JPS63246306A - シユウドモナス・グルメによるナス科野菜の土壌病害防除 - Google Patents
シユウドモナス・グルメによるナス科野菜の土壌病害防除Info
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- JPS63246306A JPS63246306A JP62080785A JP8078587A JPS63246306A JP S63246306 A JPS63246306 A JP S63246306A JP 62080785 A JP62080785 A JP 62080785A JP 8078587 A JP8078587 A JP 8078587A JP S63246306 A JPS63246306 A JP S63246306A
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- pseudomonas
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- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
本発明はシュウドモナス・グルメ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓｇｌｔ＋ｍａｅ ）に属する非病原性の微生物によ
りナス科野菜の土壌病害を防除し、健全な野菜を栽培す
る方法及びそれに用いるシュウドモナス・グルメに属す
る新規な微生物に関する。
ａｓｇｌｔ＋ｍａｅ ）に属する非病原性の微生物によ
りナス科野菜の土壌病害を防除し、健全な野菜を栽培す
る方法及びそれに用いるシュウドモナス・グルメに属す
る新規な微生物に関する。
更に詳しくは、本発明は、シュウドモナス・グルメに属
する非病原性の細菌の菌懸濁液または死菌懸濁液にナス
科植物の苗を浸漬することにより、シュウドモナス・ソ
ラナセルム菌に原因するナス科野菜の土壌病害を防除し
、健全な野菜を栽培する方法および上記の方法に用いる
新規な微生物であるシュウドモナス・グルメＫｕＮ７５
０−３Ｒ株に関する。
する非病原性の細菌の菌懸濁液または死菌懸濁液にナス
科植物の苗を浸漬することにより、シュウドモナス・ソ
ラナセルム菌に原因するナス科野菜の土壌病害を防除し
、健全な野菜を栽培する方法および上記の方法に用いる
新規な微生物であるシュウドモナス・グルメＫｕＮ７５
０−３Ｒ株に関する。
〈従来技術および問題点〉
野菜の特産地化により連作障害による被害が増大してお
り、その対策が求められている。特に、トマト、ナスな
どのナス科作物は連作により土壌病害を受は易い。土壌
病害に対する対策の一つは殺菌剤を散布する、土壌燻蒸
を行うなどであるが、薬剤を土壌全体に作用させるのが
難しい上、特異性が低いため、土壌中の有用な微生物を
も殺し生態系を乱す恐れがある。さらに、耐性菌が出現
するため、大量の殺菌剤の投与が必要となる。他の対策
としては耐病性の作物品種を作ることである。この場合
、畑土で有効な例が多いが、すぐに新たな耐性菌が出現
すると云った問題がある。
り、その対策が求められている。特に、トマト、ナスな
どのナス科作物は連作により土壌病害を受は易い。土壌
病害に対する対策の一つは殺菌剤を散布する、土壌燻蒸
を行うなどであるが、薬剤を土壌全体に作用させるのが
難しい上、特異性が低いため、土壌中の有用な微生物を
も殺し生態系を乱す恐れがある。さらに、耐性菌が出現
するため、大量の殺菌剤の投与が必要となる。他の対策
としては耐病性の作物品種を作ることである。この場合
、畑土で有効な例が多いが、すぐに新たな耐性菌が出現
すると云った問題がある。
く問題解決の手段〉
イネのもみ枯病菌として知られるシュウドモナス・グル
メ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｇｌｕｍａｅ）には、そ
の病原性が変化し病原性を喪失することが頻々認められ
る。本発明者らは、この性質を利用すれば、作物に対し
病害を現さず、しかもその生産する抗菌物質などによっ
て、ナス科野菜の土壌病害原因菌であるシュウドモナス
