JPS6324977B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は鶏の伝染性コリーザの原因菌株および
その菌を用いて製造したワクチンに関する。 鶏の伝染性コリーザ症は、育成率の低下、産卵
開始の遅延、産卵率の低下および産卵停止をもた
らし、その経済的損失は大きい。そのため、予防
策として伝染性コリーザ症ワクチンが汎用されて
おり、特に、農林省家畜衛生試験場より入手可能
なヘモフイルス ガリナルム221株を用いて製造
したワクチンが利用されている。同種ワクチンは
全国各地で生ずる鶏伝染性コリーザ症に対し効力
を示すものとして頻りに用いられてきたが、最
近、同菌株より製造したワクチンでは免疫効果が
現われない伝染性コリーザ症が出現している。本
発明者らはこのようなコリーザ症に有効な免疫活
性を有するワクチンの製造を目的として、かかる
コリーザ症に罹患している鶏より菌株を分離し、
同菌株を用いてワクチンを製造し、本発明を完成
した。 本発明者らが純粋な形で分離したS1株は、そ
の形態学的性状および生理学的性状、とくに下記
の性状よりヘモフイルス パラガリナルムに属す
るものと認められる。 カタラーゼの生成 陰性 硝酸塩の還元 陽性 インドールの生成 陰性 ヘミン要求性 陰性 DPN要求性 陽性 赤血球凝集性 ニワトリ 陰性 ウズラ 陰性 豚 陽性 モルモツト 陽性 ウサギ 陰性 糖の分解能 グルコース、マンノース、レブロース、マル
トース、デキストリン、スターチ、ガラクト
ース、マンニツト、シユクロース 陽性 ソルビツト 陰性 上記の性状において、マンニツト分解能を有す
ること、豚およびモルモツトの赤血球を凝集する
ことより、本菌株はヘモフイルス パラガリナル
ムに属する公知菌株（日本獣医学雑誌40巻65〜73
頁（1978年）など）とは明らかに異なり、新菌株
と認められる。なお、本菌株は工業技術院微生物
工業技術研究所に微工研菌寄第5191号として寄託
されている。 本菌株、ヘモフイルス パラガリナルムS1株
より鶏の伝染性コリーザ症ワクチンを製造するに
は、常法に準じて行えばよい。菌の培養はこの種
の菌の培養に通常用いられる培地を使用して行
う。また、特許出願公告昭49−40927号に記載さ
れている天然培地を用いてもよい。ポリペプト
ン、カザミノ酸、ニワトリ肉汁、酵母エキス、じ
やがいも等を窒素源および炭素源として用い、必
要に応じて各種無機塩、例えば、塩化ナトリウ
ム、リン酸塩などを加える。さらにニワトリ血清
またはその代替物であるジホスホピリジンヌクレ
オシド、緬羊血清を加える。培養は約30〜40℃で
定常期まで静置培養または連続培養を行う。 培養終了後、常法に従い不活化を行う。不活化
は加熱により行つてもよいが、培養液に不活化剤
を加える方法がより簡便である。不活化剤とし
て、マーゾニン、ベータープロピオラクトン、タ
イロシン、サリチル酸、クリスタルヴイオレツ
ト、安息香酸、ベンゼトニウムクロライド、ポリ
ミキシン、グラミシジン、ホルマリン、石炭酸な
どが用いられる。不活化培養液は必要に応じて適
量のアジユバントを加えた後、サイホンまたは遠
心分離等の方法で不活化物を分離する。アジユバ
ントとして、水酸化アルミニウムゲル、燐酸アル
ミニウムゲル、燐酸カルシウムゲル、明ばんなど
が用いられる。分離された不活化物は、リン酸緩
衝食塩液などを用いて適当な濃度に調製する。ま
た必要に応じて、防腐剤を加える。使用される防
腐剤としてはマーゾニン、タイロシン、ベーター
プロピオラクトン、安息香酸、ホルマリン、サリ
チル酸、クリスタルヴイオレツト、ベンゼトニウ
ムクロライド、ポリミキシン、グラミシジン、石
炭酸などが挙げられる。 得られる不活化ワクチンに、更に免疫活性を高
めるためにアジユバントを添加することを考離し
てもよい。アジユバント量は適宜決定すればよい
が、通常、ワクチン100容量に対し１〜99容を加
えるとよい。 本発明で得られる伝染性コリーザ用ワクチンは
筋肉内、皮下または皮内注射などにより鶏に接種
する。また、必要に応じて、ヘモフイルス ガリ
ナルム221株より製造した従来の伝染性コリーザ
用ワクチンを本発明のワクチンに加えてもよい。
さらに、鶏が極めて罹患しやすいニユーカツスル
病や伝染性気管支炎に対しても同時に鶏に免疫を
与えるために、これらの疾病予防の為に従来用い
られているワクチン類を上記の抗コリーザ用ワク
チンに加えてもよい。すなわち、本願発明で得ら
