JPS631939B2 - - Google Patents
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Description
本発明は、γ−L−グルタミル−p−アミノア
ニリド誘導体〔〕又はその塩及びこれを用いる
γ−グルタミルトランスフエラーゼ(以下、γ−
GTPという。)の測定方法に関するものである。 本発明のγ−L−グルタミル−p−アミノアニ
リド誘導体〔〕は新規物質であり、γ−GTP
の測定用の基質として極めて有用である。 γ−GTPは肝臓機能検査上、重要な指標とな
る生体酵素で、γ−GTPの活性測定は極めて測
定頻度の高い測定項目である。 従来γ−GTP活性値の測定には、基質として
γ−L−グルタミル−p−ニトロアニリドが使用
されている。しかしながらこの基質は酵素反応を
行うための緩衝液に極めて溶け難く、そのための
可溶化剤の使用を必要としている。且つ酵素反応
によつて生成したp−ニトロアニリン量を波長
410nmの吸光度で測定しているので、血清成分
中に存在する同波長域に吸収を持つ物質、特にビ
リルビンの影響は避けられないと言う欠点を有す
る。 本発明者らはかかる欠点に鑑み鋭意研究の結果
一般式 (式中、Aは低級アルキレン基を表わし、Rは低
級アルキル基を表わす。)で示されるγ−L−グ
ルタミル−p−アミノアニリド誘導体〔〕又は
その塩が上記欠点を悉く解消し、基質としてのγ
−GTPの反応性が高く且つ十分な溶解性を有し、
測定の波長も410nmよりも長波長域で測定でき
る等の極めて顕著な効果を奏する本発明を完成す
るに至つた。 即ち、本発明は、一般式 (式中、Aは低級アルキレン基を表わし、Rは低
級アルキル基を表わす。)で示されるγ−L−グ
ルタミル−p−アミノアニリド誘導体又はその塩
及びこれを基質として用いることを特徴とするγ
−GTPの測定方法である。 本発明のγ−L−グルタミル−p−アミノアニ
リド誘導体〔〕又はその塩の例としてはγ−L
−グルタミル−p−(N−エチル−N−ヒドロキ
シエチルアミノ)アニリド、γ−L−グルタミル
−p−(N−エチル−N−ヒドロキシプロピルア
ミノ)アニリド等又はこれらの塩等が挙げられ
る。 本発明のγ−L−グルタミル−p−アミノアニ
リド誘導体〔〕又はその塩は、通常、例えば次
のような方法により容易に製造することができ
る。 即ち、例えばN−フタリル−γ−L−グルタミ
ン酸無水物等のN−保護−γ−L−グルタミン酸
無水物と一般式 (式中、Aは低級アルキレン基を表わし、Rは低
級アルキル基を表わす。)で示されるp−フエニ
レンジアミン誘導体〔〕とを反応させて、N−
フタリル−γ−L−グルタミル−p−アミノアニ
リド誘導体等のN−保護−γ−L−グルタミル−
p−アミノアニリド誘導体を得、次いで自体公知
の方法例えば常法によりフタリル基等の保護基を
除去し、本発明のγ−L−グルタミル−p−アミ
ノアニリド誘導体〔〕又はその塩を得る。 本発明に係る低級アルキレン基の例としてはメ
チレン基、エチレン基、プロピレン基等の炭素数
1〜5の低級アルキレン基が挙げられ、低級アル
キル基の例としてはメチル基、エチル基、プロピ
ル基等の炭素数1〜5の低級アルキル基が挙げら
れる。 前段の反応に際し、N−保護−γ−L−グルタ
ミン酸無水物はp−フエニレンジアミン誘導体
〔〕に対して当量若しくは稍過剰に使用するの
が好ましく、要すれば溶媒例えばクロロホルム、
ジクロルエタン等を使用し、必要に応じて有機酸
例えば酢酸等を共存させて、通常は20〜100℃で
反応させる。反応終了後は常法に従つてN−保護
−γ−L−グルタミル−p−アミノアニリド誘導
体を分離し、次に例えばヒドラジンを、要すれば
溶媒の存在下に反応させる。ヒドラジンはそのま
までも水加物でもそれらの塩であつても良く、通
常水加物の使用が便利である。この反応は通常水
又は溶剤を用いるが、反応に影響を与えないもの
であればいずれでもよく、例えばメチルアルコー
ル、エチルアルコール等のアルコール類、テトラ
ヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類等水溶
性溶剤の使用が好ましい。 後段の反応はN−保護−γ−L−グルタミル−
p−アミノアニリド誘導体に対し当量若しくは稍
過剰のヒドラジンを用いて60℃以下、好ましくは
10〜30℃で行う。反応後、常法に従い目的物を単
離し、要すれば酸又はアルカリで中和すれば所望
する塩が得られる。 本発明の新規なγ−L−グルタミル−p−アミ
ノアニリド誘導体〔〕又はその塩はγ−GTP
活性値測定用基質として用いられ、通常は至適条
件であるPH8.0〜8.5で測定されるが、従来のγ−
GTP活性値測定用基質として広く用いられてき
たγ−L−グルタミル−p−ニトロアニリドは上
記弱アルカリ側のPH範囲では溶解度が極めて悪
く、たとえばPH8.0の0.05Mホウ酸緩衝液に0.09%
(0.003M)溶解するのみで基質量として必要な
0.001〜0.015M溶液にするには塩酸塩として溶解
したのち、緩衝液でうすめ、過飽和溶液として測
定時間中かろうじて必要濃度をもたせるか、界面
活性剤等で溶解を補助する必要があり、いずれの
場合でも満足される条件ではない。 しかるに本発明の新規な基質であるγ−L−グ
ルタミル−p−アミノアニリド誘導体〔〕又は
その塩は優れた溶解性を有する。たとえば前記の
γ−GTP活性値測定条件下で、γ−L−グルタ
ミル−p−(N−エチル−N−ヒドロキシエチル
アミノ)アニリドは8.7%(0.28M)、γ−L−グ
ルタミル−p−(N−エチル−N−ヒドロキシプ
ロピルアミノ)アニリドは30%(0.93M)の溶液
を作ることができ必要濃度を容易に満すことが出
来る。 1例としてγ−L−グルタミル−p−(N・N
−ジエチルアミノ)アニリドの溶解度は前記と同
条件において1.3%(0.045M)であり、本発明の
γ−L−グルタミル−p−アミノアニリド誘導体
〔〕又はその塩の溶解度がいかに優れているか
がわかる。 加うるに工業的製造に際して溶解性が優れてい
るので、試薬製剤を製造するにあたつても本発明
のγ−L−グルタミル−p−アミノアニリド誘導
体〔〕又はその塩は濃厚な状態で取り扱うこと
ができ、たとえば凍結乾燥製剤製造に際し、濃厚
な溶液から凍結乾燥できるので蒸発水分量が少な
くてすみ省エネルギーという観点からも極めて有
利である。 本発明の新規なγ−L−グルタミル−p−アミ
ノアニリド誘導体〔〕又はその塩はγ−GTP
に対して優れた基質反応性を有している。 その1例を挙げると本発明のγ−L−グルタミ
ル−p−アミノアニリド誘導体〔〕又はその塩
のγ−GTPに対する基質親和性(基質反応性)
は従来最も広く使用されてきたγ−L−グルタミ
ル−p−ニトロアニリドやγ−L−グルタミル−
p−(N・N−ジメチルアミノ)アニリドやγ−
L−グルタミル−p−(N・N−ジエチルアミノ)
アニリド等と比較して優れその若干例についてこ
れを示すと表1のとおりである。
ニリド誘導体〔〕又はその塩及びこれを用いる
γ−グルタミルトランスフエラーゼ(以下、γ−
GTPという。)の測定方法に関するものである。 本発明のγ−L−グルタミル−p−アミノアニ
リド誘導体〔〕は新規物質であり、γ−GTP
の測定用の基質として極めて有用である。 γ−GTPは肝臓機能検査上、重要な指標とな
る生体酵素で、γ−GTPの活性測定は極めて測
定頻度の高い測定項目である。 従来γ−GTP活性値の測定には、基質として
γ−L−グルタミル−p−ニトロアニリドが使用
されている。しかしながらこの基質は酵素反応を
行うための緩衝液に極めて溶け難く、そのための
可溶化剤の使用を必要としている。且つ酵素反応
によつて生成したp−ニトロアニリン量を波長
410nmの吸光度で測定しているので、血清成分
中に存在する同波長域に吸収を持つ物質、特にビ
リルビンの影響は避けられないと言う欠点を有す
る。 本発明者らはかかる欠点に鑑み鋭意研究の結果
一般式 (式中、Aは低級アルキレン基を表わし、Rは低
