JPS63190829A - 細胞膜タンパク、これを含む組成物及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ル肚へ１１ 本願では複数の刊行物を括弧内のアラビア数字で引用し
ている。これらの引用文献の完全な名称は本文の末尾に
示す。これらの刊行物の開示内容全体は、本発明が該当
する技術分野の従来技術の状態をより十分に説明するた
めに本願の参考文献としている。

本発明は、自己免疫疾患の治療及び予防用の新規製剤及
び薬剤に係り、該製剤及び薬剤は、自己免疫リンパ球の
所定の細胞及び細胞系の膜から得られる免疫原性物質を
ベースとするかあるいは、新規圧力処理、化学的架橋剤
又は細胞骨格破壊剤で処理した活性化細胞をベースとす
る。

自己免疫疾患の予防用製剤は、所定のＴ細胞レセプター
を含む特異的自己免疫Ｔ細胞系又は圧力処理した活性化
Ｔｉ胞から得られる膜タンパクから構成されるワクチン
を含んでいる。本発明は更に、このような活性細胞膜物
質の産生方法及び活性化細胞の処理方法、並びに活性成
分として細胞［物質又は活性ｆヒ細胞のいずれかを含む
医薬組成物も提供する。

自己免疫疾患の病因剤は、個体の正常な構成要素を冒す
内因性リンパ球である０発明者は多数の実験的自己免疫
疾患を生じる特異的自己免疫Ｔリンパ球を長期細胞系と
して成長させた（１−９）。こうして得られた自己免疫
細胞の比較的純粋な培夏物は、病理発生の調査を促進し
、自己免疫のキャリア状態を明らかにし、自己免疫に対
するワクチン接種及びその治療手段を提供した（５−９
）。

先非へｌ在 本発明は、自己免疫疾患の予防及び治療に使用される新
規製剤に係り、：′ｔＡ製剤は特異的自己免疫Ｔリンパ
球の所定の膜物質、又は圧力処理した活性化Ｔリンパ球
細胞をその活性成分として含んでいる。本発明は更に、
このようなリンパ球からこのような物質を得るための方
法、このようなリンパ球の圧力処理、並びにワクチン及
び該ワクチンを含む医薬製剤の製造方法にも係る０本発
明のその他の特徴は以下の工明から明らかになろう。

自己免疫疾患は、個体のそれ自体の組織を冒す免疫シス
テムにより生じる共通の特徴を有する。

あらゆる自己免疫疾患の病源には、個体の特定のターゲ
ット抗原を特異的に認識する自己免疫リンパ球が存在し
ている。自己免疫疾患としては、慢性関節リウマチ、多
発性硬化症、所定の形態の糖尿病、甲状腺炎、及び重症
筋無力症が挙げられる。

現在までのところではこれらの疾患に対する特異的形態
の治療は存在し−ていない。

実験室動物に自己免疫疾患を生じる原因となるＴリンパ
球を長期細胞系として成長させることが可能であること
がわかった。このような疾患としては、脳を髄炎、関節
炎及び甲状腺炎が挙げられる。このような細胞はこのよ
うな特異的自己免疫疾患のワクチン接種用として有効な
剤であることが判明し、このようなリンパ球を弱毒化し
て注入すると、自己免疫疾患は起こらなかった。このよ
うなワクチン接種は、このような動物をこのような疾患
に対して免疫性にするか又は低怒受性にする（疾患が著
しく重度でなくなる）のに極めて有効であることが判明
した。更に、このような動物にこのような細胞を接種す
ると、疾患を極めて有効に治療できることがわかった。

本発明によると、所定のＴ４ｇ胞レセしターを含む特異
的自己免疫Ｔｉ胞からの膜物質をその活性成分として含
有する医薬製剤が提供される。本発明は更に、このよう
な膜物質の製造及び単離のための新規方法も提供し、該
方法は、このようなＴリンパ球に高い静水圧を加え、圧
力を徐々に解放し、こうして高度の生物学的活性を保持
する膜物質を有効に放出させることから成る。あるいは
、このようなＴ細胞に静水圧を加え、該圧力を徐々に解
放することにより該細胞を圧力処理する方法ムある。

活性物質を誘導するための典型的な条件は、５００〜１
５００気圧程度の圧力であり、圧力は５分間にわたって
徐々に強化され、より高いレベルのこのような圧力を約
１０〜４５分間維持し、５〜１５分間にわたって該圧力
を徐々に解放する。

活性「ヒＴ細胞の圧力処理は、このような細胞を５００
〜約１３００気圧に至る圧力強化下に約５分間おき、該
圧力を約１５分間維持し、約５分間の間に該圧力を徐々
に解放することにより達せられる。

事実上放出は生じない、放出された物質及び圧力処理し
た活性化細胞のいずれも本発明のワクチンの活性成分と
して使用され得、細胞は完全な生存能力を維持する。

こうして得られた物質は、約１０７〜１０８の活性化細
胞又は同数の細胞からの物質を含んでいる。ヒトのワク
チン接種の場合では、約０．０ＩＮ１Ｆ〜約３Ｈのこの
ような物質（放出されるタンパク又は圧力処理した活性
化Ｔ細胞）の量が使用され、ワクチン接種は約２週間の
適用間隔で３〜４回実施される。

このような免疫化は所定の自己免疫疾患の予防及び治療
に有効である。

圧力処理は、リンパ球を好適な緩衝液に懸濁させ、気体
媒体を含まない圧力槽に懸濁液を入れ、例えばフレンチ
プレスを使用して上記のような圧力を加えることから成
る。

形成された細胞懸濁液を約１５００ｒｐ＋ｎで遠心分離
し、上清を約１時間約１０００００．で超遠心分離し、
膜フラグメン１〜を沈降させる。圧力処理した活性化Ｔ
細胞力町形成されたら、該細胞を遠心分離により収集す
る。

