JPS633848B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はＷ／Ｏ／Ｗ（水相／油相／水相）型複
合エマルシヨンタイプの酵素製剤に関し、更に詳
述すれば酵素がＷ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンの最内
水相に配合されてなる酵素製剤に関する。 従来より、種々の酵素が医薬用として使用され
ているが、酵素を生体内に適用する場合、そのま
ま生体内に投与すると、蛋白特有の抗原抗体反応
が生じる問題があり、このため酵素を一度に大量
投与することができず、また投与された酵素自体
の安定性並びに持続性にも多くの問題があつた。 このような酵素投与の問題点を解決する方法と
しては、従来、酵素をマイクロカプセル内に封入
して投与する方法が知られているが、この方法は
経口投与にしか有効に適用できす、また酵素をマ
イクロカプセルに封入する際に酵素の大部分が失
活してしまう問題があり、更に生体内に適用した
際、マイクロカプセル壁膜が高分子であるため壁
膜の処理ができず、かつ壁膜のフレキシビリテイ
ーが弱いために手細血管にまで行きわたらない等
の問題を有していた。 なお、従来、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンの最内
水相に制癌剤を配合することが提案されている
が、これは、制癌剤の臓器指向性をコントロール
するものであり、また、これは極く一部で実験的
にリンパ内に投与されているにすぎないものであ
つた。 本発明者らは、上記事情に鑑み、マイクロカプ
セル化酵素と同様の機能を有し、かつマイクロカ
プセルのもつ前記欠点のない酵素製剤を得るため
に、鋭意研究を行つた結果、Ｗ／Ｏ／Ｗ多相乳化
型エマルシヨンの最内水相に酵素を配合すると、
酵素が安定化されて存在し、37℃の体温条件にお
いても安定性が高い上、生体内に適用した際の持
続化が達成されると共に、蛋白特有の抗原抗体反
応が有効に阻止され、大量投与が可能であり、し
かも製剤調製時における酵素の失活も少ないとい
う優れた作用を発揮する製剤が得られ、経口投与
のみならず静脈内等にも有効に投与し得ることを
知見し、本発明をなすに至つた。 即ち、本発明はＷ／Ｏ／Ｗ多相乳化型エマルシ
ヨンの最内水相に酵素を配合することを特徴とす
るＷ／Ｏ／Ｗ多相乳化型エマルシヨンタイプの酵
素製剤を提供するものである。 以下、本発明につき詳しく説明する。 本発明に係る酵素製剤は、酵素を配合した水相
を油相に乳化、分散させることにより得た油中水
滴型（Ｗ／Ｏ型）エマルシヨンを分散質とし、こ
のＷ／Ｏ型エマルシヨンを最外水相に分散させて
なるＷ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンを基本形態とする
ものであり、酵素としてはＬ−アスパラギナー
ゼ、アルギナーゼ、ウロキナーゼ、リゾチーム、
デキストラナーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、
リパーゼ、カタラーゼ等の一種又は二種以上が配
合される。酵素の配合量は特に限定されないが、
本発明においては酵素の抗原抗体反応が有効に防
止されるため、大量に配合することも可能であ
る。 前記酵素は製剤の種類等に応じて注射用蒸留水
や生理食塩水等に溶解され、これら酵素の配合溶
解した水相はＷ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンの最内相
（Ｗ／Ｏ型エマルシヨンの内相）を構成する。 この場合、この水相（最内水相）中には糖類を
配合することが好ましく、糖類の添加により、
Ｗ／Ｏ型エマルシヨン粒子界面膜の機械的強度を
増加させ、粒子の安定性を増大させて、Ｗ／Ｏ／
Ｗ型エマルシヨンの多相乳化型粒子の調製割合を
増加させる。なお、糖類としては、グルコース、
ガラクトース、マンノース、フルクトース、キシ
ロース等の単糖類、マルトース、ラクトース、シ
ユクロース、デキストラン加水分解物等の少糖
類、ソルビツト、キシリツト等の糖アルコール、
特に少糖類と単糖類が使用される。また、これら
糖類の配合量は最内水相中0.1〜20重量／容量％、
