JPS63283578A - 組み換えワクチニアウイルス - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は組み換えワクチニアウィルスに関し、さらに詳
しくは、ワクチニアウィルスの増殖に非必須なゲノムＤ
ＮＡ領域に牛バラインフルエンザ■型ウィルス由来のｃ
ＤＮＡが組み込まれた組み換えワクチニアウィルス及び
同ｃＤ　Ｎ　Ａに関する。

（従来の技術） 近年、ワクチニアウィルスに外来性ＤＮＡを組み込んだ
組み換えワクチニアウィルスの構築法が考案され、外来
性ＤＮＡとして、例えば感染症ウィルスの抗原コードＤ
ＮＡを用いた組み換えワクチニアウィルスを生ワクチン
として利用する方法が提案されるようになった（例えば
特開昭５８−１２９９７１号、特公表昭６０−５００５
１８号、特公表昭６１−５０１９５７＠など）。

しかしながら、過去、牛バラインフルエンザ■型ウィル
スの抗原コード遺伝子をワクチニアウィルスに組み込ん
だ例はなく、また、牛パラインフルエンザ■型ウィルス
そのものの遺伝子解析についてもほとんど情報がなく、
ワクチニアウィルスに外来性ＤＮＡとして牛バラインフ
ルエンザ■型ウィルス由来の抗原コードｃＤ　Ｎ　Ａを
組み込むことはほとんど不可能な状態にあった。

（発明が解決しようとする問題点） そこで本発明者らは、かかる従来技術の下で牛バライン
フルエンザ■型ウィルス由来の抗原コードｃＤ　Ｎ　Ａ
がゲノムＤＮＡ中に組み込まれた増殖可能な組み換えワ
クチニアウィルスの構築を目指し鋭意検討を進めた結果
、牛バラインフルエンザ■型ウィルスのＣＤ　Ｎ　Ａよ
りヘマグルチニン・ノイラミニダーゼ（以下場合により
ＨＮと称す）をコードする領域を選択しワクチニアウィ
ルスのプロモーターに連結しワクチニアウィルスの増殖
に非必須なゲノム領域に組み込めば増殖可能な組み換え
ワクチニアウィルスが得られることを見い出し本発明を
完成するに至った。

（問題点を解決するための手段） かくして本発明によれば、牛パラインフルエンザ■型ウ
ィルス由来の抗原をコードするｃＤ　Ｎ　Ａ及び同ＣＤ
　Ｎ　Ａをワクチニアウィルスの増殖に非必須なゲノム
領域に、好ましくはプロモーター機能を有するＤＮＡと
共に、発現可能な形で組み込まれた組み換えワクチニア
ウィルスが提供される。

本発明において組み換えウィルスの作製に供されるウィ
ルスはワクチニアウィルスに分類されるウィルスであれ
ばいかなるものでもよく、例えばＷＲ株（ジャーナル　
オブ　ヴイロロジー先１゜８５７、（１９８４）、リス
ター株、リスター株の温度感受性変異株（ＵＳＰ４．５
６７．１４７）Ｎｅｗ　　Ｙｏｒｋ　Ｂｏａｒｄ　　ｏ
ｆ　　Ｈｅａｌｔｈ株、ＬＣｌ　６１８株などの種痘ワ
クチン株くワクチン抗原用ベクターとしてのワクチニア
ウィルス°“Ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓｅｓ　ａｓ　
　ｖｅｃｔｏｒｓ　ｆｏｒ　Ｖａｃｃｉｎｅ　　Ａｎｔ
ｉｇｅｎｓ　”ｐｐ、８７−１００．ジエイ、キンナン
（Ｊ。

Ｑｕｉｎｎａｎ、　）編アムステルダム、ニューヨーク
およびオックスフォード：エルセバー社）（Ｅ　１ｓｅ
ｖｉｅｒ　）版）などが例示される。

また牛バラインフルエンザ■型ウィルス（以下ＢＰＩＶ
３という）、由来のヘマグルチニン・ノイラミニダーゼ
をコードするｃＤ　Ｎ　Ａは、例えば上記ＢＰＩ　Ｖ３
のＭ株（インフエクション・アンド・イミユニティ　Ｉ
　ｎｆｅｃｔｉｏｎ　　ａｎｄ　ｌ　ｍｍｕｎｉ＄ｙ　
３支、２６２〜２６７．１９８１）や９１ＯＮ株（マイ
クロバイオロジー・アンド・イミュノ０ジー　　Ｍ　１
ｃｒｏｂｉｏｌｏ（ＩＶ　ａｎｄ　　Ｉ　ｕ＋ｕｎｏｌ
ｏｇＶ　２３　、　６１７〜６１８．１９７９）を用い
て調製することができる。

