JPS63214181A - ヒト・パピロ−マ・ウイルス１８型の発現生成物、これらのタンパク質に特異的な抗体およびこれらの抗体または対応するｄｎａを含む診断助剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［従来の技術］ デュルスト（Ｄｕｅｒｓｔ）らは、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ
１、　Ａｃａｄ。

Ｓｃ１．ＵＳＡ、８０巻、（１９８３年）３８１３〜３
８１５頁にＨＰＶ１６と呼ぶ新しい型のヒト拳パピロー
マ・ウィルス（ＨＰ　Ｖ）を記載している。

このウィルスのＤＮＡ配列およびゲノム構成は、ゼード
ルフ（Ｓｅｃｄｏｒｆ）らのＶｉｒｏ１０ｇｙ、　１４
５巻、（１９８５年）、１８１〜１８５頁に記載されて
いる。もう一つの新しい型のヒト・パピローマ・ウィル
スは、ボスハート（ＢｏｓｈａｒＬ）らのＥＭＢＯＪ。

３巻（１９８４年）、１１５１〜１１５７頁に記載され
、ＨＰＶ１８と命名されている。後者の文献テハ、ＨＰ
Ｖ１６とＨＰＶ１８との間の類似性、具体的には両者と
も悪性生殖器腫瘍に関連しているという事実について言
及されている。ゲノムの大きさは同程度の大きさの約７
．９ｋｂであり、ゲノム構成は同じである。

［発明が解決しようとする問題点］ パピローマ・ウィルスは培養によって複製することは出
来ない。したがって、診断助剤としてのＨＰＶ１８ＤＮ
Ａの使用、発現生成物の単離、抗原としてのそれらの使
用、抗体の単離、対応する診断助剤の調製には、遺伝子
操作の工程が必要である。

Ｅ問題点を解決するための手段］ 本発明はゲノムおよびＨＰＶ１８のｃＤＮＡの部分特徴
化に基づくものである。これにより、ＨＰＶ１８による
生殖器腫瘍の早期診断が可能になる。

本発明は特許請求の範囲に記載されている。本発明のそ
の他の態様は、以下に詳細に説明する通りである。

ＤＮＡ配列１は、ＨＰＶ１８（７）最初１７）１７２０
ｂｐを示している。発現生成物Ｅ６、Ｅ７およびＥｌは
、適当に印が付けである。読取り枠はそれぞれ右端に示
されている。角括弧はスプライス供与部位およびスプラ
イス受容部位を示す。

２．７ｋｂＸｂａＩフラグメントの部分配列と相同性に
ついてのＨＰＶ１６との比較によって、ＨＰＶ１８ゲノ
ムの開放読取り枠Ｌ１の核酸およびアミノ酸配列を決定
することができ、以下の表に示しである。ＨＰＶ１６と
の相同部位はＨＰＶ１６のＤＮＡ配列の位ｆｉｆ５７５
４と５８７１との間に位置している。

