ｌ　／に述べたと
同様の欠失方法（ｄ＠１ｅｔｉｏｎ　５ｔｒａｔ＠ｇｙ
）を使用することによってｐＣＨＩＴ　／コｊｌからの
キチナーゼプロモーター及び！’−（ｊ−プライム）非
暗号付は配列（Ｓ−ｏｒｉｍｏ　ｎｏｎ−ｃＯｄｉｎｇ
　５ｅｑｕ＠ｎｃｅ＠）のすべてを除去する。欠失され
たプラスミ２はＢａ　ｍＨＩリンカ−を結合させて再循
環する。欠失の程度はプラスミｐの配列を分析すること
によって測定する。４ｆな誘導体中の生じたＥｅｏＲＩ
−Ｒ＊ｍＨＩ断片は任意適当なプロモーターと作動関係
に置かれた場合に形質発現さｆ′Ｌ得るキチナーゼ０カ
セツト＠全形ｂｚする、１（１ｎｄｌｌｌ−ＢａｍＨＩ
　ｖｉｒＢカセット、ＥｃｏＲＩ−Ｂａｍ）ＩＩキチナ
ーゼカセット及びｇｃｏＲＩ−Ｈｉ　ｎｄｌｌで切断さ
れたｐ［ＪＣ／りを一緒に連結反応略せて形質発現に対
して適正に配向されたｖｉｒＢ−キチナーゼ融合体（ｆ
ｕａ−４ｏｎ）を保有−するＦ１ａ　ｏＲＩ−ｄｉ　ｎ
ｄｌｕ　Ｆｒｆ片を含むプラスミに９を得た（第ｒ図参
照）。この融合体それ自体がｖｊｒＢによって制御され
たキチナーゼの形質発現のために理想的でないことが判
明した場合には、こｎＨプラスミーの欠失り）ための配
列処理の間に得られる配列データから設定づれたＢｇｍ
ＨＩ−末端アダブタ−（ＢａｍＨＩ−ｅｎｄｅｄ　ａｄ
ａｐｔｏｒ　）オリゴヌクレオチρを合成することによ
って補正することができる。たとえばこのアダプターに
キチナーゼに対するフレーム内（ｉｎ−ｆｒａｍａ）イ
ニシエーターコＰンを含むことができ、あるいａキチナ
ーゼに対する適正なシグナルベプチ−が存在するのを保
証するために別のコにンを含み得る。該アダプターはｖ
ｉｒＢ−及びキチナーゼ遺伝子付は配列間の単一のｒ（
ａ　ｍＨＩ部位に挿入される。このｐｔｒ　Ｃ／ターｖ
ｉｒＢ　−キチナーゼについで順欠ｐＧｖ　／　／　Ｏ
Ａに遅結反応される（後記実施例！参照）。こｆＬａつ
いでアグロバクテリウム　ツメファシェンス中に導入さ
れる。
実施例μ　バチルス　スリンジエンシス　δ−エン♂ト
キシンカセット 農薬活性蛋白質のｖｉ　ｒＢ制御下における産生ａクロ
ーニングにより単離さ几た遺伝子が存在する任意の蛋白
質に適用し得る一般的方法である。こ立てにつｂて説明
する。このエンｐトキシン遺伝子ＨＩＡ、＋ｋｂ（キロ
ベース）のＰｓｔｌ制限フラグメント上に存在し得る（
ａｖａｉｌａｂｌｅ　）［Ｏｂｕｋｏｗｉｅｚ　Ｉ−）
％（／９ｒ＆＞〕。これは実施例／　ＶＣ述べた一方向
的欠失方法のために特異的に作ら几たプラスミーである
ｐＫＳ　　にクローンされる、欠失ａエンｔトキシン遺
伝子中に惹起され、すべてのプロモーＪ　−及びＪ’（
ｊ−プライム）−非暗号（ｎｏｎ−ｃｏｄ　ｉｎｇ　）
配列の除去が違反される。欠失の程度汀ＤＮＡ配列を認
知しそしてこＡ？公表されているＮ−末端アミノ酸配列
と比較することによって監視プれる（Ｗｏｎｇら、（／
りｒ３）〕。欠失プラスミｐはＢａｒｎＨＩ　ＩＩンカ
ーを結合して再循環される。得られるＢａｍＨＩ−Ｐｓ
ｔＩフラグメントはエンシトキシンカセットを形放し、
これはついで実施例３に述べたごと〈実施ｆｌ＋　／の
マｉｒＢカセットに融合せしめられる。
ゼの試験 ｐｃｉ（ＩＴ　／　２　ｔ　／は実施ｆ１１２　ｉｃお
けるごときキチナーゼ遺伝子を保有する出ｎｄｌ−Ｅｃ
　ｏＲＩフラグメントをもつプラスミ？である。このプ
ラスミｐは単一のＥｅｏＲＩ部位を有し、アグロバクテ
リウム属において複製し得ないものである。ｐＧＶ／１