例えば上記Ｍ株から調製されたｃＤ　Ｎ　Ａは第５図に
示すごとき配列を有する全部で１７１６塩基対から構成
されており、また９１ＯＮ株から［４されるＣＤ　Ｎ　
Ａは１７１６塩基対中３７番目、３９番目、５０番目、
９５１目、３５９番目、５３７番目、５７７番目及び１
３２５番目の計８つが他の塩基に置換された構造を有し
ている（第６図参照）。このようにＢＰＩＶ３由来のＨ
Ｎ遺伝子をコードするｃＤＮＡの配列は必ずしも一様で
はないが、本発明においては、上記二種類のｃＤ　Ｎ　
Ａと実質的に同一の機能を有する範囲において、修飾さ
れたｃＤＮＡ（即ち、塩基配列が置換、挿入、欠失した
もの）であってもよい。もちろん、実質的に同一の機能
を有するかぎり、アミノ酸配列が異なる程度に修飾され
たものであってもよい。

本発明を実施するに当たっては、まずワクチニアウィル
スの増殖に非必須なりＮＡｍ域を組み込んだ第一の組み
換えベクターが作製される。同領域内にワクチニアウィ
ルス内で機能するプロモーターが含まれているものが好
ましい。ここで言う増殖に非必須なりＮＡ領領域は、例
えばワクチニアウィルスのチミジンキナーゼ（ＴＫ）ｍ
転子、血球凝集素（ＨＡ）遺伝子、ワクチニアウィルス
ＷＲ株ＤＮＡのＨｉｎｄｌ［Ｉ切断Ｆフラグメント、Ｍ
フラグメント、Ｎフラグメント（ウィルスＬＬ（１）。

２３−３３．（１９８６））など、外来性ＤＮＡの挿入
による変異を受けても実質上ウィルスの増殖に影響を及
ぼさない領域を言う。

また、ワクチニアウィルス内で機能するプロモーターと
は、合成・天然を問わずワクチニアウィルスが保有する
転写の系でプロモーターとして有効に機能しえるものな
らいかなる塩基配列のものでも良く、その具体例として
は例えばジャーナルオブ　ヴイロロジ−６６２−６６９
（１９８４）に示されるようなワクチニアウィルスのプ
ロモーター具体的には７．５にポリペプチドをコードす
るワクチニアウィルス遺伝子のプロモーター、１９にポ
リペプチドをコードするワクチニアウィルス遺伝子のプ
ロモーター、４２にポリペプチドをコードするワクチニ
アウィルス遺伝子のプロモーター、チミジンキナーゼを
コードするワクチニアウィルス遺伝子のプロモーター、
２８にポリペプチドをコードするワクチニアウィルス遺
伝子のプロモーターなどが例示される。

第一の組み換えベクターの作製については常法に従えば
良く、例えばワクチニアウィルスの増殖に非必須なりＮ
Ａ断片を適当なベクターに組み込んだ後、必要に応じて
該断片中に存在する制限酵素切断点を利用しその下流に
υ１限酵素切断配列を付加したプロモーターを組み込め
ば良い。用いられるベクターの具体例として、例えばｐ
Ｂ　Ｒ３２２、ｌ）Ｂ　Ｒ３２５、ｌ）Ｂ　Ｒ３２７、
１１８Ｒ３２８。

ｐＵｃ７．ｐＵｃ８．１）ＵＯ３，ｐＵｃ１９などのご
ときプラスミド、λファージ、Ｍ１３ファージなどのご
ときファージ、ｐＨＣ７９（ジーン、４．２９１．１９
８０年）などのごときコスミドが例示される。

本発明においては、次いで、第一の組み換えベクターの
プロモーターの下流に牛パラインフルエンザ■型ウィル
スのヘマグルチニン・ノイラミニダーゼをコードする領
域を挿入して第二の組み換えベクターが作製される。挿
入方法もまた常法に従えば良く、例えば第１のベクター
のプロモーターの下流に予め設けられた制限酵素切断点
を利用して牛パラインフルエンザ■型ウィルス由来のＣ
Ｄ　Ｎ　Ａ断片を挿入すれば良い。

