JPS63290826A - 特定の抗原に対する免疫応答を刺激する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は特定の抗原に応答する免疫系の調節に関する。

特に２本発明は、逆抑制（ｃｏｎｔｒａｓｕｐｐｒｅｓ
−５ｉｏｎ）を起こさせることによって、これらの抗原
に対する免疫応答を刺激することに関する。

（従来の技術） Ｂ細胞群によって分泌される特定の抗体の力価を上昇さ
せることに加えて、免疫原性を有する外来物質はリンパ
球Ｔ細胞群の応答を刺激する。一般に、　Ｔｉ１ｍには
３つの亜群（すなわち、キラー細胞（またはエフェクタ
ー細胞）、ヘルパー細胞。

およびサプレッサー細胞）が存在すると考えられている
。少し簡単に述べると、ヘルパー細胞群およびサプレッ
サー細胞群は、エフェクター細胞群に反対の効果を及ぼ
す。特に、細胞障害性１９７８球（ＣＴＬ　）の形成と
活性とに影響を及ぼす。

サプレッサー細胞群は、ある程度は自己調節を行ってい
る。すなわち逆に抑制する細胞を包含している。と考え
られる。逆に抑制する細胞が存在するという証拠は他の
研究者によって示されている。これらの証拠には、望ま
しくない反応を防ぐために免疫応答を局在化させる際に
、これらの細胞が必要であるという実験が含まれている
（Ｇｒｅｅｎ　。

Ｄ、Ｒ，ら、　　Ｐｒｏｃ　　Ｎａｔｌ　　Ａｃａｄ　
　Ｓｃｉ　　ＵＳＡ　　（１９８２）　　７９：８８９
；Ｍａｔｔｉｎｇｌｙ、Ｊ、Ａ、ら、　Ｊ　Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ　　（１９７８）　１２１：１８７８）。

コントラサプレッサー細胞は１例えば糖尿病患者（Ｐｔ
ａｋ、Ｗ、ら、　Ｎａｔｕｒｅ（１９８０）　２８３：
１９９）；およびＮＺＢマウス（Ｓｍｉｔｈ、Ｈ，Ｒ，
ら、　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　（１９８２）　１２９　：
２３３２）における自己免疫反応の因子として関係して
いる。ハプテン／ＩｇＧ混合物を注射することによって
、コントラサプレッサー細胞が誘導され、それによって
腫瘍が破壊されるということも示されている（Ｈａｍａ
ｏｋａ＋Ｔ、　　ら、ＬハＬムＬ（１９７９）ユＵ：１
８５）、インビトロおよびインビボにおけるコントラサ
プレッサー細胞の誘導は、抗原だけを用いるか、または
抗体と組み合わせて前培養することによって示されてい
る（Ｇｅｒｓｈｏｎ、Ｒ，に、　ら、Ｌ監ＬＭｅｄ　　
（１９８１）１５３：１５３３；Ｇｒｅｅｎ、Ｄ、Ｒ，
ら、　　ＮＹ　　Ａｃａｄ　　５ｃｉ（１９８２）３９
８：３１８；Ｇｒｅｅｎ、Ｄ、Ｒ，ら、　　Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏ　　Ｔｏｄａ（１９８６）　７　：１８１）。

サプレッサーＴ細胞系の一般的なモデルは、第１図のよ
うな概念図で表される。このカスケードの最終産物（第
１図ではＴｉ３およびｃｓ（コントラサプレッサー細胞
）と名付けられている）は、おそらく反対の効果を及ぼ
すであろう。すなわち。

Ｔｉ３細胞はＴ細胞系の免疫応答を抑制するのに効果的
であると推定され、コントラサプレッサー細胞はＴｉ３
細胞の活性を直接または間接に調節する。

これらの細胞群は、いずれもこのカスケードのＴｓ２細
胞によって分泌される抗イディオタイプのＴｓＦ２因子
によって、ある様式で調節されるか、あるいは該ＴｓＦ
２因子との反応性を有する。　ＴｓＦ２細胞は。

