JPS6332477A - 釣菌用棒および釣菌方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、細菌発育のための装置および培地に関する。

具体的には、本発明は、細菌を、最初の細菌数から最終
的なあらかじめ定められた数まで発育さすための装置お
よび培地に関する。この装とは、そのような発育のため
の培地および培地に接種するだめのあらかじめ定められ
た細菌数をうるための手段を包含している。

本発明の発育を！１１１限する培地は、細菌を同定しそ
して細菌の抗生物質に対する感受性を測定するために用
いられるいくつかの操作に有用である。

このような操作では、試験操作の開始時に、細菌を、あ
る濃度範囲（Ｃ，Ｃ，当たりのコロニー形成単位、ＣＦ
Ｕ／ｃ、ｃ、）にしておく必要がある。さもないと、最
終結果は正確でない。たとえばＴｈｅ　Ａａ＋ｅｒｉｃ
ａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｒ　Ｃｌ１ｎｉｃａｌ　Ｐａ
ｔｈｏｌｏｇｙ。

４５巻、４号、４月、１９６６．２９３−２９６頁の’
　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　５ｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉ
ｔｙ　Ｔｅｓｔｉｎｇ　ｂｙＳｔａｎｄａｒｉｚｅｄ　
Ｓｉｎｇｌｅ−Ｄｉｓｃ　Ｍｅｔｈｏｄ”およびｔｈｅ
　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｍｍ１ｔｔｅｅ　ｆｏｒ　Ｃ
ｌ１ｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ　５ｔａｎｄａｒ
ｄｓ　ｏｒ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　５ｔａｔｅｓ　ｏ
ｒＡｍｅｒｉｃａにより発行された’　Ｐｅｒｆｏｒｍ
ａｎｃｅＳｔａｎｄａｒｄｓ　　ｆｏｒ　　Ａｎｔｉｍ
ｉｃｒｏｂｉａｌ　　Ｄｉｓｃ　　５ｕｓｃｅｐｔｉ−
ｂｉｌ目Ｖ　Ｔｅ５ｔ　“ＡＳＭ−２に、迅速に発育す
る細菌の抗生物質および化学療法剤に対する感受性を測
定する、にｉ　ｒｂｙ−Ｂａｕｃｒ法が記載されている
。

Ｋｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ法は、ふつう、患者より得られ
た細菌のコロニーを寒天プレート上に発育さすことを包
含する。細菌の４から５個のコロニーを白金耳を用いて
釣菌し、それらを、大豆力ぜイン消化物ブロスの４から
５ｃ、ｃ、を含有する試験管中に加える。試験管は２か
ら８時間インキュベートし、中程度の濁り細菌懸濁液と
する。この懸濁液は、ついで、必要ならば、塩溶液また
は類似のブロスで希釈し０．５ｃ、ｃ、の１％ＢａＣｌ
２を９９．５ｃ、ｃ、の１％ＨＳＯ２（０，３６ＪＪｌ
定）に添加し調製されるスタンダード（０、５ＨｃＦａ
ｒｌａｎｄスタンダード、以降、ＨｃＦａｒｌａｎｄス
タンダードと称する）と見掛は上同じ密度とする。Ｈｕ
ｃｌｌｃｒ−Ｈｉｎｔｏｎ寒天含有プレートに、この細
菌ブ０ス懸濁液を木綿塊を用いて塗沫する。接種物が乾
燥したあと、抗生物質または化学療剤を含有するディス
クを寒天上におく。プレートはついで１夜インキユベー
トし、細菌発育のない各ディスクのまわりの面積を測定
する。これは阻止域として知られており、特定の細菌に
対して有用な抗生物質を決定するのに使用する。

に１ｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ法が正確であるためには、寒天
プレート上に塗沫する培地中には約１×１０８ＣＦＬＪ
／ｃ、ｃ、が含有されねばならない。ふつう、発育のレ
ベルは上記のＨＣＦａｒｌａｎｄスタンダードと肉眼で
比較して測定する。細菌がこの濃度に達するに要する時
間は、細菌に応じて変化するが、２から８時間に変化す
る。細菌が１ｘ１０８ＣＦＵ／Ｃ，Ｃ，を超えるほどに
発育したＨｃＦａｒｌａｎｄスタンダードよりより濁る
ならば、培地は、スタンダードに等しくするように希釈
されねばならぬ。

種々の細菌に対する細菌の感受性を測定するための別の
方法は、ＭＩＣまたは最小阻止濃度試験と称されるしの
である。この試験は、ＡｌｂｅｒｔＢａｌｏｗｓ　、◎
　１９７４．７７から８７頁、Ｃｕｒｒｅｎｔ　ＴＯｃ
ｈｎｉｑｕｅｓ　ｆｏｒ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　５
ｕｓｃｅｐｔｉ−ｂｉｌｉｔｙ　丁ｃｓｔｉｎａに論ぜ
られている。この方法では、被験細菌の発育を支える液
体または固体培地中、抗生物質を一連の希釈濃度とした
ものを調製Ｍる。

液体培地は試ｌｌ４Ｎ中に加えるのが便宜であり、固体
ｊ８地にふつうベトリ皿に注入する。この試験を行なう
には、１定範囲の濃度の抗生物質を１運の２倍希釈にｇ
Ｊ製するのがふつうである。各チューブまたはベトリ皿
には、問題となっている細菌を接種する。一定時間イン
キュベーションしてから、細菌が発育しているかまたは
発育していないかの状態を、各抗生物質１ｉＩｒｘにつ
いて測定する。このようにして、系列希釈した時の、も
っとも近い希釈度として、抗生物質の最小阻止瀾瓜を測
定する。

これが、阻止濃度を測定するもつとも正確な方法である
。しかし、希釈溶液を調製する面倒な努力が単純化され
た最近までは、この方法は一般的に普及しなかった。Ｍ
ＩＧ試験では、希釈された抗生物質には、ある１１度範
囲つまり１０５から１０６ＣＦ　Ｕ／ｃ、ｃ４）細菌ヲ
接１　ｔ　ル。

ＨＣＦａｒｌａｎｄスタンダードに相当するまで発育し
た細菌を含有するブロス、つまり約１×１０８ＣＦ　Ｌ
Ｊ　／Ｃ，Ｃ，までに発育したものを希釈して、この濃
度とする。

上記の感受性試験ならびに、細菌の型またはそれの抗生
物質に対する感受性を測定するための別の試験では、に
１ｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ試験の場合にペーパーディスクを
おこうとするベトリ皿に接種するかまたはＭＩＣ試験の
場合には系列希釈抗生物質含有ブロスに接種しようとす
る場合、ある定められた量の細菌を試験に使用する必要
を生ずる。このことは、試験が正確であるのに必要なの
である。より少ない細菌濃度では、実際よりもより抗生
物質に対して感受性であるような結果を与えるであろう
。他方、細菌がより高Ｓ度に存在すると、試験の結果は
、細菌の発育を阻止するのに必要であるよりもより高い
抗生物質濃度を必要とすることを示すことになるであろ
う。いずれの指示をも誤まっていることになる。