・ソラナセルム菌を死滅し、ナス科野菜の土壌病害を防
除できると考え本発明を完成した。
メ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｇｌｕｍａｅ）には、そ
の病原性が変化し病原性を喪失することが頻々認められ
る。本発明者らは、この性質を利用すれば、作物に対し
病害を現さず、しかもその生産する抗菌物質などによっ
て、ナス科野菜の土壌病害原因菌であるシュウドモナス
・ソラナセルム菌を死滅し、ナス科野菜の土壌病害を防
除できると考え本発明を完成した。
本発明は、シュウドモナス・グルメに属する非病原性細
菌の菌懸濁液あるいは死菌懸濁液にナス科野菜の苗を浸
漬した後、栽培することにより、シュウドモナス・ソラ
ナセルム菌に原因するナス科野菜の土壌病害を防除し、
健全な野菜を栽培する方法および上記の方法に用いる新
規な微生物であるシュウドモナス・グルメＫｕＮ７５０
−３Ｒ株を提供する。
菌の菌懸濁液あるいは死菌懸濁液にナス科野菜の苗を浸
漬した後、栽培することにより、シュウドモナス・ソラ
ナセルム菌に原因するナス科野菜の土壌病害を防除し、
健全な野菜を栽培する方法および上記の方法に用いる新
規な微生物であるシュウドモナス・グルメＫｕＮ７５０
−３Ｒ株を提供する。
本方法に用いる微生物としては、
ｌ）イネおよびじゃがいも、たまねぎ、人参、大根、ト
マト等の作物に対して病原性をもたず、２）シュウドモ
ナス・ソラナセルム菌に対する抗菌活性を有し、シュウ
ドモナス・ソラナセルム菌に原因するナス科野菜の土壌
病害を有効に防除する、等の性質を有するシュウドモナ
ス・グルメに属する細菌であればよく、例えば、シュウ
ドモナス・グルメ ８７５０株、シュウドモナス・グル
メ ８０５ｂ株、シュウドモナス・グルメＫｕＮ７５０
−３Ｒ株があげられる。
マト等の作物に対して病原性をもたず、２）シュウドモ
ナス・ソラナセルム菌に対する抗菌活性を有し、シュウ
ドモナス・ソラナセルム菌に原因するナス科野菜の土壌
病害を有効に防除する、等の性質を有するシュウドモナ
ス・グルメに属する細菌であればよく、例えば、シュウ
ドモナス・グルメ ８７５０株、シュウドモナス・グル
メ ８０５ｂ株、シュウドモナス・グルメＫｕＮ７５０
−３Ｒ株があげられる。
シュウドモナス・グルメ Ｎ７５０株およびシュウドモ
ナス・グルメ ８０５ｂ株はイネのモミガラ細菌病の罹
病部より分離し、ＰＳＡ寒天平板培地で植え継ぎを繰り
返した結果、病原性を喪失した菌株である。これらの菌
株の分類学的性質は（冨永時任；農業技術研究所報告Ｃ
−７５（１９７１）日本における牧草および鋼種作物の
病害に関する研究）に記載されている。
ナス・グルメ ８０５ｂ株はイネのモミガラ細菌病の罹
病部より分離し、ＰＳＡ寒天平板培地で植え継ぎを繰り
返した結果、病原性を喪失した菌株である。これらの菌
株の分類学的性質は（冨永時任；農業技術研究所報告Ｃ
−７５（１９７１）日本における牧草および鋼種作物の
病害に関する研究）に記載されている。
シュウドモナス・グルメ ＫｕＮ ７５０−３Ｒ株は
、シュウドモナス・グルメ Ｎ７５０株にＮＴＯ（Ｎメ
チル−Ｎ′−二トロニトロソグアニジン）による変異処
理を施すことによって得たストレプトマイシンに対する
耐性株で、新規な微生物であり、土壌に施用する殺菌剤
による影響を避けられるという利点がある。シュウドモ
ナス・グルメ ＫｕＮ ７５０−３Ｒの分類学的性質
は以下のとおりである。
、シュウドモナス・グルメ Ｎ７５０株にＮＴＯ（Ｎメ
チル−Ｎ′−二トロニトロソグアニジン）による変異処
理を施すことによって得たストレプトマイシンに対する
耐性株で、新規な微生物であり、土壌に施用する殺菌剤
による影響を避けられるという利点がある。シュウドモ
ナス・グルメ ＫｕＮ ７５０−３Ｒの分類学的性質
は以下のとおりである。
シュウドモナス・グルメ ＫｕＮ ７５０−３Ｒ菌株
の性質 （ａ）形態 １）細胞の形態 桿状 大きさ ０． ６〜０．９×（μｍＸｔ１
ｍ） １．７〜２．５２）多様性
なし ３）運動性 あり 鞭毛 極 ３本 ４）胞子の形成 なし ５）ダラム染色性 陰性 ６）抗酸性 なし くｂ）生育の状態 １）肉汁平板寒天培養 ２７°Ｃ４Ｂ時間形状