０４ウム属において複製可能である広い宿主域をもつプ
ラスミＰであり・、常在性Ｔｉプラスミ？とは無関係で
ある。そｒＬＨ単一のＥａｏＲＩ部位を有する。
ｐＣＨＩＴ　／λｊｌ及びｐｃｖ　／　／　０４　ｆ−
緒にそれらの各々のＥｃｏＲＩ部位を介して連結反応さ
せてプラスミーｐＤＵＢ　２　ｊ　Ｏ／を形成せしめる
（５ｇ２図参照）、これにその正常型プロモーターから
形質発在し得る組立体（ｅｏｎｓｔｒｕｅｔ）である。
ｐＤＵＢ　２１０１上で平板培養する際通関化領域を生
じた。これはキチナーゼ遺伝子が形質発現さｎたことを
示す。
伝子はプラスミ’ｐＣＨＩＴ　！　／　０上に存在し得
る。
前記と同様の方法によってこのプラスミーをｐＧＶ／１
０６に融合させてプラスミーｐＤＵＢ　２　’ｊ　０２
を形成せしめ念。
実施例！において形す兄これたキチナーゼ産生性アグロ
バクテリウム属菌株は弱毒性である。これらの弱毒性菌
株は野生型ＴＩプラスミーの転移によ菌株からの前件（
ビルレント）機能を獲得しないように検層することが望
ま［−い。か＼る転移を阻止するために、キチナーゼ産
生性アゲロバクチ１；ラム属菌はま友安全化されｆｃ（
ｄｉｓａｒｍｅｄ）非毒件Ｔｉプラスミーを保体するこ
ともできる。この常在性プラスミｙＢ二つの機構、すな
わち不和合性（ｉｎｃｏｒｎｐｍｔｉｂｉｌｌｔｙ　、
　　Ｉｎｃと略称される）　［Ｍｏｎｔｏｙａら、（／
り７ｇ）〕及び確立阻害（ｅｓｔａｂｌｉａｈｍｅｎｔ
ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　、　ｓｉｎと略称される）（Ｈ
ｏｏｙｋａａｓら、（１９ＩＯ）〕によって別の（毒性
の）Ｔｉ−７’ラスミρの侵入を阻止する。これらの機
構の両者が−ｇＶＣ作用すればキチナーゼ産生性アグロ
ノ々クテリウム属菌が毒性化される機会に著しく減少し
得る。
前記実施例中に簡略化して示した文献の明細は以下のと
おりである。
ｌ　　Ａｓｈｈｙ　Ａ　Ｍ、Ｗａｔａｏｎ　Ｍ　Ｄ　ａ
ｎｄ　Ｓｈａｗ　ＣＨ：（／りＪ’７）　　ＦＥＭＳ　
　Ｍｉｅｒｎ、Ｌａｔｔ、　　’Ａ１．／ｒター７タコ
。
ｌ　　　　Ｃｈｅｎ、Ｅ　　Ｊ　　ａｎｄ　　Ｓａｐｂ
ｕｒｇ、Ｐ　　Ｈ：（／９１り　　ＤＮＡμ、／Ａｊ−
／７０゜ ３、　　Ｄａ８．　Ａ、　５ｔａｃｈｅｌ＋　Ｓ、　Ａ
ｌ１ｅｎｚａ、　Ｐ　Ｍｏｎｔｏｙ、ａ。
Ａ　　ａｎｄ　　Ｎｅａｔｅｒ、　　Ｅ　　：　　（／
りｒＡ）　　Ｎｕｃｌ、ＡｃｉｄｓＲａｇ　１ｇ、　／
３１ｊ−／３６μ。
ｕ、　　　　Ｇｕｏ、　　Ｌ　　ＨＹａｎｇ、　　ＲＣ
Ａ　　ａｎｄ　　Ｗｕ、　　Ｒ：　　（／りｆＪ）Ｎｕ
ｅｌ、Ａｅｉｄｓ　　Ｒａｓ、　／／、　　ｊ３２１−
！１３り。
ｊ　　　　Ｈｅｎ１ｋｏｆｆ　　Ｓ：　　（／９ｒ’Ａ
）　Ｇｏｎｏ　　２１．　　、？ｊ／−３３９゜ｉｐ、
　　　Ｈｏｈｅｉｓａｌ、Ｊ　　ａｎｄ　　Ｐｏｈｌ、
Ｆ　Ｍ　；　　（／？ｒＡ）Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓ　　
Ｒａｇ、　　／Ｉｔ、　　ｊＡＯ！＋−７、Ｈｏｏｙｋ
ａａａ、Ｐ　Ｊ　Ｊ　Ｄｕｌｋ−Ｒａｇ、ＨＤ　Ｏｏｍ
ｓ＋、Ｇａｎｄ　　５ｃｈｉｌｐｅｒｏｏｒｔ、　　Ｒ
Ａ　　：　　（／”ｌＩｒ０’＞　　Ｊ。
Ｂａｅｔｅｒｉｏｌ、／ｇｊ、／２りｊ−／３０６゜Ｊ
’、　　　Ｊｏｒ＋ｓ＋ｓ、Ｊ　Ｄ　Ｇ　Ｇｒａｄｙ、
Ｋ　Ｌ　Ｓｕａｌｏｗ、Ｔ　Ｖａｎｄ　　Ｂｅｄｂｒｏ