上記の試験またはそれに類似する試験を実施するには、
実験室の技術者は細菌の発育している寒天平板より４か
ら５個のコロニーを取りそれを上記したブロス発育培地
中で２から８時間おく必要がある。培地は一定時間おき
に調べて、細菌の濃度が）ｌｃＦａｒｌａｎｄスタンダ
ードに等しいかどうかをみる。培地を肉眼でみると、細
菌のある培養物は適当な濃度まで発育しないのに、他は
適当な１７Ｊ度以上に発育している。前者の場合、細菌
はより長く発育させ、後者の場合、希釈して標準の濃度
に戻寸。これらはいずれも面倒であるし、時間がかかる
。

本出願人は、細菌が発育しうるが、しかし、細菌が発育
到達する濃度レベルを制限する培地を発見したのである
。具体的には、本出願人は、２つの異なる属の、好気的
、病原性の、迅速に発育するＩ細菌より少なくともひと
つの種を、出発間の数よりあらかじめ定められた終りの
数まで発育させ、その時点で、細菌は、培地中の栄養分
の欠如により実質的に発育を終止しそして該細菌が少な
くとも１８時間は生存状態にいる水性培地を発見したの
である。この培地は、炭素原、窒素原、ビタミンおよび
無ｖｓ質を発育さすに十分の間でそして細菌の発育に使
用されうる形で含有している。

培地が有用である細菌は、好気的の、つまり発育するの
に酸素を使用する細菌である。ｌ細菌はまた病気をおこ
す点で病原性であり５０分または以下の分裂時間を有す
る点ですみやかに発育するものである。

この培地は、グラム陽性およびグラム陰性両方の、病原
性の迅速に発育する細菌である。しかし、培地中の種々
の成分の型および損は、グラム陽性菌はダラム陰性菌と
ふつうは異なり、そしてグラム陽性菌について必要な濃
度とするには、ダラム陰性菌より長くかかる傾向を示す
。

本発明の発育培地は、２つの異なる属の好気的、病原性
細菌のうちの少なくともひとつの種を発育させる。ふつ
う、培地は、２つの属のグラム陽性菌より少なくともひ
とつの種を発育させるかまたは少なくとも２つの属のダ
ラム駄性菌より少なくともひとつの属を発育させる。グ
ラム陽性の好気的細菌では、ふつうの細菌および感受性
試験を実施する必要のある、大部分の病気をおこす細菌
を包含するのに２つの属がある。それらは、スタフィロ
コッカスおよびストレプトコッカスである。

もしも培地がこれらの２つの属のそれぞれよりの種を発
育さすならば、ダラム染色試験を用いて、それがグラム
陽性が陰性かを決定するために細菌を試験するだ番プで
すむ。細菌がグラム陽性ならば、グラム陽性細菌を発育
さす培地を使用し、培地は、Ｈｃｒａｒｌａｎｄスタン
ダードに等しいような望むレベルまで細菌を発育させる
。

ダラム染色試験で１１細菌がダラム陰性であるとなると
、細菌はさらに多くの数の属に由来することになる。ダ
ラム陰性の好気的細菌でおこされる病気の９９％は、１
６種の属に入る細菌によりおこされる。これらダラム陰
性菌には、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ。

Ｓｈｉｇｅｌｌａ、　Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ、　Ｓ
ａ１ｍｏ’ｗ’ａｌｌａ。

Ａｒ１ｚｏｎａ、　Ｃ１ｔｒｏｂａｃｔｅｒ、　Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ。

Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、　５ｅｒｒａｔｉａ、　Ｐ
ｒｏｔｅｕｓ。

Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ、　Ｙｅｒｓｉｎｉａ、　Ｐｓ
ｅｕｄｏａ＋ｏｎａｓ。

＾ｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、　Ｈｏｒａｘｅｌｌａお
よびＰａ５ｔｅｕｒｅｌ　Ｉａがある。

培地は、ふつうは上記定義のようなＣＦＵで記載されそ
しである容量の培地を基準として表わされる、つまりＣ
ＦＵ／ｃ、ｃ、として表わされるある細菌数より発育さ
せる。最初の濃度はＩＣＦＬＩ程度に低くありうるが、
ふつうは、そして、なるべくは、少なくとも５　Ｘ　１
０６ＣＦ　Ｕ／ｃ、ｃ、とする。

より低い細菌数または濃度から出発しても、より高い濃
度から出発した場合と箸しく異なる最終細菌数を与える
ことはないけれども、最終濃度に達するまでの時間が異
なる。そして、インキュベーション時間を調節しようと
するならば、最初の濃度を調節せねばならぬ。細菌の到
達ケる最終濃度は、安定相といわれる。

上記論議のように、ＨｃＦａｒｌａｎｄスタンダードに
等しい濃度に達するための時間は、試験操作に応じて、
２から８時間を要し、大部分の細菌では、その濃度に達
するのに少なくとも５から６時間を要する。発育制限培
地を用いて、ＩＩ細菌は、５時間のうちに、最終濃度ま
たは安定相に到達さすのが有利である。発育制限培地を
用いて細菌が２時間で安定相に達しても、技術者が５時
間のあいだ培地をヂエツクしなくても、その状態に留ま
り、ＨｃＦａｒｌａｎｄスタンダードに等しい濃度とす
るのに希釈を必要としない。

安定相または最終ｉＩ瓜に達すると、細菌の発育は実′
目的におちこむ。これは、ａｌｌ菌の連続的発育に不可
欠な栄養分の少なくとも１種の消耗によるのであって、
発育を停止させそして細菌数を実質的に減少させうる毒
性副生成物を細菌が生産することによるものでない。本
発明ＱｔＮに用いられそしてに１ｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ操
作に用いられている標準培地では、発育の生長が落ちこ
む細菌数は、Ｉｌｌ菌の毒性副産物により決定されたの
であった。この場合−のＩｔ菌数はＨｃＦａｒｌａｎｄ
スタンダードを超えている。

最終濃度または最大安定相は、１種または１種より多く
の栄養分の消耗により達せられる。この点で生きている
Ｃ　Ｆ　Ｕ　／ｃ、ｃ、カウントは、平らとなりそして
少なくとも約１８時間実質的に不変に留まる。細菌は、
Ｌ記のように実施しようとする種々の試験を実施するに
有用な時間のあいだ生存している。ふつうこのような生
存のあいだの時間は少なくとも１８時間である。