点状 周縁 波状 隆起 半レンズ状 光沢 あり 表面 平滑 色調 白〜白黄色 ２）肉汁寒天斜面培養 ２７°Ｃ４８時間生育度
良好 形状 点状 表面 平滑 色調 白〜白黄色 光沢 あり ３）肉汁液体培養 ２７°Ｃ４８時間生育度
良好 着色・脱色 なし 表面生育 あり 沈渣 あり ４）肉汁ゼラチン穿刺 ２２°Ｃ４週間液化なし ５）リドマスミルク ２７°Ｃ３週間リドマス反応
中性 凝固 陽性 ペプトン化 陽性 （ｃ）生理学的性質 １）硝酸塩の還元 陽性 ２）脱窒反応 陰性 ３）ＭＲテスト 陰性 ４）ＶＰテスト 陰性 ５）インドールの生成 陰性 ６）硫化水素の生成 陰性 ７）デンプンの加水分解 陰性 ８）クエン酸の利用 （クリステンセン培地） 陽性 ９）無機窒素の利用 硝酸塩 陰性 アンモニウム塩 陽性 １０）水溶性色素の生成 陰性 １１）ウレアーゼ活性 陰性 １２）オキシターゼ活性 陰性 １３）カタラーゼ活性 陰性 １４）生育範囲 ｐ）（５，５〜８．５温度 １
０〜４０°Ｃ １５）酸素に対する態度 好気性 １６）ＯＦテスト 陽性 １７ＨＪ！ｉからの酸・ガスの生成 酸 ガス ■Ｌ−アラビノース 十 − ■Ｄ−キシロース 十 − ■Ｄ−グルコース 十 − ■Ｄ−マンノース 十 − ■Ｄ−フラクトース 十 − ■Ｄ−ガラクトース 十 − ■麦 芽 糖 −− ■ シ ヨ 糖
−−■乳 糖 −− ［相］トレハロース −− ■Ｄ−ソルビトール −− ＠Ｄ−マンニット −− ■イノジット 十 − ［相］グリセリン −− ■デンプン −− ２７°Ｃ２１〜７日間培養して判定した。ｍｉがらの酸
・ガスの生成は３週間培養して判定した。
の性質 （ａ）形態 １）細胞の形態 桿状 大きさ ０． ６〜０．９×（μｍＸｔ１
ｍ） １．７〜２．５２）多様性
なし ３）運動性 あり 鞭毛 極 ３本 ４）胞子の形成 なし ５）ダラム染色性 陰性 ６）抗酸性 なし くｂ）生育の状態 １）肉汁平板寒天培養 ２７°Ｃ４Ｂ時間形状
点状 周縁 波状 隆起 半レンズ状 光沢 あり 表面 平滑 色調 白〜白黄色 ２）肉汁寒天斜面培養 ２７°Ｃ４８時間生育度
良好 形状 点状 表面 平滑 色調 白〜白黄色 光沢 あり ３）肉汁液体培養 ２７°Ｃ４８時間生育度
良好 着色・脱色 なし 表面生育 あり 沈渣 あり ４）肉汁ゼラチン穿刺 ２２°Ｃ４週間液化なし ５）リドマスミルク ２７°Ｃ３週間リドマス反応
中性 凝固 陽性 ペプトン化 陽性 （ｃ）生理学的性質 １）硝酸塩の還元 陽性 ２）脱窒反応 陰性 ３）ＭＲテスト 陰性 ４）ＶＰテスト 陰性 ５）インドールの生成 陰性 ６）硫化水素の生成 陰性 ７）デンプンの加水分解 陰性 ８）クエン酸の利用 （クリステンセン培地） 陽性 ９）無機窒素の利用 硝酸塩 陰性 アンモニウム塩 陽性 １０）水溶性色素の生成 陰性 １１）ウレアーゼ活性 陰性 １２）オキシターゼ活性 陰性 １３）カタラーゼ活性 陰性 １４）生育範囲 ｐ）（５，５〜８．５温度 １
０〜４０°Ｃ １５）酸素に対する態度 好気性 １６）ＯＦテスト 陽性 １７ＨＪ！ｉからの酸・ガスの生成 酸 ガス ■Ｌ−アラビノース 十 − ■Ｄ−キシロース 十 − ■Ｄ−グルコース 十 − ■Ｄ−マンノース 十 − ■Ｄ−フラクトース 十 − ■Ｄ−ガラクトース 十 − ■麦 芽 糖 −− ■ シ ヨ 糖
−−■乳 糖 −− ［相］トレハロース −− ■Ｄ−ソルビトール −− ＠Ｄ−マンニット −− ■イノジット 十 − ［相］グリセリン −− ■デンプン −− ２７°Ｃ２１〜７日間培養して判定した。ｍｉがらの酸
・ガスの生成は３週間培養して判定した。
パージエイズ・マニュアル・オブ・システマテイック
バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏ
ｆ ５ｙｓｔｅａ＋ａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ）の検索式に従って検索すると、本菌株は、ダラム陰
性桿菌で運動性を有する好気性菌であり、イネ罹病部か
ら分離されたことから、シュウドモナス・グルメに属す
る。ただし、本菌株は、抗菌物質ストレプトマイシンに
対して２０μｓ／ｍ１以上の濃度で生育できる。親株で
あるシュウドモナス・グルメ Ｎ７５０株や他のシュウ
