JPS6323900A - リボソ−ム阻害タンパク質及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は、新規なタンパク賀合成阻害剤、その単離方
法、それか存在する薬剤組成物としての用途に関する。

真核細胞系においてタンパク賀合成を阻害するタンパク
質は多くの植物の種子又は他の部分において発見されて
いる。これらのタンパク質のうち、リシン、アブリン及
びモデシンは細胞系及び非細胞系の両方においてタンパ
ク賀合成を阻害し、従って動物に対して極めて毒性か高
い。対照的に、非細胞系においてのみ有効なタンパク質
は、動物に対する毒性が低いか又はない。おそらくそれ
らは細胞内に入れないからてあろう。

一般的に、これらのタンパク質はリポソームの６Ｏ３の
サブユニットを非可逆的に不活性化し、不活性化される
とリポソームは伸長因子２と反応することかできない、
従って、これらはタンパク質合成の研究において興味を
持たれ、また、これらを腫瘍を攻撃するために用いるこ
とが提案されている。

この型のタンパク質を以下「リポソームー不活性化タン
パク質（ＲＩＰ）と呼ぶ。最も良く知られたＲＩＰはリ
シンてあり、これはカスター油植物を抽出することによ
って得られる。もう１つのＲＩＰであるゲロニンは最近
記載され、ＦＥＢＳレターズ、１９８５．　］！Ｉｓ　
（１，２）　、１〜８ページに記載されている。

トリコサンテス・キリロウィ（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈ
ｅｓｋｉｒｉ　ｌｏｗｉ　ｉ）の根から抽出されたタン
パク質トリコサンチンか最近記載され（Ｎａｔｕｒｅ、
　１９８Ｇ、　３２１゜ｐｐ、４７７−４７８）、その
アミノｍ配夕暉はリシンＤのサブユニットＡとある程度
相同である。

トリコサンテス・キリロウイの種子から、トリコサンチ
ンとは異なる新規で非常に強力なＲＩＰか抽出てきるこ
とかわかった。この新規なＲＩＰを以下「トリコキリン
」と呼ぶ。

従って、この発明は、その１つの局面に３いて、以下の
性質を有するトリコキリンと呼ばれる新規なＲＩＰを提
供する。

・これは、ＳＤＳ　（ラウリル￥を酸ナトリウム）の存
在下におけるポリアクリルアミドゲル上での電気泳動に
よって決定される分子量か２８０００±３０００の糖タ
ンパク質である。

・これは９以上の等電点を有する。

・これは、その中性糖の含量が１，１ないし１．５重量
％てあって、０，３ないし１．２ｚのマンノースを含む
。

・これは、タンパク質１モル当たりの残基の数±２０％
て表現された以下のアミノ酸組成を有する。

Ｌｙｓ：１７．３　　Ｈａｓ：　１．１　　Ａｒｇ：　
５．７　　Ａｓｘ：２２．８Ｔｂｒ：１８．９Ｓｅｒ：
２３．５Ｇｌｘ：２１．６Ｐｒｏ二８．１１Ｇｌｙ：１
５．０Ａｌａ＋２１．１　１／２Ｃｙｓ：　１．９Ｖａ
ｌ：１２．５　　Ｍｅｔ：　３．０５　１１ｅ：１５．
８　　Ｌｅｕ：２４．３Ｔｙｒ＋１２．１　　Ｐｈｅ：
１０．Ｉ　　Ｔｒｐ検出せずただし、Ａｓｘはアスパラ
ギン酸及びアスパラギン残基の両方を示し、ＧＩＫはグ
ルタミン酸及びグルタミン残基の両方を示し、１／２Ｃ
ｙｓは、分析に中に測定された。システィン酸の形態に
ある、もとのタンパク質のシスティン残基を示す。

・これは以下の末端アミノ酸配列を有する。

Ａｌａ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓアミノ酸組成
は、６Ｎ塩酸、１％フェノール及び１％２−メルカプト
エタノールの存在下て、窒素下で２４時間１０５°Ｃに
加熱することによって決定された。アミノ酸はアルカリ
媒体中でフェニルインチオシアネートによって誘導体に
添加された。このようにして得られたフェニルチオヒダ
ントイン（ＰＴＨ）は逆相ＨＰ　１．Ｃによって分析さ
れた。