大部分の細菌について最終の望む濃度は６×１０　から
３．ＯＸｌ　０８ＣＦＵ／ｃ、ｃ、とする。

これは０　、５　Ｈｃｌ’ａｒｌａｎｄスタンダードに
相当する。

培地は種々の望む濃度レベルに到達するように変型され
つる。

培地の型および成分は、細菌に望む最終濃度および発育
させるｔＩＡ菌の型に応じて変化させつる。

すべての場合、細菌の発育に有用な形状の炭素および窒
素を与える形状で、炭素および窒素原が存在しうる。ふ
つうビタミンおよび無機物もまた存在する。しかし、上
記したように、１種または１種より多くのこれらの成分
は、細菌が最終のあらかじめ定められた濃度に達し実質
的に発育を停止するように１１．ＩＪ限する。

ダラム陰性細菌では、有利な培地は培地１　ｃ、ｃ。

について約０．４２から０．７０ミリグラムの炭素を含
有する。炭素は、細菌が発育に有用な形状とする。この
形は、炭素がペプトンまたは類似の形状で存在するもの
であることが分った。有利な培地はさらに、ペプトン中
に存在する窒素と類似の形で、培地ｃ、　ｃ、当たり０
．０９から０．１５ミリグラムの窒素を含有する。有利
な培地は約７から８までのｐＨを有する。プロテオース
ベプトンを用いる場合、炭素の範囲は、培地Ｃ，Ｃ，に
ついて約０．１６から０．２７ミリグラムで、窒素は、
培地Ｃ，Ｃ，について０．０３５から０．０５６ミリグ
ラムで、炭素および窒素は、プロテオースベブトンまた
はそれに類似の形で存在するものとする。

ペプトンの代表的な分析結果をつぎに示す。

パーセント ペプトン　プロテオ− スベプトン 全窒素　　　　　　　　　１６．１６　　　１４．３γ
１級プ０テオースＮ　　　　Ｏ，０６Ｇ、６０２級プロ
テオースＮ　　　　Ｏ，６８４，０３ペプトンＮ　　　
　　　　　１５．３８　　　　９．７４アンモニヤＮ　
　　　　　　　Ｏ，０４０，００遊離アミノ基　　　　
　　　３．２０　　　　２．６６アミドＮ　　　　　　
　　　　０．４９　　　　０．９４七ノアミノＮ　　　
　　　　　９．４２　　　　７．６１ジアミノＮ　　　
　　　　　　４．６７　　　　４．５１トリプトフアン
　　　　　　０．２９　　　　０．５１グーロジン　　
　　　　　　　Ｏ’、９８　　　　２．５１シスチン　
　　　　　　　　０．２２　　　　０．５６有機イオウ
　　　　　　　０．３３　　　　０．６０無機イオウ　
　　　　　　０．２９　　　　０．０４リン　　　　　
　　　　　　０．２２　　　　０．４７塩素　　　　　
　　　　　　０．２７　　　　３．９５ナトリウム　　
　　　　　１．０８　　　　２．８４カリウム　　　　
　　　　０．２２　　　　０．７０カルシウム　　　　
　　　　０．０５８　　　０．１３７マグネシウム　　
　　　　　０．（１５６０，１１Ｂマンガン　　　　　
　　　な　し　　　　０．０００２鉄　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　０．００３３　　　　　０．０
０５６灰分　　　　　　　　　　　３．５３　　　　９
．６１エーテル可溶性抽出物　　０．３７　　　　０．
３２反応、ｐＨ７，０６，８ ＋）ｔｌは、１％蒸留水中溶液を１２１度Ｃで１５分間
オートクレーブしたあとのものである。

この有利な培地は、ペプトンまたはプロテオースベプト
ン中に存在するビタミンおよび無機塩を含有する。５時
間より少ない時間のうちに６×１０’から３Ｘ１０８Ｃ
ＦＵ／ｃ、ｃ、の最終ＩＩαまでグラム陰性菌まで発育
さすに有用なことの分った、２つの特に有用な処方物は
、０．８グラムのペプトンまたは０．３グラムのプロテ
オースペブトン、０．０３グラムのデキストロース、２
．５グラムのリン酸ジ・カリウム、１．２５グラムのリ
ン酸モノカリウムおよび５．０グラムの塩化カリウムを
含有する１００ｃ、ｃ、の水の混合物である。

リン酸塩は、ｉＩｌ衝材料として加えて、組成物を約７
．０のｌ）Ｈに保つように添加する。細菌の種類によっ
ては、ｖＡ笥が必要である。上記の２つの処方物は、Ｈ
ａｒａの最初のａ度が十分であるならば、たとえば、少
なくとも約５　Ｘ　１０６ＣＦ　Ｕ／ｃ、ｃ、である場
合に、グラム陰性、好気性、病原性ｉＩｌ菌の大部分よ
りの種が、５時間のうらに上記ＣＦＵ／Ｃ，Ｃ，の範囲
まで発育しつる培地を提供する。

上記のように、炭素原および窒素原の有利なものは、グ
ラム陰性菌については、ペプトンおよびプロテオースペ
プトンとする。ネオペプトン、トリプトンおよびポリペ
プトンもまた用いうるが、これらは同じ時間の枠内でＨ
ｃＦａｒｌａｎｄのスタンダードまでの発育を来たさぬ
こと、そして、あるグラム陰性１！１ｍについては、な
んら有意な程度にまでの発育を与えぬことが分った。そ
れゆえに、これらの材料は、より限定された数の細菌だ
けに有用であることになる。しかし、このような材料の
ペプトンまたはプＯテオースペブトンとの組合わせは、
より多数の［細菌に有用な培地を提供するのに使用しう
る。

ダラム陽性細菌に用いるに有用な培地は、１．７グラム
のトリプテイケースと、０．３グラムノフイト＞　（Ｅ
ｌｈＶｔｏｎｅ　）と、０．２５グラムのデキストロー
スと、０．５グラム塩化ナトリウムと、０．２５グラム
のリン酸ジカリウムとを含有する１０００ｃ、ｃ、の水
の溶液を包含する。

これら種々の培地のずべては、培地に４１箇を接種しそ
して培地を２から８時間インキュベートすることにより
使用しつる。

上記の発育＆ｌＩ限培地を使用し、そして、発育ｖ１限
培地に接種するための細菌のコロニーよりのあるあらか
じめ定められた聞の細菌をうろことを可能とする、ひと
つの装置が考案された。この装置は、細菌の発育のため
の時間をあらかじめ定めることも可能とするという利点
を有する。グラム陰性［菌について５１Ｒ間以内の有利
な時間内に必要な発育がおこるようにするためには、最
初の菌数は、少なくとも約５Ｘ　１０６ＣＦＵ／ｃ、ｃ
、とせねばならない。

