JPS63263098A - Ｎａｄｈ又はｎａｄｐｈのペルオキシダ−ゼによる定量法 - Google Patents
Ｎａｄｈ又はｎａｄｐｈのペルオキシダ−ゼによる定量法Info
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- JPS63263098A JPS63263098A JP9818187A JP9818187A JPS63263098A JP S63263098 A JPS63263098 A JP S63263098A JP 9818187 A JP9818187 A JP 9818187A JP 9818187 A JP9818187 A JP 9818187A JP S63263098 A JPS63263098 A JP S63263098A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野コ
本発明は、ＮＡＤＨにジアホラーゼを使用させるか又は
ＮＡＤＰＨに旧黄色酵素を作用させることによって過酸
化水素を生成させ、この過酸化水素をペルオキシダーゼ
によって酸化発色させてＮＡＤＨやＮＡＤＰＨを定量す
る方法であって、特にＮＡＤＨやＮＡＤＰＨの過酸化水
素への転換効率を向上させると共に酸化発色収率を向上
させた方法に関するものである。
ＮＡＤＰＨに旧黄色酵素を作用させることによって過酸
化水素を生成させ、この過酸化水素をペルオキシダーゼ
によって酸化発色させてＮＡＤＨやＮＡＤＰＨを定量す
る方法であって、特にＮＡＤＨやＮＡＤＰＨの過酸化水
素への転換効率を向上させると共に酸化発色収率を向上
させた方法に関するものである。
［従来の技術］
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ”）や
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド燐酸（ＮＡＤＰ
”）は、デヒドロゲナーゼによって触媒される非常に多
くの酸化還元反応に関与することが知られている。従っ
て、これらの補酵素が酵素反応に関与して生じる還元型
（ＮＡＤＨ，ＮＡＤＰ［（）を定量することは、酵素活
性や基質量を測定するという観点からも重要なことであ
り、従来からもＮＡＤＨやＮＡＤＰＨを定量する為の各
種の方法が提案されている。特に、近年はＮＡＤＨをジ
アホラーゼやフェナジンメトサルフェート（ＰＭＳ）等
によって過酸化水素を発生させ、この過酸化水素によっ
てペルオキシダーゼの酸化発色を行なわせる方法が検討
されている。この方法によれば、還元性発色色素に導く
ホルマザン発色法と比べて、分析機器を汚染するという
問題が回避でき、又分子吸光係数の面から高感度化が達
成されると共に、現在普及しているペルオキシダーゼに
よる酸化発色法の統一化を図るという面からも有利であ
る。
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド燐酸（ＮＡＤＰ
”）は、デヒドロゲナーゼによって触媒される非常に多
くの酸化還元反応に関与することが知られている。従っ
て、これらの補酵素が酵素反応に関与して生じる還元型
（ＮＡＤＨ，ＮＡＤＰ［（）を定量することは、酵素活
性や基質量を測定するという観点からも重要なことであ
り、従来からもＮＡＤＨやＮＡＤＰＨを定量する為の各
種の方法が提案されている。特に、近年はＮＡＤＨをジ
アホラーゼやフェナジンメトサルフェート（ＰＭＳ）等
によって過酸化水素を発生させ、この過酸化水素によっ
てペルオキシダーゼの酸化発色を行なわせる方法が検討
されている。この方法によれば、還元性発色色素に導く
ホルマザン発色法と比べて、分析機器を汚染するという