今度はＴｓＰ１因子によって刺激される。このＴｓＦ１
因子はイディオタイプであって、刺激抗原との反応性を
有する一次細胞であるＴｓｌ細胞によって分泌される。

ネズミのハイブリドーマ（Ａ１０と名付けられている）
は、対応するネズミ腫瘍のＰ８１５抗原に応答してＴｓ
Ｆ１因子を分泌する。該因子はこの抗原に対して特異的
である。このようなハイブリドーマは。

５ｔｅｅｌｅ、　Ｊ、に、ら、　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ（
１９８５）１３４：２７６７−２７７８に記載されてい
る。このＴｓＦ１因子のヒトにおける対応物は、扁桃腺
細胞において見い出されている（Ｓｔｅｅｌｅ、　Ｊ、
に、ら、　Ｊ　ｆｍｕｎｏｌ　（１９８５）　１３５：
１２０１−１２０６）。抗原フェレドキシン（Ｆｄ）に
特異的なＴｓＦｌを分泌するハイブリドーマはＦｄｌｌ
と名付けられ。

５ｔｅｅｌｅ、　Ｊ、に、ら、　Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　
（１９８６）、（出版中）に記載されている。さらに、
　ＴｓＰ２を分泌する細胞系（Ａ２９と名付けられてい
る）はＰ８１５抗原に関して抗イディオタイプである。

この細胞系もまた。　５ｔｅｅｌｅ、　Ｊ、に、ら、　
Ｊ　Ｉｍｎ＋ｕｎｏｌ　（１９８６）、（出版中）に記
載されている。

腫瘍細胞の注射と同時にマウスの静脈内に、　ＴｓＦｌ
を発生させるＡＩＯを投与することによって、　Ｐ８１
５腫瘍のインビボにおける増殖が特異的に増強されるこ
と、および該ＴｓＦ１がＰ８１５に特異的なＣＴＬのイ
ンビトロにおける発生を阻害すること、がすでに示され
ている（Ｓｔｅｅｌｅ、　Ｊ、に、ら、　Ｊ　Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ（１９８５）。

１３４：２７２６−２７７８．　（前出）Ｈ５ｔｅｅｌ
ｅ、　Ｊ、に、ら、　「形質転換細胞の誘導および認識
Ｊ　（１９８６）、Ｇｒｅｅｎｅ、Ｍ、Ｉ。

う編、プレナムプレス、ニューヨーク）。

自己免疫疾患やアレルギーの場合のように、免疫系を抑
制することが望ましい場合もあるが、たいていの場合に
は腫瘍や感染性微生物のように有害であり得る外来物質
に対して免疫系が対抗する能力を刺激することの方が望
ましい。従って、特に重要であるのは、正確なタイミン
グでＴｓＦｌを投与することによって、　ＴｓＦｌは、
侵略している腫瘍や病原体の増殖を促進させるよりもむ
しろ、これら侵略者に対する免疫系の有効性を増強させ
るということが見い出されていることである。

（発明の要旨） 本発明は、Ｔ細胞サプレッサー細胞系を調節することに
よって、特定の外来物質に対する免疫応答を刺激する方
法を提供する。抗原を生む外来物質に曝露する前に適当
なＴｓＦｌを投与するか、あるいは有効量のＴａＦ５を
投与することにより免疫応答が増強される。

従って、ある局面では２本発明は特定の抗原に対する被
験体の免疫応答を刺激する方法に関する。

該方法は、このような刺激を必要とする被験体に対し、
該抗原に曝露する前の有効な時点で、該抗原との免疫反
応性を有するＴ細胞サプレッサー因子ＴｓＰ１の有効量
を投与することを包含する。アジュバントは必要ではな
く、この効果が抗原特異的でなければならない場合には
、望ましくない。

第２の局面では９本発明は対応する抗イディオタイプの
ＴａＦ５を投与することによって免疫系を刺激すること
に関する。免疫系における逆抑制を増強する本発明の方
法は、このような処置を゛必要とする被験体に対し、抗
原に関して抗イディオタイプであるＴ細胞サプレッサー
因子ＴｓＦ２の有効量を投与することを包含する。

