JPS63271141A - 試料中の過酸化水素の測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ａ産業上の利用分野 本発明は、過酸化水素の測定方法の改良に関するもので
ある。

Ｂ発明の概要 試薬の添加を伴う測定系を用いて試料中の過酸化水素を
測定する場合、添加する試薬中には微量の過酸化水素が
存在するために、低濃度領域においては該過酸化水素が
測定を妨害し、高感度の測定を行うことができず、充分
な測定精度も得られなかった。

本発明は、測定系に使用する試薬に無機触媒を添加して
該試薬中に存在する過酸化水素を分解除去し、これらの
過酸化水素による測定妨害を除去することにより、高感
度かつ高精度の測定を行うことを可能とするものである
。

Ｃ従来の技術 試料中の過酸化水素を正確に定量することは、各種の分
析を行う上で極めて有用である。例えば臨床検査分野に
おいては、生体中のグルコース、コレステロール、アミ
ノ酸、ポリアミン等の成分を、過酸化水素を最終計測信
号物質として分析する方法が多く採用されている。また
、グルコースオキシダーゼ等の酸化酵素を抗原抗体の標
識酵素として酵素免疫測定法を行う場合においても過酸
化水素を最終計測信号として分析が行われる。従って、
過酸化水素の高感度分析は、生体成分の分析等において
極めて有力な手段となるものである。

上記の分析方法は、測定対象とする物質について例えば
酸化反応等を起こさせ、該反応の際に発生する過酸化水
素を、例えば化学発光法等により定量し、検量線に基づ
いて測定対象とする物質の量を求めるものである。

現在においては、過酸化水素の測定方法として比色法、
化学発光法等による方法が行われているが、その基礎技
術は広く一般化され、分析法として確立されている。

上記のような各種の方法の中でも、発光物質ルミノール
を触媒とともに用いて過酸化水素を測定する方法は、極
めて有力な測定手段として注目されている。

Ｄ発明が解決しようとする問題点 上記のような発光物質を触媒とともに用いて過酸化水素
を測定する方法は、一般に過酸化水素濃度が１０−’ｍ
ｏｌ／ｌ以下の低濃度においては検量線の直線性が悪く
、低濃度になるにつれてバックグラウンドの影響が大き
くなる。すなわち、前記発光物質中には過酸化水素が微
量存在しており、低濃度領域においては該発光物質中の
過酸化水素が測定を妨害する。このため、過酸化水素濃
度が低濃度になればなるほど反応によって生じる過酸化
水素を正確に定量するのが困難となるという問題点があ
った。

本発明はかかる問題点を解決するためになされたもので
、過酸化水素が上記のような低濃度領域においても、検
出感度が高く、測定精度のよい測定方法を提供すること
を目的とするものである。

Ｅ問題点を解決するための手段 本発明に係る方法は、上記のような測定系に使用する発
光物質等の試薬に無機触媒を添加して反応を生じせしめ
、該試薬中に存在している過酸化水素を分解除去するこ
とにより、上記問題点を解決したものである。

Ｆ作用 本発明においては、測定系に使用する発光物質等の試薬
に無機触媒を添加して反応を生じせしめ、該試薬中に存
在している過酸化水素を分解除去することにより、反応
によらない過酸化水素量が減少し、これらの測定妨害が
なくなる。その結果、検量線の直線性がさらに低い濃度
領域まで確保される。

Ｇ実施例 以下、本発明の実施例について説明する。

（実施例１） 発光試薬であるルミノールに、触媒として白金（白金黒
コ牛丼化学薬品（株）製、−級）を添加し、攪拌した。

その溶液を濾過して前記白金を除去する。以下この濾過
液を「溶液Ａ」とする。

次に、測定試料である過酸化水素溶液０．１ｍｌに、溶
液Ａ　０．５ｍｌ及びマイクロペルオキシダーゼ０．５
ｍｌを添加し、その際に生じる発光の量を、ルミノメー
タ　ＵＰＤ−８０００（（株）明電舎製）により測定を
する。

（実施例２） 発光試薬であるルミノールに、触媒としてパラジウム（
パラジウム黒：牛丼化学薬品（株）製。

−級）を添加し、攪拌した。その溶液を濾過して前記白
金を除去する。以下この濾過液を「溶液Ｂ」とする。

次に、測定試料である過酸化水素溶液０．１ｍｌに、溶
液Ｂ　Ｏ，５ｍｌ及びマイクロペルオキシダーゼ０．５
ｍｌを添加し、その際に生じる発光の１を、ルミノメー
タ　ｕｐｏ−ａｏｏｏにより測定する。