ドモナス・グルメ菌株は０．２Ｒｇ／■ｌのストレプト
マイシンに感受性である。従って、シュウドモナス・グ
ルメ ＫｕＮ ７５０−３Ｒ株は、ストレプトマイシ
ンに対して高い抵抗性を示す点で新規な微生物であると
認められる。
バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏ
ｆ ５ｙｓｔｅａ＋ａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ）の検索式に従って検索すると、本菌株は、ダラム陰
性桿菌で運動性を有する好気性菌であり、イネ罹病部か
ら分離されたことから、シュウドモナス・グルメに属す
る。ただし、本菌株は、抗菌物質ストレプトマイシンに
対して２０μｓ／ｍ１以上の濃度で生育できる。親株で
あるシュウドモナス・グルメ Ｎ７５０株や他のシュウ
ドモナス・グルメ菌株は０．２Ｒｇ／■ｌのストレプト
マイシンに感受性である。従って、シュウドモナス・グ
ルメ ＫｕＮ ７５０−３Ｒ株は、ストレプトマイシ
ンに対して高い抵抗性を示す点で新規な微生物であると
認められる。
シュウドモナス・グルメ Ｎ７５０、シュウドモナス・
グルメ ８０５ｂおよびシュウドモナス・グルメ Ｋｕ
Ｎ ７５０−３Ｒは各々工業技術院微生物工業技術研
究所に受託番号 微工研菌寄第９２４２号、第９２４０
号、第９２４１号として受託されている。
グルメ ８０５ｂおよびシュウドモナス・グルメ Ｋｕ
Ｎ ７５０−３Ｒは各々工業技術院微生物工業技術研
究所に受託番号 微工研菌寄第９２４２号、第９２４０
号、第９２４１号として受託されている。
本発明に用いる微生物の分離は、以下の方法でおこなう
。
。
イネのモミガラ病病罹部からシュウドモナス・グルメを
分離し、ＰＳＡ培地上で植え継ぎを繰り返した後、イネ
に対する病害性を、■もみに対する病原性、■イネ幼苗
に対する病害性について測定する。いずれにも病害性を
持たないシュウドモナス・グルメの菌株について、トマ
ト青枯病病原菌であるシュウドモナス・ソラナセルムに
対する抗菌活性を測定し、抗菌活性の強い菌株を選抜す
る。これらの菌株が他の作物に対して病原性をもたない
ことを、じゃがいも、たまねぎ、人参、大根、トマトに
ついて確認する。
分離し、ＰＳＡ培地上で植え継ぎを繰り返した後、イネ
に対する病害性を、■もみに対する病原性、■イネ幼苗
に対する病害性について測定する。いずれにも病害性を
持たないシュウドモナス・グルメの菌株について、トマ
ト青枯病病原菌であるシュウドモナス・ソラナセルムに
対する抗菌活性を測定し、抗菌活性の強い菌株を選抜す
る。これらの菌株が他の作物に対して病原性をもたない
ことを、じゃがいも、たまねぎ、人参、大根、トマトに
ついて確認する。
シュウドモナス・グルメ Ｎ７５０およびシュウドモナ
ス・グルメ ８０５ｂは上記のようにして分離した。シ
ュウドモナス・グルメ ＫｕＮ ７５０−ＳＲは、シ
ュウドモナス・グルメ Ｎ７５０株にＮＴＧ （Ｎメチ
ル＝Ｎ′−二トロニト口ソグアニジン）により変異処理
を施すことにより取得した。
ス・グルメ ８０５ｂは上記のようにして分離した。シ
ュウドモナス・グルメ ＫｕＮ ７５０−ＳＲは、シ
ュウドモナス・グルメ Ｎ７５０株にＮＴＧ （Ｎメチ
ル＝Ｎ′−二トロニト口ソグアニジン）により変異処理
を施すことにより取得した。
本発明に用いる菌株の培養には、通常の微生物の培養に
常用される炭素源、窒素源、無機質等を含む各種培地を
使用できる。具体的には、炭素源として、グルコース、
シュクロース、マルトース、澱粉、Ｐｉ蜜、米、麦など
の天然炭水化物、グリシン、グルタミンなどのアミノ酸
類などのなかから、一種または二種以上を適宜選択して
使用すれば良い。窒素源としては、肉エキス、大豆粉、
酵母エキス、各種アミノ酸など有機窒素化合物、アンモ
ニウム塩、硝酸塩など無機窒素化合物などのなかから、
一種 または二種以上を適宜選択して使用すれば良い。
常用される炭素源、窒素源、無機質等を含む各種培地を
使用できる。具体的には、炭素源として、グルコース、
シュクロース、マルトース、澱粉、Ｐｉ蜜、米、麦など
の天然炭水化物、グリシン、グルタミンなどのアミノ酸
類などのなかから、一種または二種以上を適宜選択して