他の局面では１本発明は上述の方法を実施するのに適当
な薬剤組成物に関する。

特定の抗原に対する免疫応答を増強する上述の方法に適
した本発明の薬剤組成物は、Ｔ細胞サプレッサー因子Ｔ
ｓＦ１の有効量を、薬学的に許容される賦形剤と混合し
た形で含有する。

免疫系における逆抑制を増強する上述の方法に適した本
発明の薬剤組成物は、Ｔ細胞サプレッサー因子ＴｓＦ２
の有効量を、薬学的に許容される賦形剤と混合した形で
含有する。

（発明の構成） 本発明は、適当なＴｓＦ１因子を事前に投与することに
より、特定の病原体または腫瘍に対する免疫応答を刺激
する方法を目的としている。従って。

該方法は免疫感作手順に相当し、曝露が考えられる場合
に必要である。例えば、免疫感作はマラリア、コレラ、
黄熱病などの特定の病気を引き起こす微生物の流行が知
られている地域に入る旅行者に適切である。免疫感作は
また。遺伝的解析により、または家系により、特定の腫
瘍が発生しやすいと思われる人にも適切である。所望の
効果を得るためには、　ＴｓＦ１因子は曝露前３０日と
５日との間。

好ましくは２１日と７日との間、さらに好ましくは１４
〜１０日あたりに投与されるべきである。該因子は２体
重１ｋｇあたり約ｏ、ｉμｇ〜１■の精製ＴｓＦ１因子
を用いて、注射または他の方法で投与される。

投与に際し、該因子はタンパク様物質を投与するのに通
常用いられる方法で処方されるが、アジュバントは用い
られない。典型的には、これらタンパクは静脈注射によ
って投与される。これらタンパクは１例えば、生理的イ
オン強度のリン酸緩衝化食塩水、リンゲル溶液、バンク
溶液などの形態に処方される。このような化合物の適当
な処方物は、レミントンの薬学、最新版、マックパブリ
ッシングカンパニー、イーストン、　ＰＡに記載されて
いる。

ＴａＦ５の注射は、抗原に曝露する前である必要はない
が、ｙｓｎと同時に行うこともできる。

適当なＴｓＦ１因子およびＴｓＦ２因子は、以下に簡単
に述べるような既に開示された技術を用いて、永久増殖
化細胞系から得ることができる。

一般に、所望の因子を分泌する永久増殖化細胞系の調製
には９本発明により達成される目的に適した。当該分野
に公知の免疫感作および永久増殖化技術が用いられる。

被験体である哺乳動物を所望の抗原で免疫感作し、膵臓
または末梢血リンパ球を２例えばＫｏｈｌｅｒおよびＭ
ｉｌｓｔｅｉｎの方法またはウィルス感染により永久増
殖化する。次いで、これら永久増殖化細胞を適当なプロ
トコルにより所望の因子の生産について選抜する。この
ようにして得られた細胞系は所望のタンパク様因子の起
源として用いられる。該因子は、当該分野で理解されて
いるように、これら細胞をインビトロで培養するか、あ
るいは腹水腫瘍として成育させることにより分泌される
。

従って、ハイブリドーマまたは他の永久増殖化細胞を調
製する方法は、一般的に知られているが。

本発明の所望の抗原特異的な因子を得るために重要な点
は、免疫原を適切に選択すること、および因子を分泌す
る調製された永久増殖化細胞の選抜手順を適切に計画す
ることである。

５ｔｅｅｌｅ、　Ｊ、に、ら（前出）の方法と頻偵の方
法を用いれば、いかなる抗原性物質を用いても、該物質
に対して特異的なＴｓＦ１因子を分泌するＴ細胞の生産
を刺激することができる；これらの因子はイディオタイ
プ（ｉｄ”）である０次いで、これらＴｓＦ１因子は、
適当なＴ細胞を永久増殖化し、所望の因子を分泌する細
胞を選抜することにより生産することができる。このよ
うな選択に対する適当な基準は、Ｔ細胞サプレッサー因
子と一般的に反応する抗体との免疫反応性と、抗原との
免疫反応と。