なお、各実施例と比較するために、過酸化水素溶液０．
１ｍｌに、白金を添加しないルミノールを使用して上記
と同様の方法により過酸化水素を測定する。

第１図及び第２図はそれぞれ実施例１及び実施例２によ
る方法を示す工程図、第３図は比較例を示す工程図であ
る。

第４図は過酸化水素濃度と発光量の関係を示す図である
。図において、・はルミノールをそのまま使用した比較
例の検量線、Ｏは実施例１の検量線、△は実施例２の検
量線を示す。

図から分かるように、ルミノールをそのまま使用した比
較例の検量線は、過酸化水素濃度が１０−７ｍｏｌ／ｌ
より低濃度領域においてバックグラウンドの影舌が現わ
れるのに対し、実施例１及び実施例２の両実施例の検量
線とも、過酸化水素濃度が１０−８ｍｏｌ／ｌ程度まで
バックグラウンドの影響が比較的小さいものとなってい
る。すなわち、過酸化水素の検出感度が、比較例では１
０−’　、ｍｏｌ／ｌであるのに対し、両実施例とも１
０−’　ｍｏｌ／ｌと向上している。また、両実施例と
も、１０−’　ｍｏｌ／ｌ以下の濃度領域における直線
性も向上している。

上記のように、実施例１．２ともほぼ同様の結果が得ら
れた。両実施例における効果をまとめると、以下の通り
である。

■　無機触媒を用いることにより、測定系に使用する試
薬溶液（ルミノール）中に存在する測定阻害物質を除去
することができる。

■　■の方法を用いることにより、バックグラウンドの
影響が過酸化水素が低濃度となるまで現われず、検量線
のブランク値が減少し、過酸化水素濃度が１０−’　ｍ
ｏ１７１程度の低濃度領域まで測定することができるよ
うになり、検出感度が向上する。

■■の方法を用いることにより、１０−’　ｍｏｌ／ｌ
以下の低濃度領域における検量線の直線性が向上し、最
終計測信号として過酸化水素を用いる分析法の測定精度
が向上する。

次に、本発明を適用する測定装置の一例を第５図に示す
。

本装置の要点は、測定試料中に添加するルミノール等の
化学発光試薬と、マイクロペルオキシダーゼ等の触媒を
、ポンプを介して注入するための配管経路中に、白金、
パラジウム等の無機触媒を充填したカラムを挿入し、前
記試薬溶液自身の中に含まれているこれらの阻害物質を
減少させることにより、バックグラウンドを減少させ、
より高感度な過酸化水素の測定を可能にするものである
。

図において、１はルミノール等の化学発光試薬の入った
試薬タンク１．２はマイクロペルオキシダーゼ等の触媒
の入った試薬タンク２．３は各試薬を搬送する試薬送液
ポンプ、４は白金等の無機触媒を充填した無機触媒充填
カラム、５は測定用の暗室、６は発光を測定するための
光電子増倍管である。

上記の装置による過酸化水素の測定結果も前記実施例の
結果と同様のものが得られている。

Ｈ発明の効果 本発明は以上説明した通り、測定系に使用する試薬に無
機触媒を添加し、該試薬中に存在している過酸化水素を
分解除去することにより、反応によらない過酸化水素量
が減少し、これらの過酸化水素による測定妨害がなくな
る。その結果、検量線の直線性がさらに低い濃度領域ま
で確保されるので、検出感度が高くなり、測定精度も向
上するといる効果がある。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の第一実施例を示す工程図、第２図は本
発明の第二実施例を示す工程図、第３図は本発明との比
較例の方法を示す工程図、第４図は過酸化水素濃度と発
光量との関係を示す図、第５図は本発明を適用する測定
装置の一例を示す構成図である。 代理人　弁理士　佐　藤　正　年 第１図 実施例Ｉ ｉａ ■ γ容イ・夜Ａ 反応２　　　　試験管 １〜１５秒間の発光量ヲＬＬＩＭＩＮＯＭＥＴＥＲＵＰ
Ｄ−８０００テ測定試験管 １〜１５秒間の発光ｉヲＬＵＭＩＮＯＭＥＴＥＲＵＰＤ
−８０００テ１ｌｌｌｌ定Ｃｋ　　　　Ｃ家　　　　ｇ ヤ

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）試料中の過酸化水素を、試薬の添加を伴う測定系
   を用いた定量法により測定する方法において、 前記試薬に無機触媒を添加することにより試薬中に存在
   している過酸化水素の分解除去を行うことを特徴とする
   試料中の過酸化水素の測定方法。
2. （２）前記無機触媒は白金またはパラジウムのいずれか
   であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の試
   料中の過酸化水素の測定方法。
3. （３）前記試薬の添加を伴う測定系を用いた定量法は、
   化学発光法であることを特徴とする特許請求の範囲第１
   項または第２項記載の試料中の過酸化水素の測定方法。