使用すれば良い。窒素源としては、肉エキス、大豆粉、
酵母エキス、各種アミノ酸など有機窒素化合物、アンモ
ニウム塩、硝酸塩など無機窒素化合物などのなかから、
一種 または二種以上を適宜選択して使用すれば良い。
さらに、無機塩として微量のマグネシウム、ナトリウム
、カルシウムなどのリン酸塩、塩酸塩、硫酸塩、炭酸塩
など一種または二種以上を適宜添加して使用すれば良い
。これらの炭素源、窒素源、無機塩を組み合わた培地に
、寒天などのゲル化剤を添加して作製した固体培地も使
用できる。培養は、前記培地成分を含んだ液体培地中で
振盪培養２通気撹拌培養、装置培養、連続培養などの通
常の培養方法、または固体培地上での静置培養により、
使用微生物に適した培養方法を選択して行う。培養条件
は、特に制限はないが、通常は、２３〜３３°Ｃが好ま
しく、培養液ｐＨは、６．５〜８程度が好ましい。
、カルシウムなどのリン酸塩、塩酸塩、硫酸塩、炭酸塩
など一種または二種以上を適宜添加して使用すれば良い
。これらの炭素源、窒素源、無機塩を組み合わた培地に
、寒天などのゲル化剤を添加して作製した固体培地も使
用できる。培養は、前記培地成分を含んだ液体培地中で
振盪培養２通気撹拌培養、装置培養、連続培養などの通
常の培養方法、または固体培地上での静置培養により、
使用微生物に適した培養方法を選択して行う。培養条件
は、特に制限はないが、通常は、２３〜３３°Ｃが好ま
しく、培養液ｐＨは、６．５〜８程度が好ましい。
本発明に用いる菌株の病害防除活性は、次のような方法
で測定する。播種後１０〜２０日目のトマト幼苗をトマ
ト青枯病病原菌であるシュウドモナス・ソラナセルム（
Ｐ、 ５ｏｌａｎａｃｅｒｕｓ＋） Ｃ３１９株の菌濃
度を１０ ” 〜１０ ｌ０ｃｆ ｕ ／ｍｌとした菌
懸濁液に１０分間浸漬した後、本発明に用いる細菌の菌
濃度を１０ ” 〜１０１６ｃｆ ｕ ／’＋ｗｌとし
た菌懸濁液または死菌懸濁液に１２〜７２時間浸漬する
。
で測定する。播種後１０〜２０日目のトマト幼苗をトマ
ト青枯病病原菌であるシュウドモナス・ソラナセルム（
Ｐ、 ５ｏｌａｎａｃｅｒｕｓ＋） Ｃ３１９株の菌濃
度を１０ ” 〜１０ ｌ０ｃｆ ｕ ／ｍｌとした菌
懸濁液に１０分間浸漬した後、本発明に用いる細菌の菌
濃度を１０ ” 〜１０１６ｃｆ ｕ ／’＋ｗｌとし
た菌懸濁液または死菌懸濁液に１２〜７２時間浸漬する
。
このように処理したトマト幼苗をポットに植え、温室で
栽培して青枯症状の発生を病原菌懸濁液にのみ浸漬した
対照と比較して測定する。死菌液は、例えば、熱処理、
ＵＶ照射、クロロホルム蒸気の接触などによって調製で
きる。
栽培して青枯症状の発生を病原菌懸濁液にのみ浸漬した
対照と比較して測定する。死菌液は、例えば、熱処理、
ＵＶ照射、クロロホルム蒸気の接触などによって調製で
きる。
本発明の実施にあたり、播種後１０〜２０日目のトマト
幼苗を、菌濃度を１０４〜ｉｏ’ｃｆｕ／ｍｌとしたシ
ュウドモナス・グルメに属する非病原性菌の菌懸濁液ま
たは死菌懸濁液に室温で１２〜７２時間浸漬した後土壌
に植え栽培する。死菌液は、病害防除活性測定の時と同
様にして調製できる。
幼苗を、菌濃度を１０４〜ｉｏ’ｃｆｕ／ｍｌとしたシ
ュウドモナス・グルメに属する非病原性菌の菌懸濁液ま
たは死菌懸濁液に室温で１２〜７２時間浸漬した後土壌
に植え栽培する。死菌液は、病害防除活性測定の時と同
様にして調製できる。
本方法はシュウドモナス・ソラナセルム菌に原因するナ
ス科野菜、の土壌病害に適用され、例えばトマト青枯病
、たばこの苗立枯病に有効である。
ス科野菜、の土壌病害に適用され、例えばトマト青枯病
、たばこの苗立枯病に有効である。
次に実施例により本発明を説明するが、これらにより本
発明の範囲が何ら制限されるものではないことは言うま
でもない。
発明の範囲が何ら制限されるものではないことは言うま
でもない。
若いイネのモミガラ細菌病に罹病した種子または罹病イ
ネの罹病部を約０．５Ｃ１ｍｌ角に切取り、７５％エチ
ルアルコール中に瞬間的に浸し、続いて３％アンチホル
ミン溶液中で１分間表面殺菌をした、滅菌した蒸溜水で
２回洗浄した後、１個の罹病片につき滅菌水２ｍｌを加
えて磨砕した。その磨砕液を、ＰＳＡ寒天平板培地に画