を組み合わせたものである。

このような抗体は、現在入手可能である。特に有用な抗
体は、　８１６Ｇ（Ｍａｉｅｒ、　Ｔ、Ａ、ら、　Ｊ　
Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８３）　１…：１８４３）である
。該抗体は、Ｔサプレッサー因子が抗原特異性を有する
にもかかわらず。

該因子と一般的に反応することが示されている。

該抗体はフォードラ　ロジック　チクノロシーズ。

バンク−バー、ブリティッシュコロンビアから市販され
ている。

永久増殖化Ｔ細胞群をサプレッサー因子に関して選抜す
るのに有用な抗体を用いると、一般に。

いかなる所望のＴｓＦ１成分を生産することも容易にな
る。従って、このような種々の因子を、いかなる所望の
抗原に対しても免疫反応性を有するように調製し得る。

ＴｓＦ１因子はまた。抗イディオタイプ（ｉｄ−）であ
るＴｓＦ２因子の生産に対する免疫原をして有用である
。その手順はＴｓＦｌを調製するための上述の手順と類
似している。ＴｓＦ２因子を調製するのに重要な他方の
局面は、もちろん適当な選抜方法を選択することにある
。ＴｓＦ２因子は抗イディオタイプであるため、該因子
は抗原に擬似的である。さらに。

これら因子は、一般にＴサプレッサー因子と反応する抗
体（例えば、　８１６Ｇ）と反応する。これら２つの性
質を考慮すると１選抜には二重基準が適当である。適当
なＴｓＦｌで免疫感作された動物から得られた永久増殖
化Ｔ細胞を、抗サプレッサー因子抗体（例えば、　８１
６Ｇ）およびイディオタイプ抗原特異的因子の両者と反
応する細胞を選ぶことにより選抜する。この因子はＴａ
Ｆ５を得るのに用いた適当なＴｓＦ１免疫原であるか、
あるいは元の抗原に対しＢ細胞によって分泌された抗体
のいずれかである。このような反応性の組み合わせを用
いることによって、所望のＴｓＦ２因子を分泌するＴ細
胞だけが得られる。

ＴｓＦ１因子は、一般に８０〜９０ｋｄの分子量を有し
。

そして約２５ｋｄのペプチドと結合した４５〜５０ｋｄ
の範囲の分子量を有するサブユニットのへテロダイマー
から構成されている。これら因子は、タンパク様であっ
て、多量の糖が付加している。これら因子は、一般にＴ
細胞サプレッサー因子に特異的な抗体と反応する。そし
て、これら因子は抗原特異的なイディオタイプであるた
め、抗原とも直接反応する。これら因子は抗原に対して
生じた抗体とは反応しない。

ＴｓＦ２因子の分子量は約７０ｋｄである。これら因子
はタンパクであって、Ｉ！が付加されていることもある
。これら因子の性質は充分に解明されている。

これら因子は、一般にＴ細胞サプレッサー因子に特異的
な抗体と反応するが、抗原特異的である。

これら因子は抗イディオタイプであり、従って問題の抗
原に特異的なＴｓＦｌと、およびその抗原に対して生じ
た抗体と反応する。これら因子は抗原自身には結合しな
い。これらの物質は、インビトロにおける分析において
抗原に特異的な細胞障害性リンパ球の発生を抑制し、そ
してさらに、細胞障害性リンパ球の形成を抑制する因子
を肺臓細胞から除去する。

従って、いかなる所望の抗原に関連するＴｓＦｌ因子お
よびＴｓＦ２因子も調製し得る。適当な抗原には。

種々の細菌（例えば、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈ
−ｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）　、ストレプトコッカス（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）　。