システィンはタンパク質を過ギ酸て酸化した後に測定し
た（　Ｊ、　Ｒｉａｌ、　Ｃｈｅｗ、　２３８．２３５
−２３７（１９６３））。

末端アミノ酸配列は、１０％酢酸溶液中に溶解された５
ｎｍｏｌのタンパク質から出発して、アプライド・パイ
オシンセシス社′版先のマイクロシークエンサーによっ
て決定した。ＰＴＨのアミノ酸は逆相ＨＰＬＣによりて
分析した。

これらの結果は全て、トリコサンチンについて発表され
た文献と比較すると、トップキリンとトリコサンチンは
２つの全く異なる物質であることを示している。

この発明はもう１つの局面において、すりつぶしたトリ
コサンテス・キリロウィの種をｐＨ５，５〜７．５の緩
衝液の存在下で水で抽出し、不溶性物質を除去し、ｐＨ
７，２ないし７．７の、０．３ないし０．６Ｍ塩化ナト
リウムを含む緩衝液を溶離液として用いた弱酸性イオン
交換樹脂上でのクロマトグラフィーによって該粗抽出物
を分画し、阻害剤タンパク質を含む画分を回収し、得ら
れたタンパク質をゲルろ過によって精製することを含む
、トップキリンの製造方法を提供する。

例えば、好ましくは予め皮を」いたトリコサンテス・キ
リロウィの種をすりつぶし、例えば塩化ナトリウムのよ
うな電解質と、例えばリン酸緩衝液のような緩衝液を含
む、中性付近のｐＨを有する水て抽出する。不溶性材料
を例えば遠心によって除き、低分子量物質を例えばリン
酸緩衝液に対して透析することにより溶液から除去する
。透析した抽出物を次にカルボキシメチルセルロースの
ような弱酸性イオン交換樹脂上でクロマトグラフィーに
架けることによって分画する。溶層は、例えば０ないし
０．３　Ｍ４化ナトリウム水溶液の直線濃度勾配を用い
ることによって行なうことかできる。通常、４つの主た
るピークが溶離され、０．０３ないし０．１１Ｍの濃度
の塩化ナトリウムによって溶離されるピークＩＶかトッ
プキリンの主たる部分を含む。

トップキリンは、例えばセファデックス（登Ｒ商標）の
ようなカラム上てゲルろ過によって精製することがてき
る。

トップキリンは、適当な結合剤を介してハプトマーに結
合することかできる。従って１例えば、トップキリンは
従来方法によってジスルフィド架橋を介して抗体に結合
することかてきる。

これを行なうために、トップキリン及びハプトマーの両
方を、ジスルフィド基を担持する鎖を導入することかで
きる試薬と反応させることかてきる。

この発明のもう１つの対象は、フリー又はブロックされ
たＳＨ基を含むトップキリンの修飾誘導体、特に、トッ
プキリンとＳ−アセチルメルカプトコハク酸無水物との
反応によって得られるメルカプトサクシノイルトップキ
リン、及びヒドロキシルアミとＳ−アセチル誘導体との
反応により得られる対応するメルカプトサクシノイル誘
導体である。このように修飾されたトップキリンの製造
方法は、活性化物質、特に活性化タンパク質を３１製す
るために共通的に用いられるものである。

即ち、Ｓ−アセチルメルカプトサクシノイル基の抗体内
への導入は米国特許第４ｊ４０，５１５号に記載されて
おり、イオノフオア（ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ）の第１級水
酸基へのＳ−アセチルメルカプトサクシノイル基の導入
は欧州特許出願第１５２．７８１号に記載されており、
Ｓ−アセチルメルカプトサクシノイル基のリシンのＡ鎖
への導入は欧州特許出願第１５９．１１１号に記載され
ている。

これらの修飾トリコキリンは次の式によって表わされる
。

ＴＫ’−（Ｇｏ−Ｃ１ｌ−３−Ｗ）ｎ ｌ　　　　　　　　　　（１） ｃＨ２ｃｏｏＨ ただし、ＴＫ’はトリコキリンの基、Ｗは水素又はアセ
チル基、ｎは０．２ないし３、好ましくは０．４ないし
１、さらに好ましくは０．７である。

トリコキリンは、網状赤血球の溶解物中てタンパク質合
成を阻害し、そのＩＤ５ｏは１．５ないし４　ｎｇ／ｍ
ｌである。この効果は全細胞に対してははるかに低く、
試験する細胞に応じてそのＩＤ、。は７ｇ４／ｍｌない
し１００　ｇｇ／ｉｆの間て変化する。