特に0.5〜10重量／容量％とすることが好ましい。 本発明において、油相を形成するために使用さ
れる油成分は植物性のもの、動物性のもの、鉱物
性のものいずれでもよいが、特に毒性の面から植
物性のものが好ましく、オリーブ油、ピーナツツ
油、綿実油、ゴマ油、ココナツツ油、トウモロコ
シ油などが使用される。また、油成分としてフル
オロカーボンを用いることもできる。なお、これ
ら油成分の配合量は、目的とする薬剤の剤型によ
り異なるが、注射剤の場合は0.5〜10重量％、内
服の場合は0.5〜30重量％、外用剤の場合は10〜
40重量％である。 また、本発明においては前記油相中に脂肪酸を
配合することが好ましく、脂肪酸の配合は特に注
射剤の調製の場合に効果的である。使用される脂
肪酸としては、炭素数12〜38のもの、特に12〜18
のものが好ましく、例えばラウリン酸、ミリスチ
ン酸、パルミチン酸、ステアリン酸などが用いら
れる。上述した炭素数の脂肪酸は、これを油相中
に配合して使用することにより、後述するように
最外水相中に添加する弱アルカリ塩との相乗的な
作用で、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンの粒子径
（Ｗ／Ｏ型エマルシヨン粒径）を確実に2μｍ以下
にすることができると共に、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマル
シヨンの安定性を向上させることができる。この
場合、前記脂肪酸の配合量は、油相に対して１〜
30重量／容量％とすることが好ましく、この範囲
の配合量において、確実にＷ／Ｏ／Ｗ型エマルシ
ヨンの粒子径を2μｍ以下にすることができる。 更に、本発明では、酵素製剤を注射剤として構
成する場合、極性基を有する親油性物質を前記油
相中に配合することが好ましい。極性基を有する
親油性物質としては、解離してプラスの電位を示
すもの、マイナスの電位を示すもの、いずれを用
いてもよいが、例えばフオスフアチジン酸、ガン
グリオシド、ジセチルフオスフエート等のマイナ
スの電位を示す親油性物質を使用することが好ま
しく、これら親油性物質の配合により、Ｗ／Ｏ／
Ｗ型エマルシヨンの粒子の凝集を確実に防止する
ことができ、注射剤として使用する場合に致命的
な血栓を引き起すことを防止できる。なお、これ
ら親油性物質は、油相に対し0.0001〜１重量／容
量％の割合で配合することが好ましい。 Ｗ／Ｏ型エマルシヨンの形成に用いる油溶性乳
化剤としては、非イオン系活性剤、特に毒性のき
わめて少ないソルビタン誘導体が好ましく、例え
ばソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノラ
ウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビ
タンモノステアレート、ソルビタントリステアレ
ート、ソルビタンセスキオレエート、ソルビタン
トリオレエート等、或いはグリセロールモノ脂肪
酸エステル、ジグリセロールジ脂肪酸エステル
等、又はこれらの混合物が使用される。なお、こ
れら油溶性活性剤の配合量は、油相中１〜20重
量／容量％、特に５〜10重量／容量％とすること
が好ましい。 そして、上述の油成分、油溶性乳化剤、更に必
要に応じて添加される脂肪酸、極性基を有する親
油性物質等により油相が構成されるが、この場
合、この油相中に大豆レシチン等のリン脂質が適
量添加することが好ましく、これらリン脂質の添
加によりＷ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンの安定性が更
に向上する。 また、必要により、前記油相中に酸化防止剤が
添加される。酸化防止剤としては、フエノール
系、キノン系、アミン系、有機酸、無機酸、イオ
ウ化合物等が用いられるが、特にフエノール系や
有機酸が望ましく、例えばブチルヒドロキシアニ
ソール、クエン酸等が使用される。 また、本発明においては、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマル
シヨンの最外相を構成する水相中に弱アルカリ金
属塩を配合することが好ましく、このような弱ア
ルカリ塩の配合は特に注射剤の調製の場合に効果
的である。弱アルカリ塩としては、有機酸のアル