級アルキル基を表わす。)で示されるγ−L−グ
ルタミル−p−アミノアニリド誘導体〔〕又は
その塩が上記欠点を悉く解消し、基質としてのγ
−GTPの反応性が高く且つ十分な溶解性を有し、
測定の波長も410nmよりも長波長域で測定でき
る等の極めて顕著な効果を奏する本発明を完成す
るに至つた。 即ち、本発明は、一般式 (式中、Aは低級アルキレン基を表わし、Rは低
級アルキル基を表わす。)で示されるγ−L−グ
ルタミル−p−アミノアニリド誘導体又はその塩
及びこれを基質として用いることを特徴とするγ
−GTPの測定方法である。 本発明のγ−L−グルタミル−p−アミノアニ
リド誘導体〔〕又はその塩の例としてはγ−L
−グルタミル−p−(N−エチル−N−ヒドロキ
シエチルアミノ)アニリド、γ−L−グルタミル
−p−(N−エチル−N−ヒドロキシプロピルア
ミノ)アニリド等又はこれらの塩等が挙げられ
る。 本発明のγ−L−グルタミル−p−アミノアニ
リド誘導体〔〕又はその塩は、通常、例えば次
のような方法により容易に製造することができ
る。 即ち、例えばN−フタリル−γ−L−グルタミ
ン酸無水物等のN−保護−γ−L−グルタミン酸
無水物と一般式 (式中、Aは低級アルキレン基を表わし、Rは低
級アルキル基を表わす。)で示されるp−フエニ
レンジアミン誘導体〔〕とを反応させて、N−
フタリル−γ−L−グルタミル−p−アミノアニ
リド誘導体等のN−保護−γ−L−グルタミル−
p−アミノアニリド誘導体を得、次いで自体公知
の方法例えば常法によりフタリル基等の保護基を
除去し、本発明のγ−L−グルタミル−p−アミ
ノアニリド誘導体〔〕又はその塩を得る。 本発明に係る低級アルキレン基の例としてはメ
チレン基、エチレン基、プロピレン基等の炭素数
1〜5の低級アルキレン基が挙げられ、低級アル
キル基の例としてはメチル基、エチル基、プロピ
ル基等の炭素数1〜5の低級アルキル基が挙げら
れる。 前段の反応に際し、N−保護−γ−L−グルタ
ミン酸無水物はp−フエニレンジアミン誘導体
〔〕に対して当量若しくは稍過剰に使用するの
が好ましく、要すれば溶媒例えばクロロホルム、
ジクロルエタン等を使用し、必要に応じて有機酸
例えば酢酸等を共存させて、通常は20〜100℃で
反応させる。反応終了後は常法に従つてN−保護
−γ−L−グルタミル−p−アミノアニリド誘導
体を分離し、次に例えばヒドラジンを、要すれば
溶媒の存在下に反応させる。ヒドラジンはそのま
までも水加物でもそれらの塩であつても良く、通
常水加物の使用が便利である。この反応は通常水
又は溶剤を用いるが、反応に影響を与えないもの
であればいずれでもよく、例えばメチルアルコー
ル、エチルアルコール等のアルコール類、テトラ
ヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類等水溶
性溶剤の使用が好ましい。 後段の反応はN−保護−γ−L−グルタミル−
p−アミノアニリド誘導体に対し当量若しくは稍
過剰のヒドラジンを用いて60℃以下、好ましくは
10〜30℃で行う。反応後、常法に従い目的物を単
離し、要すれば酸又はアルカリで中和すれば所望
する塩が得られる。 本発明の新規なγ−L−グルタミル−p−アミ
ノアニリド誘導体〔〕又はその塩はγ−GTP
活性値測定用基質として用いられ、通常は至適条
件であるPH8.0〜8.5で測定されるが、従来のγ−
GTP活性値測定用基質として広く用いられてき
たγ−L−グルタミル−p−ニトロアニリドは上
記弱アルカリ側のPH範囲では溶解度が極めて悪
く、たとえばPH8.0の0.05Mホウ酸緩衝液に0.09%
(0.003M)溶解するのみで基質量として必要な
0.001〜0.015M溶液にするには塩酸塩として溶解
したのち、緩衝液でうすめ、過飽和溶液として測
定時間中かろうじて必要濃度をもたせるか、界面
活性剤等で溶解を補助する必要があり、いずれの
場合でも満足される条件ではない。 しかるに本発明の新規な基質であるγ−L−グ
ルタミル−p−アミノアニリド誘導体〔〕又は