本発明の別の態様によると、細胞膜砧タンパクの安定′
ａ薬物を形成する処理を細胞に加えることにより、特異
的自己免疫疾患の予防又は治療に有用な１１２８球細胞
からの精製膜タンパクが産生され得る。このような凝集
物はＴ細胞レセグターを３んており、このようなレセプ
ターは恐らくマイトジェン又は抗原で処理することによ
りＴｌ１ａＩ胞を活性化させた後に現われる１個以上の
非認諧分子と共に存在すると考えられている。

Ｔ細胞に圧力処理を加える代わりに、ホルムアルデヒド
、ゲルタールアルデヒド又は他の任意の従来の架橋剤の
ような好適な化学的架橋剤で処理してもよい（第３．４
及び５図参照）。このような処理は圧力処理前又は後に
実施しても有益である。

本発明の更に別の態様によると、該Ｔリンパ球の細胞骨
格を破壊するための処理をこのようなＴ細胞に加えても
よい。サイトカラシン（０，５ｐｌＦ／ｚｌ）又はコル
ヒチン（１０マイクロモル）のような従来の細胞骨格破
壊剤を使用することができる。

上記型の化学的架橋剤を使用すると、このような処理は
細胞の破壊後に壊変しないような分能された細胞膜を使
用することができる。圧力処理した細胞は細胞の溶解後
にある程度ワクチン接種の有効性を失うが、化学的架橋
剤で処理した細胞はこのような有効性を失わない。

上記の態様によると、所定の疾患の予防及び治療用の有
効な手段を得るために、１１２８球細胞の各種の処理を
使用することができ、あるいはこのような処理を組み合
わせて使用してもよい。

膜タンパクの架橋は、ホルムアルデヒＩ・又はゲルター
ルアルデヒド（約０．３〜１％を約１５分間）のような
剤による処理を使用すると有利である。

細胞骨格の破壊は、サイｌ−カラシン（約０．ｈｙ／ｚ
１）及びコルヒチン（約１０マイクロモル）の組み合わ
せのような剤で処理することにより実施され得る。

架橋後、細胞を好適な低張溶液に懸濁させ、不連続スク
ロース勾配を使用して均質化及び分離させた後、分離し
た膜をリン酸緩Ｗｉ溶液（ＰＢＳ）で透析することによ
り、固定細胞膜が得られる。

以下の実験は、上記方法に従って１１２８球細胞を処理
することにより得られる結果のいくつかを示すものであ
る。実験の詳細を以下に述べる。

■のテ’ｉＪｆ巨日 本発明は、特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有用な
圧力処理した活性化Ｔリンパ球細胞を提供するものであ
る。本発明の１１２８球細胞は樹立細胞系（ｅｓＬａＬ
＋１ｉｓｈｅｄ　ｃｅｌｌ　１ｉｎｅ）から得てもよい
し、あるいは例えばマウス、ラッＩ・又はヒトのような
被験体の循環系又はリンパ系から収り出してもよい。更
に、１１２８球細胞は、特異的自己免疫疾患を治療すべ
き患者から直接収り出してもよい。本願の範囲では、「
活性化Ｔリンパ球細胞（ａｃＬｉｖａＬｅ、ｄ　Ｔ　Ｉ
ｙｍｐｌ＋ｏｃｙｔｅ　ｃｅｌｌ）」とは１１２８球細
胞により免疫応答を誘導することが可能な特異抗原又は
マイトジェンにさらされた１１２８球細胞を息昧する。

好適なマイＩ・ジエンは当該技術分野で知られており、
コンカナバリンＡ、植物凝集素、及びポークライード（
ｐｏｋｅＩＩＩｅｅｄ）マイ小ジエンを含む０本発明の
圧力処理した活性化Ｔリンパ球細胞は、多発性硬化症、
甲状腺症、Ｉを糖尿病、強直性を髄炎、慢性関節リウマ
チ又は重症筋無力症の治療に有用であり得る。

また、本発明の圧力処理した活性化Ｔリンパ球細胞を化
学的架橋剤で更に処理してもよい。好適な（ヒ学的架橋
剤は従来技術で既知であり、非限定的な例としてホルム
アルデヒド及びゲルタールアルデヒドを３む。本発明の
一態様では、圧力処理した活性化Ｔリンパ球細胞を静水
圧で処理した後に（ヒ字的架橋剤で処理する。本発明の
別の態様では、圧力処理した活性化Ｔリンパ球細胞を静
水圧で処理する前に１ヒ学的架橋剤で処理する。

本発明は更に、特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有
用な、化学的架橋剤で処理した活性化１９７８球細胞も
提供する。自己免疫疾患は、多発性硬化症、甲状腺症、
Ｉを糖尿病、強直性を髄炎、慢性関節リウマチ又は重症
筋無力症であり得る。

本発明は更に、特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有
用な、破壊剤で処理した活性化１９７８球細胞も提供す
る。本願の範囲では破壊剤とは、細胞骨格をフラグメン
トに解離することが可能な剤を意味し、化学物質である
サイトカラシン及びコルヒチンを含む。もっとも、他の
破壊剤も当該技術分野では既知であるので、これらを使
用してもよい。これらの破壊剤は別々に使用してもよい
し、あるいは相互に組み合わせて使用してもよい。