つまり、本出願人等は、細菌を、最初の数より定められ
た最終数まで発育させ、その時点で、培地の欠乏により
該細菌の発育が実質的に落ち込む装置を発見したのであ
る。この装置は、（ａ）該細菌を、その初めの菌数から
定められた最後の菌数まで発育させろる発育培地の共給
原を含有する、開口部を有する容器と；（ｂ）該容器の
外部にあるところの該細菌の少なくともひとつの発育コ
〇ニーより既知量のＩｌｌ菌をうるためにそして該発育
培地に接種するために用いられる、該容器中に存在する
手段と；（Ｃ）該容器の内部に無菌状態を保つために該
容器中の該開口部をおおうためにあり、該培地に接種す
るために使用する、該容器の外部にある該細菌の該コロ
ニーより既知量の細菌をうるために細菌を採取するため
に、該細菌を得る際に取り外しうるようにした。そして
、接種された該培地をインキュベートするあいだ該容器
を閉じておくための、取除きうる手段とを包含している
。

装置は、図面を参照して説明する。第１図は、本発明の
装置の内部断面図である。・第２図は、部分的に断面図
とした、本発明の装置の透視図である。第３図は、本発
明の装置の棒の１部の内面図である。第４図は、その中
に細菌の含まれているところを示す。第３図の棒状装置
である。第５図は、発育培地に細菌を接種した直後の本
発明の装置の断面図である。第６図は、第５図に示す本
発明の装置のライン６−６に沿った断面図である。

第７図は、接種しそして最大安定相またはあらかじめ定
められた発育段階までインキュベーションしたあとの本
発明の装置の断面図である。第８図は、第７図の装置を
ライン８−８に沿って切断した断面図である。

本発明の装置は、ポリプロピレン、ポリアミド、ヒルロ
ーズアセテート、ブチレートまたは種々のポリエステル
のような透明の変型しうる材料より作られている容器ま
たはスリーブを含有する。スリーブ１の内部には、ガラ
スアンプル２が含有され、その中には上記のように、発
育制限培地３が含有される。あとから記載するように、
ガラスアンプルは脆弱性で、変型しうるスリーブ１を圧
迫すると破壊される。装置のアンプル２に対して並列し
て棒４が存在する。これは先細りの溝５を含有している
。これは、第３および４図によりさらにくわしく記載す
る。棒４は、細菌の種々のコロニーより細菌を釣菌する
のに用いられ、コロニーより先細りの満５へ細菌のあら
かじめ定められた量を取り込むように作られている。棒
４はキャップ６に固定する。キャップ６および棒４は、
ポリプロピレンのようなプラスチック材料より作られる
、キャップ６の内部には、２つのリム（ｒｉｍ）７およ
び８を有し、キャップ６およびスリーブ１のあいだに無
菌的な栓をするようにしである。これは、装置を接種す
るより前およびインキュベーションのあいだ、他の微生
物がスリーブ１に入るのを防止する。キャップ６には、
３個のプロジン（Ｐｒｏｎｇｅ）　９が含まれるが、そ
れらのうち２つが第１図に含まれる。これらのプロジン
は、キャップ６中の孔１０を、変型しうるスリーブ１が
変型されて細菌および培地３を孔１０から押出す際に、
つまり装置を作動さす際にアンプルよりの砕かれたガラ
スで詰まってしまうのを防止する。孔１゜は感圧性の接
テープ１１（タブ１２を含有する）で装置の使用前およ
び装置をインキュベーションの完了づ゛るまでおおう。

その時点でテープ１１を露出する孔１０より剥がす。そ
れにより、スリーブ１より、培地３および細菌をしぼり
出す。

第２図は、感圧性接着テープ１１が存在しないことを除
いては、使用前の正常の形状の装置を示す。見られるよ
うに、棒４はアンプル２に隣接し、リム７および８はス
リーブ１の上部に並置されている。この場合孔１０は露
出させて透視的に見せており、感圧性チー７１１は示し
てない。ブロン・ジ９はここには示してない。ガラスア
ンプル２は、ふつう３５．６ミリメードル×６．３ミリ
メートルの大きさで、約０．６ｃ、ｃ、の発育培地を含
有する。スリーブ１はふつう４３．０ミリメートルの良
さで８．６ミリメードルの直径である。

本発明の装置の重要な特徴は、先細りの溝５を含有する
１１ｉ４である。満５は、第３図によりくわしく示しで
ある。示しであるように溝５は先細りにしである。この
溝は、細菌が満５に押込められるように毛ＩＢ管作用を
与えられている。先細りしている満５の大きい方の端が
コロニーにまず接触するように、コロニーの表面に直角
に棒４を押しつける手段により細菌を押しつけると、細
菌は溝を上昇し、空気は、溝の先細りになっている方の
端より押出される。あるあらかじめ定められたレベルと
なると、ｉｌ　５に連結的に押込まれる細菌は、溝５の
先細りになった端の方へ移動するのでなく、満５の頂部
より移動して出るので、それ以上の細菌は溝の中に押込
まれえない。第３図は、正常に詰められた状態の、溝５
の中における細菌１３を模式的に示している。満５は、
ある数の細菌が溝の中に入るのを可能とするようになっ
ている。これは、本発明の装置の培地中に細菌をおくと
きに、Ｃ，Ｃ，当たり少なくとも５×１０６個の細菌に
等しい。先細りしている溝は約０．４３ミリメートルの
深さ、０．２５ミリメートルの１】（もつとも広い末端
のところ）、そして３．１ミリメートルの長さで、これ
が上記の聞の釣菌を可能とするはづである。溝は、細菌
の種々の数に合わせて変型されうる。

この装置の使用を、第５図から第８図までにより記載す
る。第５図は、棒４を用いる装置の接種直後の本発明の
装置を模式的に示している。キャップ６をスリーブ１よ
りはづし、棒４の先細りしている溝５により、４から５
個のＩＩｌ菌コロニーより、装置を接種するに十分清、
通常少なくとも５×１０６個の細菌を釣菌する。キャッ
プ６をふたたびはめ、棒４および満５を紅白して、細菌
を、アンプル２にｖＪ接しておく。第５図に示ずように
、アンプル２は、スリーブ１を変型して破壊する。

細菌１３は、発育制限培地３中に模式的に示しである。

この形状の装置は、ふつう約３５１ｉＪ　Ｃに２から８
時間インキュベートする。有利な発育培地では、あらか
じめ定められた８のｌｌｌ菌数、つまり６×１０　から
３Ｘ１０８ＣＦＬＩ／ｃ、ｃ、とするのに５時間を要す
る。第６図は、インキュベージコン開始時の第５図の装
置の断面図を示し、破壊されたアンプル２、発育培地３
および細菌１３を示す。

イン４：ユベーションしたあとの装置は、第７図の形で
示す。この場合、装置のすべては、細菌１３の数が著し
く増加する以外は、前と同様である。

第８図は、この段階での第７図の装置の断面図を示す、
インキュベーション後の使用に際しての第７図の装置は
、テープ１１が取除かれ、発育した細菌が孔１０を紅白
して押出されうる状態となっている。この装置は、孔１
０を下方に向けるだけでよい。スリーブ１を圧迫し変型
し細菌１３および培地３を孔１０より押出す、アンプル
２に由来するこわれたガラスは、ブロンジ９により孔を
詰めることがない。