その塩は優れた溶解性を有する。たとえば前記の
γ−GTP活性値測定条件下で、γ−L−グルタ
ミル−p−(N−エチル−N−ヒドロキシエチル
アミノ)アニリドは8.7%(0.28M)、γ−L−グ
ルタミル−p−(N−エチル−N−ヒドロキシプ
ロピルアミノ)アニリドは30%(0.93M)の溶液
を作ることができ必要濃度を容易に満すことが出
来る。 1例としてγ−L−グルタミル−p−(N・N
−ジエチルアミノ)アニリドの溶解度は前記と同
条件において1.3%(0.045M)であり、本発明の
γ−L−グルタミル−p−アミノアニリド誘導体
〔〕又はその塩の溶解度がいかに優れているか
がわかる。 加うるに工業的製造に際して溶解性が優れてい
るので、試薬製剤を製造するにあたつても本発明
のγ−L−グルタミル−p−アミノアニリド誘導
体〔〕又はその塩は濃厚な状態で取り扱うこと
ができ、たとえば凍結乾燥製剤製造に際し、濃厚
な溶液から凍結乾燥できるので蒸発水分量が少な
くてすみ省エネルギーという観点からも極めて有
利である。 本発明の新規なγ−L−グルタミル−p−アミ
ノアニリド誘導体〔〕又はその塩はγ−GTP
に対して優れた基質反応性を有している。 その1例を挙げると本発明のγ−L−グルタミ
ル−p−アミノアニリド誘導体〔〕又はその塩
のγ−GTPに対する基質親和性(基質反応性)
は従来最も広く使用されてきたγ−L−グルタミ
ル−p−ニトロアニリドやγ−L−グルタミル−
p−(N・N−ジメチルアミノ)アニリドやγ−
L−グルタミル−p−(N・N−ジエチルアミノ)
アニリド等と比較して優れその若干例についてこ
れを示すと表1のとおりである。
【表】
本発明のγ−L−グルタミル−p−アミノアニ
リド誘導体〔〕又はその塩を基質として用いて
γ−GTP活性値を測定するためにγ−GTPの酵
素反応によつて遊離生成するp−フエニレンジア
ミン誘導体〔〕を定量するには、芳香族アミン
を比色定量する従来公知の方法、たとえばジアゾ
カツプリング法やアルデヒド類と反応させて生成
するシツフ塩基を定量する方法などが適用できる
が、酸化によつて生成する着色化合物を定量する
方法は、操作の簡便性、迅速性あるいは測定値の
正確度の点で最も好ましい方法である。すなわ
ち、p−フエニレンジアミン誘導体〔〕を直接
酸化して着色化合物を生成させるか或は酸化縮合
して着色化合物を生成する方法、たとえばフエノ
ール、p−クロロフエノール、ブチルヒドロキシ
アニソールなどのフエノール類、1−ナフトール
−2−スルホン酸、4−クロロ−1−ナフトール
−2−スルホン酸、8−オキシキノリンなどのナ
フトール類、の存在下にメタ過ヨウ素酸塩、過酸
化水素とペルオキシダーゼまたは赤血塩などの酸
化剤で酸化して着色化合物に誘導して比色定量す
る。 かように本発明のγ−L−グルタミル−p−ア
ミノアニリド誘導体〔〕又はその塩はγ−
GTP活性値測定用の基質として、反応性、溶解
性等に極めて優れ、正確かつ迅速に測定できる比
色定量法に導くことができ、またその簡便さから
自動分析装置への適用も容易である。 以下に実施例を述べ本発明を更に説明する。 実施例 1 (γ−L−グルタミル−p−(N−エチル−N
−ヒドロキシプロピルアミノ)アニリドの製
造) N−フタリル−γ−L−グルタミン酸無水物31
gを酢酸−クロロホルム混合液(1:2)60mlに
懸濁し、これに4−アミノ−N−エチル−N−ヒ
ドロキシプロピルアニリン22gのクロロホルム溶
液を30℃以下で適下する。イソプロピルアルコー
ルを加えて晶出させると、N−フタリル−γ−L
−グルタミル−p−(N−エチル−N−ヒドロキ
シプロピルアミノ)アニリド41gが得られる。 本品をエタノール400mlに溶解し、これに抱水
ヒドラジン12mlを20℃以下で滴下。、析出する固
体を取する。再度エタノノールに懸濁させ、塩
酸を加えPH3まで酸性にし、不溶物を去したの
ち、アセトンで晶出させるとγ−L−グルタミル
−p−(N−エチル−N−ヒドロキシプロピルア
ミノ)アニリド塩酸塩16gが得られる。