問題が回避でき、又分子吸光係数の面から高感度化が達
成されると共に、現在普及しているペルオキシダーゼに
よる酸化発色法の統一化を図るという面からも有利であ
る。
［発明が解決しようどする問題点］
しかしながら、この方法においても下記の様な若干の問
題が残されている。
題が残されている。
上記の方法ではＮＡＤＨやＮＡＤＰＨから過酸化水素を
発生させる過程において、その反応系内で部分的に電子
還元が進行してスーパーオキサイド（０□−）が生じる
のであるが、ペルオキシダーゼを反応系に共存させてお
くと、前記ｏ２−がペルオキシダーゼと結合してコンプ
レックス■！と呼ばれる複合体を形成する。この様な複
合体形成反応は、水素供与体である色原体の共存下にお
いて署しく促進される傾向があり、ここに形成された複
合体は、カタラーゼ作用を発揮して０２−を分解する性
質を有している。従って反応系に０２−が生成する場合
には、この０２−がペルオキシダーゼのカタラーゼ作用
の為に迅速に消費されてしまい、その結果過酸化水素を
生成させる為の０２−が不足するのでＮＡＤＨやＮＡＤ
ＰＨの全てが消費されて過酸化水素を発生するとは限ら
ず、理論上期待されるレベルの酸化発色が得られないと
いう問題があった。換言するならば上記方法ではペルオ
キシダーゼによるカタラーゼ作用が、０２−の過酸化水
素への自然不均化反応よりも速く進行してしまい、期待
通りの効果が得られないことが多い。この様な不都合を
回避する手段として、例えばペルオキシダーゼの添加時
期を上記自然不均化反応が終了した後にするということ
も考えられるが、自然不均化反応は一必ずしもそれほど
早く進行する訳ではなく、又作業を２段階で行なう必要
があるので繁雑である。
発生させる過程において、その反応系内で部分的に電子
還元が進行してスーパーオキサイド（０□−）が生じる
のであるが、ペルオキシダーゼを反応系に共存させてお
くと、前記ｏ２−がペルオキシダーゼと結合してコンプ
レックス■！と呼ばれる複合体を形成する。この様な複
合体形成反応は、水素供与体である色原体の共存下にお
いて署しく促進される傾向があり、ここに形成された複
合体は、カタラーゼ作用を発揮して０２−を分解する性
質を有している。従って反応系に０２−が生成する場合
には、この０２−がペルオキシダーゼのカタラーゼ作用
の為に迅速に消費されてしまい、その結果過酸化水素を
生成させる為の０２−が不足するのでＮＡＤＨやＮＡＤ
ＰＨの全てが消費されて過酸化水素を発生するとは限ら
ず、理論上期待されるレベルの酸化発色が得られないと
いう問題があった。換言するならば上記方法ではペルオ
キシダーゼによるカタラーゼ作用が、０２−の過酸化水
素への自然不均化反応よりも速く進行してしまい、期待
通りの効果が得られないことが多い。この様な不都合を
回避する手段として、例えばペルオキシダーゼの添加時
期を上記自然不均化反応が終了した後にするということ
も考えられるが、自然不均化反応は一必ずしもそれほど
早く進行する訳ではなく、又作業を２段階で行なう必要
があるので繁雑である。
本発明はこうした従来技術のもつ問題点を解決する為に
なされたものであって、その目的とするところは、ＮＡ
ＤＨやＮＡＤＰＨから過酸化水素への発生効率を向上さ
せると共に酸化発色収率を向上させ、ＮＡＤＨやＮＡＤ
ＰＨを迅速且つ高感度に定量し得る様な方法を提供する
ことにある。
なされたものであって、その目的とするところは、ＮＡ
ＤＨやＮＡＤＰＨから過酸化水素への発生効率を向上さ
せると共に酸化発色収率を向上させ、ＮＡＤＨやＮＡＤ
ＰＨを迅速且つ高感度に定量し得る様な方法を提供する
ことにある。
［問題点を解決する為の手段］
上記目的を達成し得た本発明とは、ＮＡＤＨにジアホラ