これら第−及び第二の組み換えベクターの構築に当たっ
ては遺伝子操作の容易な大腸菌の系を用いれば良く、使
用するプラスミドベクターも目的に相応しいものである
限り特に限定されるものではない。

本発明においては、次に、予めワクチニアウィルスを感
染させた動物培養ＩＩ胞に第二の組み換えベクターを移
入し、ベクターＤＮＡとウィルスゲノムＤＮＡの間に相
同組み換えを起こさせ、組み換えワクチニアウィルスを
構築する。ここで用いられる動物培養細胞はワクチニア
ウィルスが増殖可能なものであればよく、その具体例と
して、例えばＴＫ−１４３（ヒト骨肉腫由来＞、ＦＬ（
ヒト羊膜由来）、Ｈｅ＋ａ（ヒト子宮頚部癌由来）、Ｋ
Ｂ（ヒト碍咽喉癌由来）、ＣＶ−１（サル腎由来）、Ｂ
１０−１（サル腎由来）、ＲＫ１３（ウサギ腎由来）、
Ｌ９２９（マウス結合組織由来）、ＣＥ（鶏胚）−細胞
、ＣＥＦ（鶏胎児繊維芽細胞）などが例示される。

組み換えワクチニアウィルスの構築に当たっては常法に
従えば良く、例えば、ＤＮＡクーロニング第２巻（ＤＮ
Ａ　　ｃｌｏｎｉｎｇ　■ｏｌｕｍｅ　■）　、実際的
なアプローチ＜ａ　ｐｒａｃｔｔｃａ＋　ａｌ）Ｉ）ｒ
ｏａｏｈ）　ｐｐ、　１９１−２１１、ディ、エム、グ
ローバー（Ｄ　　ＭＱｌｏｖｅｒ）編、（ＩＲＬプレス
、オツクスフオード、ワシントン）の記述に準じてワク
チニアウィルスを感染させたＣＶ−１細胞にリン酸力ル
シュウム共沈法により処理した第二の組み換えベクター
を移入させ、椿られる組み換えウィルスを含むウィルス
集団をＥａａｌｅ　　ＭＥＭ上に培養されたＴＫ陰性細
胞に感染させＢＵｄＲ存在下生育してくるプラークを選
択し、組み換えウィルス候補株とすれば良い。これら候
補株の内から牛パラインフルエンザ■型ウィルスのヘマ
グルチニン・ノイラミニダーゼをコードするＤＮＡ断片
が組み込まれたウィルスを選択する方法については、候
補株をプラーク純化したのち、該ＤＮＡをプローブとす
るハイブリダイゼーション法を利用するか、あるいは、
抗生バラインフルエンザ■型ウィルス抗体を用いるイム
ノアッセイを利用すれば良い。

（発明の効果） かくして本発明によれば、ワクチニアウィルスの増殖に
一非必須なゲノム領域に牛バラインフルエンザ■型ウィ
ルス由来の抗原コードＣＤ　Ｎ　Ａがプロモーター機能
を有するＤＮＡと共に発現可能な形で組み込まれた、牛
用生ワクチンとして利用可能な、組み換えワクチニアウ
ィルスが得られる。

（実施例） 以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。

１１１と ＋１１　　Ｂ　Ｐ　Ｉ　Ｖ　３感染細胞からの−ＲＮＡ
の抽出ヒト胎児肺由来株化細胞Ｒ６６にＢＰＩＶ３Ｍ株
を感染させ、ウィルスを増殖後、培養液を除去し、そこ
にアクチノマイシンＤ含有５％ＴＰＢ−ＭＥＭを加え更
に培養し、培養液を除去する。こうして調製したウィル
ス感染細胞よりグアニジウム溶液による抽出と塩化セシ
ウム密度勾配遠心（細胞工学、ｖｏｌ　、２．Ｎｏ　、
２．１９８３）により全ＲＮＡを分離した。

上記全ＲＮＡをＴＥ　（トリスＥＤＴＡ）溶液としたの
ち、吸着バッファー（ＴＥ　ｐＨ７，５＋０．５Ｍ　　
ＮａｃＪ）で平衡したオリゴｄＴセルロースカラムを用
いて全ＲＮＡから−ＲＮＡを分離した。