線し、２５°Ｃで２〜３日間静置培養し、出現したコロ
ニーの中、白色のものを判別して釣菌した。
ネの罹病部を約０．５Ｃ１ｍｌ角に切取り、７５％エチ
ルアルコール中に瞬間的に浸し、続いて３％アンチホル
ミン溶液中で１分間表面殺菌をした、滅菌した蒸溜水で
２回洗浄した後、１個の罹病片につき滅菌水２ｍｌを加
えて磨砕した。その磨砕液を、ＰＳＡ寒天平板培地に画
線し、２５°Ｃで２〜３日間静置培養し、出現したコロ
ニーの中、白色のものを判別して釣菌した。
シュウドモナス・グルメをこのようにして７４菌株分離
した。
した。
ＰＳＡ寒天培地の組成（ｐ Ｈ７，０）じゃがいも（３
００ｇ） ｌ ＯＯ０ｍ１ＮａｚＨＰ Ｏ４・
１２Ｈｚ ０ ２ｇＣａ（ＮＯｚ）ｚ
０．５ｇペプトン ５ｇ シュクロース １５ｇ寒天
１５ｇ （イネもみに対する病原性の検定） イネ種子を土壌に播種し温室で１ケ月栽培し、２２容の
ワグネルボットに２株ずつ移植した。上記のように分離
後、ＰＳＡ培地で増殖したシュウドモナス・グルメの検
定菌を、ＰＳＡ平板培地２５°Ｃ，３日間培養し、菌濃
度を１０ ” ｃｆｕ ／ｍｌの懸濁液とし、そこに開
花期の穂を３０秒間浸漬した。その後５日間温室で栽培
を継続し、全もみ数に対する発病もみ数の比率により発
病性を求めた。
００ｇ） ｌ ＯＯ０ｍ１ＮａｚＨＰ Ｏ４・
１２Ｈｚ ０ ２ｇＣａ（ＮＯｚ）ｚ
０．５ｇペプトン ５ｇ シュクロース １５ｇ寒天
１５ｇ （イネもみに対する病原性の検定） イネ種子を土壌に播種し温室で１ケ月栽培し、２２容の
ワグネルボットに２株ずつ移植した。上記のように分離
後、ＰＳＡ培地で増殖したシュウドモナス・グルメの検
定菌を、ＰＳＡ平板培地２５°Ｃ，３日間培養し、菌濃
度を１０ ” ｃｆｕ ／ｍｌの懸濁液とし、そこに開
花期の穂を３０秒間浸漬した。その後５日間温室で栽培
を継続し、全もみ数に対する発病もみ数の比率により発
病性を求めた。
（イネ幼苗に対する病原性の検定）
イネ種子を３％アンチホルミン溶液で表面滅菌し滅菌水
で洗浄した。種子を２５°Ｃ１４８時間滅菌水に浸漬し
た後、３０°Ｃ２２４時間静置して催芽した。この発芽
した種子を、ＰＳＡ培地で増殖させたシュウドモナス・
グルメの検定菌を、菌濃度を１０８ ｃｆｕ ／ｍｌふ
した懸濁液中に３０秒間浸漬した。この種子をポットに
播種し３２’Ｃ，４８時間静置して出芽させた。さらに
２５“Ｃ，５日間温室で緑化させて、幼苗腐敗症の発病
を４段階に分類して発病性を測定した。
で洗浄した。種子を２５°Ｃ１４８時間滅菌水に浸漬し
た後、３０°Ｃ２２４時間静置して催芽した。この発芽
した種子を、ＰＳＡ培地で増殖させたシュウドモナス・
グルメの検定菌を、菌濃度を１０８ ｃｆｕ ／ｍｌふ
した懸濁液中に３０秒間浸漬した。この種子をポットに
播種し３２’Ｃ，４８時間静置して出芽させた。さらに
２５“Ｃ，５日間温室で緑化させて、幼苗腐敗症の発病
を４段階に分類して発病性を測定した。
（抗菌物質生産の検定）
検定菌をＹＰＤ寒天平板上に接種し、２５°Ｃ１２４時
間ないし４８時間静置培養した。コロニーが形成したら
シャーレの天地を逆さにして、下方のフタにクロロホル
ムを１．５ ｍｌ添加して２時間クロロホルム蒸気で菌
を死滅させた。蒸気滅菌した０、５％寒天を含むＹＰＤ
培地を４５〜４７℃に冷却し、指示菌を約１０１０ｃｆ
ｕ／ｍｌとなるように加え混合し、その５ｍｌを上記シ
ャーレに重層した。
間ないし４８時間静置培養した。コロニーが形成したら
シャーレの天地を逆さにして、下方のフタにクロロホル
ムを１．５ ｍｌ添加して２時間クロロホルム蒸気で菌
を死滅させた。蒸気滅菌した０、５％寒天を含むＹＰＤ
培地を４５〜４７℃に冷却し、指示菌を約１０１０ｃｆ
ｕ／ｍｌとなるように加え混合し、その５ｍｌを上記シ
ャーレに重層した。
２５°Ｃ１２４時間ないし４８時間静置培養し出現した
抗菌ゾーンの直径を測定した。使用した指示菌ハ、シュ
ウドモナス・ソラナセルム（Ｐ、ｓｏｌａｎａｃｅｒｕ
ｍ ） Ｃ３１９菌株を用いた。
抗菌ゾーンの直径を測定した。使用した指示菌ハ、シュ
ウドモナス・ソラナセルム（Ｐ、ｓｏｌａｎａｃｅｒｕ
ｍ ） Ｃ３１９菌株を用いた。
上記の方法で検定した結果、イネもみ及びイネ幼苗に対
する病原性をもたず、シュウドモナス・ソラナセルム（