ｏｋ、　　Ｊ　　Ｒ：　　（／９１Ｈ，）　ＥＭＢＯＪ
、　　７゜４ｔ６７−μ７３゜ ５！　　　Ｌ＠ｅｍａｎｓ　　Ｊ、Ｄ＠ｂｌａｅｒｅ、
ＲＷｌｌｌｍｉｔｚａｒ、Ｌ　Ｄ。
Ｇｒ＠ｖｅ、Ｈ−Ｈ＠ｒｎａｌａｔｓ＊ｎａ、Ｊ　Ｐ　
Ｖａｎ　ＭｏｎｔａｇｕＭ　ａｎｄ　　５ｅｈａｌｌ　
　Ｊ：　　（／デ１１２）ＥＭＢＯＪ、／、／ｇ７−ｌ
ｊ２＋ １０＋　Ｍｏｎｔｏｙａ　Ａ　Ｌｍ　Ｍｏｏｒｅ　　Ｌ
　Ｗ、Ｇｏｒｄｏｎ　Ｍ　Ｐ　ａｎｄＮ＠ａｔａｒ　Ｂ
、Ｗ：　　（／９７１）Ｊ、ｖ　Ｂａｅｔａｒｉｏｌ　
　／３１＊。
りＯター９／！。
／ｌ　　Ｏｂｕｋｏｗｉｅｚ、Ｍ　Ｇａ　　Ｐｅｒｌａ
ｋ、Ｆ　　Ｊ　Ｋｕｓａｎｏ−Ｋｒ＠ｔｚｍａｒ、Ｋ　
Ｍａｙ＠ｒ、Ｅ　Ｊ　ａｎｄ　Ｗａｔｒｕｄ、Ｌ　Ｓ：
（ｌり１４）Ｇ＠ｎ＠　４ｃｊ、　　３２７−１３／。
／ＪＬ　５ｔａｅｈａｌ、Ｓ　Ｅ＊　　Ｎ＠＠ｔｅｒ　
Ｅ　Ｗ　ａｎｄ　　Ｚａｍｂｒｙｓｋｉ。
Ｐ　　Ｃ：　　（／９ｒＡ）　Ｐｒｏｅ、　　Ｎａｋ、
　　Ａｅａｄ、　　Ｓｅｔ、　　ＵＳＡ。
１３、　３７９−３１３゜ ／Ｊ、　　Ｗｏｎｇ、ＨＣ，５ｃｈｎａｐｆ、ＨＥ　ａ
ｎｄ　Ｗｈｌｔｅｌｙ。
ＨＲ：　　（／９１３）　　Ｊ、　　ＢＬｏｌ、　　Ｃ
ｈｅｍ、　　２！！、　　／９６０−／り６７゜ 欠配のプラスミｔに英国、スコツトラン−、アバディー
ンへＢヂ　ｆＤＧ、アベイロー−／３ｊ。
ピーオーゼツクス３１．トーリイ　リサーチ　ステーシ
ョア　（Ｔｏｒｒｙ　Ｒａｓ＠ａｒｅｈ　５ｔａｔｉｏ
ｎ　、　ＰＯＢ６）ＣＪ／　　、　　／３！ｒ　　人ｂ
ｂｅｙ　　Ｒｏａｄ　　、　　人ｂｓｒｄａ＊ｎ　　Ａ
ｇ３　ｒＤＧ　。
５ｅｏｔｌａｎｄ　）　ノｆショナル　コレクションズ
　オブ　インダストリアル　アン−マリン　バクテリア
（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏ１１＠ｅｔｉｏｎａ　ｏｆ　
’１ｎｄｕＩＩｔｒｉａｌａｎｄ　Ｍａｒｉｎａ　Ｂａ
ｃｔｅｒｉａ　、　ＮＣＩＢと略称される）Ｋ既に寄託
され、そのＮＣＩＢ受託番号は下記のとおりである。
寄　託　＃　　　　　ＮＣＩＢ受託査号プラスミｙ　ｐ
ｏｕＢａ、ｔｏｔ　　　　　ｔ　２ｚ　０７プ５　スミ
ｈ’　ｐｉ）ｕ８２！０−１　　　　　／　２６０ｚ
【図面の簡単な説明】
第１図に広省主城プラスミｔを一１示するものである。 第２図にキチナーゼについて暗号付けする遺伝子７ラグ
メントをｖｉｒ遺伝子の制御子にｌＪｒいて本発明に促
う１）ＮＡ塩基配列を提供せ］−め侍る方法１５Ｐ説明
するものである。 第３図に本発明に従う微生物の損易され念植窃への移動
及びその結果として生起する損傷４１１物近くのより畠
！１度の植物代謝守σン存在下で員桑活性Ｓ質について
暗号付けする遺伝子の誘２！４を承すものである。 第ｔｔ図及び５Ａｊ図ｖ−゛アセトシリンゴン及ヒバ二
１１ルアルコールヘσ）走化性が十Ｔｌｆラスミーと−
ＴＩプラスミｐとでいかに相通するかを示すグラフであ
る、 第６図にｖｉｒＢカセヅ・トの製造工程を例示するもの
であり、第７図にキチナーゼカセットの製造工程′Ｊｔ
例示するものである。 第１図１ｖｉｒＢカセツト及びキチナーゼカセットから
の不発明に従うプラスミｒの形成を示すものである。 第り図σ本発明に従う微生物に有用な第二のプラスミＰ
の形成を示すものである。 第１図 第３図 第４図 毛管中のアセトシリンゴンの；農虜 第５図 弔電中のバニリルアルコールのＢ度 第６図 第７図 第８図