カリ金属塩が好ましく、例えばクエン酸ナトリウ
ム、コハク酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリ
ウム、炭酸ナトリウム等が使用されるが、無機塩
でもよく、弱塩基性を示すものならいずれでもよ
い。これら弱アルカリ塩を最外水相中に配合する
ことにより、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンの粒子径
を2μｍ以下にすることを確実に可能にする。ま
た、これら弱アルカリ塩は注射液等を等張化する
作用を果す。なお、弱アルカリ塩の配合量は、前
記脂肪酸と等モル量とすることが好ましい。 更に、Ｗ／Ｏ型エマルシヨンを最外水相に分散
させるために使用される水溶性乳化剤としては、
イオン性のもの、非イオン性のもの、いずれでも
よいが、注射剤の場合には非イオン性のものが好
ましく、特に、溶血作用が極めて少なく、かつ
Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンを確実に安定化し得る
等の点で、酸化プロピレンを重合して得られるポ
リプロピレングリコールをベースとして、これに
酸化エチレンを付加して得られるポリオキシエチ
レン・ポリオキシプロピレンブロツクポリマー
（プルロニツク系活性剤、下記(1)式）を用いるこ
とが好ましい。 HO（C₂H₄O）ａ（C₃H₆O）ｂ（C₂H₄O）cH ……(1) なお、前記水溶性乳化剤の配合量は通常全体の
0.2〜10重量／容量％であり、この乳化剤、更に
は必要により添加される弱アルカリ塩を蒸留水等
に溶解することにより最外水相が構成される。ま
たこの場合、油溶性乳化剤と水溶性乳化剤との配
合割合を重量比で２：１〜40：１とすることが好
ましく、これにより非常に安定性の高いＷ／Ｏ／
Ｗ型エマルシヨンを得ることができる。 そして本発明に係る酵素製剤は、前記酵素が配
された最内水相を前記油相に乳化、分散させて
Ｗ／Ｏ型エマルシヨンを形成させた後、このＷ／
Ｏ型エマルシヨンを前記最外水相に分散させ、
Ｗ／Ｏ／Ｗ多相乳化型エマルシヨンを得ることに
より製造される。この場合、最内水相、油相、最
外水相の配合割合は、目的とする薬剤の剤型によ
り異なるが、例えば注射剤の場合はそれぞれ２〜
10容量％、0.5〜10容量％、97.5〜80容量％とす
ることが好ましい。 なお、本発明に係る酵素製剤は、経口用或いは
注射用等として調製されるが、経口用の場合に
は、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンの粒子径は特に問
題とはならないが、エマルシヨンの安定性の点か
ら通常20μｍ以下に調製され、粘度についてはそ
の飲み易さの点から10ポイズ以下に調製される。
また、注射用の場合には、粒子径は7μｍ以下、
特に静脈内注射では2μｍ以下に調製することが
望ましく、また粘度は注射の際の疼痛緩和の点か
ら１〜４センチポイズに調製することが好まし
い。この場合、上述したように、油相に脂肪酸を
配合すると共に最外水相に弱アルカリ塩を配合す
ることにより、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンの粒子
（分散質であるＷ／Ｏ型エマルシヨン）を均一に、
その粒子径をいずれも2μｍ以下の微細粒子とし
て形成できる。かつ、前記脂肪酸、弱アルカリ金
属塩の配合、及び極性基を有する親油性物質、リ
ン脂質、糖類等の配合により非常にＷ／Ｏ／Ｗ型
エマルシヨンの安定性が高まり、粒子の凝集現象
や溶血現象、赤血球の萎縮が確実に防止され、ま
た赤血球細胞内液との等張化も確実に達成された
酵素製剤を容易に得ることができる。 而して、本発明に係るＷ／Ｏ／Ｗ多相乳化型エ
マルシヨンを基本形態とする酵素製剤は、酵素が
Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンの最内水相中に配合さ
れていることにより、酵素が室温下は勿論、37℃
の体温条件下においても安定に存して、活性の低
下がなく、単なる酵素溶液と比較して体温条件下
における安定性がより増大するという特徴を有す
る。また、本発明に係る酵素製剤は、酵素反応の
速度が遅延化され、従つて効果の持続化が確実に
達成されると共に、生体内に適用した場合に抗原