第１表は、種々の細胞に対するトリコキリンの効果、特
にタンパク質合成阻害のＩＤ、。＜ｐ−ｇ／ｌｌ及びＭ
　ｘ　１０−’で示しである）を示す。これは、Ｊ、　
Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、　２５９．９３５９−９３６４
　（１９８４）に記載された方法を適用することによっ
て測定した。

第１表 トリコキリンの動物に対する毒性は体重２７ないし３２
ｇのスイスメスマウスについて評価した。トリコキリン
は、１群６匹の動物に対し、投与量たり０．５６ないし
２０　Ｂ／ｋｇの投与量（２つの投与量間の比は２）で
腹膣内投与した。ＬＤｓｏは、フィネイによって記載さ
れたスピア−マン−カーパー法（５ｔａｔｉｓｔｉｃａ
ｌ　ＭｅＬｈｏｄｓ　ｉｎ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｓ
ｓａｙ、　ｐ、　５２４−５３０）によって計算した。

トリコキ’、Ｉ：／ノＬＤ５ｏは８．１．　＋Ｈ／ｋｇ
　ｆ　２ＱＺである。

以下の実施例はこの発明を例示するが限定しない。

実施例１　トリコキリンの単離 Ａ）粗抽出物 トリコサンテス・キリロウィの種（１，２ｋｇ）を、５
１１１１！のリン酸緩衝液を含む、８倍体積の０．１４
Ｍ塩化塩化ナトリウム溶液Ｈ７，５）と共にウルトラタ
ラックス（Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ）装設中てすりっふ
した。

マグネチックスタラーてかきまぜなから、抽出を４℃て
一夜続けた。

粗い残渣を除いた後、抽出物を０°Ｃて１００００ｇて
４５分間遠心した。上清を冷たいままデカンテーション
して固化された脂肪を除き、次に硫酸アンモニウムを舊
和点まで加えることによってタンパク質を沈殿させた。

上記した条件で遠心した後、沈殿を５ｍＭのリン酸緩衝
液を含む、［１，１４Ｍ塩化ナナトリウム溶液　ｐＨ７
，５）　１文中に再懸濁した。

溶解されなかった物質を上記と同じ条件で遠心して除い
た。上清を、５１リン酸ＡＩ！Ｆｉ液ｐ　＋＋　７　、
０て平衡化した、室温にあるセファデックスＧ２５カラ
ム（９５ｃｍ　ｘ　１０　ａｍ）に移し、３文／時間の
速度て溶離した。第１のピークを回収した。

Ｂ）イオン交換クロマトグラフィー ２回の操作（２，４ｋｇの種から出発）によって得られ
た抽出物を１つにし、これを最鰐濃度３０ＩＩＩＭまて
の塩化ナトリウムて処理し、３０ｍＭリン酸緩衝液ｐ新
液　７　、０で平衡化したＣＭ−セファロース・ファー
スト・フロー（１７，５ｃｍ　ｘ　５　ｃｎ＋）のカラ
ムに移した。固定されなかった物質は同一の緩衝液て溶
離された。結合されたタンパク質は同一のリン酸緩衝液
（体１２０Ｊ）ｌ中に３０ないし１１０ｍｍｏｌ／　ｌ
の塩化ナトリウムを含む勾配によって溶離した。１時間
当たり１．２文の速度で４００　ｍｌの両分を回収した
。２８０　ｎｍｌ、：おける吸光度及び溶離物の伝導度
を監視した。タンパク質合成に対して阻害活性を示す両
分を１つにしく１５交）、酩酊てｐＨ５，８に酸性化し
た。この溶液を、１１０１ＩＩ酢酸ナトリウム緩衝液ｐ
Ｈ４，５で平衡化したＳ−セファロース・ファースト・
フロー（６，６ｃｍ　ｘ　５　ｃｉ）のカラムに移した
。同一の緩衝液で洗った後、固定されたタンパク質を、
　０．５　Ｍの塩化ナトリウムを含む２０ｍＭのリン酸
緩衝液ｐ＋１７．５で溶離した。