表−１ とＮＩＩａｕ　Ｔｒツニｍ弧田ヱ兜力！鼠ＤりＡｉ力店
）［ＰＶ１８　　ＴＣ〒　ＡＧＡ　　？１’Ａ　　ｆｆ
ｌ　　ＡＣ’ｌ’　　（７１’Ｔ　　ＯＧで　ＡＡ’ｌ
’　　ＯＣＡ　　’ａ’ｌ’　　ｆｆｌ　　ＡＧＧ　　
ＯでＴＨＦＶ１６　　？ＣＣＡＧＡ　　Ｃ’ａ　　Ｃｆ
ｆ　　０１ｌｌｊＡ　　Ｇｌ”１’　　ＧＧＡ　　ＣＡ
Ｗ’　　ＣＣＣ’ａ？　　ｆｆ！’　　ＯＣＴ’　ＡＴ
Ｔと慇り述り艷（畦雲弘１陸号！−ロ匣迦ｉ’ｒｏ　Ｈ
ａ田ヱ田１田１と匹≧！健ユ々ｍ迦り乃旦弧≦！に呈■
７　■Ａ（Ｘπ　■π　■℃　Ｍα　晶Ｇ　　ＣＡＧ　
　ＧＡ？　　Ａ實　ＣＣＩ’　　靜Ｇ　９テ　α１　■
ＡＡＡＡ　　ＡＡＡ　　ＣＣＴ　　ＡＡＣＡＡＴ　　ｕ
ｃ　　ＡＡＡ　　Ａ？Ａ　　ｆｆＡ　　Ｃ１’ｎ　　Ｃ
ＣＴ　　ＡＡＡ　　ＧＴＡ　　’ＩＴＡ　　ＧＧＡＴｘ
＝　Ｘ！Ｙ！ＬＰｒｏ　々巳兜兜≧！迦ｈＮ力！乃！１
と健ヱ！！ｌ！、倶ユ試担五虱二！担ＨＶａｌ　健ユｈ
力！ＴＡＧ　　ＣＡＡ　　’ａ’ｌ’　　ＡＧＡ　　Ｇ
ＴＡ　　ｆｆｌ　　ＡＧＧ　　ＧＴＧ　　ＣＡＧ　　Ｔ
ＴＡ　　ＣＣで７償　ＣＡＡ　　υＣＡＧＧ　　舒Ａ？
ｆｆｌ’　　献玖　ＭＡ　Ｃ鯉　賛Ａ　　ＣＣ’！’と
！田ユ鼠担五Ｖａｎ　、　Ｐｈｅ　担五迦工旦Ｉａｕ　
Ｐｒ。

このＤＮＡ配列を知れば、当業者はＨＰＶ１８のタンパ
ク質Ｌ１をコードする全ＤＮＡ配列を容易に決定するこ
とができる。

本明細書に開示されているＨＰＶ１８のＤＮＡ部分配列
を知れば、ゲノム構成はＨＰＶ１６と一致するので、例
えばデュルスト（Ｄｕｅｒｓｔ）らおよびボスハート（
Ｂｏｓｈａｒｔ）らによって記載されて０るように好適
な遺伝子バンクからＨＰＶ１８の全ＤＮＡを単離して、
それを特徴化することも可能となった。ボスハート（Ｂ
ｏｓｈａｒｔ）らによって報告された株化細胞（ＨｅＬ
ａ、ＫＢ、Ｃ４−１）とは別に、５Ｗ７５６もゲノムま
たはｃＤＮＡ遺伝子バンクの基礎として好適である。特
に、ＨＰＶ１８ゲノムは高コピー数でＨｅＬａ株化細胞
に導入される。

ＤＮＡ配列ＩＩは、開放読取り枠Ｅ６またはＥ６＊、Ｅ
ｌおよびＥｌ（開始）の領域におけるＨｅＬａ細胞のｍ
ＲＮＡから得たｃＤＮＡ配列を示している。矢印は、ス
プライス部位を示す。切断イントロンＥ６は、細線で印
を付けである。システィン残基は、四角で囲んで強調し
である。

ＨＰＶ１６および１８の読取り枠の限界を知れば、自体
公知の方法で通常の発現系において対応するＤＮＡ配列
を発現させてウィルスタンパク質を得ることが可能であ
る。ｐＰＬｃ２４型の発現ベクター（ルモー（Ｒｅｓａ
ｕｔ）ら、Ｇｅｎｅ、　１５巻、（１９８１年）、８１
〜９３頁、２２巻、（１９８３年）１０３〜１１３頁、
Ｎｕｃ１、　ＡｃｆｄｓＲｅｓ　、、１１巻（１９８３
年）４６７７〜４６８８頁）が特に好適であることが分
かった。ＭＳ−２ポリメラーゼφセグメントのポリリン
カー下流および（このポリリンカーのＳｍａ　Ｉ部位へ
の）８−１１０−または１２−ｖ−ＥｃｏＲＩリンカ−
を挿入すると、ｐＰＬｃ２４から発現ベクターｐＥＸ３
−マー、ｐＥＸ１０−マーおよびｐＥＸ１２−マーを生
成し、これらは容易に正確な読取り枠にフラグメントを
クローン化することができる。これによって、ＭＳ−２
ポリメラーゼセグメントとコード化したウィルスタンパ
ク質またはタンパク質部分とから成る融合タンパク質が
得られる。イー・コーリ（Ｅ、　ｃｏｉｌ）では、これ
らは細胞破壊後の膜分画において不溶性融合タンパク質
として見出だされ、これによって処理および精製が非常
に容易になる。この方法で得られるタンパク質は、実験
動物を免疫化するときの抗原として直ちに使用すること
ができる。