およびエセリヒア・コリー（Ｅ、ｃｏｌｉ）　；寄生生
物（例えば、マラリア）；そしてウィルス（例えば。

肝炎、ヘルペス）などに関連する抗原性因子がある。

（以下余白） （実施例） 以下の実施例は本発明を例証するものであって。

制限するものではない。この実施例はマウスで得られた
実験データを示しており、そのデータは。

抗原に曝露する前に投与されたＰ８１５およ、びフェレ
ドキシンＴｓＦ１因子、および随時投与されたＴｓＦ１
因子の免疫応答促進効果を証明している。こ゛れらのデ
ータは、ネズミの系でのこれらの因子の効果を示すもの
であるが、これらのデータは、一般にを推動物、特に哺
乳動物にこの原理を普遍的に適用できることを示す、こ
の因子の種間の反応性は現在のところ知られておらず、
そして、この因子は遺伝的に密接に関連する種に移入し
得るか、もしくは移入し得ない。

裏旌貫上 （材料および方法） ＤＢＡ／２？　ウ７．およびＣＢＡＸＤＢＡ／２　Ｆｌ
　７ウスの雌。

６〜８週令のものをすべての実験で用いた。ＰＢＳ中の
腫瘍細胞を、２００μ２の容量中に１０４個の細胞濃度
で右脇腹に皮下注射で投与した。

ｂ上■ど１ ＡＩＯおよびＦｄｌｌ　ＴｓＦｌは、　ＣＢＡＸＤＢ＾
／２Ｆ１マウス中で腹水腫瘍としてハイブリドーマを増
殖させることにより生産した。このマウスは、注射の７
日前に０．５ｄのプリスタンを、そして注射した日に５
００ラドの放射線が与えられた。多数の細胞（〉１０６
個）を腹腔内に注射し、そして、この目的に用いられる
細胞は、これらの動物に次々投与することにより維持さ
れた。得られた腹水を直ちにＰＢＳで５倍に希釈し、細
胞を遠心分離で除去し。

液体部分を、既報（Ｓｔｅｅｌｅら、　Ｊ、Ｉｎ＋ａ＋
ｕｎｏ１．（１９８５）（前出））のように、セファロ
ース４Ｂに結合したＢ１６Ｇモノクロ一ナル抗体の免疫
吸着カラムにかけた。カラムを過剰のＰＢＳで洗浄し、
吸着物質を氷冷した０、１Ｎ　ＨＣＩで溶出させた。溶
出画分を直ちに中和し、２８０ｎｍの吸収を測定した。

タンパクを含む両分を集め、　　ＰＢＳに対して透析し
、全てを腹水除去後２４時間以内に実験に用いた。全て
の操作は４℃で行った。８Ｍ５１４７　（ここでのすべ
ての細胞系に対するＴ細胞ミエローマ融合相手であり、
＾ＴＣＣから得られる）を対照として用いた。

ＴｓＦ１′　　びＴｓＦ　　　の 選択免疫吸着カラム３つを、シアノーゲンブロマイド活
性化セファロース４Ｂに材料を結合させることにより調
製した。上記材料は以下のものを包含する：　Ｍａｂ　
８１６Ｇ、　Ｐ１８５膜抽出物（両者は、５．０■／ｌ
ｌ１１の割合でビーズに結合させた）、およびＡｌｏＴ
ｓＦｌ分子。このＡＩＯＴｓＦ１分子は、上述のように
精製し、４．０■／ｒ１１の牛血清アルブミンを含むＰ
ＢＳ中において、１．０■／ｄの割合でビーズに結合さ
せた。関係のないＭａｂを含む対照カラム、および８１
６Ｇカラムを通した対照の腹水もまた。調製された。

２５匹のマウス群のマウスのそれぞれの右脇腹に２００
μｉ中１０４個のＰ！８５細胞を皮下注射した。Ｉ。

２、４．６．７．９および１２日目に３匹のマウスを殺
し、肺臓を摘出し、プールした。未処理の対照マウスを
同様に処理した。肺臓細胞をＰＢＳで洗浄し。

標準溶解緩衝液（蒸留水中、　０．１４Ｍ　ＮａＣ１，
１，５ｍＭ’ｇｃｈ＋　１０ｍＭ　　）リスＨＣ１，お
よび０．５％ＮＰ４０．　ｐＨ８．６）で可溶化した。

腫瘍を有するマウスおよび対照のマウスからの可溶性物
質を、まず、　８１６Ｇ免疫吸着材に通し、そして反応
物質を０．１Ｎ　ＨＣＩで溶出した。各両分（ポリクロ
ーナルＴｓＦ１を含有する）を、　ＥＬＩＳＡプレート
上１重炭酸コーティング緩衝液中で倍々希釈し。