タンパク質を含むピークに対応する画分（２００ｍｌ）
を回収し、５０交の蒸留水に対して３回透析し、凍結乾
燥すると３８０１ｇのトリコキリンが得られた。

Ｃ）ゲルろ過 上て得られたトリコキリンを５０１１の０．１４　Ｍ塩
化ナトリウム溶液に溶解した。不溶性物質を２００００
　ｇ　、３０分間の遠心によって除去した。上清を、５
ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７，ｏて平衡化した４℃のセファ
デックスＧ５０コースカラム（９５ｃｙａ　ｘ５　ａｍ
）に移した。溶離を６０１／時間の速度て行なった。上
記したように、タンパク質を含むピークに対応する溶液
を回収し、透析し、凍結乾燥した。

これにより２６７ｍｇの精製トリコキリンが得られた。

実施例２：Ｓ−アセチルメルカブトサクシノイルートリ
コキリン及びメルカブトサクシノイルートリコキリン １０．５　ｍｇ／＋ｌ　（Ｅ＋０３１　、ｗｉｏｌ／ｍ
ｌ）のＳ−アセチルメルカプトコハク酸無水Ｔｈ（ＳＡ
ＭＳＡ）ジメチルホルムアミド溶液１００鉢ｌを、６１
１の１２５ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７中に５．８　ｍｇの
トリコキリン（０，２１５ｇ　ｍｏｌ）を含む溶液に加
えた。１時間インキュベートした後、反応液を１２５ｍ
Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７に対して透析することによって過
剰の反応物質を除去した。これにより、０．９４８　ｍ
ｇ／ｉｔのＳ−アセチルメルカブトサクシノイルートリ
コキリンを含む溶液５．７　ｍｌか得られた。エルマン
法（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙａ＋ｏｌｏｇｙ　
２５．４５７　（１９７２））によってヒドロキシルア
ミンと反応させると、トリフキリ２１モル当たり０．７
のフリーのＳＨ基を含む（分光光度分析）メルカプトサ
クシノイルートリコキリンが得られた。ポリアクリルア
ミド勾配電気泳動によって調べると、この修飾タンパク
質は、２８０００±３０００の分子量を有する単一のハ
ントを示し、これはもとのタンパク質と一致していた。

実施例３：抗体ＡＴ１５Ｅ　　（抗Ｔｈｙ１．２）とメ
ルカプトサクシノイルートリコキリンとの反応によって
得られる結合体 Ａ）修飾抗体ＡＴＬ５Ｅの調製 抗体ＡＴ１５Ｅは、ネズミ科動物のリンパ球の抗原Ｔｈ
ｙ１．２に対するモノクローナル抗体てあった。

この抗体は、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　１ｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ　１．２２．２４！１１−８　（１９７９）に記載
されたものてあり、ｔｌｙｂｒｉｄｏｍａｌ（１）、　
１３−１７　（１９８１）に記載されたハイブリトーマ
から得られた。

５．５　Ｂ／ｍｌのＮ−サクシシイミシン−３−イル３
−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピオネー
トをエタノール中に含む２５用１の溶液を、０．１　Ｍ
ホウ酸１ｆｆｉ液ｐＨ８，８中に３．５５　ｍｇ／ｕ＋
１の抗体ＡＴ１５Ｅを含む３．７ｍｌの溶液に加えた。

３０分間インキュベートした後、過剰の試薬を１２５１
１ＩＭリン酸緩衝液ｐｌ（７に対して透析した。

透析後、タンパク質溶液を遠心して３．４　ｙｇ／ｍＩ
のタンパク質を含む溶液１１ｍ１を得た。２−メルカプ
トエタノールとの交換によって放出されたピリジン−２
−チオンを３４３ｎｍにおける吸光度分析を行なったと
ころ、得られた抗体は、抗体１モル当たり３．２の活性
化混合ジスルフィド基を有していた。

Ｂ）免疫前（結合体）の調製 上で得られた修飾トリコキリンの溶液５】１（すなわち
、０．１８３　ｇＩｌｏｌ）を上で得られた活性化抗体
の溶液１．９　ｗｌ　（すなわち、０．０４’ｌ　ｇ　
ｍｏｌ）に加え、この混合物を、塩酸ヒドロキシルアミ
ンの１モル溶液３５０ｇ１の存在下て２５°Ｃて２０時
間インキュベートした。溶液を遠心し、セファデックス
Ｇ２００カラム」二てのろ過によって才り製し、溢出物
の吸光度を２８０ｎｍて測定した。抗体とＴＫとの両方
を含む両分を１つにすると、０．２１５ｍｇ／１Ｉｌｌ
　　（すなわち、４．３　ｍｇ）の免疫前を含む溶液２
０ｆｆｉ１か得られた。この溶液は抗体に結合された修
飾トリコキリンを０．０４５　ｍｇ／ｌ含んでいた。