リド誘導体〔〕又はその塩を基質として用いて
γ−GTP活性値を測定するためにγ−GTPの酵
素反応によつて遊離生成するp−フエニレンジア
ミン誘導体〔〕を定量するには、芳香族アミン
を比色定量する従来公知の方法、たとえばジアゾ
カツプリング法やアルデヒド類と反応させて生成
するシツフ塩基を定量する方法などが適用できる
が、酸化によつて生成する着色化合物を定量する
方法は、操作の簡便性、迅速性あるいは測定値の
正確度の点で最も好ましい方法である。すなわ
ち、p−フエニレンジアミン誘導体〔〕を直接
酸化して着色化合物を生成させるか或は酸化縮合
して着色化合物を生成する方法、たとえばフエノ
ール、p−クロロフエノール、ブチルヒドロキシ
アニソールなどのフエノール類、1−ナフトール
−2−スルホン酸、4−クロロ−1−ナフトール
−2−スルホン酸、8−オキシキノリンなどのナ
フトール類、の存在下にメタ過ヨウ素酸塩、過酸
化水素とペルオキシダーゼまたは赤血塩などの酸
化剤で酸化して着色化合物に誘導して比色定量す
る。 かように本発明のγ−L−グルタミル−p−ア
ミノアニリド誘導体〔〕又はその塩はγ−
GTP活性値測定用の基質として、反応性、溶解
性等に極めて優れ、正確かつ迅速に測定できる比
色定量法に導くことができ、またその簡便さから
自動分析装置への適用も容易である。 以下に実施例を述べ本発明を更に説明する。 実施例 1 (γ−L−グルタミル−p−(N−エチル−N
−ヒドロキシプロピルアミノ)アニリドの製
造) N−フタリル−γ−L−グルタミン酸無水物31
gを酢酸−クロロホルム混合液(1:2)60mlに
懸濁し、これに4−アミノ−N−エチル−N−ヒ
ドロキシプロピルアニリン22gのクロロホルム溶
液を30℃以下で適下する。イソプロピルアルコー
ルを加えて晶出させると、N−フタリル−γ−L
−グルタミル−p−(N−エチル−N−ヒドロキ
シプロピルアミノ)アニリド41gが得られる。 本品をエタノール400mlに溶解し、これに抱水
ヒドラジン12mlを20℃以下で滴下。、析出する固
体を取する。再度エタノノールに懸濁させ、塩
酸を加えPH3まで酸性にし、不溶物を去したの
ち、アセトンで晶出させるとγ−L−グルタミル
−p−(N−エチル−N−ヒドロキシプロピルア
ミノ)アニリド塩酸塩16gが得られる。
【表】
実施例 2
(γ−L−グルタミル−p−(N−エチル−N
−ヒドロキシエチルアミノ)アニリドの製造) N−フタリル−γ−L−グルタミン酸無水物47
gを酢酸−クロロホルム混合液(7:10)80mlに
懸濁し、これに4−アミノ−N−エチル−N−ヒ
ドロキシエチルアニリン32gのクロロホルム溶液
を30℃以下で適下する。イソプロピルアルコール
を加えて晶出させるとN−フタリル−γ−L−グ
ルタミル−p−(N−エチル−N−ヒドロキシエ
チルアミノ)アニリド66gが得られる。 本品をエタノール500mlに溶解し、これに抱水
ヒドラジン20mlを20℃以下で滴下し、析出する固
体を取する。エタノールに再度懸濁させ、塩酸
でPH3まで酸性にし、不溶物を去したのち、ア
セトンで晶出させるとγ−L−グルタミル−p−
(N−エチル−N−ヒドロキシエチルアミノ)ア
ニリド塩酸塩20gが得られる。
−ヒドロキシエチルアミノ)アニリドの製造) N−フタリル−γ−L−グルタミン酸無水物47
gを酢酸−クロロホルム混合液(7:10)80mlに
懸濁し、これに4−アミノ−N−エチル−N−ヒ
ドロキシエチルアニリン32gのクロロホルム溶液
を30℃以下で適下する。イソプロピルアルコール
を加えて晶出させるとN−フタリル−γ−L−グ
ルタミル−p−(N−エチル−N−ヒドロキシエ
チルアミノ)アニリド66gが得られる。 本品をエタノール500mlに溶解し、これに抱水
ヒドラジン20mlを20℃以下で滴下し、析出する固
体を取する。エタノールに再度懸濁させ、塩酸
でPH3まで酸性にし、不溶物を去したのち、ア
セトンで晶出させるとγ−L−グルタミル−p−
(N−エチル−N−ヒドロキシエチルアミノ)ア