ーゼを作用させるか又はＮＡＤＰＨに旧黄色酵素を作用
させ、生成する過酸化水素に色原体及びペルオキシダー
ゼを作用させて酸化発色させ、この発色強度を測定する
ことによりＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨを定量する方法にお
いて、前記ベオキシダーゼに不均化反応促進剤を共存さ
せた点に要旨を有するＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨのペルオ
キシダーゼによる定量法である。
ーゼを作用させるか又はＮＡＤＰＨに旧黄色酵素を作用
させ、生成する過酸化水素に色原体及びペルオキシダー
ゼを作用させて酸化発色させ、この発色強度を測定する
ことによりＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨを定量する方法にお
いて、前記ベオキシダーゼに不均化反応促進剤を共存さ
せた点に要旨を有するＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨのペルオ
キシダーゼによる定量法である。
［作用〕
本発明は上述の如く構成されるが、要は上記一連の反応
系においてペルオキシダーゼに不均化反応促進剤を共存
させることにより、ペルオキシダーゼによるカタラーゼ
作用の反応よりも、ｏ２−の過酸化水素への不均化反応
の進行を促進させたものである。このことによってＮＡ
ＤＨやＮＡＤＰＨから迅速に過酸化水素を発生せしめる
と共に、酸化発色収率を向上させることに成功したもの
である。
系においてペルオキシダーゼに不均化反応促進剤を共存
させることにより、ペルオキシダーゼによるカタラーゼ
作用の反応よりも、ｏ２−の過酸化水素への不均化反応
の進行を促進させたものである。このことによってＮＡ
ＤＨやＮＡＤＰＨから迅速に過酸化水素を発生せしめる
と共に、酸化発色収率を向上させることに成功したもの
である。
ＮＡＤ）Ｉから過酸化水素を発生するにはジアホラーゼ
の存在が必要であるが、このジアホラーゼはその起源に
よってＮＡＤＨオキシダーゼ作用に違いが認められる。
の存在が必要であるが、このジアホラーゼはその起源に
よってＮＡＤＨオキシダーゼ作用に違いが認められる。
例えば豚心臓由来のジアホラーゼは上記作用が強いこと
が知られている。
が知られている。
そこで本発明者らは自然不均化反応を促進させるという
趣旨のもとで、ＮＡＤＨオキシダーゼ作用の強いジアホ
ラーゼをＮＡＤＨに作用させることをまず試みた。しか
しながらこの場合においてもペルオキシダーゼと色原体
を共存させた状態では、得られる酸化発色量は依然とし
てＮＡＤＨの酸化量に対応しないものであった。この知
見は、既知量の過酸化水素を添加して分子吸光係数を調
べたり、或はペルオキシダーゼを自然不均化反応終了後
に加えて酸化発色させること等によりて確認できた。但
し自然不均化反応終了後にペルオキシダーゼを添加させ
る方法は、本発明方法と比べて時間的にも能率的にも劣
ることは既に述べた通りである。
趣旨のもとで、ＮＡＤＨオキシダーゼ作用の強いジアホ
ラーゼをＮＡＤＨに作用させることをまず試みた。しか
しながらこの場合においてもペルオキシダーゼと色原体
を共存させた状態では、得られる酸化発色量は依然とし
てＮＡＤＨの酸化量に対応しないものであった。この知
見は、既知量の過酸化水素を添加して分子吸光係数を調
べたり、或はペルオキシダーゼを自然不均化反応終了後
に加えて酸化発色させること等によりて確認できた。但
し自然不均化反応終了後にペルオキシダーゼを添加させ
る方法は、本発明方法と比べて時間的にも能率的にも劣
ることは既に述べた通りである。
次に、本発明者らは不均化反応促進剤としてスーパーオ
キサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）を選び、この促進剤を
含む下記の組成の試薬を用い、ＮＡＤＨの過酸化水素変
換による酸化発色反応を行なった。即ち下記組成の試薬
に０．１ｍｊＺのＮＡＤＨ（１ｍＭ）を添加し、波長５
５３ｒ＋ａ＋における吸光度の増加によって酸化発色反
応を検討した。
キサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）を選び、この促進剤を
含む下記の組成の試薬を用い、ＮＡＤＨの過酸化水素変
換による酸化発色反応を行なった。即ち下記組成の試薬
に０．１ｍｊＺのＮＡＤＨ（１ｍＭ）を添加し、波長５
５３ｒ＋ａ＋における吸光度の増加によって酸化発色反
応を検討した。
（試薬）
Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピ
ル）−ｍ−トルイジンナトリウム（ＴＯＯＳ：０．２％
） ・・・０゜６Ｉ１１１ ４−アミノアンチピリン（４−ＡＡ：’０．２％）・・
・０．３１１１ＪＺ ペルオキシダーゼ（９００／ ｍＩＬ） −０，１
ｍＪＺジアホラーゼ（豚心臓由来＋ ２０００７＋ｎｕ
）・・・Ｏ，１ｍ４ Ｓ ＯＤ （１’０ＯＬＩ／ｍｕ ）
−０，１ｍ４Ｔ ｒｉｓ −Ｆｌ ｃ ｉ Ｍｉ衝
ン夜 （０，１Ｍ、 ＰＨ８，１）・・・ｌ。７ｍｊ
２ 尚比較の為に、自然不均化反応終了後に（Ｎ Ａ Ｄ
Ｈ添加５分後）にペルオキシダーゼを添加した場合、及
び促進剤としてのＳＯＤを添加しない場合についても同
様に実験した。
ル）−ｍ−トルイジンナトリウム（ＴＯＯＳ：０．２％
） ・・・０゜６Ｉ１１１ ４−アミノアンチピリン（４−ＡＡ：’０．２％）・・
・０．３１１１ＪＺ ペルオキシダーゼ（９００／ ｍＩＬ） −０，１
ｍＪＺジアホラーゼ（豚心臓由来＋ ２０００７＋ｎｕ
）・・・Ｏ，１ｍ４ Ｓ ＯＤ （１’０ＯＬＩ／ｍｕ ）
−０，１ｍ４Ｔ ｒｉｓ −Ｆｌ ｃ ｉ Ｍｉ衝
ン夜 （０，１Ｍ、 ＰＨ８，１）・・・ｌ。７ｍｊ
２ 尚比較の為に、自然不均化反応終了後に（Ｎ Ａ Ｄ
Ｈ添加５分後）にペルオキシダーゼを添加した場合、及
び促進剤としてのＳＯＤを添加しない場合についても同
様に実験した。
これらの結果を第１図に示すが、第１図中のトレースＣ
は本発明方法に従った場合であり、トレースＢはＳＯＤ
を添加しない場合、トレースＡは自然不均化反応終了後
にペルオキシダーゼを添加した場合の夫々の結果を示し
ている。
は本発明方法に従った場合であり、トレースＢはＳＯＤ
を添加しない場合、トレースＡは自然不均化反応終了後
にペルオキシダーゼを添加した場合の夫々の結果を示し
ている。
第１図の結果から下記の様な知見が得られる。
トレースＡの結果は、酸化発色のレベルが自然不均化反
応後の過酸化水素量を反映したものであるが、このトレ
ースＡの結果に比ベトレースＢの結果は明らかに酸化発
色のレベルが低いものであった。尚ＳＯＤを添加しない
場合については、色原体量、ジアホラーゼ量及びペルオ
キシダーゼ量を変えて種々検討したが、トレースＢの結
果とほぼ同様の結果しか得られなかった。
応後の過酸化水素量を反映したものであるが、このトレ
ースＡの結果に比ベトレースＢの結果は明らかに酸化発
色のレベルが低いものであった。尚ＳＯＤを添加しない
場合については、色原体量、ジアホラーゼ量及びペルオ
キシダーゼ量を変えて種々検討したが、トレースＢの結
果とほぼ同様の結果しか得られなかった。
これに対しトレースＣ（本発明方法による場合）の結果
は、酸化発色のレベルがトレースＡとほぼ同様のレベル
に達しており、過酸化水素はペルオキシダーゼの共存下