（り　岡山−バーブ法によるＢＰＩＶ３ＭＫ３Ｉｌ伝子
を含むプラスミドの構築（第１図参照）プラスミドｐｃ
ＤＶ−１（ファルマシア製）を制限酵素ＫｐｎＩで消化
後、ターミナルトランスフェラーゼ（ＴＴａｓｅ）でｄ
Ｔ！Ｑを付加し、さらに制限酵素ＥＣ０ＲＩで切断後、
長い方のＤＮＡ断片（約２．９Ｋｂｐ）を分離・回収し
、ベクタープライマーを得た。

一方プラスミドｐＬ１（ファルマシア製）を制限酵素Ｐ
ＳｔＩで消化後、１’−１”ａｓｅでｄＧ鎖を付加し、
さらに制限酵素１−１ｉｎｄｌｌで切断後、最も短かい
断片（約０．５Ｋｂｐ）を分離・回収しリンカ−ＤＮＡ
＠得た。

次いで（１）で得たＩＲＮ　Ａと、先ぎに調製したｐｃ
Ｄ　Ｖ　１ベクターブライマーを混合し、アニーリング
したのち、リバーストランスクリブターゼ（ＲＴａｓｅ
）を加えＣＤ　Ｎ　Ａ合成を実施し、更にＴ　Ｔ　ａｓ
ｅによるｄＣ鎖付加反応を実施した。これを制限酵素）
−１ｉｎｄｌｌｌで消化した。消化後、先に調製したｔ
）Ｌ１由来リンカ−ＤＮＡを加え、アニーリングｌＤＮ
Ａリガーゼによりライゲーション反応を行ない、環状化
した。その後、ＤＮＡリガーゼ、ＤＮＡポリメラーゼ■
、ＲＮａｓｅＨを加え、ＲＮＡ鎖のＤＮＡ鎖への置換反
応を実施し、生成した組み換えプラスミドを大１！１ｌ
ＨＢ１０１コンピテントセルに導入し、得られた形質転
換菌の中から目的の）ＬＮ遺伝子を含む組み換えプラス
ミド（Ｍ１７６）を有する形質転換菌を以下に述べる手
順により選択した。

＋３）　　Ｂ　Ｐ　Ｉ　Ｖ　ａ　Ｍ株ＨＮ遺伝子を含む
組み換えプラスミドＭ１７６のスクリーニング ヴイロロジ−１５５，６８８〜６９６（１９８６）に記
載の方法に従って組み換えプラスミドのスクリーニング
を行なう。即ち、上述の如く調製した形質転換菌につい
てＢＰＩＶ３　９１ＯＮ株ゲノムＲＮＡをプローブとす
るコロニーハイブリダイゼーションを行ない、ポジイテ
ィブな菌を選択した。それらの菌に含まれるプラスミド
をＳＶ４０でトランスフオームされたＣＶ−１１１胞（
ＣｏＳ細胞）にリン酸力ルシュウーム法により、トラン
スフェクションしたのち、続生化学実験講座５免疫生化
学研究報ｐ６６〜７７に記載の方法に従って一次抗体と
してＨＮに対する単クローン抗体（ヴイロロオジ−１５
５、（ｐ６８８〜６９６（１９８６）参照）、二次抗体
としてイソチアン酸フルオレセイン抗体結合抗マウスＩ
（ＩＧ抗体を用いる螢光抗体法によってヘマグルチニン
・ノイラミニダーゼの発現を確認した。

＋４）ＨＮ３Ｉｌ伝子の塩基配列の解明組み換えプラス
ミドＭ１７６を制限酵素’ｆ３ａｌＨＩで切断し、約１
．９Ｋｂｌ）のｌ−Ｉ　Ｎ遺伝子を含むＤＮＡ断片を得
た。この断片についてＭ１３ファージを用いるメツシン
グら方法（ジーンユ。

Ｐ、２６９．（１９８２）、サイエンス２４１゜Ｐ、１
２０５　（１９８１））により配列分析を行なった。

その結果、ＣＤＮΔの塩基配列は第０図に示す通りであ
り、そのうちＨＮ遺伝子に相当する部分は第１から第１
７°１６番までであることが判明した。この塩基配列か
らＨＮのアミノ酸配列は第■図に示すメチオニンに始ま
りセリンで終る５７２のアミノ酸からなるものであるこ
とが判明した。