棒４の中の先細りした満５は、釣菌される細菌の数が上
記より大きいかまたは小さいように、接種の細菌接種数
に応じて変化させうる。棒または釣菌装置が、あらかじ
め定められた世の細菌を反復操作により釣菌しつる限り
、先細りした溝以外の他の８４造物も使用されつる。こ
の装置は、細菌が、釣菌装置により定められるあらかじ
め定めた酢より、発育制限培地により定められる最終レ
ベルに、ある一定時間で達することを可能とする。

この時間は、最初の菌数、発育制限培地の処方および細
菌の型で決まる。Ｋｉｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ試験またＭＩ
Ｃ試験に用いるためには、５時間のうちに約６×１０　
から３Ｘ１０８ＣＦＵ／ｃ、ｃ、の濃度まで発育さすｇ
ｔ置が有利である。

示した装置は、ガラスアンプル２の中に発育制限培地３
を含有する。同じ結果をうるのに他の変型も可能である
。たとえば、装置は、ねじのついたキャップを有する、
ねじを切ったスリーブでありうる。そして、それに棒を
取付ける。この場合、発育制限培地がスリーブの中にあ
り、キャップをスリーブにふたたびはめる時に、直接に
接種しうる。細菌は棒で釣菌し、培地中に棒を入れると
同時にキャップをねじって戻す。他の変型も専門家にと
って明らかであろうが、これらも本発明範囲内に含める
ものとする。

第１図に記載の装置は、種々のガラスおよびガラス成分
を成型し成形して作られる。約０．６Ｃ，Ｃ，の培地３
をガラスアンプル２の中に入れガラスアンプル２を熱密
封する。アンプル２は１２１度Ｃで１０分闇黒気滅菌す
る。スリーブ１、ギャップ６およびテープ１１は、１０
０度Ｆで３時間酸化エチレンでガス滅菌する。ついで８
時間通気する。ｍじられそして滅菌されたガラスアンプ
ル２はスリーブ１に無菌的に付ける。キャップを取り付
番プ、テープ１１をつける。

つぎの実施例で用いる材料および細菌を記載しておく、
入手先も記載しておく。これらの例で“発育装置″は、
上記のような大きさを有する装置を意味する。

トリプトン、カゼインの酵素氷解物、Ｄｉｒｃｏ。

Ｉｎｃ、、　Ｄｃｔｒｏｉｔ、　Ｈｉｃｈｉｇａｎ、　
Ｌｌ、Ｓ、Ａ。

ペプトン、カゼインの酵素水解物、ｏ；ｒｃｏ。

Ｉｎｃ、、　Ｄｅｔｒｏｉｔ、　Ｈｉｃｈｉｇａｎ、　
ｔＪ、ｓ、Ａ。

デキストロース、Ｄｉｒｃｏ、　Ｉｎｃ、、　Ｄｅｔｒ
ｏｉｔ。

１４ｉｃｈｉｇａｎ、　Ｕ、Ｓ、Ａ。

ポリペプトン、カゼインおよび動物組織の酵素水解物、
Ｂｉｏａｕｃｓｔ、　Ｉｎｃ、、　８ａｌｔｉｍｏｒｃ
、　Ｍａｒｙｌａｎｄ。

１３、　Ｓ、　Ａ。

ネオペプトン、蛋白質の酵素氷解物、Ｄ　ｉ　ｒｃｏ。

Ｉｎｃ、、　Ｄｃｔｒｏｉｔ、　Ｈｉｃｈｉａａｎ、　
Ｌｌ、Ｓ、Ａ。

プロプオースペプトン、蛋白質の酵素氷解物、Ｄｉｒｃ
ｏ、　　夏ｎｃ、、　　０ｅｔｒｏｉｔ、　　旧ｃｈｉ
ｇａｎ、　　　ＩＪ、Ｓ、＾。

５ａｌｉｏｎｅｌｌａ　ｔｙｐｈｉｗｕｒｉｕａ＋、　
Ａｍｅｒｉｃａｎ　ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏ１１
ｅｃｔｉｏｎ、　（ＡＴＣＣ）　Ｎｏ、１９０２８Ｓｈ
ｉｇｅｌｌａ　３ｏｎｎｅｉ、　（ＡＴＣＣ２５３３１
）Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ｃｌｏａｃａｅ（ＡＴＣ
Ｃ２３３５５）およびｓｔ。

Ｐａｕｌ　　Ｒａｍ５ｃｙ　　ｌ１ｏｓｐｉｔａｌ、Ｓ
ｔ、Ｐａｕｌ、）ｌｉｎｎｅｓｏｔａ。

ｕ、ｓ、Ａ。

にＩｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｌｏｎｉａｅ、　（Ａ
ＴＣＣ２３３５７）Ｊ５よびＳｔ、Ｐａｕｌ　　Ｒａ１
ｓｃｙ　　１ｌｏｓｐｉｔａｌ、Ｓｔ、Ｐａｕｌ。

Ｈｉｎｎｅｓｏｔａ、　ＩＪ、Ｓ、Ａ。

Ｐｒｏｔｅｕｓ　　Ｖｕｌｇａｒｉｓ　　（ＡＴＣＣ６
３８０）Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｍ１ｒａｂｉｌｉＳ、　　Ｓ
Ｌ、　　Ｊｏｈｎ’ｓ　ｌ１ｏｓｐｉｔａｌ。

Ｓｔ、　Ｐａｕｌ、　ＨｉｎｎｅｓｏｔａおよびＳｔ、
　Ｐａｕｌ　Ｒａｍ５ｅｙ１１ｏｓｐｉｔａｌ、　ｓｔ
、　Ｐａｕｌ、旧ｆｌｒｌｅｓＯ１ａ、　１１．ｓ、Ａ
。

５ｅｒｒａｔｉａ　ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ　（ＡＴＣＣ
８１００）およびＳｔ。

Ｐａｕｌ　　Ｒａ１ｓｃｙ　　１ｌｏｓｐｉｔａｌ、　
　Ｓｔ、　　Ｐａｕｌ、　　Ｈｉｎｎｅｓｏｔａ。

Ｕ、Ｓ、Ａ、 Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ　　５ｐｅｃｉｅｓ、　　ＩＪ
ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆＨｉｎｎｅｓｏｔａ、　　Ｈ
ｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、Ｈｉｎｎｅｓｏｔａ、Ｕ、Ｓ、
Ａ。

Ｃ１ｔｒｏｂａｃｔｅｒ　　５ｐｅｃｉｅｓ、　　ｔｌ
ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｈｉｎｎｅｌ−ｓｏｔａ、
　　Ｈｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、Ｈｉｎｎｅｓｏｔａ、　
　ｔｌ、ｓ、Ａ。

Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ、　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　
ｏｆ　Ｈｉｎｎｅｓｏｔａ。

Ｈｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、　　Ｈｉｎｎｅｓｏｔａ、　
Ｕ、Ｓ、Ａ。

＾ｒｉＺＯｎａ、　ｕｎｔｖｅｒｓｔｔｙ　ｏｒ　Ｈｉ
ｎｎｅＳＯｔａ。

Ｈｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＨｉｎｎｅＳＯｔａ、Ｕ、Ｓ
、Ａ。

Ｙｅｒｓｉｎｉａ、　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｒ　Ｈ
ｉｎｎｅｓｏｔａ、　Ｈｉｎｎｅａ−ｐｏｌｉｓ、　　
Ｈｉｎｎｃｓｏｔａ、Ｕ、Ｓ、Ａ。

ＰｓｅｕｄｏＩＩｌｏｎａｓ　　ａｅｒｕａｉｎｏｓａ
　　（ＡＴＣＣ２７８５３）Ｓｔ。

Ｐａｕｌ　Ｒａ５ｓｅｙ　ｌ１ｏｓｐｉｔａｌ、　Ｓｔ
、　Ｐａｕｌ、　Ｈｉｎｎｅｓｏｔａ。

Ｕ、Ｓ、Ａ。

Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　（ＡＴＣＣ２５９
２２）およびＳｔ。

Ｐａｕｌ　　Ｒａａ＋ｓｅｙ　ｌ１ｏｓｐｉｔａｌ、　
　Ｓｔ、　　Ｐａｕｌ、　　Ｈｉｎｎｅｓｏｔａ。

１１、Ｓ、八。

Ａｃ１ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃ
ｕｓ、　　Ｓｔ、　ＰａｕｌＲａｉｓｅｙ　　Ｉｔｏｓ
Ｄｉｔａｌ、Ｓｔ、　Ｐａｕｌ、旧ｎｎｅｓＯｔａ、　
１１．ｓ、Ａ。

Ｐｒｏｔｅｕｓ　　ｍｏｒｇａｎｉｉ、　　Ｓｔ、　　
Ｐａｕｌ　　Ｒａ５ｓｅｙ　　Ｈｏ５ｐｉｔａｌ。

Ｓｔ、Ｐａｕｌ、Ｈｉｎｎｅｓｏｔａ、　　Ｕ、Ｓ、Ａ
。

Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　　ａｃｒｏｇｅｎｃｓ、Ｓ
Ｌ、Ｐａｕｌ　　Ｒａｍ５ｅｙＨｏｓｐｉｔａｌ、Ｓｔ
、Ｐａｕｌ、Ｈｉｎｎｅｓｏｔａ、　　υ、Ｓ、＾。

−Ｐａ５ｔｃｕｒｅｌｌａ　　（ｓｐｅｃｉｅｓ）、Ｓ
ｔ、Ｐａｕｌ　　Ｒａｍ５ｅｙ）１ｏｓｐｉｔａｌ、Ｓ
ｔ、Ｐａｕｌ、）４ｉｎｎｅｓｏｔａ、　　υ、　Ｓ、
　Ａ。

ＣＤＣＧｒｏｕｐ　　ＩＩ　　Ｆ、　　Ｓｔ、　　Ｐａ
ｕｌ　　Ｒａｍ５ｅｙ　　ｌ１ｏｓｐｉｔａｌ。

Ｓｔ、　Ｐａｕｌ、　Ｈｉｎｎｅｓｏｔａ、　ｔｌ、ｓ
、Ａ。

Ｈｏｒａｘｅｌｌａ、Ｓｔ、Ｐａｕｌ　　Ｒａａ＋ｓｅ
ｙ　１ｌｏｓｐｉｔａｌ、Ｓｔ。

Ｐａｕｌ、ＨｉｎｎｅＳＯｔａ、Ｕ、Ｓ、Ａ。

Ｃ１ｔｒｏｂａｃｔｅｒ　　ｒｒｅｕｎｄｉｉ、　　Ｓ
ｔ、　　Ｐａｕｌ　　Ｒａｍ５ｅｙＨｏｓｐｉｔａｌ、
　Ｓｔ、　Ｐａｕｌ、、　Ｈｉｎｎｅｓｏｔａ、　Ｕ、
Ｓ、Ａ。

例１ 上記のような構造の装置に、装置付属の棒の先細りの溝
を用いて種々の細菌を接種した。細菌の最初の濃度を記
録した。各装置のアンプル中に含まれる発育制限培地は
、つぎの成分を含有した。

０．８グラム　　　ペプトン ０．０３グラム　　デキストロース ２．５グラム　　　リン酸ジカリウム １．２５グラム　　リン酸モノカリウム５．０グラム　
　　塩化ナトリウム ０．２グラムのペプトンおよび１．６グラムのペプトン
を含有する培地溶液もｗＡ製した。

他に４１Ｉの発育制限培地を調製した。それらは、プロ
プオースペプトン、トリプトン、ネオペプトンおよびポ
リペプトンを含有した。これらは、上記処方物中のペプ
トンに代えて加えた。生ずる初期濃度を測定すると、Ｃ
ＦＵ／ｃ、ｃ、でつぎのようである！結果は、各培地に
ついて、３つのｒＡ！ｌ口ットを用いて、それぞれから
５個のサンプルをとった、１５の試料の平均である。

ペプトン　　　　　　プロプオースペプトンＥｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ　　　　１．８Ｘ１０　　　　２
．　ｌＸ１０７Ｓｈｉｇｅｌｌａ　　　　　　　３．　
Ｑｘ　１０　　　　６．　Ｑｘ　１０７にＩｅｂｓｉｅ
ｌｌａ　　　　　　２．７Ｘ１０　　　　３．７Ｘ１０
７Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　　　　　４．５ｘ１０　
　　　４．０Ｘ１０１Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ　　　　
　　７．５ｘ　１０　　　　７．　ＯＸ　１０７Ｐｒｏ
ｔｅｕｓ　Ｈｉｒａｂｉｌｉｓ　　　　４．８Ｘ　１０
　　　　５．６Ｘ　１０７５ａｌＩＩｌｏｎｅｌｌａ　
　　　　　２．８Ｘ１０　　　　４．　ＯＸ　１０７Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　　　　　０．８Ｘ　１０７１
　、９Ｘ　１０７Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ　　　　　　
４．５Ｘ１０１４．５Ｘ１０１Ａｒｉｚｏｎａ　　　　
　　１．５Ｘ１０　　　２．４刈Ｏ７Ｅｄｗａｒｄｓｉ
ｅｌｌａ　　　　　２．４Ｘ１０’Ｙｅｒｓｉｎｉａ　
　　　　　　３．３Ｘ１０７５．　ｌＸ１０１５ｅｒｒ
ａｔｉａ　　　　　　　１．３Ｘ１０　　　　７．５Ｘ
１０’Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ　　　　１．
２Ｘ　１０’細菌の種は上記のようである。