例１：ベクター構築 発現ベクターｐＰＬｃ２４　（ルモー（Ｒｅｉａｕｔ）
ら、１９８１年、上記文献）は、ＥｃｏＲＩで開裂させ
、突出末端にフレノウ（Ｋｌｅｎｏｖ）酵素を用いて埋
填を行い、プラント末端を再度連結する。これによって
ＥｃｏＲＩ開裂部位が除去される。この方法で改質され
たベクターを次にＢａｍＨＩおよびＨｉｎｄｌ　Ｉ　Ｉ
で開裂させ、ポリリンカー配列を後者の部位にクローン
化する。

このために、プラスミドｐＵＣ８をＥｃｏＲＩ開裂させ
、末端を埋填し、８ｇｌｌｌリンカ−を挿入する。Ｂｇ
ｌｌｌ−ＨｉｎｄｌｌＩポリリンカーフラグメントを次
に切断して、改質ｐＰＬｃ２４中に挿入する。

生成するベクターを次にＳｍａ　Ｉで開裂させ、以Ｆの
表に示す３種類の（プラント末端）ポリリンカーの一つ
を開裂部位に挿入する。この方法では、発現ベクターｐ
ＥＸ８−ｖ−１ｐＥＸ１０−マーおよびｐＥＸ１２−マ
ーが得られる。これらのベクターは、ポリリンカー領域
ＢａｍＨＩ−５ａｌＩ−Ｐｓｔｌ−ＨｉｎｄｌＩＩがそ
れぞれの場合における読取り枠中の一つの位置に関して
シフトしていることだけが異なっている。

ｐ江シｋＩ＃ｕ　Ａｓｐ　＆ｒ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　１Ｐ
ｒｏ　３ｅｒ　旨Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　？
ｒｐＣ’！Ｇ　ＡＡ’ｌ’　ＴＣＧ　（Ｘ）Ｇ　ＧＡ？
　ＣＣＧ　ＴＣＧ　ＡＣＣＴＧＣＡｔ）ＣＣＡＡ　ＧＣ
Ｔ　’１ｍｐＥＫ＋ｏ−マーｔａｕ　　Ａｓｐ　　９ｅ
ｒ　　＠ｙ　　Ｇｌｙ　　９ｅｒ　　−α　Ａｓｐ　　
Ｉａｕ　　Ｇｌｕ　　Ｔｈｒ　　Ｓｅｒ　　ｌ５ｕＣ？
Ｇ　ＡＡ’ｌ’　ＴＣＣＯＯＧ　ＯＯＡ　ＴＣＣＧ１’
ＣＧＡＣＣ’ｌＧ　ＣＡＧ　ＣＣＡ　ＡＯＣＴＴＧｐＥ
Ｋ１２−７−　ＴＪｌｕ　　Ａｓｐ　　Ｅｌｅｒ　　Ｇ
ａｙ　　Ｇｌｙ　　ｎ＠　Ａｒｇ　　Ａｒｇ　　Ｐｒｏ
　　Ａｌａ　　Ａｌａ　　ｌ６ｒｓ　　ｌ５ｕＣＴＧ　
ＡＡ？　Ｔｌ１ｌ：Ｃ０ｆＸ）　ＧＧＧ　ＡＴＣ（ＸＦ
Ｉ’　ＣＧＡ　ＣＣＴ　ＯＣＡ　ＧＣＣＡＡＧ　Ｃ實Ｔ
ｈｏＲＩ　　ＷａｉＸＢａａＭＸ　　Ｆ３ａｌＸ　　　
＆ｔＩ　　　！（ｉｎｄＩエエしたがって、これらのベ
クターは融合タンパク質をコードするものであって、こ
の融合タンパク質は、就中、Ｍ　Ｓ　−２ポリメラーゼ
の初めの１００個のアミノ酸があり、ポリリンカー配列
に対応する架橋要素が続いて、これに所望なタンパク質
、すなわち本発明の場合にはウィルスタンパク質、が付
着しているものである。