この製剤中の抗体１モル当たりの平均結合率は１．４７
にてあった。このようにして得られた結合体は、上記式
（ｌｔｌａ）においてＰｏがアミノ官能を有さない抗体
ＡＴ１５Ｅの基、ｍか１．５であるものであった。

免疫活性試験 トリコキリンの１つの性質は真核細胞中てのタンパク質
合成を阻害することである。従って、行なった試験は、
非細胞系モデル又は細胞系モデルにおけるタンパク質合
成阻害試験である。

Ａ）非細胞系モデル 生体外でのプロトコールは、人工メツセンジャーＲＮＡ
、ポリウリジル酸、の存在下で”Ｃ−フェニルアラニン
を取り込むことがてきるラット肝臓のサブセルラー画分
てあった。

サブセルラー画分の調製及び１４Ｃ−フェニルアラニン
の取り込みの測定に採用した方法は、ラット肝細胞のミ
クロソーム画分とサイドシル画分の両方を用いた。　８
ｉｏｃｈｍｉｃａ　ｅヒ８ｉｏｐｈｐｈｙｓｉｃａＡｃ
ｔａ　３１２．６０８−６１５　（１９７３）に記載さ
れた方法を修飾したものである。トリコキリンを含む試
料は、０．２ｚの２−メルカプトエタノールと１５ｇ／
ｍｌのウシ血清アルブミンとを含む、５０１トリス塩酸
緩衝液ｐ）１７．６に適当に希釈された溶液の形態て導
入した。カウントデータを、それぞれの反応液について
、＋ＩＣ−フェニルアラニンの取り込みの、阻害剤を含
まない対照液に対する阻害パーセントを計算するために
用いた。

得られた値により、実験条件下において１４Ｃ−フェニ
ルアラニンの取り込みを５０％阻害するトリコキリンの
濃度（すなわち１ｃｓｏ）を決定することかできた。す
なわち、もとのトリコキリンのＩ　Ｃｓ。は７　ｘ　１
０−”Ｍてあり、修飾トリコキリンのそれは８−１０　
ｘ　１０−”Ｍであることかわかった。従って、修飾に
よって、トリコキリンの活性は有意に損失しない。

Ｂ）細胞モデル上てのトリコキリン免疫毒の特異的細胞
毒性 トリコキリンの生物学的活性は真核細胞系においてタン
パク質合成を阻害することである。採用した方法は、ガ
ン細胞内への１４Ｇ−ロイシンの取り込みに対する研究
物質の影響を測定することであった。用いた細胞は、表
面抗原Ｔｈｙｉ、ｚを表現するＴ白血病ネズミ科動物か
ら誘導されたＴ２セルラインに属するものてあった。細
胞を種々の濃度の研究物質の存在下でインキュベートし
、インキュベート終了後、このようにして処理した細胞
による１４Ｃ−ロイシンの取り込みの程度を調べた。

この測定は、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃ
ａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ　２４９　（ＩＩ）、　３５５
７−：１５６２　（１９７４）に記載された方法に基づ
き、トレーサー”Ｃ−ロイシンを用いてタンパク質合成
の程度を決定することによフて行なった。ろ過によって
単離された全細胞上の、取り込まれた放射能を測定した
。

これらの測定に基づき、横軸上に研究物質中のトリコキ
リンのモル濃度をプロットし、縦軸上に、タンパク質合
成に影響を与える物質の不存在下における対照細胞に比
較した１４Ｃ−ロイシンの取り込みを百分率で示したも
のを縦軸にとって、ドーズ／効果曲線を描くことができ
た。

このように、それぞれの研究物質について、１４Ｃ−ロ
イシンの取り込みの５０％を阻害する濃度、すなわち「
５０％阻害濃度ＩＣ６ｏＪを決定することができた。第
２表はトップキリン免疫毒及び未結合トリコキリンにつ
いて同一の実験により得られたＩＣ，。値を示している
。

第２表 トリコキリンＩＴは、未結合のトリコキリンの１万倍以
上も高い非常に強力な細胞毒活性を有することかわかる
。

この新規な群の免疫毒は、破壊すべき標的細胞が免疫毒
を調製するために用いられた抗体又は抗体断片によって
認識される、ガン又は非ガン疾病の治療に用いることか
てきる。最適な投与態様及び治療の期間は、患者及び治
療すべき疾病の性質に応じて個々のケースにおいて決定
される。