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、植物に又は植物の隣接環境に植物代謝物に対して走
    化性反応を示し得る微生物を施し、そこで該微生物をそ
    の走化性の結果として植物に向つて移動させ、それによ
    つて植物上に又はその隣接部位に農薬活性物質を供与又
    は形成させることからなる植物に農薬活性物質を供与す
    る方法。 ２、微生物が走化性反応を示す植物代謝物の化学種は植
    物の損傷に応答して植物によつて放出される代謝物であ
    り、それによつて微生物は損傷を受けた植物に誘引され
    る傾向があり、かくして植物に近接して所望の農薬活性
    物質の供与又は形成をもたらすものである特許請求の範
    囲第１項記載の方法。 ３、農薬活性物質が土壌微生物の一種又はそれ以上の染
    色体遺伝子又は非染色体遺伝子の形質発現の産物である
    特許請求の範囲第１項又は第２項記載の方法。 ４、遺伝子が組換えＤＮＡ技術によつて組立てられたも
    のでありかつ微生物の形質転換に使用されるものである
    特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５、微生物がアグロバクテリウム属のものである特許請
    求の範囲第４項記載の方法。 ６、微生物が走化性反応を示す植物代謝物は形質発現に
    よつて農薬活性物質を産生する一種又はそれ以上の遺伝
    子の誘導物質としても作用する特許請求の範囲第１項な
    いし第５項のいずれかに記載の方法。 ７、農薬活性物質を形質発現する遺伝子がＴｉプラスミ
    ドのｖｉｒＢ調節配列の制御下にある特許請求の範囲５
    項又は第６項記載の方法。 ８、植物に又は植物の隣接環境に一種又はそれ以上の染
    色体遺伝子又は非染色体遺伝子の形質発現によつて直接
    又は間接的に農薬活性物質を産生し得る微生物を施しそ
    して該一種又はそれ以上の遺伝子の誘導物質を被処理植
    物に又はその隣接域に施すことによつて該遺伝子の形質
    発現を誘導せしめることからなる植物に農薬活性物質を
    供与する方法。 ９、農薬活性物質が菌類又は昆虫類の細胞壁又はその他
    の構成部分を消化し得る酵素からなる特許請求の範囲第
    １項ないし第８項のいずれかに記載の方法。 １０、農薬活性物質が￥セラシア￥￥マルセツセンス￥
    のキチナーゼからなる特許請求の範囲第１項ないし第９
    項のいずれかに記載の方法。 １１、農薬活性物質が殺虫作用をもつ蛋白質である特許
    請求の範囲第１項ないし第８項のいずれかに記載の方法
    。 １２、農薬活性物質が￥バチルス￥￥スリンジエンシス
    ￥のデルタ−エンドトキシンである特許請求の範囲第１
    １項記載の方法。 １３、農薬活性物質が所与の環境から菌類又は昆虫類の
    発育に必要な必須元素又は発育因子を除去するに有効な
    ものである特許請求の範囲第１項ないし第８項のいずれ
    かに記載の方法。 １４、農薬活性物質が、植物中で産生され又は植物に隣
    接する環境に供与される際病原体の発育に必要な金属イ
    オンをキレート化することによつて病原体の発育を阻止
    する鉄担持物質からなる特許請求の範囲第１３項記載の
    方法。 １５、農薬活性物質が植物の生育環境中におけるビオチ
    ンの欠乏を惹起すに有効であり、したがつてビオチン依