Ｐ、ｓｏｌａｎａｃｅｒｕｍ ） Ｃ３１９菌株に対す
る抗菌活性の最も強い菌株２株、シュウドモナス・グル
メＮ７５０およびシュウドモナス・グルメ ８０５ｂを
選抜した。
する病原性をもたず、シュウドモナス・ソラナセルム（
Ｐ、ｓｏｌａｎａｃｅｒｕｍ ） Ｃ３１９菌株に対す
る抗菌活性の最も強い菌株２株、シュウドモナス・グル
メＮ７５０およびシュウドモナス・グルメ ８０５ｂを
選抜した。
（シュウドモナス・グルメ ＫｕＮ ７５０−３Ｒ株
の取得） イネモミガラ病の罹病部から分離したシュウドモナス・
グルメＮ７５０株を親株としＰＳＡ培地で増殖させた菌
体を、ＰＢＳ液（０，８％Ｎ ａｃ １ ＊ Ｏ−２％
Ｋ ｃ １ ＋ １０ ｍ Ｍりん酸緩衝液（ｐＨ７，
０）で洗浄し、ＰＢＳ液に懸濁した後、変異処理剤ＮＴ
Ｇ （Ｎ−メチル−Ｎｏ−ニトロ−ニトロソグアニジン
）を終濃度５０μｇ／ｌｌｌ１となるように加え、３０
’Ｃで６０分間ゆるやかに振盪を行った。遠心、洗浄を
３回行い、最初の液量に相当する滅菌したＰＢＳ液に懸
濁した。そのうち０．１ｍｌを、５００ｇｇ／ｍｌ硫酸
ストレプトマイシンを含有するＰＳＡ培地上に広げ、２
５°Ｃで３日間培養し、出現したコロニーを１０株分離
した。それらを５００ｇｇ／ｍｌ硫酸ストレプトマイシ
ンを含有する肉汁液体培地に接種し、最も生育の良い菌
を選抜した０選抜した株をシュウドモナス・グルメＫｕ
Ｎ７５０−３Ｒと名付けた。
の取得） イネモミガラ病の罹病部から分離したシュウドモナス・
グルメＮ７５０株を親株としＰＳＡ培地で増殖させた菌
体を、ＰＢＳ液（０，８％Ｎ ａｃ １ ＊ Ｏ−２％
Ｋ ｃ １ ＋ １０ ｍ Ｍりん酸緩衝液（ｐＨ７，
０）で洗浄し、ＰＢＳ液に懸濁した後、変異処理剤ＮＴ
Ｇ （Ｎ−メチル−Ｎｏ−ニトロ−ニトロソグアニジン
）を終濃度５０μｇ／ｌｌｌ１となるように加え、３０
’Ｃで６０分間ゆるやかに振盪を行った。遠心、洗浄を
３回行い、最初の液量に相当する滅菌したＰＢＳ液に懸
濁した。そのうち０．１ｍｌを、５００ｇｇ／ｍｌ硫酸
ストレプトマイシンを含有するＰＳＡ培地上に広げ、２
５°Ｃで３日間培養し、出現したコロニーを１０株分離
した。それらを５００ｇｇ／ｍｌ硫酸ストレプトマイシ
ンを含有する肉汁液体培地に接種し、最も生育の良い菌
を選抜した０選抜した株をシュウドモナス・グルメＫｕ
Ｎ７５０−３Ｒと名付けた。
上記の方法で取得したシュウドモナス・グルメＮ７５０
、シュウドモナス・グルメ ８０５ｂ、シュウドモナス
・グルメＫｕＮ７５０−３Ｒのトマト青枯病病原菌であ
るシュウドモナス・ソラナセルム（Ｐ、ｓｏｌａｎａｃ
ｅｒｕｍ ） Ｃ３１９菌株に対する抗菌活性、および
該３菌株と対象として用いたシュウドモナス・グルメＮ
７５０１のイネもみに対する病原性、イネ幼苗に対する
病原性、各種作物に対する病原性測定の結果を以下に示
す。
、シュウドモナス・グルメ ８０５ｂ、シュウドモナス
・グルメＫｕＮ７５０−３Ｒのトマト青枯病病原菌であ
るシュウドモナス・ソラナセルム（Ｐ、ｓｏｌａｎａｃ
ｅｒｕｍ ） Ｃ３１９菌株に対する抗菌活性、および
該３菌株と対象として用いたシュウドモナス・グルメＮ
７５０１のイネもみに対する病原性、イネ幼苗に対する
病原性、各種作物に対する病原性測定の結果を以下に示
す。
表１ 抗菌活性物質生産
指示面
検定菌 シュウドモナス・ソラナセルムシュウ
ドモナス・グルメＮ７５０１１株、シュウドモナス・グ
ルメ８０５ｂ菌株、シェウドモナス・グルメＫｕＮ７５
０−３ＲＩ株はいずれもトマト青枯病の病原菌であるシ
ュウドモナス・ソラナセルムＣ３１９薗に対して、強い
抗菌活性を示した。
ドモナス・グルメＮ７５０１１株、シュウドモナス・グ
ルメ８０５ｂ菌株、シェウドモナス・グルメＫｕＮ７５
０−３ＲＩ株はいずれもトマト青枯病の病原菌であるシ
ュウドモナス・ソラナセルムＣ３１９薗に対して、強い
抗菌活性を示した。
表２ イネもみに対する発病率
検定菌 発病率
表３ イネ幼苗に対する発病度
検定菌 発病度
シュウドモナス・グルメＮ７５０１菌株はイネもみおよ
びイネ幼苗に対して発病性を示すが、シュウドモナス・
グルメＮ７５０菌株、シュウドモナス・グルメ８０５ｂ
菌株、シュウドモナス・グルメＫｕＮ７５０−３Ｒ菌株