本発明の破壊剤で処理した活性化１９７８球細胞は、多
発性硬化症、甲状腺症、１型糖尿病、強直性を髄炎、慢
性関節リウマチ又は重症筋無力症の治療に有用であり得
る。

また、本発明の破壊剤で処理した活性化１９７８球細胞
を、化学的架橋剤又は静水圧で処理してもよい。

本発明は更に、特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有
用な圧力処理した活性化１９７８球細胞の産生方法も提
供する。この方法は、まず自己免疫疾患に特異的な活性
化１９７８球細胞を緩衝液に懸濁させることから成る。

懸濁した細胞を次に適当な時間適当な静水圧下におく。

その後、懸濁細胞に加えられた圧力を適当な割合で解放
し、細胞から膜タンパクの実質的な損失を生じることな
しに圧力処理した活性化１９７８球細胞を産生させる０
本発明の一態様では、好適な圧力は５００〜約１５００
気圧である。本発明の別の態様では、懸濁細胞に好適な
静水圧を加える前に、懸濁細胞を化学的架橋剤で処理す
る０本発明の更に別のＲ様では、減圧後に懸濁ｉｔ（［
＋　１１を化学的架橋剤で処理する。

本発明は更に、特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有
用な、化学的架橋剤で処理した活性化１９７８球細胞の
産生方法も提供する。この方法は、自己免疫疾患に特異
的な活性化１９７８球細胞を緩衝液に懸濁させ、懸濁し
た細胞を化学的架橋剤で処理することか′ら成る。

本発明は更に、特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有
用な、圧力処理した活性化１９７８球細胞の産生方法も
提供する。この方法は、まず自己免疫疾患に特異的な活
性化１９７８球細胞をＭｌｌ液液懸濁させることから成
る。懸濁した細胞を破壊剤で処理し、活性化１９７８球
細胞を得る。次に活性（ヒエリンパ球細胞に適当な時間
好適な静水圧を加える。その後、活性化Ｔリンパ球細胞
膜フラグメントに加えられた圧力を適当な割合で解放し
、膜タンパクを実質的に損失することなく圧力処理した
活性化Ｔリンパ球細胞膜フラグメントを産生させる０本
発明の一態様では、好適な圧力は５００〜約１３００気
圧である。本発明の別のａ様では、処理した後、化学的
架橋剤で処理する。

本発明は更に、特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有
用な、圧力処理した活性化１９７８球細胞の別の産生方
法も提供する。この方法は、まず自己免疫疾患に特異的
な活性化１９７８球細胞を緩衝液に懸濁させることから
成る。懸濁した細胞に適当な時間好適な静水圧を加える
。その後、懸濁細胞に加えられた圧力を適当な割合で解
放し、膜タンパクを実質的に損失することなしに圧力処
理した活性ｆヒエリンパ球細胞膜フラグメンｌ〜を産生
させる。減圧後、圧力処理した活性化１９７８球細胞を
破壊剤で処理し、圧力処理した活性化１９７８球細胞を
産生させる０本発明の一態様では、好適な圧力は５００
〜約１５００気圧である９本発明の別の態様では、得ら
れる圧力処理した活性化１９７８球細胞を化学的架橋剤
で処理してもよい。

本発明は更に、特異的自己免疫疾患の予防又は１〜の産
生方法も提供する。この方法は、ます自己免疫疾患に特
異的な活性化Ｔリンパ球細胞を緩衝液に懸濁させ、懸濁
した細胞を破壊剤で処理し、活性化Ｔリンパ球細胞を産
生させることから成る。

更に、形成された活性化Ｔリンパ球細胞を化学的架橋剤
で処理してもよい。

本発明は更に、特異的自己免疫疾患の予防又はｉｌｌ　
ｆｙに有用な組成物も提供する。この組成物は、本発明
の圧力処理した活性化Ｔリンパ球細胞及び医薬上許容可
能なキャリアから成る。医薬上許容可能なキャリアは当
該技術分野で知られており、非限定的な例として０．０
１〜０．ＩＭ、好ましくは０．０５Ｎリン酸塩榎街液、
又は０．８％食塩水を含む。特異的自己免疫疾、Φの予
防又は治療用の別の組成物も提供される。この組成物は
、本発明の化学的架橋剤て処理した活性化Ｔリンパ球細
胞及び医薬上許容可能なキャリアから構成される。本発
明は特異的自己免疫疾患の予防又は治療用の更に別の組
成物も提供する。この組成物は、本発明の破壊剤で処理
した活性化Ｔリンパ球細胞膜フラグメント及び医薬上許
容可能なキャリアから構成される。

本発明は更に、被験体の特異的自己免疫疾患の予防又は
治療方法も提供する。これらの方法は、有効量の本発明
の組成物を適当な経路で被験体に投与することから成る
。適当な投与経路は経口、鼻腔内又は被皮膚投与、並び
に筋肉内、静脈内、皮膚内、皮下及びｍ膜組繊内注射念
倉む。

本発明は更に、特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有
用な活性化Ｔリンパ球細胞から精製膜タンパクと回収す
るための方法も提供する。この方法は、まず自己免疫疾
患に特異的な活性化Ｔリンパ球細胞を１１ｍ液に懸濁さ
せることから成る。懸濁した細胞を適当な時間好適な静
水圧下におき、膜タンパクを放出させる。その後、懸濁
した細胞に加えられた圧力をを適当な割合で解放する。