れるワクチンには、S1株より製造したワクチン、
S1株より製造したワクチンにヘモフイルス ガ
リナルム221株より製造したワクチンを加えたワ
クチン（以下混合ワクチンと記す。）、混合ワクチ
ンにニユーカツスル病ワクチンを加えたワクチ
ン、混合ワクチンに伝染性気管支炎ワクチンを加
えたワクチン、混合ワクチンにニユーカツスル病
ワクチンと共に伝染性気管支炎ワクチンを加えた
ワクチンが包含される。 次に本発明の実施例を示すが、これは本発明を
何ら限定するものでない。 実施例 ニワトリ肉汁培地：ニワトリ肉汁※ 1000ml 塩化ナトリウム ５ｇ ポリペプトン 10ｇ ※鶏肉をすりつぶし、鶏肉１Kgに水２を加
えてかきまぜ、０℃で24時間放置する。これ
をコツホにかけ過する。この液をニワト
リ肉汁とする。 ニワトリ肉汁培地を121℃、30分間滅菌し、別
に過滅菌したニワトリ血清と合わせる。 上記の血清加ニワトリ肉汁培地にヘモフイルス
パラガリナルムS1（FERMP−No.5191）を接種
培養し、37℃で定常期迄（菌濃度約10⁶〜10⁸個／
ml）大量静置培養を行なう。得られた培養液に、
0.01％の濃度になるようにマーゾニンを加え、２
〜５℃で24時間放置し不活化する。不活化を確認
後、不活化培養液1000mlに約300mlの割合で水酸
化アルミニウムゲルを加え、２〜５℃で一昼夜放
置し、サイホンで上清を捨てる。集められた沈渣
に滅菌リン酸緩衝食塩水を加える。この液に防腐
剤として、0.01％の濃度になるようにマーゾニン
を加えて２〜５℃で保存する。この調製液はヘモ
フイルス パラガリナルムS1の培養液（菌濃度
約10⁶〜10⁸個／ml）の約３倍濃縮液に相当する。 上記調整液30容量と水酸化アルミニウムゲル30
容量に滅菌リン酸緩衝食塩液を加えて全量を100
容量とする。 混合ワクチンの場合は、上記調製液30容量とヘ
モフイルス ガリナルム221株より得た調製液30
容量に滅菌リン酸緩衝食塩液を加えて全量を100
容量とする。 次に、ヘモフイルス パラガリナルムS1株よ
り得られたワクチン（以下S1株単独ワクチンと
記す）、このワクチンにヘモフイルス ガリナル
ム221株より得られたワクチンを加えた混合ワク
チン、およびヘモフイルス ガリナルム221株よ
り得られたワクチン（以下221株単独ワクチンと
記す）の伝染性コリーザに対する免疫効果を比較
試験した結果を示す。 (1) 試験法 30日令のSpF種の雄鶏を１群10羽を用い、上記
の各ワクチン0.5ml（総菌数10⁸個）を筋肉内に接
種する。接種３週目にヘモフイルス ガリナルム
221株およびヘモフイルス パラガリナルムS1株
の0.5c.c.（菌数10⁸個）を鼻腔内に滴下し、接種後
７日間鼻汁、顔面の腫張、クシヤミなどの症状を
観察するとともに、７日目に剖検し、菌の有無を
調べる。 (2) 試験結果 各ワクチンの伝染性コリーザに対する免疫効果
は表１に示すとおりであり、S1株より得たワク
チンと221株より得たワクチンを混合することに
よる免疫効果の低下は認められない。

【表】 ＊ 分子＝陽性を示した羽数／分母＝供試した
羽数
なお、混合ワクチンを接種した鶏にヘモフイル
ス ガリナルム2403株、288株、Ｆ株を用いて攻
撃試験を行つたところ、いずれの菌株の攻撃に対
しても免疫効果が現われた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ マンニツトを分解し、豚およびモルモツトの
   赤血球を凝集する、実質的に純粋な形で分離され
   たヘモフイルス パラガリナルムS1。 ２ マンニツトを分解し、豚およびモルモツトの
   赤血球を凝集する、実質的に純粋な形で分離され
   たヘモフイルス パラガリナルムS1を不活化し、
   得られる不活化物を有効成分とすることを特徴と
   する鶏の伝染性コリーザ症不活化ワクチン。 ３ ヘモフイルス ガリナルム221を不活化して
   得られる不活化物を加えた特許請求の範囲２の鶏
   の伝染性コリーザ症不活化ワクチン。 ４ ニユーカツスル病ワクチンを加えた特許請求
   の範囲３の鶏の伝染性コリーザ症不活化ワクチ
   ン。 ５ 伝染性気管支炎ワクチンを加えた特許請求の
   範囲３の鶏の伝染性コリーザ症不活化ワクチン。 ６ ニユーカツスル病ワクチンおよび伝染性気管
   支炎ワクチンを加えた特許請求の範囲３の鶏の伝
   染性コリーザ症不活化ワクチン。