滴定した。残りのＴｓＦ１含有溶出液を１次に、　Ｐ８
１５抗原カラムに通し、　Ｐ８１５特異的ＴｓＦ１を含
む反応物質を溶出した。そして、腫瘍を有するマウスお
よび正常のマウスからの各両分を、上述のように。

ＥＬＩＳＡプレート上で滴定した。最後に、残りの８１
６Ｇ溶出物質をＡＩＯＴｓＦ１免疫吸着カラムに通した
。

反応物質（抗イディオタイプＴｓＦ２成分を含有する）
を溶出させ、　ＥＬＩＳＡ法で調べた。

腫瘍を有する動物および対照の動物の両者について、上
述の日数すべてにおいて、上記工程を繰り返して行った
。　ＥＬＩＳＡプレートをコーテイング後４℃にて１８
時間放置し、　ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ中″１０ｕｇ／ｄの
濃度の精製Ｂ１６Ｇ　Ｍａｂを用いて反応させた。プレ
ートにおける最後の反応をアルカリホスファターゼでラ
ベルしたウサギ抗−マウスＩｇを用いて行った。腫瘍を
有する動物からの物質について得られた値を対照の値と
比較することにより、バックグラウンドを越えるレベル
の反応性が測定された。

リエニＬ±り」雇乙１土Δ− ＴｓＦのＣＴＬに対する効果を確かめるために、　ＤＢ
Ａ／２牌臓細胞を■字形底のプレート（Ｌｉｎｂｒｏ　
＃７６−０２３−０５）に８連でプレートした。このプ
レートのウェルには１倍々希釈で１００μβずつが分離
され、その中には、１０６個から１．２５Ｘ１０’個の
細胞が含まれる。Ｐ８１５細胞をＤＢ＾／２マウスの腹
水から得、３回洗浄した。そして２〜６Ｘ１０”細胞／
　ｍａｌの割合で、５０μＩｔ／ｄのマイトマイシンＣ
と共に完全ＲＰ門■培地（ＲＰＭｌ、１Ｏｎ＋Ｍヘベス
、　　５Ｘ１０−’Ｍ　２−メルカプトエタノール、　
１０％ＦＣＳ、ペニシリン／ストレプトマイシン）中、
３７℃にて５％ＣＯｔ雰囲気下で１時間にわたり反応さ
せた。次に、　Ｐ８１５細胞を３回洗浄し、完全ＲＰ旧
に再懸濁させた。２．５　Ｘ　１０’個の細胞を含む１
００μ２を肺臓細胞を含む全てのウェルに加えた。５日
間インキュベートした後。

細胞を再懸濁し、全ウェルから採取される各１０゛０μ
ｆの反応液をＵ字形底プレート（Ｌｉｎｂｒｏ　１１７
６−２４−２０５）に移した。

新鮮なＰ８１５細胞を、１〜％時間にわたり０．２＋ｗ
Ｃｉ／２Ｘ１０’細胞の割合でｓ′Ｃｒによりラベルし
た。細胞を洗浄し、完全ＲＰＭＩ中、５％ＣＯ，雰囲気
下で３７°Ｃにて３〜４時間にわたりインキュベートし
た。