減圧した懸濁液を遠心分離し、細胞を除去すると共に膜
タンパクを含む上清を形成する。この上清を超遠心分離
して精製膜タンパクを回収する。本発明の一態様では、
好適な静水圧を加える前に懸濁した細胞を化学的架橋剤
で処理する０本発明の別の態様では、減圧後に懸濁細胞
を化学的架橋剤で処理する。本発明の別の態様では、適
当な静水圧を加える前に懸濁細胞を破壊剤で処理する６
本発明の更に別の態様では、減圧した細胞を破壊剤で処
理してもよい。本発明の更に別の態様では、好適な静水
圧は５００〜約１５００気圧である。本発明の更に別の
態様では、上清の超遠心分離に先立って放出された膜タ
ンパクを化学的架橋剤で処理する。

本発明により提供される各種の細胞、処理及びタンパク
は、例示の目的で与えられる以下の実験及び実施例を参
照することにより更によく理解されよう。なお、これら
の実験及び実施例は特許請求の範囲に記載した本発明の
範囲を限定するものではない。

社Ｊし虹〃功ｊＬ ラット： Ｔｂｅ　Ｗｅｉｚｍａｎｎ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｒ
　５ｃｉｅｎｃｅの＾ｎｉｍ＆ＩＢｒｅｅｃｌｉｏｇ　
Ｃｅｎｔｅｒから通交系ルイスラットを入手した。月齢
２〜３箇月のラットを使用し、各実験で月齢及び性別を
揃えた。

ｍＬ： Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ミシガン州、
デ）・ロイｌ−）から熱殺菌した結核菌（Ｎ、ｔｕｂｅ
ｒｃｕｌｏｓｉｓ）ｌ１３ｔ＊ａを購入した。５Ｌａｔ
ｅｎ　Ｓｅｒｕｍ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ（デンマーク、
コペンハーゲン）からミコバクテリウムの精製タンパク
誘導体（ＰＰＤ）を購入し、Ｂｉａ−Ｙｅｄａ（イスラ
エル、Ｒｅｌ＋ｏｖｏＬ）からコンカナバリンＡ（Ｃｏ
ｕ＾）を購入した。精製ラット■型コラーゲンは、バー
ミンガム州、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｒ　ＡＩａｂａ
ａ＋ａ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ＣｅｎｔｅｒのＥ、Ｊ、旧１
１ｅｒ博士から寄贈された。ラッｌ−１型コラーゲンは
ラットの尾健から調製したものであり、Ｗｅｉｚｍａｎ
ｎ　　ＩｎｓＬｉｔｕＬｅｃｒ）ＤｅｐａｒｔｍｅｎＬ
　　ｏｆ　　Ｂｉｏｐｂｙｓｉｃｓのり、　Ｄｕｓｋｉ
ｎ博士から寄贈された（１６）　。

！ＵＬ： 全細胞培養は、Ｄｕｌｂｅｃｃｏの修正したイーグルの
培地にューヨーク州、グランドアイランド、Ｇｒａｎｄ
　１ｓｌａｎｄ　［ｌｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏ、、（
ＧＩＢＣＯ））を使用した。増殖アッセイ、活性化及び
クローニングに使用した培地（増殖培地：ｐｒｏｌｉｆ
ｅｒａＬｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ）は、ｂｎＭグルタミン
（イスラエル、エルサレム、Ｂｉｏ−Ｌａｂ）、２−メ
ルカプトエタノール（５Ｘ　１０−　’Ｍ）、ゲンタマ
イシン（４０ｕｙ＃ｆ）、及び１％の新鮮な臼己山来う
ット血清を補充した。長期培養で繁殖細胞系及びクロー
ンを保持するために使用した培地（繁殖培地：ｐｒｏｐ
ａｇａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ）は、Ｔ細胞成長因子（
３）のソースとしてＣｏｎ＾で活性〔ヒさせたリンパ球
の上清１５容量％、１０％ウマ血清（ＧＩＢＣＯ）、１
ｍＭピルビン酸すＩ・リウム、及び非必須アミノ酸（１
３ｉｏ−Ｌａｂ）を補充した増殖培地である。

−・アジュバン１〜１ｈ＾＾の４ 活性＾Δを誘導するために、不完全フロイン）・アジー
Ｌパンｌ−（Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）
中に１０″ＩＩｇ／１１のＭＴを含有する０、１ａｆの
完全フロインドアシュパン１−（ＣＦ＾）をラットの尾
の基部に皮膚内接種した。

（１７）に記載されているシステムを使用して関節炎の
重度を鑑定した。６足を、紅斑、膨張及び関節の変形に
基づいて０〜４に等級（−ｆ　Ｉｔ　した。到達可能な
最高指数は１６であった。昌の臨床診断は、（１８）に
記載されているように選択したラットの関節の組織試験
により確コ２した。

＾２為の　１　びクローニング ＣＦ八で免疫したラットからＭＴに反応性のへ２系を取
り出した。９日目に排膿性のリンパ核を除去し、（１９
）に記載されているようにＭＴに反応性のＴｉ胞系を発
生させ、保持した。制限希釈技術を使用して＾２をクロ
ーニングした。下記に記載するように補助細胞の存在下
でＭＴと共に３日間インキュベー１・することによう、
系統細胞をｉｎ　ｖｉｔｒｏで活性１ヒさぜた。３０目
にリンパ芽球を繁殖培地に移し、更に７０問おいた。１
０日日に細胞を収集し、洗い、３回計数し、激しく混合
した。照射（１５００ラド）した牌細胞（２ｘｌＯ）／
１）及びＭＴ（１０μｇ／履１）の存在下で、ウェル化
たりｔｏｏｐｚの増殖培地を有する９６ウエルマイクロ
タイタープレートに０．１細胞／ウエルの割合で接種し
た。クローニング後６ロ目から１４日日までウェルの細
胞成長を検査した。培養効率は６０２６であった。クロ
ーン化した細胞を２００１１のウェル、次いで２．６、
！Ｅｔ後に１０１１のプレートの繁殖培地で増殖させ、
濃度は２〜４ｘ　１０５．ｍ胞／ｘｉとした。