（５）　　ワクチニアウィルスチミジンキナーゼ（ＴＫ
）遺伝子を含む第１の組み換えベクター（ｃ＋ＵＨＫ）
の作製（第２図参照） ｐＵｃ９をＥＣ０ＲＩ及びＰＳｔＩで消化後、ポリメラ
ーゼで処理し、切断端を平滑末端したのち、連結し、Ｅ
ＣｏＲＩ部位の欠損したｐｔＪ　Ｃ９を作製した。この
Ｅ（ＯＲｉ部位欠損ｐＵｃ９をＨｉｎｄｌｌｌで切断後
、ワクチニアウィルスＴＫ遺伝子を含むワクチニアウィ
ルスＷＲ株のＨｉｎｄｎｌＪ断片に連結し、第１の組み
換えベクターｐＵ　ＨＫを得た。

（６）　　ポリリンカー及びワクチニアウィルス７．５
にプロモーターが挿入されたワクチニアウィルスＴＫ遺
伝子を含む第二の組み換えベクターｐＮＺ６８に２の作
製（第３図参照）ワクチニアウィルスＷＲ株の７．５プ
ロモーター（モスら、セル上２５、ｐ、８０５〜８１３
．１９８１年）をｐＵｃ１９（ファルマシア社製）のＨ
ｉｎＣＩＩ部位に挿入したのち、）−１ｉｎｄｌ［とＥ
ｃｏＲＩで順次切断して７．５にプロモーターの前後に
ポリリンカ一部位を有するＤＮＡ断片（約３５０ｂｐ）
を得た。

このＤＮＡ断片（第３図参照）を（５）で得たプラスミ
ドｐＵ　ＨＫのＥＣ０ＲＩ消化物とをポリメラーゼで処
理したのち、連結し、得られた組み換えプラスミドをｐ
Ｎ　Ｚ　６８　Ｋ　２と命名した。

［７１７，５ブローＥ−ター＋７）下ａにＢＰ［Ｖ３　
　Ｍ型のＨＮ遺伝子を挿入した第二の組み換えプラスミ
ド（ＤＮ　Ｚ　６８　Ｋ　２　ＨＮ　）の作製（第４図
参照）（３）で冑だＢＰＩＶａＭ株のｍＲＮ　Ａ由来の
ＨＮ遺伝子を有するプラスミド（Ｍ１７６）をＢａ１ｌ
ｌＩで消化した後、ＨＮ遺伝子を含む約１．９Ｋｂｐの
断片を分離した。次いでこの断片を（６）で作製したプ
ラスミドｐＮ　Ｚ　６８　Ｋ　２のＢａ１−！１消化物
に連結し、得られたプラスミドをｐＮＺ６８に２ＨＮと
命名した。ｐＮ　Ｚ　６８　Ｋ　２中にＢＰＩＶ３ＨＮ
遺伝子が存在することはこのプラスミドで大腸菌Ｈ８１
０１株を形質転換し、プラスミドを抽出、３ａｍＨＩで
消化しアガロース電気泳動で約１．９Ｋｂｐの断片が得
られることにより確認した。また、ＥＣ０ＲＩで消化し
、同様に電気泳動を実施、８．４Ｋｂ＋）、１７Ｋｂｐ
の断片が得られることによりワクチニアウィルス７．５
にプロモーター遺伝子に対し正方向にＨＮ遺伝子が挿入
されていることを確認した。

（８）　　粗換えワクチニアウィルスの作出２５Ｃ１１
２のカルチャーボトルに培養されたＣＶ−１１Ｂ胞にワ
クチニアウィルスＷＲ株（０，１ｐｆｕ　／細胞）を接
種し、４５分後、前記の組換えプラスミドｏＮＺ６８に
２ＨＮ１２μｑ　を２．２ｍ（の減菌水で溶かし、樋高
ら（白質、核酸、酵素、２７，３４０．１９８５）の方
法によってＤＮＡ−リン酸カルシウム共沈物をつくり、
そのＱ、５ｍＪを感染ＣＶ−１細胞上に滴下した。３０
分間３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターに静置し、５
％牛脂児血清を含むＥａｇｌｅ　　ＭＥＭ４．５１１１
Ｊ！を加えた。その３時間後培養液を交換し、４８時間
摸、培養細胞ごと３度凍結融解し、超音波処理（３０秒
）した。