においても充分に生成していることが理解される。尚ト
レースＡの結果については、波長３４０＋＋ｍにおける
吸光度によってＮＡＤＨ減少量と酸化発色量について調
査したが、両者に対応した値を示していることが確認さ
れた。
は、酸化発色のレベルがトレースＡとほぼ同様のレベル
に達しており、過酸化水素はペルオキシダーゼの共存下
においても充分に生成していることが理解される。尚ト
レースＡの結果については、波長３４０＋＋ｍにおける
吸光度によってＮＡＤＨ減少量と酸化発色量について調
査したが、両者に対応した値を示していることが確認さ
れた。
この様に本発明方法では反応系に不均化反応促進剤を共
存させることによって従来の不都合を解消し得たもので
あるが、用いる不均化反応促進剤としては上記ＳＯＤ以
外に、ガラクトースオキシダーゼ、Ｆｅ−ＥＤＴＡ、Ｍ
ｎ−ＥＤＴＡ、銅イオン及びペプタイド結合性銅イオン
等が挙げられる。但し本発明はこれらの種類に限定され
るものではない。これらの不均化反応促進剤はいずれか
１種を選んで用いればよいが、場合によっては２種以上
を組合わせて用いる様にしてもよい。
存させることによって従来の不都合を解消し得たもので
あるが、用いる不均化反応促進剤としては上記ＳＯＤ以
外に、ガラクトースオキシダーゼ、Ｆｅ−ＥＤＴＡ、Ｍ
ｎ−ＥＤＴＡ、銅イオン及びペプタイド結合性銅イオン
等が挙げられる。但し本発明はこれらの種類に限定され
るものではない。これらの不均化反応促進剤はいずれか
１種を選んで用いればよいが、場合によっては２種以上
を組合わせて用いる様にしてもよい。
又Ｍｉ街液に関しても上記Ｔｒｉｓ −ＨＣＪ２緩衝液
に限らず、従来から用いられている適当なｋＪｌｉ液を
用いればよい。更に上記実験では色原体としてＴＯＯＳ
や４−ＡＡ等を用いた場合について示したが、本発明で
用いる色原体に関しても上記のものに限らず、他のもの
を選んで適宜反応系を設定すればよい。
に限らず、従来から用いられている適当なｋＪｌｉ液を
用いればよい。更に上記実験では色原体としてＴＯＯＳ
や４−ＡＡ等を用いた場合について示したが、本発明で
用いる色原体に関しても上記のものに限らず、他のもの
を選んで適宜反応系を設定すればよい。
上記実験例ではＮＡＤＨについてのみ述べたが、本発明
はＮＡＤＰＨを定量する場合についても通用できるもの
であり、その場合にはジアホラーゼの代りに旧黄色酵素
を上記実験におけるジアホラーゼと同程度の単位数で添
加すればよい。
はＮＡＤＰＨを定量する場合についても通用できるもの
であり、その場合にはジアホラーゼの代りに旧黄色酵素
を上記実験におけるジアホラーゼと同程度の単位数で添
加すればよい。
ＮＡＤＰＨに作用させる旧黄色酵素としては、イースト
菌由来のものが例示できる。
菌由来のものが例示できる。
本発明は基本的にはＮＡＤＨやＮＡＤＰＨ等を定量する
為の方法であるが、これらの生成に関与する脱水素酵素
を共存させることも可能であり、このことによって脱水
素酵素活性や基質等を測定することができる。
為の方法であるが、これらの生成に関与する脱水素酵素
を共存させることも可能であり、このことによって脱水
素酵素活性や基質等を測定することができる。
一方本発明で用いる試薬の各組成の濃度範囲についても
何ら限定するものではなく、例えば脱水素酵素を共存さ
せる場合にはその酵素の至適反応条件によって適宜設定
すればよい。
何ら限定するものではなく、例えば脱水素酵素を共存さ
せる場合にはその酵素の至適反応条件によって適宜設定
すればよい。
次に、本発明者らが不均化反応促進剤としてのＳＯＤの
効果について検討した結果を第２図に示す。これはＳＯ
Ｄ以外は上記試薬組成に従い、ＳＯＤについてはその濃
度を変化させて添加（添加量は同じ）したものである、