培養物を３〜４日毎に移した。２〜４週に１回、ＭＴ及
び補助細胞と共に３日間インキュベーション（下記参照
）することにより系統細胞を再活性化させ、繁殖培地に
戻した。抗原に対する増殖応答又は＾Δを仲介するかも
しくは耐性を誘導する能力を調査する前に、クローン化
したサブ系統＾２ｂをこのようにして６週間増殖させた
。

系統綱月の−”化 増殖培地中の補助細胞として同質遺伝子照射（１５００
ラド）胛細胞（１５Ｘ　１０６／ｚｆ）の存在下に、１
０μｇ／ｌのＭＴ又は２．５１Ｊｙ／ｚｆのＣｏｎ　八
と共に３日間インキュベーションすることにより、系統
へ２又はサブ系門すの副１１ｃ　（２ｘ　１０５／ｘｌ
）を活性化させた。３０後、リンパ芽球を収集し、リン
酸桜街溶液（ＰＢＳ）で２回洗い、繁殖培地にＵすか又
は１ｎｖｉｖｏ又はｉｎ　ｖｉＬｒ。

調査に使用した。この時点までに照射した胛細胞のほと
んどは死滅し、壊変した。

乱ｉ交１ 八・轟１−」Ｓ−Ｌ［− 少１（２ｚｆ）に圧力を加えるために、細胞懸濁液をプ
ラスチックキャップイ・１きチューブに入れ、試料緩衝
液を頂部に加えた。密閉後、短い２２Ｇ針をキャップに
挿通させ、圧力平衡の孔としてｖ１能させた。気泡を回
避した。チューブを４５ｍ１圧力ボンベ（フレンチプレ
スセル、八ｍ１ｎｃｏ）のキャビティに配置した。より
大きい試料容量のためには、細胞懸濁液を圧力ボンベの
キャビティに直接加えた。

２５０バ一ル／分の割合で静水圧を徐々に加え、所望の
圧力で２時間まで維持した後、ゆっくりと解放した。細
胞を収集し、ＰＢＳで２回洗った。

Ｂ、へタンパクの列。

細胞をホルムアルデヒド又はゲルタールアルデヒド（０
，３〜１％）により１５分間固定した。１０６〜１０８
の細胞を２．５ｚｌのＰＢＳに懸濁させた。ＰＢＳ中の
架橋剤の２１音ｍｍ溶液同−容星を室温で細胞懸濁液に
加え、その後細胞をＰＢＳで６回洗った。

Ｃ−柵ｌゴ目■戒濁− プロセスは１ｌＣｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉＢ　ｏｆ　ｎ＋
ｅ＋ｎｂｒａｎｅ　ｐｒｏｔ−ｅｉｎ３’“に記載の方
法により実施したが、架橋剤をｆ受用する代わりにサイ
トカラシン（０，５１１ｇ／ｚ１）とコルヒチンク１０
マイクロモル）を組み合わせて使用した。

Ｄ、１１１−朕え 細胞をｒ＋ｔ＋ｓ低張溶液、（１／３生理的オスモル濃
度＋１’ＭＳＦ（１０〜５Ｍ）＋アジ化物（０，０２％
））５ｚｊ７容量中で４℃で１５分間懸濁させ、ポリト
ロン（ｐｏ　ｌ　ｙ　Ｌｒｏｎ）ホモジナイザー（３０
秒間隔で２．５分間、速度６．５単位、４℃）で均質ｆ
ヒすることにより、固定細胞膜を得た。

不連続スクロース勾配（４１％スクロース、９６０００
１１．２時間、ＲｏＬＬｅｒ　５ｌｌＩ２８．４℃）を
使用して膜を分離した。分＾ｌした膜をＰＢＳて透析し
く２時間、４℃〉、［ｔｒａｄｆｏｒｄ分析により測定
した。この方法を使用することにより得られたタンパク
の収率は３Ｘ　１０’！胞当たり１．５〜２％ｇであっ
た。

去１」ミ云ル一二 自己免疫Ｔ細胞の特殊なｉｎ　ｖｉＬｒｏ系統を発展さ
せた（１−９）、第１表は、Ｔリンパ球のこれらの系統
に関連する３種類の実験自己免疫疾患を要約したもので
ある。実験自己免疫脳を髄炎（ＥＡＥ）は、ミニリンの
塩基性タンパク（ＢＰ）で免疫することにより、’ｉｌ
（云的に感受性の系統のラッ１〜に能動的に誘導され得
る（１０）。ＥＡＥは、通常麻痺及び中枢神経系の白質
の細胞浸潤により特徴付けられる急性疾患として現われ
る。未処理ラットは、通常２又は３日後に急性ＥＡＥか
ら自然に回復し、能動ＥＡＥの新たな誘導に対して耐性
を示す（２）。慢性又は再発性ＥΔＥも所定の条件下で
誘導され得、このような疾患は多くの点でヒトの多発性
硬化症に類似している。

実験自己免疫甲状腺炎（ＥＡＴ）は、アジュバント中の
千ロクロプリン（Ｔｇ）で免疫することにより１ト２の
遺伝的に感受性のマウスに誘導され得る（１１）。

ＩＥＡＴは甲状腺の慢性炎症として現われる。ＦＡＴの
病巣に対して耐性のマウスの系統は、まだ高滴定量のＴ
ｇ自己抗体を産生し得る。　ＦＡＴはヒトにはめったに
見られない自己免疫甲状腺炎（ハシモトの甲状腺炎）の
モデルであると忠われる。