ニリド塩酸塩20gが得られる。
【表】
実施例3(使用例1)
A 試液
(1) 基質緩衝液:γ−L−グルタミル−p−
(N−エチル−N−ヒドロキシエチルアミノ)
アニリド12mM/、グリシルグリシン50m
M/、1−ナフトール−2−スルホン酸
0.2mM/、エチレングリコール1重量%
を含有する、PH8.3の0.05mM/ホウ酸緩
衝液を調製する。 (2) 酸化試液:0.2%過ヨウ素酸カリウムを含
有するPH8.3の0.3M/ホウ酸緩衝液を調製
する。 B 測定操作 基質緩衝液1.0mlに血清試料0.02mlを加えて
よく混合した後37℃の恒温槽で15分間加温す
る。次いで酸化試液2.0mlを加える。試料の代
りに水0.02mlを用い試料と同様に操作して得ら
れる試薬盲検を対照として660nmに於ける吸
光度を測定する。N−エチル−N−ヒドロキシ
エチル−p−フエニレンジアミンを使用して常
法に従つてあらかじめ作成した検量線と対比し
て、γ−GTP活性値を算出する。 実施例4(使用例2) 基質として使用例1のγ−L−グルタミル−p
−(N−エチル−N−ヒドロキシエチルアミノ)
アニリドの代りにγ−L−グルタミル−p−(N
−エチル−N−ヒドロキシプロピルアミノ)アニ
リドを用い、使用例1に準じて665nmに於ける
吸光度を測定しγ−GTP活性値を算出する。 実施例5(使用例3) A 試液 (1) 基質緩衝液:γ−L−グルタミル−p−
(N−エチル−N−ヒドロキシエチルアミノ)
アニリド12mM/、グリシルグリシン50m
M/を含有するPH8.3の0.05mM/ホウ
酸緩衝液を調製する。 (2) 酸化試液:0.2%過ヨウ素酸カリウムを含
有するPH8.3の0.3M/ホウ酸緩衝液を調製
する。 B 測定操作 基質緩衝液2.0mlに血清試料0.02mlを加えて
よく混合した後、37℃で15分間加温する。次に
酸化試液2.0mlを加えて発色させる。試料の代
りに水0.02mlを用い試料と同様に操作して得ら
れる試薬盲検を対照として510nmに於ける吸
光度を測定し、N−エチル−N−ヒドロキシエ
チル−p−フエニレンジアミンを用いて常法に
従つて作成した検量線と対比してγ−GTP活
性値を算出する。
(N−エチル−N−ヒドロキシエチルアミノ)
アニリド12mM/、グリシルグリシン50m
M/、1−ナフトール−2−スルホン酸
0.2mM/、エチレングリコール1重量%
を含有する、PH8.3の0.05mM/ホウ酸緩
衝液を調製する。 (2) 酸化試液:0.2%過ヨウ素酸カリウムを含
有するPH8.3の0.3M/ホウ酸緩衝液を調製
する。 B 測定操作 基質緩衝液1.0mlに血清試料0.02mlを加えて
よく混合した後37℃の恒温槽で15分間加温す
る。次いで酸化試液2.0mlを加える。試料の代
りに水0.02mlを用い試料と同様に操作して得ら
れる試薬盲検を対照として660nmに於ける吸
光度を測定する。N−エチル−N−ヒドロキシ
エチル−p−フエニレンジアミンを使用して常
法に従つてあらかじめ作成した検量線と対比し
て、γ−GTP活性値を算出する。 実施例4(使用例2) 基質として使用例1のγ−L−グルタミル−p
−(N−エチル−N−ヒドロキシエチルアミノ)
アニリドの代りにγ−L−グルタミル−p−(N
−エチル−N−ヒドロキシプロピルアミノ)アニ
リドを用い、使用例1に準じて665nmに於ける
吸光度を測定しγ−GTP活性値を算出する。 実施例5(使用例3) A 試液 (1) 基質緩衝液:γ−L−グルタミル−p−
(N−エチル−N−ヒドロキシエチルアミノ)
アニリド12mM/、グリシルグリシン50m
M/を含有するPH8.3の0.05mM/ホウ
酸緩衝液を調製する。 (2) 酸化試液:0.2%過ヨウ素酸カリウムを含
有するPH8.3の0.3M/ホウ酸緩衝液を調製
する。 B 測定操作 基質緩衝液2.0mlに血清試料0.02mlを加えて
よく混合した後、37℃で15分間加温する。次に
酸化試液2.0mlを加えて発色させる。試料の代