スプライスされるウィルスタンパクｔＥ６”をコードす
るｃＤＮＡの挿入物を含む発現ベクターを、例示のため
に以下に説明する。

ＨｅＬａ細胞からのＨＰＶ１８陽性ｍＲＮＡを、Ｓ１ヌ
クレアーゼでプラント末端としたｃＤＮＡに転換した。

ＥｃｏＲＩリンカ−の付着およびＥｃｏＲＩで切断した
後、生成するセグメントをＥｃｏＲＩで開裂したファー
ジλＮＭ１１４９中に連結し、文献（マーレイ（Ｈｕｒ
ｒａｙ）のｒＬａｍｂｄａ　Ｉ　ＩＪ　、アール争ダブ
リュ・ヘンドリックスＲ，Ｗ、　ｌ１ｅｎｄｒｌｘ）監
修、３５９〜４３２頁、コールドＯスプリング・ハーバ
−〇ラボラトリー・ブレス（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　
１ｌａｒｂｏｒ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ）、
ニューヨーク、１９８３年）記載のようにパッケージン
グおよび選択を行った。クローン化したＨＰＶ１８　　
ＤＮＡをＥｃｏＲＩを用いて再度単離して、アガロース
ゲル電気泳動法によって精製した。

ｃＤＮＡは、Ｅ６およびＥ６”のＮ末端にＮｃｏＩの開
裂部位を含む。この酵素で開裂させ、突出末端を埋填し
て、プラント末端ＤＮＡフラグメントとする。

発現ベクターｐＥＸ１０−マーをＢａｍＨＩで切断し、
突出末端を埋填する。プラント末端にしたｃＤＮＡフラ
グメントをこの埋填開裂部位に連結すると融合タンパク
質をコード化するベクターを生じる。この融合タンパク
質は、ＭＳ−２の１００個のアミノ酸の後に、最初にア
ミノ酸Ｌｃｕ−Ａｓｐ−８ｏｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−８ｏ
ｒが続き、次いでメチオニンを介してＥ６　の５６個の
アミノ酸が続く、というものである。

同様にして、他のウィルスタンパク質をコードする発現
ベクターを構築することができる。

例２：融合タンパク質の発現 イー・コーリ（Ｅ、　ｃｏｌｔ）　５３７株のコンピテ
ントバクテリアを、例１の発現ベクターを用いて形質転
換する。この株はプラスミドコード（ｐｌＢｓｓｌｄ−
ｃｏｄｅｄ）リプレッサー遺伝子を含み、その温度感受
性遺伝子生成物は２８℃の温度でλＰ、プロモーターに
よって制御される発現を抑制する。負の制御は、温度が
４２℃（ルモー（Ｒｅｓａｕｔ）ら、Ｇｅｎｅ２２、上
記文献）に上昇するとなくなる。更に、このプラスミド
は、アンピシリン耐性の遺伝子を有する。

形質転換バクテリアの単一コロニーは先ず２８℃で定常
期にまで蓄積させて、次いで４２℃に予熱したＬＢ培地
で１＝４の比率に希釈し、４２℃で更に３時間振盪する
。バクテリアがペレットとなってからその一部（ａｌｉ
ｑｕｏｔ　）を溶菌溶液で処理すると、ＳＤＳポリアク
リルアミドゲル上で電気泳動法による分析で、期待した
発現バンドを同定することができる。融合タンパク質は
、総細胞タンパク質の２０％までを占める。発現したタ
ンパク質の分子鑓は、アミノ酸配列から誘導される値と
良好に一致する。

例３：融合タンパク質の精製 ペレット状イー・コーリ（Ｅ、　ｃｏｌｌ）細胞（５リ
ツトルの培養物）を４０ｍ１の緩衝液（８％スクロース
、５０ｍＭＥＤＴＡ、５０ｍＭトリス、ｐＨ８，２００
μｇ／ｍｌリゾチーム）に再分散させ、室温で１５分間
放置する。０．１％界面活性剤（トライトン（ＴＲＩＴ
ＯＮｆ＠Ｘ　−１００、ポリオキシエチレン生成物）を
加えた後、細胞を音波処理し、下記のように処理する。