アジュバンＩ・甲状腺炎（＾＾）は、規定の（ｄｅｆｉ
ｎｅｄ）白−抗原にて・なく字仝フロインドアジュバン
ト（ＣＦ＾）中の結核菌微生物（Ｔｂ）て免疫すること
によりラットに誘導されるという点が、ＥＡＥ及びＥＡ
Ｔと異なる（１２）、接種から約２週間後、遺伝的に感
受性のラッＩ・はヒトの関節リウマチに見られる特徴の
いくつかを想起させるような特徴を有する亜急性多発性
関節炎を示す。関節炎はこの抗原の免疫により誘導され
得るので、コラーゲン■型はは静のターゲット自己抗原
であり得ると示唆されている（１３）。しかしながら、
最近の報告では静とコラーゲン■関節炎とは別々の存在
であり得ると示されている（１４．１５）。

第１表は更に、類似の自己免疫病巣が抗原−特異系統細
胞の接種により誘導され得ることを示している。系統細
胞を活性化及び保持し、疾患を形成することの詳細につ
いては文献中に記載されている（１−５）。方法の基礎
は動物に選択抗原を与え、選択抗原及び照射同買逍伝子
補助細胞と共に培養することにより特異的に反応性の細
胞を選択することである。抗原−補助細胞は、系統細胞
の増殖応答を誘発するように主要組織適合遺伝子複合体
（ＭＩＩＣ）の少なくとも一部において同質３ｒｉ伝子
でなければならない（３，４＞。還択された系統細胞を
次に抗原又は補助細胞の不在下で条件づけ培地（ｃｏｎ
ｄｉｔｉｏｎｅｄ　ｍｅｄｉｕｍ）で培養する。自己免
疫疾患を仲介することが可能な全安定系統は、一般的Ｔ
細胞マーカー（マウスのＴＩ＋ｙｌ又は−３／１３）及
び遅延型の過敏性／′ヘルパー細胞のマーカー（Ｌｙｔ
−１又はＷ３／２５）に対して陽性であることが認めら
れ、細胞毒性／′サプレッサー細胞のＬｙｔ−２又はＯ
Ｘ８マークに対して陽性の細胞は数個又は皆無であった
。１ｇマーカーに対して陽性の細胞系は存在しない、疾
患を仲介するためには、レシピエンＩ・動物に接種する
前に特異抗原又はＴ４［１胞マイトジエンと共にインキ
ュベーションすることによりＴリンパ球系統を活性１ヒ
させなければならない、１０４〜１０５程度の抗ＢＰ又
は抗ｒｇ細胞を１回接種すると、比較的短時間で顕著な
ＥＡＥ及びＦＡＴの臨床及び病理兆候が生じ得る。Ａ＾
を誘発するにはより多数の系統細胞（１０’）を使用し
、レシピエントラット （７５０Ｒ）する必要がある。レシピエン１〜は疾患を
生じるようにＭＩＩＣの一部で系統細胞と同質遺伝子で
なければならない。特徴的自己免疫病巣は、ターゲット
器官における系統細胞の免疫学的に特異的な蓄積を伴う
。Ｔリンパ球系統細胞により発生する疾患における自己
抗体の役割を示す証拠は明らかでない。

発明者は脳を髄炎又は関節炎クローン化細胞を産生させ
ることにも成功した。抗ＩＭＰクローンは親系統よりも
多少悪性ではなかったが、抗Ｔｂクローンは親よりも著
しく悪性のものが単離された。

１　】爪に・　るワクーンｌ 自己免疫疾患に対する耐性を誘発するための１、？異的
ワクチンとしての系統細胞（Ｉ　ｉｎｅ　ｃ　ｅｌ　Ｉ
ｓ）の使用を表ＩＩにまとめた。照射にかけた、又はマ
イトマイシンＣで処理した抗ＢＰ系統細胞は、もはやＥ
ＡＥを発生させることはできなかった．しかしながら、
このような弱毒化系統細胞を静脈内に一度接種すると、
［ｌＰ／ＣＦ八での免疫処理により能動的に誘発された
ラットの約６５％が耐性を示した。初期の実験では、ラ
ットは抗ＢＰ系統細胞の受動トランスフｙ　−　（ｐａ
ｓｓｉｖｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ）により発生したＥＡＥ
にまだ敏怒であった。このことは、予形成された効果も
しくは細胞に対する耐性メカニズムの効果が、分化性分
裂細胞に対する効果より劣る可能性を示唆する（７）、
　Ｌがしながら我々は、系統細胞のポジティブトランス
ファー（ｐｏｓｉＬｉｖｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ）に起因
するＥＡＥら能動ＥＡＥ（ａｃｔｉｖｅ　ＥＡＥ）も、
圧力処理した細胞を使用することによって回避できるこ
とを最近になって発見した（２０）。これに対し、弱毒
化した抗ｒｇ系統細胞を静脈内に一度接種すると、Ｔｇ
／ＣＦＡ４こより誘発された能動ＥＡＴが完全に阻害さ
れるだけでなく、活性化抗Ｔｇ系統細胞の接種にょって
生じるＥＡＴも阻害されることが判明した。従って、自
己免疫疾患に対する耐性は原則として、疾患の初期の分
子ヒ段階（ｄｉｆｆｅｒｅｎＬｉａｔｉｏｎ　ｐｂｕｓ
ｅ）のみに限定されるのではなく、エフェクタ一段階（
ｅｆｆｅｃＬｏｒ　ｐｂａｓｅ）も含み得る。圧力、架
橋剤又は破壊剤で処理したＴリンパ球を用いて行ったワ
クチン接種実験の結果については表Ｖを参照されたい．
また、本明！［＋１書に開示されている種々の方法で修
飾したＴリンパ球を使用するワクチン接種実験の結果に
ついては、添付図面第３図から第５図を参照されたい。