ブランクの所は、接種菌がまちがっていたことを示ず。

−−２，３Ｘ１０７ ５、３Ｘ１０７−　　　　３．３ｘ１０７８、８Ｘ１０
’ ３、６Ｘ１０７ ２．９Ｘ１０７ １、５ｘｌＯ２，９ｘ１０　　　１．８刈０７３、１Ｘ
１０７ −　　　　　６．４Ｘ１０７ ２、９ｘ１０　　　　８．０ｘ１０　　　２３．９ｘ１
０７−　　　　　３．０Ｘ１０７ ２、８ｘ１０’　　　　５．７ｘ１０７４．４ｘ１０７
３、９ｘ１０　　　　３．９ｘ１０７４．４ｘ１０１−
　　　　　２．７ｘ１０７２．６ｘ１０７例２ つぎの材料を１０００ｃ、ｃ、の脱イオン水に溶解し、
１２１度Ｃで１５分間蒸気滅菌した。

０．８グラム　　　ペプトン ０．０３グラム　　デキストローズ ２．５グラム　　　リン酸二カリウム １．２５グラム　　リン酸−カリウム ５．０グラム　　　塩化ナトリウム ０．２グラムのペプトンおよび１．６グラムのペプトン
を含有する培地の溶液もｇＡ製した。それぞれの培地を
用いて発育装置を調製した。発育装置添付の棒を用いて
、法衣に示す種々の細菌の４から５時間までの令、１８
から２４４時間での令の細菌コロニーを釣菌した。各細
菌について５個の発育装置を使用し、各ＩＤＶｉについ
て５試料の平均を求めた。１４種の異なる細菌を使用し
た。それで３種の培地のそれぞれについて、７０個の発
育装置を使用した。各発育装置は回転させ１０秒間混合
し、３５度Ｃでインキュベートした。０、乞 ４．５および６時間後に生きた菌数を数Ｘだ。結果を法
衣に示す。

−へＣｏｃｏ　　マ寸へへ　ののＯ〜　の寸［Ｆ］へ　
■ＯＯ■の（Ｏへへ　Ｎ■ロト　マ［Ｆ］−ａ　Ｏ■■
の　ωへのＯ細　　菌 Ａｒ１ＺＯｎａ Ｅｃｈｖａｒｄｓｉｅｌｌａ Ｙｅｒｓｉｎｉａ Ｓｅｒｒａｔｉ　＆１ｒｃｅｓｃｅｎｓＰｒｏｔｅｕｓ
　ｖｕｌｏａｒｉｓ 表　２（続き） ０時間　　　　１．１　　　　　１．４６　　　　２．
０４時間　　　　４．１　　　　１５．２　　　　１６
．０５時間　　　　４．９　　　　１６．０　　　　２
１．８６時間　　　　４．９　　　　１７．６　　　　
２６．２０時間　　　　２．２　　　　　２．９８　　
　　１．９４時間　　　　２．３　　　　　６．０４　
　　　８．３５時間　　　　２．５　　　　　６．０２
　　　　８．８６時間　　　　２．４　　　　　５．９
　　　　１０．５０時間　　　　３．３　　　　　３，
０２　　　　３．７４時間　　　　５．０　　　　　９
．９　　　　１６．０５時間　　　　５，４　　　　１
１．５　　　　１９．２６時間　　　　６，７　　　　
１３，０　　　　２１．２０時間　　　　１．１　　　
　　１．６２　　　　１．１４時間　　　　５．２　　
　　１０．０　　　　１４．０５時間　　　　６，３　
　　　１６．８　　　　１７．８６時間　　　　６．８
　　　　２６．３　　　　２３．４０時間　　　　１．
７　　　　　１．３６　　　　０．５４ＩＲ間　　　　
６．５　　　　１９．３６　　　７９．２５時間　　　
　６．３　　　　２３．２　　　　３１．４６時間　　
　　７．３　　　　２２，０　　　　３４．５例３ 例２を反復するが、ペプトンに代えてポリトンを用いた
。結果は数表に示す。

！ｔ　　　　　　　　　　　「− ＣＤＣＯ −一　　　−一　　　へへ　へへの０ 例４ 例２を反復するが、ペプトンに代えてネオペプトンを用
いる。結果を法人に示す。

マド−？Ｏｏのｏｔ、ｏＣｆ′３へへＯへののへ　寸寸
へ■細　　菌 ＾ｒｉｚｏｎａ Ｙｅｒｓｉｎｉａ ＥｄｗａｒｄｓｉｅｌＩａ Ｓｅｒｒａｔｉａ　５ａｒｃｅｓｃｅｎｓｐｒｏｔｅｕ
ｓ　ｖｕ１ｇａｒｉｓ 表　４（続き） ６時間　　　　　　　　　　　　− ６Ｆｆｆ間　　　１０．７　　　　２８．４　　　　２
３．２例５ 例２を反復するが、ペプトンに代えてトリーンを使用す
る。結果を法衣に示す。

■０へ？　　（′Ｔ）ＣＯＯＯＯ（！Ｏのへ　■■Ｏマ
〜マド（’Ｊへへの　のの−〇　−唖０■　マ００　　
　■■ωＯ例６ 例２を反復するが、ペプトンに代えてプロテオースベブ
トンを使用する。結果は法衣に示す。

０のＣＤ（′ｖ）マ０ロ　０ヘロ寸　への［Ｆ］Ｏへの
へのへａ：１ＣＤＣＤｃｏのｗ　　ｏｏｏの　ω寸のト
　寸の［Ｆ］０細菌 ＡｒｉＺＯｎａ ＦｄｗａｒｄｓｉｅｌＩａ Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｓｅｒｒａｔｉａ　１ａｒｃｅｓｃｅｎｓＰｒｏｔｅｕ
ｓ　ｖｕ１ｇａｒｉｓ 表　６（続き） ０時間　　　　２．５　　　　　１，９２　　　　２．
７４時間　　　１０．８　　　　１４．２　　　　１５
．００時間　　　　１．６　　　　　１．３　　　　　
１．３４時間　　　　３．６　　　　　５．９　　　　
１０．３５時間　　　　３．４　　　　　８．３　　　
　１２．８６時間　　　　３，９　　　　１０．０　　
　　１５．８０時間　　　　６．４　　　　　３．０　
　　　　５．９４時間　　　１１．４　　　　１２．２
　　　　１３．２５時間　　　１３．４　　　　１８．
０　　　　１９．６６時間　　　１３．４　　　　２２
．４　　　　２６．４０時間　　　　９．９　　　　　
６，１４　　　　６．５４時間　　　２８．０　　　　
２６．２　　　　２５．８５時間　　　２７．６　　　
　３０，２　　　　２７．６６時間　　　３３．８　　
　　３７，８　　　　３５．８０時間　　　　５．２　
　　　　７．６　　　　　７．４４時間　　　１２．６
　　　　１９．６　　　　１８．４５時間　　　１１．
２　　　　２９．４　　　　２７．２６時間　　　１３
．６　　　　３３．２　　　　３３．６例７ 本発明の培地で［７られた結果を、従来からのブロス培
地、たとえばトリブチイック　ンイプロスにより標準技
術を用いて得られた結果と比較してみた。例２に記載と
同じ培地を含有する１００個の発育装置を用意した。患
者より分離した臨床分離細菌１００個を、これらの発育
装置およびに１ｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ試験に対して確立さ
れたスタンダード発育手法を用いて調べた。試験細菌は
つぎに示す。

Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　Ｃｏ１１ Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＰＳＯｕ
ｄｏｌｏｎａＳ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａＡｃｉｎｅｔｏ
ｂａｃｔｅｒ　ｃａｌｏｃｏａｃｅｔｉｃｕｓｐｒｏｔ
ｅｕｓ　ｍ１ｒａｂｉｌｉｓ ｐｒｏｔｃｕｓ　ｍｏｒｇａｎｔ＋ ＥｎｔｅｒＯｂａＣｔｅｒ　ａｅｒＯＱｅｎｅｓ［ｎｔ
ｃｒｏｂａｃｔｅｒ　ｃｌｏａｃａｅＳＯｒｒａｔｉａ
　１ａｒｃＯｎｓｃｌｓＰａｓｔｅｕｒｅｌｌａ　（ｓ
ｐｅｃｉｅｓ）ＣＯＣグループＩＦＦ Ｈｏｒａｘｅｌｌａ Ｃｉｔｏｂａｃｔｅｒ　　　ｒｒｅｕｎｄｉｉ具体的に
は、４から５個の分離されたコロニーを発育装置より取
り出した棒と接触させた。そして棒を用いて発育装置中
の発育培地に接触させた。

全体は３Ｍ商標のインキュベーターモデル１０７中で４
時間インキュベートした。頂部のテープシールを発育単
位のキャップより除き、細菌懸濁液の６から８滴を綿塊
に滴下した。塊は、Ｈｕｃｌｌｅｒ−旧ｎｔｏｎ寒天プ
レート上に３方向に塗抹した。上記の、ｔｈｅ　Ｎａｔ
ｉｏｎａｌ　Ｃｌ１ｎｉｃａｌ　Ｃｏｕ＋目ｔｅｅ　ｆ
ｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ　５ｔａｎｄａｒｄｓ　（Ｎ
ＣＣＬＳ）　　ｏｒ　ｔｈｅ　ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅ
ｓ　ｏｒ　Ａ＋＋ｅｒｉｃａ　、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉ
ｃｓ　５ｕｓｃｅｐｔｉｂｉ−Ｉｉｔｙ　５ｔａｎｄａ
ｒｄに従ってに１ｒｂｙ−Ｂａｕｅｒ試験は実施した。

本発明の発育培地装置を用いて得られた抗生物質感受性
試験の結果を、１８菌発育に対する標準方法に比較して
みた。結果は同じようであった。

例８ つぎの材料を脱イオン水１０００ｃ、ｃ、に溶解し、１
２１度Ｃで１５分間滅菌した。

１．７グラム　　　　トリプテイケース０．３グラム　
　　　フイトン　　　　　　　４゜０．２５グラム　　
　デキストロース ０．５グラム　　　　ＮａＣＩ ０．２５グラム　　　Ｋ２ＨＰＯ４ この例で用いられる発育装置は、培地を直接にその中に
入れである、上記のようなポリプロピレンスリーブであ
る。スリーブには、”　Ｔｙｖｅｃ　”フィルターを含
有するプラスチックキャップでキャップした。この培地
は、寒天プレート上の該細菌の４から５個の］〇ニーよ
り得られた５ｔａｐｈｙｌｏ−ｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｃ
ｕｓの１白金耳を用いて接種した。発育装置は回転させ
て、１０秒間混合した。ついで３５度Ｃでインキュベー
トした。０，１．２．５．４．５．５．５．６．５．１
１．５．１３．５．２３．５および３１時間後に菌数を
数えた。結果として、最初の数はＩ　Ｘ　１０’　ＣＦ
　Ｕ／Ｃ，Ｃ，ｔ’、１１．５時間後に、約１．７から
１．９Ｘ１０８ＣＦ　Ｕ　／ｃ、ｃ、に増加した。そし
て、上記時間／菌数の間隔のあとの方については、実質
的に減少しなかった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の装置の内部断面図である。 第２図は、部分的に断面図とした、本発明の装置の透視
図である。第３図は、本発明の装置の棒の１部の内面図
である。第４図は、その中に細菌の含まれているところ
を示す、第３図の棒状装置である。第５図は、発育培地
に細菌を接種した直後の本発明の装置の断面図である。 第６図は、第５図に示す本発明の装置のライン６−６に
沿った断面図である。第７図は、接種しそして最大安定
相またはあらかじめ定められた発育段階までインキュベ
ートしたあとの本発明の装置の断面図である。 第８図は、第７図をライン８−８に沿って切断した断面
図である。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）予め定められた量の細菌を該細菌の少なくとも一
   つの発育コロニーの表面より釣菌するため棒であつて、
   頂部末端を有する棒状部品および下方のコロニー接触先
   端を有し、該下方先端は該先端の最下端に、細菌を取り
   込む少なくとも一つの溝を有し、該溝は予め定められた
   量の細菌を毛細管作用により取り込むことのできるもの
   である、ことを特徴とする釣菌用棒。
2. （２）該溝の少なくとも１つが先細りの溝である、特許
   請求の範囲第（１）項記載の棒。
3. （３）該頂上末端が、該棒を容器に配置した時に、容器
   の開口部に取り外しできるように適合して、そこをおお
   うための手段を含んでいる特許請求の範囲第（１）項記
   載の棒。
4. （４）予め定められた量の細菌を該細菌の発育コロニー
   の表面から釣菌する方法であつて、特許請求の範囲第１
   項に記載の棒状部品の先端を該コロニーの表面と接触さ
   せ、これにより該予め定められた量の細菌を該先端の溝
   により毛細管作用によつて取り込むことを含む釣菌方法
   。
5. （５）一室に液状培地を含有する容器を既定量の細菌で
   接種する方法であつて、 特許請求の範囲第４項に記載の方法により予め定められ
   た量の細菌を釣菌し： 該細菌を該棒状部品を経て該容器中の培地に隣接して配
   置し；次いで 該細菌と該培地とを相互に接触させる； ことを特徴とする方法。
6. （６）釣菌された細菌の予め定められた量が、該細菌を
   該培地と接触させる場合に、少なくとも５×１０＾６細
   菌／ｍｌに等しい、特許請求の範囲第（５）項記載の方
   法。