又ＮＡＤＨ添加量に関しても上記実験と同様である。
効果について検討した結果を第２図に示す。これはＳＯ
Ｄ以外は上記試薬組成に従い、ＳＯＤについてはその濃
度を変化させて添加（添加量は同じ）したものである、
又ＮＡＤＨ添加量に関しても上記実験と同様である。
第２図の結果から明らかな様に、５００７ｍ１以上のＳ
ＯＤの添加で酸化発色は飽和状態を示した。しかもこの
発色量は、第１図のトレースＡに一致するものであった
。
ＯＤの添加で酸化発色は飽和状態を示した。しかもこの
発色量は、第１図のトレースＡに一致するものであった
。
［実施例］
５ＯＤ（５０ＬＩ／ｍｕ最終濃度）を加えた場合と加え
ない場合とについて、下記の反応組成でＮＡＤＨを定量
した。
ない場合とについて、下記の反応組成でＮＡＤＨを定量
した。
（反応組成）
ＴＯＯ３（０，２％） ・・・０．６ｎ１
４−ＡＡ（０，２％） −０，３ｍｆｌ
ペルオキシダーゼ（ｑｏｕ／ｍ４） ”Ｊ、１ｍＱ
ジアホラーゼ（２０００／ｍｊ２ ） ＝Ｊ、
１ｍＡＳ ＯＤ （１５０００／ ａｌｌ ）
−−−０，１ｒｎｌｌＴｒｉｓ−）１ｃｕＩＪ
ｔ街液（０，１Ｍ、 Ｐ Ｈ８，１）・・・１．７ｍ
ｆｌ 上記反応組成（ＳＯＤを添加しない場合はＳＯＤを含ま
ないもの）に、０．ｂｏｌの各種濃度のＮＡＤＨを添加
した。
４−ＡＡ（０，２％） −０，３ｍｆｌ
ペルオキシダーゼ（ｑｏｕ／ｍ４） ”Ｊ、１ｍＱ
ジアホラーゼ（２０００／ｍｊ２ ） ＝Ｊ、
１ｍＡＳ ＯＤ （１５０００／ ａｌｌ ）
−−−０，１ｒｎｌｌＴｒｉｓ−）１ｃｕＩＪ
ｔ街液（０，１Ｍ、 Ｐ Ｈ８，１）・・・１．７ｍ
ｆｌ 上記反応組成（ＳＯＤを添加しない場合はＳＯＤを含ま
ないもの）に、０．ｂｏｌの各種濃度のＮＡＤＨを添加
した。
その結果を第３図に示すが、第３図の結果から明らかな
様に、ＳＯＤを添加した場合（Ｏ印）に比べてＳＯＤを
添加しない場合（・印）ではその発色量が少ない。尚第
３図における縦軸は波長５５３ ｎ＋ａにおける吸光度
を示し、横軸は添加量０、ｌａｌ中のＮＡＤＨ濃度を示
している。この様にＳＯＤの添加によって、ＮＡＤＨの
酸化に対応する発色量が得られた。
様に、ＳＯＤを添加した場合（Ｏ印）に比べてＳＯＤを
添加しない場合（・印）ではその発色量が少ない。尚第
３図における縦軸は波長５５３ ｎ＋ａにおける吸光度
を示し、横軸は添加量０、ｌａｌ中のＮＡＤＨ濃度を示
している。この様にＳＯＤの添加によって、ＮＡＤＨの
酸化に対応する発色量が得られた。
［発明の効果コ
以上述べた様に本発明法によれば、反応系中にＳＯＤ等
の不均化反応促進剤を共存させることによって、ＮＡＤ
ＨやＮＡＤＰＨからの過酸化水素形成効率を向上させる
と共に酸化発色収率を向上させ、ＮＡＤＨ（ｂＮＡＤＰ
Ｈを迅速且つ高感度に定量し得る様になった。
の不均化反応促進剤を共存させることによって、ＮＡＤ
ＨやＮＡＤＰＨからの過酸化水素形成効率を向上させる
と共に酸化発色収率を向上させ、ＮＡＤＨ（ｂＮＡＤＰ
Ｈを迅速且つ高感度に定量し得る様になった。
第１図は各種条件下におけるＮＡＤＨの酸化発色の吸光
度変化を示すグラフ、第２図はＳＯＤ添加量と発色度と
の関係を示すグラフ、第３図はＳＯＤを加えた場合と加
えない場合においてＮＡＤＨを測定した結果を示すグラ
フである。 保ｆｉ：Ｊ略 （［有］） ピ Ｅ 藝■ υ μフ Ｕ】 味
度変化を示すグラフ、第２図はＳＯＤ添加量と発色度と
の関係を示すグラフ、第３図はＳＯＤを加えた場合と加
えない場合においてＮＡＤＨを測定した結果を示すグラ
フである。 保ｆｉ：Ｊ略 （［有］） ピ Ｅ 藝■ υ μフ Ｕ】 味
Claims (2)
- （１）ＮＡＤＨにジアホラーゼを作用させるか又はＮＡ
ＤＰＨに旧黄色酵素を作用させ、生成する過酸化水素に