この発明の生理活性物質は適当ないずれの方法によって
も投与のために製剤することかてきる。通常、活性物質
は注射によって投与され、非発熱性液体、好ましくは水
中で製剤される。水は、等張液にするために緩衝液や塩
化ナトリウムのような生理学的に許容できる塩を含んで
いてよい。

抗腫瘍治療のためには、トリコサンチン又はトリコキリ
ンの結合体としての１日の投与量は、１ないし１００ｍ
ｇ、有利には５ないし５０Ｉ１ｇ、例えば約Ｌｏｎｇで
ある。

結合体の形態にあるトリコサンチン又はトリコキリンを
含む投与単位は例えば、工ないし１００ｍｇのトリコキ
リン結合体又はトリコサンチン結合体を通常含む注射用
アンプルである。

出願入代理入弁理土鈴江武彦

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）ＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）の存在下にお
   けるポリアクリルアミドゲル上での電気泳動によって決
   定される分子量が２８０００±３０００の糖タンパク質
   であり、 ９以上の等電点を有し、 その中性糖の含量が１．１ないし１．５重量％であって
   、０．３ないし１．２％のマンノースを含み、タンパク
   質１モル当たりの残基の数±２０％で表現された以下の
   アミノ酸組成を有し、 Ｌｙｓ：１７．３　Ｈｉｓ：１．１　Ａｒｇ：５．７　
   Ａｓｘ：２２．８　Ｔｈｒ：１８．９　Ｓｅｒ：２３．
   ５　Ｇｌｘ：２１．６　Ｐｒｏ：８．０　Ｇｌｙ：１５
   ．０　Ａｌａ：２１．１　１／２Ｃｙｓ：１．９　Ｖａ
   ｌ：１２．５　ＳＭｅｔ：３．０５　Ｉｌｅ：１５．８
   　Ｌｅｕ：２４．３　Ｔｙｒ：１２．１　Ｐｈｅ：１０
   ．１　Ｔｒｐ検出せず（ただし、Ａｓｘはアスパラギン
   酸及びアスパラギン残基の両方を示し、Ｇｌｘはグルタ
   ミン酸及びグルタミン残基の両方を示し、１／２Ｃｙｓ
   は、分析に中に測定された、システイン酸の形態にある
   、もとのタンパク質のシステイン残基を示す） 以下の末端アミノ酸配列を有する、 【アミノ酸配列があります】 トリコキリンと呼ばれるリボソーム阻害タンパク質及び
   フリー又はブロックされたＳＨ基を有するその修飾誘導
   体。
2. （２）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （ただし、ＴＫ＾ｏはトリコキリンの基、Ｗは水素又は
   アセチル基、ｎは０．２ないし３）で示される、メルカ
   プトコハク酸トリコキリン。
3. （３）ｎが０．４ないし１である特許請求の範囲第２項
   記載のメルカプトコハク酸トリコキリン。
4. （４）Ｗが水素であり、ｎが０．７である特許請求の範
   囲第２項又は第３項に記載のメルカプトコハク酸トリコ
   キリン。
5. （５）Ｗがアセチル基でありｎが０．７である特許請求
   の範囲第２項又は第３項記載のメルカプトコハク酸トリ
   コキリン。
6. （６）すりつぶしたトリコサンテス・キリロウィの種を
   ｐＨ６．５〜７．５の緩衝液の存在下で水で抽出し、不
   溶性物質を除去し、ｐＨ７．２ないし７．７の、塩化ナ
   トリウムを含む緩衝液を溶離液として用いた弱酸性イオ
   ン交換樹脂上でのクロマトグラフィーによって該粗抽出
   物を分画し、阻害剤タンパク質を含む画分を回収し、得
   られたタンパク質をゲルろ過によって精製することを含
   む、トリコキリンの製造方法。
7. （７）低分子量物質が透析によって抽出物から除去され
   る特許請求の範囲第６項記載の方法。
8. （８）Ｓ−アセチルメルカプトコハク酸無水物をトリコ
   キリンと反応させることを含む、特許請求の範囲第２項
   ないし第５項のいずれか１項に記載された修飾トリコキ
   リンの製造方法。
9. （９）特許請求の範囲第１項ないし第５項のいずれかに
   記載された誘導体から成る、ハプトマーと結合すること
   による結合体を製造するための材料。