はいずれも病原性をもたないことが明らかとなった。
びイネ幼苗に対して発病性を示すが、シュウドモナス・
グルメＮ７５０菌株、シュウドモナス・グルメ８０５ｂ
菌株、シュウドモナス・グルメＫｕＮ７５０−３Ｒ菌株
はいずれも病原性をもたないことが明らかとなった。
（シュウドモナス・グルメ菌株の各種作物に対する病原
性） 市販のたまねぎ９人参、大根を輪切りにして水洗いした
後、７０％エチルアルコールで表面殺菌を行った。また
ジャガイモは輪切りにして、７０％エチルアルコールで
数秒間滅菌しその後３％アンチホルミン溶液に１０分間
浸けることによって表面殺菌を行った。
性） 市販のたまねぎ９人参、大根を輪切りにして水洗いした
後、７０％エチルアルコールで表面殺菌を行った。また
ジャガイモは輪切りにして、７０％エチルアルコールで
数秒間滅菌しその後３％アンチホルミン溶液に１０分間
浸けることによって表面殺菌を行った。
検定菌をＰＳＡ培地で２５℃、４８時間培養しその一白
金耳を表面殺菌した野菜スライス上に接種した。５日間
２５°Ｃで培養し、野菜表面に腐敗が生じるか否かで病
原性の有無を判定した。結果を表４に示す。
金耳を表面殺菌した野菜スライス上に接種した。５日間
２５°Ｃで培養し、野菜表面に腐敗が生じるか否かで病
原性の有無を判定した。結果を表４に示す。
Claims (5)
- （１）シュウドモナス・グルメ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ ｇｌｕｍａｅ）に属する非病原性菌懸濁液にナス科
野菜の苗を浸漬することを特徴とするシュウドモナス・
ソラナセルム菌に原因するナス科野菜の土壌病害を防除
し、健全な野菜を栽培する方法 - （２）トマト青枯病を抑制することを特徴とする特許請
求の範囲第１項記載の方法 - （３）シュウドモナス・グルメ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓ ｇｌｕｍａｅ）に属する非病原性菌の死菌懸濁液に
ナス科野菜の苗を浸漬することを特徴とするシュウドモ
ナス・ソラナセルム菌に原因するナス科野菜の土壌病害
を防除し、健全な野菜を栽培する方法 - （４）トマト青枯病を抑制することを特徴とする特許請
求の範囲第３項記載の方法 - （５）シュウドモナス・グルメ ＫｕＮ ７５０−ＳＲ
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｇｌｕｍａｅ ＫｕＮ ７
５０−ＳＲ）株（微工研菌寄第９２４１号）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62080785A JPS63246306A (ja) | 1987-03-31 | 1987-03-31 | シユウドモナス・グルメによるナス科野菜の土壌病害防除 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62080785A JPS63246306A (ja) | 1987-03-31 | 1987-03-31 | シユウドモナス・グルメによるナス科野菜の土壌病害防除 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63246306A true JPS63246306A (ja) | 1988-10-13 |
Family
ID=13728100
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62080785A Pending JPS63246306A (ja) | 1987-03-31 | 1987-03-31 | シユウドモナス・グルメによるナス科野菜の土壌病害防除 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63246306A (ja) |
-
1987
- 1987-03-31 JP JP62080785A patent/JPS63246306A/ja active Pending
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