３７℃で１５分間インキュベージジンした後、１８．０
０Ｏｒｐｍの遠心分離を１５分間行う。

生成するペレットを２５ｍ１のＰＢＳ （Ｎ　ａ　２　ＨＰ　Ｏ４８ｍ　Ｍ　１Ｎ　ａ　Ｈ２Ｐ
　Ｏ４８ｍ　Ｍ　１ＮａＣｌ　１４０ｍ、Ｍ）に採り、
０．１％界面活性剤を加え、混合物を音波処理し、３７
℃で１５分間インキュベーションし、次いで再度 １８．０００ｒｐｍで１５分間遠心分離する。生成する
ペレットをＩＭ尿素２５ｍ１中に採り、混合物を音波処
理し、３７℃で１５分間インキュベーションし、再度１
８．０００ｒｐｍで１５分間遠心分離する。生成するペ
レットを７Ｍ尿素中に採り、混合物を音波処理し、再度
１８．０００ｒｐｍで１５分間遠心分離する。この方法
で得られる」二澄液は、９０％にまで富化した融合タン
パク質を含む。

例４：免疫感作 ウサギをそれぞれ１■の融合タンパク質（ＦＥＢで透析
したもの）および１ｍｌの完全フロイントアジュバント
で免疫する。不完全フロインドアジュバント中の等量の
タンパク質を３〜４週間の間隔で少なくとも３回皮下注
射をする。

抗血清の調製 血餅を初めに低速度（５０００ｒｐｍ、１０分間）で遠
心分離し、血清（上澄液）を除去し、ペレットを次に高
速度（１５，ＯＯＯｒｐｍ、１０分間）で再度遠心分離
する。上澄液を車とめて、硫酸アンモニウ、ムで４５％
飽和し、混合物を冷蔵室に１時間放置する。沈澱物をペ
レットにしく１２．００Ｏｒｐｍ、１０分間）、このペ
レットをＰＢＳに溶解し、免疫グロブリンを硫酸アンモ
ニウムで沈澱させる。再度ベレット化し、ペレットをＰ
ＢＳで溶解した後、抗体をＰＢＳに対して一晩透析し、
緩衝液を数回変える。次に、抗血清を一２０℃で凍結す
る。

ポリクローン抗血清の精製（親和性クロマトグラフィ） 抗血清はイー・コーリ（Ｅ、　ｃｏｌｌ）からの融合タ
ンパク質に対するものであるので、それらは、ＭＳ−２
部分およびイー・コーリ（Ｅ、　ｃｏｌｌ）タンパク質
に対する抗体を含む。これらの好ましくない抗体を除去
するため、以下のようにＭＳ−２およびイー・コーリー
（Ｅ、　ｃｏｌｔ）タンパク質を臭化シアンで活性化し
たセファロース■（５ＥＰＩＩＡＲＯ８Ｅ）に結合させ
る。

臭化シアンで活性化した２ｇのセファロースをガラスフ
ィルター上で水冷１ｍＭ塩酸２００ｍ１で、次いでカッ
プリング緩衝液（５０ｍＭホウ酸塩、ｐＨ８，５００ｍ
ＭＬｉＣ１、０．５％ＳＤＳ、同様に氷冷したもの）で
洗浄してから、２０ｍ１のタンパク質溶液（２■／　ｍ
ｌ　ｓカップリング緩衝液に対して透析したもの）に採
り、室温で２時間回転する。未結合タンパク質をカップ
リング緩衝液で洗浄し、遊離の結合部位を１Ｍエタノー
ルアミン（ｐＨ９）を添加することによって飽和させる
（室温で２時間）。タンパク質−セファロース複合体を
次にカップリング緩衝液および酢酸緩衝液（０，１Ｍ酢
酸塩、ｐＨ４，５００ｍＭＮａＣｌ）で交互に洗浄し、
カラムに充填してＰＢＳで平衡にする。

抗血清をそれぞれこの型のカラムに４回通過させる。そ
れぞれの精製工程の後、ＭＳ−２およびイー・コーリ（
Ｅ、　ｃｏｌｌ）タンパク質に対する結合抗体を０，１
Ｍグリシン（ｐＨ２，５）で洗浄することによって溶出
させ、タンパク質カラムをＰＢＳで再度平衡にし、精製
処理を繰り返す。ＭＳ−２およびイー・コーリ（Ｂ、　
ｃｏｌｔ）タンノ櫂り質に対する抗体が無くなった血清
を０．１％ナトリウムアジドと混合して、４℃で保存す
る。