りに水0.02mlを用い試料と同様に操作して得ら
れる試薬盲検を対照として510nmに於ける吸
光度を測定し、N−エチル−N−ヒドロキシエ
チル−p−フエニレンジアミンを用いて常法に
従つて作成した検量線と対比してγ−GTP活
性値を算出する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 一般式 (式中、Aは低級アルキレン基を表わし、Rは低
級アルキル基を表わす。)で示されるγ−L−グ
ルタミル−p−アミノアニリド誘導体又はその
塩。 2 一般式 (式中、Aは低級アルキレン基を表わし、Rは低
級アルキル基を表わす。)で示されるγ−L−グ
ルタミル−p−アミノアニリド誘導体又はその塩
を基質として用いることを特徴とするγ−グルタ
ミルトランスフエラーゼの測定方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP10737679A JPS5630956A (en) | 1979-08-23 | 1979-08-23 | Gamma-l-glutamyl-p-aminoanilide derivative or its salt and determination of gamma-glutamyl transferase using the same |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP10737679A JPS5630956A (en) | 1979-08-23 | 1979-08-23 | Gamma-l-glutamyl-p-aminoanilide derivative or its salt and determination of gamma-glutamyl transferase using the same |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5630956A JPS5630956A (en) | 1981-03-28 |
JPS631939B2 true JPS631939B2 (ja) | 1988-01-14 |
Family
ID=14457529
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP10737679A Granted JPS5630956A (en) | 1979-08-23 | 1979-08-23 | Gamma-l-glutamyl-p-aminoanilide derivative or its salt and determination of gamma-glutamyl transferase using the same |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5630956A (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0718135Y2 (ja) * | 1988-02-26 | 1995-04-26 | 沖電気工業株式会社 | フラットケーブル用コネクタ |
WO1991012232A1 (en) * | 1990-02-06 | 1991-08-22 | Australian Commercial Research & Development Limited | Compounds and methods for the treatment and diagnosis of cancer |
-
1979
- 1979-08-23 JP JP10737679A patent/JPS5630956A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS5630956A (en) | 1981-03-28 |
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