抗体反応が生じることが少なく、このため酵素を
大量に投与することも可能となる。更に、調製時
において酵素の失活度合も少なく、このため本発
明によれば、酵素を有効に生体内に適用し、投与
された酵素の効果を良好に発揮させることができ
るという優れた特徴を有する。 かつまた、本発明に係る酵素製剤は、血液中に
投与してもマイクロカプセル剤と異なつて問題は
なく、内服剤としては勿論、静注、皮下注、筋注
用剤として好適に使用でき、更に眼科用剤、外皮
用剤、化粧料等としても有効に作用できる。 以下実施例を示し、本発明を具体的に説明す
る。 〔実施例 １〕

【表】 上記Ａの各成分を互に混合溶解して得た油相Ａ
に、アルギナーゼ50mgとマルトースとを緩衝液に
溶解することにより得た水相Ｂを氷冷下で徐々に
加え、撹拌乳化してＷ／Ｏ型エマルシヨンを得
た。次に、このＷ／Ｏ型エマルシヨンを水相Ｃに
分散させて、アルギナーゼが最内水相に配合され
たＷ／Ｏ／Ｗ多相乳化型エマルシヨンタイプの酵
素製剤を調製した。 次に、このＷ／Ｏ／Ｗ型多相乳化型エマルシヨ
ンタイプの酵素製剤のアルギナーゼ活性を常温で
14日間にわたり測定した。また、比較のため、ア
ルギナーゼ溶液の活性を同様にして測定した。結
果を第１図に示す。なお、図中ＥはＷ／Ｏ／Ｗ多
相乳化型エマルシヨンタイプの酵素製剤、Ｎはア
ルギナーゼ溶液である（以下同じ）。また、アル
ギナーゼを界面重合法によりマイクロカプセル内
に封入した場合、その活性はアルギナーゼ溶液の
活性の15〜20％まで低下した（これに対し、前記
Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンタイプの酵素製剤の活
性は、第１図から明らかなように、アルギナーゼ
溶液の活性の65％程度であつた。） また、前記酵素製剤とアルギナーゼ溶液とを用
い、そのアルギナーゼの温度に対する影響を調べ
て第２図に示す結果を得た。なお、温度は生体内
投与を考慮して37℃とした。 更に、前記酵素製剤とアルギナーゼ溶液とにつ
き、そのアルギナーゼの反応速度を尿素を用いて
比較した。結果を第３図に示す。第３図から反応
速度定数を計算すると、アルギナーゼ溶液の場合
が65.1hr^-1であるのに対し、アルギナーゼがＷ／
Ｏ／Ｗ型エマルシヨンの最内水相に配合されてな
る酵素製剤の場合は14.4hr^-1であり、このことか
ら、この酵素製剤は反応速度が遅延化され、効果
が接続化していることが知見された。 なお、更に、前記Ｗ／Ｏ／Ｗエマルシヨンに配
合されたアルギナーゼが抗原抗体反応を引き起こ
すか否かをOuchterlony法により調べたところ、
Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンに配合されたアルギナ
ーゼはかなりの高濃度（0.2mg／ml−Ｗ／Ｏ／Ｗ
エマルシヨン）でも抗原抗体反応を引き起こさな
いことが確認された。これに対し、アルギナーゼ
溶液は容易にアルギナーゼの抗原抗体反応が生じ
てしまうものであつた。 従つて、以上の結果から明らかなように、アル
ギナーゼがＷ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンの最内水相
に配合されてなる本発明に係る酵素製剤は、アル
ギナーゼ配合時における活性低下度合も少なく、
これを放置しておいてもアルギナーゼ活性の変化
がなく、また37℃の温度条件下においても安定
で、アルギナーゼ溶液よりも安定性が増加するこ
とが知見された。更に、本発明に係る酵素製剤
は、アルギナーゼ溶液に比べて明らかに反応速度
が遅くなつており、従つて本発明によれば効果の
持続化が達成されると共に、抗原抗体反応が有効
に阻止されて、大量投与も可能になることが知見
された。 なお、前記Ｗ／Ｏ／Ｗ多相乳化型エマルシヨン
タイプの酵素製剤の粒子径（Ｗ／Ｏ型エマルシヨ
ン粒子の径）は1.5μｍ以下（平均粒径0.7μｍ）で
あり、粘度は2.5センチポイズであつた。また、
この酵素製剤は非常に安定で室温で５週間放置し
てもエマルシヨンの破壊は殆んど生じなかつた。 〔実施例 ２〕

【表】 実施例１と同様にして、油相Ａに水相Ｂを氷冷
しながら徐々に加え、Ｗ／Ｏ型エマルシヨンを調
製し、次いでこのＷ／Ｏ型エマルシヨンを水相Ｃ