組換え体のＨＮ遺伝子挿入を確認するため、６ｃｍのペ
トリ皿に培養されたＴＫ陰性（ＴＫ−）１４３細胞に上
記プラーク形成ウィルスを接種し、４５分後、１％寒天
、１２％牛脂児血清、２５μ（１／　　ｕ！Ｂｕｄ　　
Ｒ加　　Ｅａｇｌｅ　　ＭＥＭを積層し、３日間培養後
感染細胞を０．０１％中性紅で染色した。形成されたプ
ラークをパスツールピペットで単離しＥａｇｌｅ　　Ｍ
ＥＭ中に希釈する。単離したプラークにつき、再度同様
の操作を繰り返しプラークを純化した。純化したプラー
クより得られたウィルスを増殖させ、増殖ウィルスより
ＤＮＡを調製し、ヘマグルチニン・ノイラミニダーゼを
コードするｃＤ　Ｎ　Ａをプローブとするドツトプロッ
トハイブリダイゼーションにより、得られた組み換えワ
クチニアウィルスが牛パラインフルンザ３型ウィルスＭ
株由来のヘマグルチニン・ノイラミニダーゼをコードす
るＤＮＡをゲノム内に持つ組み換えウィルスであること
を確認した。

（９）組換え体の細胞での発現 組織培養用チャンバースライドに培養したＣＶ−１細胞
に、ｓ、ｏ、ｉ、１又は０．１の本発明「フィルス株（
７ＨＮＷＲ）を接種し、３７℃、１時間感染後ウィルス
液を抜きとり、細胞をＥａｇｌｅＭＥＭで洗浄し、５％
牛脂児血清、４０μｇ／ｍ℃シトシンアラビノシド加Ｅ
ａｇｌｅ　　ＭＥＭを加えた。１６時間後、Ｅａｇｌｅ
　　ＭＥＭを除き、軽くＰＢＳ　（リン酸緩衝生理食塩
水）で洗い、軽く風乾した後、−２０℃アヒトン：エタ
ノール（１：１）中５分間処理し細胞を固定する。−次
抗体として抗生パラインフルエンザ３型ウイルス・ウナ
ギ抗体、二次抗体としてイソチアン酸フルオレセイン結
合抗ウサギＩ（ＩＧ抗体を使用する螢光抗体法でチェッ
クし、組み換えワクチニアウィルスが牛バラインフルエ
ンザ３型ウィルスのヘマグルチニン・ノイラミニダーゼ
蛋白生産能を持つことを確認した。

実施例２ ＢＰＩＶａＭ株のかわりにＢＰＩＶ３　９１ＯＮ株を使
うこと以外は実施例１とまったく同様な操作を実施した
ところ、やはり同様に牛パラインフルエンザ３型ウィル
スのへマグルチニン・ノイラミニダーぜをコードするＣ
Ｄ　Ｎ　Ａが組み込まれた組み換えワクチニアウィルス
が得られた。なお、９１ＯＮ株由来のｃＤ　Ｎ　Ａの塩
基配列は全部で１７１６個の塩基配列中８個の塩基配列
がＭ株由来のｃＤ　Ｎ　Ａとは異なっていた。その塩基
配列とアミノ酸配列は第６図に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図はＭ１７６、第２図はｐＵ　ＨＫ、第３図はＤＮ
２６８に２、第４［ｉｌｔ　ｐＮＺ６８に２ＨＮの構築
手順を、また第５図及び第６図はそれぞれ生パラインフ
ルエンザｍ型つィルスＭ株及同９１ＯＮ株由来のヘマグ
ルチニン・ノイラミニダーゼをコードするｃＤ　Ｎ　Ａ
の塩基配列及びアミノ酸配列を示す。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）ワクチニアウイルスの増殖に非必須なゲノム領域
   に牛パラインフルエンザIII型由来のヘマグルチニン・
   ノイラミニダーゼをコードするｃＤＮＡの全部又は一部
   を組み込んだ組み換えワクチニアウイルス。
2. （２）該ｃＤＮＡがプロモーターの支配下にある特許請
   求の範囲第１項記載の組み換えワクチニアウイルス。
3. （３）該ｃＤＮＡが第５図のアミノ酸配列又はそれと実
   質的に同一機能を有するポリペプチドをコードするもの
   である特許請求の範囲第１項又は第２項記載の組み換え
   ワクチニアウイルス。
4. （４）該ｃＤＮＡが第５図の塩基配列またはそれと実質
   的に同一の機能を持つ塩基配列を有するものである特許
   請求の範囲第１項又は第２項記載の組み換えワクチニア
   ウイルス。