    存型病原菌の発育を阻止するものである特許請求の範囲
    第１３項記載の方法。 １６、微生物が植物に殺虫性の植物代謝物を産生させる
    誘発因子として作用する特許請求の範囲第１項ないし第
    ８項のいずれかに記載の方法。 １７、植物に又は植物の隣接環境に植物代謝物に対して
    走化性反応を示し得るかつ植物の損傷の治癒を促進し得
    る物質を産生し得る微生物を施し、それによつて該微生
    物を走化性の結果として植物に向つて移動させ、その結
    果植物の損傷部位に前記植物の損傷の治癒を促進し得る
    物質を供与し又は形成させることからなる植物の損傷の
    治癒を促進する方法。 １８、植物代謝物はアセトシリンゴン、α−ヒドロキシ
    アセトシリンゴン、３，４−ジヒドロキシ安息香酸（プ
    ロトカテク酸）、カテコール、バニリルアルコール、３
    ，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド、フエルラ酸、ト
    ラウマチン酸、バニリン酸、ギベレル酸、インドール 酢酸、バニリン、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、β−レゾル
    シン酸、ピロガロール、没食子酸、ルテオリン、アビゲ
    ニン及び糖類から選ばれる特許請求の範囲第１項ないし
    第１７項のいずれかに記載の方法。 １９、植物代謝物に対して走化性反応を示し得るかつ農
    薬活性ポリペプチドについて暗号付けする組換え体染色
    体遺伝子又は非染色体遺伝子を含有する形質転換された
    微生物。 ２０、￥エシエリヒア￥￥コリ￥、￥アグロバクテリウ
    ム￥￥ツメフアシエンス￥、￥リゾビウム￥属又は￥シ
    ュードモナス￥属菌から誘導された特許請求の範囲第１
    ９項記載の形質転換された微生物。 ２１、複製部位、植物代謝物によつて活性化されるよう
    に修正された遺伝子誘導配列及び該遺伝子誘導配列の制
    御下で農薬活性ポリペプチドを形成する遺伝子からなる
    特許請求の範囲第１９項又は第２０項に従う微生物を形
    成するための形質転換において有用なプラスミド。 ２２、遺伝子誘導配列がＴｉプラスミドの￥ｖｉｒ￥Ｂ
    遺伝子のプロモーター及びシャイン−ダルガルノ配列で
    ある特許請求の範囲第２１項記載のプラスミド。 ２３、遺伝子誘導配列の制御下における遺伝子が￥セラ
    シア￥￥マルセスセンス￥のキチナーゼ又は￥バチルス
    ￥￥スリンジエンシス￥のδ−エンドトキシンを形質発
    現せしめる作用を果す特許請求の範囲第２１項又は第２
    ２項記載のプラスミド。 ２４、植物の損傷代謝物によつて活性化されるように修
    正された遺伝子誘導配列及び該配列の制御下にあるよう
    に該配列の５′側に位置する農薬活性ポリペプチドを形
    成せしめる遺伝子からなる、特許請求の範囲第２１項な
    いし第２３項のいずれかに記載のプラスミドのような遺
    伝子物質の形成に有用なＤＮＡ塩基配列。
JP62193858A 1986-08-04 1987-08-04 植物代謝物に対して走化性反応を示す微生物による植物の処理法 Pending JPS6341410A (ja)

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