タンパク　を　いる、、法 ０己免疫系統細胞は実験的自己免疫を予防し且つ治療す
る物質として効果的であることが判明した．この方法は
、まだ特異的治療法のない臨床的自己免疫疾患でも有用
であると思われる。臨床的には、予防より治療が重視さ
れるべきであるが、実際には予防と治療の差は重要では
ないとシえることもできる。大きな問題となっている自
己免疫疾患はしばしば進行性又は回帰性であり、次から
次へと生じる自己免疫リンパ球の分化の予防はそれ自体
が有効な治療法となり得る。

第１図は、系統細胞を一度接種すると静が緩和すること
を示している。この実験では、能動的に誘導された＾＾
にかかった数グループのラットを、特異的抗Ｔｂ系統細
胞又は対照系統細胞で処理した。

特巽的系統細胞て処理したラットの方が病状が軽く、短
時間で寛解した。

自己免疫リンパ球系統の遷択の対象となる自己抗原の同
定及び取得可能生も考慮の必要がある。

自己抗原は多くの条件下で未知であり、又は供給が極め
て限られている。にも拘わらず、Δ＾モデルは、外来の
源から得られる不明な抗原の混合物を”用いた場合でさ
えも関連細胞系の成育が可能であることを示唆している
。特異的に有毒な自己免疫細胞がこのような条件で発生
する理由又はその過程は誰であるが、発生することは事
実である。但し、有効なワクチンを得るためにＴリンパ
球の系統又はクローンを育てる必要はない。ＡＡ、ＥＡ
［Ｅ又はＥＡＴにかかったラッＩ・又はマウスから直接
採取したリンパ節細胞は、特異的抗原又はＴリンパ球マ
イトジェンで活性１ヒし、且つ圧力、架橋剤又は破壊剤
で処理することができる。これらの細胞を１吏用すると
表４．５及び６に示した結果が得られた。

系統細胞からのサブセル物質（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ
ｍａＬｅｒｉａｌ）、又は抗原性を増加した細胞で治療
を行うと有利であり得、膜タンパク質は有効に使用し得
ることが判明した。系統細胞の膜タンパク質は、先にヒ
ト赤血球からの血液型抗原の分離に使用した新規の方法
によって製造した。この方法は、膜タンパク質の平衡位
置が膜脂質二重膜の硬化（ｒｉＨｉｄｉｚａＬｉｏｎ）
によって水性領域方向に移動し、脂質の粘度が極めて大
きくなるとタンパク質が放出されるという仮説に基づく
。原則として、完全膜タンパク質を膜から放出せしめる
脂質粘度閾値は各タンパク毎に決まっている。

膜を超硬化させる最も有効な方法は、コレステロールで
の予備処理によって増大し得る静水圧（５００〜１５０
０ａｔｍ）の適用である。−最に細胞はこのような処理
に耐え、放出された物質は遠心分離により大きさに応じ
て分別され得る。ｔｏｏ　、０００ｇで１時間遠心分離
した後の上澄み中に残っている物質は、分ａ１タンパク
質か又はその小集合体と見なすことができる。この遠心
分離による沈澱物は、膜のフラグメント及びタンパク質
の大集合体からなる。前記可溶性膜タンパク質は従来の
洗剤使用法で分離した膜タンパク質と異なり、通常はそ
の活性を保持する。

自己免疫疾患に対する免疫能力は下記のフラクションに
見られた： ａ）圧力処理した活性化細胞（特異的抗原レセフ゛ター
の横方向再配列及び垂直方向移動に起因すると思われる
）；ｂ）放出された可溶性タンパク質；並びにＣ）膜フ
ラグメンｌ−０ 表ＩＩＩは５圧力法によって分離した膜フラクションが
、特定抗原に対する自己免疫系統細胞の反応の阻害にお
いて免疫的に特異的であることを示している。例えば、
Ｚｌａ抗ＢＰ系統から得た膜フラクションは、［ｌＩ’
ｌに対する完全Ｚｌａ系統細胞の反応は阻害したが、関
節炎発生＾２系統細胞の対応抗原に対する反応は阻害し
なかった。逆に、関節炎発生＾２ＭＡ胞から得た膜フラ
クションは、完全へ２系統細胞の反応は阻害したがＺｌ
ａ系統細胞の反応は阻害しなかった。これらの結果は、
膜が自己抗原に対して特異的な生物学的に活性のレセプ
ターを含んでいることを示す。

第２図は、ラットに０．０５μｇのＺｌａ系統細胞膜フ
ラクションを１週間間隔で２度投与し、２週間後にラッ
ト体内に能動ＥＡＥを誘発させるという実験の結果を示
している。この結果から明らかなように、膜フラクショ
ンで処理したラットは対照ラットに比べて極めて軽い麻
痺症状を示した。このように、特異的膜フラクションを
使用すると、疾患の進行が著しく緩和され得る。表Ｉｖ
は圧力で活性１ヒした抗ＤＩ’ｌ系統細胞をラットに接
種した結果を示している。これらの結果から明らかなよ
うに、対照系統細胞で処理したラットがＥＡＥに敏恐で
あったのに対し、圧力で活性化した特異的抗ＢＰ系統細
胞により処理したラットは活性ＥＡＥに対して完全な耐
性を示した。これらのラットは完全抗ＢＰ系統細胞（図
示せず）により発生したＥＡＥに対しても耐性を示した
。圧力処理、架橋剤処理した膜試料を抗昌ワクチンとし
て使用した場合の結果を表Ｖｌに示す。