色原体及びペルオキシダーゼを作用させて酸化発色させ
、この発色強度を測定することによりＮＡＤＨ又はＮＡ
ＤＰＨを定量する方法において、前記ペルオキシダーゼ
に不均化反応促進剤を共存させたことを特徴とするＮＡ
ＤＨ又はＮＡＤＰＨのペルオキシダーゼによる定量法。 - （２）前記不均化反応促進剤が、スーパーオキシドジス
ムターゼ、ガラクトースオキシダーゼ、Ｆｅ−ＥＤＴＡ
、Ｍｎ−ＥＤＴＡ、銅イオン及びペプタイド結合性銅イ
オンから選ばれる１種又は２種以上である特許請求の範
囲第１項に記載の定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9818187A JPH0779715B2 (ja) | 1987-04-20 | 1987-04-20 | Ｎａｄｈ又はｎａｄｐｈのペルオキシダ−ゼによる定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9818187A JPH0779715B2 (ja) | 1987-04-20 | 1987-04-20 | Ｎａｄｈ又はｎａｄｐｈのペルオキシダ−ゼによる定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63263098A true JPS63263098A (ja) | 1988-10-31 |
| JPH0779715B2 JPH0779715B2 (ja) | 1995-08-30 |
Family
ID=14212852
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9818187A Expired - Lifetime JPH0779715B2 (ja) | 1987-04-20 | 1987-04-20 | Ｎａｄｈ又はｎａｄｐｈのペルオキシダ−ゼによる定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0779715B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0405988A2 (en) * | 1989-06-28 | 1991-01-02 | Sankyo Company Limited | Use of superoxide dismutase in assays involving an oxidase |
| CN104316692A (zh) * | 2014-10-24 | 2015-01-28 | 广州市丰华生物工程有限公司 | 一种新生儿总半乳糖检测试剂盒、其使用方法及制备方法 |
-
1987
- 1987-04-20 JP JP9818187A patent/JPH0779715B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0405988A2 (en) * | 1989-06-28 | 1991-01-02 | Sankyo Company Limited | Use of superoxide dismutase in assays involving an oxidase |
| CN104316692A (zh) * | 2014-10-24 | 2015-01-28 | 广州市丰华生物工程有限公司 | 一种新生儿总半乳糖检测试剂盒、其使用方法及制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0779715B2 (ja) | 1995-08-30 |
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