に分散させて、Ｌ−アスパラギナーゼが最内水相
に配合されたＷ／Ｏ／Ｗ多相乳化型エマルシヨン
タイプの酵素製剤を調製した。 このＷ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンタイプの酵素製
剤の粒子径は2μｍ以下（平均1.1μｍ）、粘度は3.1
センチポイズであつた。 なお、上記酵素製剤は、滅菌、検査後、急性リ
ンパ性白血病などの疾病に静脈内に注射或いは点
滴で投与される。 〔実施例 ３〕

【表】 実施例１と同様にして油相Ａに水相Ｂを氷冷下
で徐々に加え、Ｗ／Ｏ型エマルシヨンを調製し、
次いでこのＷ／Ｏ型エマルシヨンを水相Ｃに分散
ささて、ウロキナーゼが最内水相に配合された
Ｗ／Ｏ／Ｗ多相乳化型エマルシヨンタイプの酵素
製剤を調製した。 このＷ／Ｏ／Ｗ型エマルシヨンタイプの酵素製
剤の粒子径は1.5μｍ以下（平均0.6μｍ）、粘度は
1.8センチポイズであつた。 なお、上記酵素製剤は、滅菌後、薬局方規定の
検査をして、末梢動・静脈血栓症、肺塞栓症、冠
動脈閉塞症、心筋硬塞症、脳血管塞栓症、網膜
動・静脈血栓症などに静脈内に注射或いは点滴で
投与される。また、網膜静脈血栓症、網膜動脈塞
栓症、黄斑部出血、結膜下出血、硝子体出血、網
膜出血、前房出血などに眼科用としても投与でき
る。 なお、実施例２，３の酵素製剤は、いずれも実
施例１と同様に酵素自体の安定性、持続性に優
れ、失活度合も少なく、また抗原抗体反応を引き
起こさないものであつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の一実施例に係るアルギナーゼ
配合の酵素製剤とアルギナーゼ溶液とのアルギナ
ーゼ活性を比較したグラフ、第２図は同酵素製剤
とアルギナーゼ溶液とにおいて、アルギナーゼの
温度に対する影響を比較したグラフ、第３図は同
酵素製剤とアルギナーゼ溶液とにおいて、アルギ
ナーゼの反応速度を比較したグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 水相／油相／水相型複合エマルシヨンの最内
   水相に酵素を配合したことを特徴とする水相／油
   相／水相型エマルシヨンタイプの酵素製剤。 ２ 油相が油成分と脂肪酸と油溶性乳化剤とを含
   むと共に、最外水相が弱アルカリ塩と水溶性乳化
   剤とを含む特許請求の範囲第１項記載の酵素製
   剤。 ３ 脂肪酸が炭素数12〜38のものである特許請求
   の範囲第２項記載の酵素製剤。 ４ 脂肪酸が炭素数12〜18のものである特許請求
   の範囲第３項記載の酵素製剤。 ５ 油溶性乳化剤がソルビタン脂肪酸エステルで
   ある特許請求の範囲第２項記載の酵素製剤。 ６ 弱アルカリ塩が有機酸のアルカリ金属塩であ
   る特許請求の範囲第２項記載の酵素製剤。 ７ 水溶性乳化剤がポリオキシエチレン・ポリオ
   キシプロピレンブロツク重合体である特許請求の
   範囲第２項記載の酵素製剤。 ８ 脂肪酸が炭素数12〜38のものであり、油溶性
   乳化剤がソルビタン脂肪酸エステルであると共に
   弱アルカリ塩が有機酸のアルカリ金属塩であり、
   水溶性乳化剤がポリオキシエチレン・ポリオキシ
   プロピレンブロツク共重合体である特許請求の範
   囲第２項記載の酵素製剤。 ９ 脂肪酸配合量が油相に対して１〜30重量／容
   量％であり、弱アルカリ塩配合量が脂肪酸と等モ
   ル量である特許請求の範囲第２項又は第８項記載
   の酵素製剤。 １０ 油溶性乳化剤の配合量が油相中１〜20重
   量／容量％であり、水溶性乳化剤の配合量が全体
   の0.2〜10重量／容量％であると共に、油溶性乳
   化剤と水溶性乳化剤との配合割合が重量比で２：
   １〜40：１である特許請求の範囲第２項、第８
   項、又は第９項記載の酵素製剤。 １１ 最内水相に単糖類、少糖類、又は糖アルコ
   ールを配合した特許請求の範囲第２項又は第８項
   記載の酵素製剤。 １２ 油相に極性基を有する親油性物質及びリン
   脂質を配合し、注射剤として形成した特許請求の
   範囲第２項、第８項又は第１１項記載の酵素製
   剤。 １３ 極性基を有する親油性物質が解離してマイ
   ナスの電位を示すものである特許請求の範囲第１
   ２項記載の酵素製剤。