ラベルしたＰ８１５細胞を３回洗浄し、完全ＲＰＭＩに
再懸濁させた。１０４個の細胞を含む１００μｌを、自
然発生的なおよび最大のクロム遊離を計算するために、
全ウェル（ラベルしたＰ８１５のみの８反復試験区２列
を含む）に加えた。プレートを１１００ｒｐにて５分間
遠心分離し１次に５％ＣＯ□雰囲気下で３７℃にてイン
キュベートした。１８時間後に、プレートを再び遠心分
離し、上清１００μｌを、　Ｐ８１５細胞のみの１列以
外の全ウェルから除去した。上記Ｐ８１５細胞のみの１
列においては、最大クロム遊離を計算するために１００
μｌの細胞懸濁液が採取、除去されている。試料をＰｉ
ｃｋｅｒ　Ｐａｃｅ　１ガンマ　カウンターで測定した
。特異的溶解率（％）は次式で計算された： （以下余白） ユ】ｌ吐え 皮下注射された１０’個のＰ２Ｏ８１５細胞で腫瘍細胞
を刺激する７日〜１４日前に、上述のようにアフィニテ
ィー精製したＡＩＯからのＴｓＦ１因子または対照物質
を、　　ＤＢＡ／２マウスに全投与量２０μｇで静脈投
与した。生存期間に関する結果を表１に示す。

表１ 表中のｐ値は適当な対照動物と比較した。Ａ１０を投与
されたマウスの各個体の生存期間に関するスチューデン
トのｔ−検定分析の結果である。表中の実験３において
は、アフィニティー精製ＡＩＯを１６匹の動物に投与し
た。これらのうち８匹にはアフィニティー精製ＡＩＯを
注射したのと同じ日にＰ８１５を注射し、他の８匹はそ
の１０日後にＰ８１５を注射した０両方の場合について
適当なＰＢＳ−処理対照を採用した。統計分析は、　Ａ
ｌ０−処理動物とこれらの適当な対照動物との比較に基
づく。

表１に示されるように、Ａ１０由来のＴｓＦ１因子を腫
瘍の皮下投与に先立って投与することにより生存期間が
著しく延びた。しかし、同時に投与した場合には生存期
間は短くなった。

処理動物および未処理動物の膜におけるＴｓＦ２レベル
は実施例１で述べたように評価された。一般に、　Ｔｓ
Ｆｌの投与はＴｓＦ２レベルの上昇をもたらすことが見
い出された。Ｔｓ２細胞群は標的であり、サプレッサー
細胞カスケードの下流における関係酸　　　分であり得
るので、　ＴａＦ５値の低下は、　ＴｓＦｌの注射によ
り９時間の経過とともに間接的に起こり得る。

従って８第２図に示すように、　ＴｓＦｌが投与されて
いないマウス（三角）は、腫瘍細胞注入後の７日間にわ
たりＴｓＰ２レベルが劇的に上昇した（黒三角）。もち
ろん、対照動物（白三角）はＴｓＦ２レベルに何の変化
もなかった。一方、　１０日前にＴｓＰ１処理（２０μ
ｇ／投与）した動物は０日でＴａＦ５値が上昇し、そし
て腫瘍を注入されていない動物ではＴｓＦ２レベルが低
下し続けた。腫瘍細胞が注入された場合は、急激なＴｓ
Ｆ２レベルの上昇が緩和され、７日目までにＴａＦ２の
レベルは腫瘍細胞を与えていない動物で見られるレベル
に近づいた。

マイトマイシンＣ−処理Ｐ８１５１１１胞と共にインビ
トロで５日間培養したＤＢ＾／２マウスの肺臓細胞にお
けるＰ８１５−特異的ＣＴＬの生産を、実施例１に記述
したようにして測定した。肺臓細胞は、未処理（白三角
）、０日目にＰ８１５を投与（黒三角）、１０日前にＡ
ｌ０（ＴｓＦｌ　）を投与して０日目にＰ８１５を投与
しない（白四角）、または投与した（黒画角）マウスか
ら得た。その結果、　　ＣＴＬ活性はＴｓＦｌを１０日
前に投与した場合に増大することが示された。４゜８、
および１２２日目測定したＣＴＬレベルについて。

これらの結果を第３図に示す。予期されたように。

通常、腫瘍細胞に曝露されなかった培養物（白四角およ
び白三角）は曝露された培養物よりも低いＣＬＴレベル
を示した。最高レベルは、１０日前にＰ８１５−特異的
ＴｓＦ１処理した培養物（黒画角）で得られた。第３図
に示すように、一般に、　ＴｓＦｌの投与はインビトロ
でのＣＴＬ生産の増加を引き起こす。