この抗血清を用いると、自体公知の方法で抗原を直接検
出することだけでなく、本発明によって得られる抗血清
を用いて調製した抗体カラムを用いて抗原を富化するこ
ともできる。

得られた融合タンパク質を用いると、自体公知の方法に
よってモノクローン抗体を調製し、これらを診断助剤に
使用することができる。

得られる特定の抗血清の抗体タイターは、特定の融合タ
ンパク質に対するウェスターン・プロ・ット試験（Ｗｅ
ｓｔｅｒｎ　ｂ１０ｔ　ｔｅｓｔ）で決定したＯこのた
め、抗原を連続希釈して、希釈物をＳＤＳポリアクリル
アミドゲルに施し、電気泳動の後、タンパク質をニトロ
セルロースに移し、フィルターを対応する抗血清の希釈
物と共に一晩インキユベーションした。未結合抗体を洗
浄して除き、それぞれフィルターを１０ｃｐｍの１２５
１−タンパク質入中で少なくとも２時間インキュベーシ
ョンした後、洗浄処理を繰返、フィルターを乾燥して、
Ｘ線フィルムに暴露した。以下のタイターが見られた。

１、事件の表示 昭和６２年　特許願第１８４６３５号 ２、発明の名称 ヒト・パピローマ−ウィルス１８型の発現生成物、これ
らのタンパク質に特異的な抗体およびこれらの抗体また
は対応するＤＮＡを含む診断助剤３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 ベーリングベルケ、アクチェンゲゼルシャフト４、代　
理　人　（郵便番号１００） 東京都千代田区丸の内三丁口２番３号 電話東京（２１１）２３２１大代表

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ＨＰＶ１８のＤＮＡ（ＤＮＡ配列 I ）。 ２、遺伝子操作によって得られるＨＰＶ１８発現生成物
   。 ３、ＨＰＶ１８Ｅ１、Ｅ６、Ｅ６＾＊、Ｅ７またはＬ１
   タンパク質である特許請求の範囲第２項記載の発現生成
   物。 ４、ＨＰＶ１８発現生成物に対するモノ−およびポリク
   ローン抗体。 ５、ＨＰＶ１８Ｅ１、Ｅ６、Ｅ６＾＊、Ｅ７およびＬ１
   タンパク質に対する特許請求の範囲第４項記載の抗体。 ６、特許請求の範囲第４項記載の抗体を含む診断助剤。 ７、特許請求の範囲第５項記載の抗体を含む診断助剤。 ８、生検またはスミア材料を特許請求の範囲第６項記載
   の診断助剤と接触させることから成る、ＨＶＰ１８感染
   症の診断法。 ９、特許請求の範囲第７項記載の診断助剤を用いて該接
   触を行う、特許請求の範囲第８項記載の方法。 １０、ハイブリダイゼーション・プローブとして、ＨＰ
   Ｖ１８発現生成物またはそれらの発現生成物の部分をコ
   ードするＤＮＡを用いることから成る、ＨＰＶ１８感染
   症の診断法。 １１、ＨＰＶ１８感染症に罹っていると推定されるヒト
   のＲＮＡまたはＤＮＡを該ハイブリダイゼーション・プ
   ローブと接触させる、特許請求の範囲第１０項記載の方
   法。 １２、ＨＰＶ１８発現生成物をコードするＤＮＡまたは
   このＤＮＡの部分を含む診断助剤。 １３、発現ベクターｐＥＸ８−マー、ｐＥＸ１０−マー
   およびｐＥＸ１２−マー。 １４、特許請求の範囲第１３項記載のベクターの一つの
   ポリリンカー部分に、発現用ＤＮＡを含む、ハイブリッ
   ド・ベクター。 １５、ＨＰＶ１８発現生成物を含むワクチン。 １６、ＨＰＶ１８発現生成物がＥ１、Ｅ６、Ｅ６＾＊、
   Ｅ７またはＬ１タンパク質である、特許請求の範囲第１
   ４項記載のワクチン。 １７、ＨＰＶ１８タンパク質をコードする ＤＮＡを含む医薬。