１施■工 特定の抗原と関連したＴｓＦｌの応答の特異性は。

基準として抗体の形成を用いてインビボで示された。

ＤＢＡ／２マウスに２０μｇのアフィニティー精５Ｆｄ
ｎＴｓＦ１またはＡＩＯＴｓＦｌ、またはＰＢＳを静脈
注射した。

これら７６スを１０日間休ませた後、５０％完全ソロイ
ンドアジュバントに乳化させたＦｄおよびＫＬＨ（各２
０　ｕ　ｇ）の両方で皮下免疫した（０日目）。これら
のマウスを２１１日目採血し、同様の方法で２８日目に
追加免疫し、再び３５日目に採血した。これらの血清を
、上述のようにＦｄおよびＫＬＨの両方に対する抗体の
存在について標準ＥＬＩＳＡで検査した。

ＤＢＡ／２マウスは、全てのＬ２°マウスと同様にフェ
レドキシンに対して完全に非応答性であるので２通常は
フェレドキシンに対する抗体が生じないと予期された。

この分析の結果により、　ＴｓＦｌ　（１０日前に投与
した場合にＦｄｌｌ細胞系により分泌される）はＤＢＡ
／２マウスをフェレドキシン応答状態に変えたが、　Ｋ
Ｌｆｌ応答には何ら影響を与えず；　ＡＩＯの投与はい
ずれの応答にも何ら影響を与えないことが示された。

（発明の要約） サプレッサーカスケードにおいて分泌される因子は、適
当に投与された場合に、特定の抗原に応答する免疫系の
抑制に対して逆の作用を及ぼすのに有効である。　Ｔｓ
Ｆ２因子は抗原に先立って投与するか、あるいは抗原と
同時に投与し得る；　ＴｓＦ１因子は、このような所望
の効果を表すためには、抗原の投与に先立って投与しな
ければならない。

４　　′′　　の　　　なＵ 第１図はサプレッサーＴ細胞系の一般的なモデルを表す
概念図；第２図は腫瘍の移植に応答して形成されるＴｓ
Ｆ２のレベルが、　ＴｓＦｌを事前に投与するかしない
かに依存することを表す図；第３図はＴｓＦｌで事前に
処理を行ったかまたは行わなかったマウスから採取した
腫瘍細胞と混合された肺臓細胞のインビトロ培養物にお
けるＣＴＬのレヘルを表す図である。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、特定の抗原に対する免疫応答を増強する方法であっ
   て、 このような増強を必要とする被験体に対し、該抗原に曝
   露する前の有効な時点で、該抗原との免疫反応性を有す
   るＴ細胞サプレッサー因子ＴｓＦ１の有効量を投与する
   ことを包含する方法。 ２、前記被験体が哺乳動物である特許請求の範囲第１項
   に記載の方法。 ３、前記抗原が腫瘍抗原である特許請求の範囲第１項に
   記載の方法。 ４、前記時点が曝露前３０日と５日との間である特許請
   求の範囲第１項に記載の方法。 ５、前記時点が曝露前２１日と７日との間である特許請
   求の範囲第１項に記載の方法。 ６、免疫系における逆抑制を増強する方法であって、 このような処置を必要とする被験体に対し、抗原に関し
   て抗イディオタイプであるＴ細胞サプレッサー因子Ｔｓ
   Ｆ２の有効量を投与することを包含する方法。 ７、前記被験体が哺乳動物である特許請求の範囲第６項
   に記載の方法。 ８、特許請求の範囲第１項に記載の方法に適した薬剤組
   成物であって、 Ｔ細胞サプレッサー因子ＴｓＦ１の有効量を、薬学的に
   許容される賦形剤と混合した形で含有する薬剤組成物。 ９、特許請求の範囲第６項に記載の方法に適した薬剤組
   成物であって、 Ｔ細胞サプレッサー因子ＴｓＦ２の有効量を、薬学的に
   許容される賦形剤と混合した形で含有する薬剤組成物。