自己免疫系統細胞の膜タンパク質を用いて治療できる自
己免疫疾患の具体例 ヒト自己免疫疾患　　Ｔリンパ球の活性化に使用される
抗原 多発性硬化症　　　　　ａ）ミニリン塩基性タンパク質 ｂ）中枢神経系のイ■抽出物 甲状腺炎　　　　　　ａ）サイログロブリンｂ）甲状腺
のオ■抽出物 糖尿病くタイプＩ）ａ）島州胞抽出物 強直性脊椎炎　　　　ａ）特定クレブシェラバク（１，
７定タイプ）　　　　　テリア ｂ）関節の粗抽出物 リウマトイド関節炎　ａ）開始の■抽出物火１ヱ［Ｌ ミニリン塩基性タンパク質に対するＴリンパ球の一系統
からの細胞を使用した（Ｚｌａ系）。これらの細胞はラ
ット体内に実験的自己免疫脳炎（ＥＡＥ）を誘発する。

６ｘｌＯ’個の細胞を、ｐＨ７，２のリン酸Ｍ衝溶ｆｌ
（ＰＢＳ）２．５ｍｌ中に懸濁させ、これを滅菌圧力チ
ャンバ内に配置した。蓋は、気泡を完全に除去すべく、
溶液の表面に直接配置した。フレンチプレス（Ｆｒｅｎ
ｃｌ−＋　Ｐｒｅｓｓ）により圧力を徐々に加えて（１
５分）１０００ａｔｍ、にし、この圧力を４５分間維持
した。

次いで圧力を大気圧までゆっくり低下させた（１５分）
。細胞を試験管に移し、１５００ｒｐｍで回転処理し、
沈Ｒ物を分離した。トリパンブルー排除（ｔｒｙｐａｎ
ｂｌｕｅ　ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）によって調べた細胞生
存串は９０％を越えていた。次いで上澄みを１００，０
００ｇで１時間超遠心分離にかけた。上澄み（２ｍ１の
ＰＢＳ中約６００ｕＩ２のタンパク竹）を回収Ｌ　下腑
のｉｎ　ｖｉ１ｒｏ乃びｉｎ　ｖｉｖｏ機能実験で使用
した。

ｉｎ　ｖｉｔｒｏ実験ではＺｌａ系細胞を、特異的な抗
原の添加（０，２，ｇ／ａｔ＋のミニリン塩基性タンパ
ク質）によって、これらの細胞を増殖すべく誘発した。

細胞増殖は組込まれた放射性チミジンの分出たり計数で
表した。放出タンパク質（上記）を３０１１ｇ／ｎ＋１
加えると、細胞増殖が４０〜６０％減少した。別のＴ系
統細胞（間接炎を含む）から放出されたタンパク質を３
０１Ｊｇ／働１使用しても、細胞増殖に影響は見られな
かった。この種の実験の典型的結果を表Ｉ１１に示した
。これらの結果は、細胞表面への圧力によって放出され
た物質が誘発性抗原に対して特異的なレセプターを３ん
でいることを示す。

この物質は、自己免疫疾患を部分的に又は完全に除去す
べく、レセプターに対する免疫処理に使用し得る。以下
にこのような実験を記述する。

先ず、ＺＬａ系統細胞から圧力により放出された可溶性
タンパク質０．５μビを挟挿することにより、ラッ１〜
と１週間間隔で２戊子免疫した。２週間後、ラットをア
ジュバント中ＢＰ抗原によりチャレンジ処理した。１４
日後、対照グループのラットは総て重いＥＡＥ症状を示
したが、予処理したラッ１〜は軽いＥへＥ症状しか示さ
なかった。起脳炎量のＢＰでチャレンジ処理した場合の
典型的プロフィルを第２図に示す。この場合も、無関係
な系（関節炎）から圧力により放出されたタンパク質で
のラットの予処理はＥＡＥの発生に影響を及ぼさなかっ
た。

二　　へ 募」」（ 特異的自己免疫系統細胞を使用する自己免交疾患に対す
るワクチン接種 ラット又はマウスに活性化系統細胞（抗ＢＰ、５Ｘ１０
６；抗ＴＦｉ、５Ｘ１０’；抗Ｔｂ、２Ｘ　１０’）を
静脈内接種し、これらの系統細胞のいくつかは照射（１
５００Ｒ）により処理した、対照動物（示さず）には非
関連抗原に対する系統細胞を接種した。２〜４週後、活
性自己免疫疾患を誘導するように動物を感作した。

第１１１表 膜フラクションは特異的系統細胞の増殖反応を阻害する
膜フラクションの由来細胞　　特異的抗原に対する増殖
反応系統阻害率％ 縁　　　ηｌ Ａ２　　　　　　　　　　　　３９　　　　０八ｌａ　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０　　　　
　５０八２（関節炎）及びＺｌａ（脳を製炭細胞系）か
らの膜フラクションを圧力法（Ｌ　、０００ａ　Ｌｍ　
、　）によって得た。完全系統細胞の特異的抗原に対す
る増殖反応に５０ｕｇ／ｍｌが含まれていた。阻害に！
、（％〉は、特異的系統細胞から得た膜フラクションの
存在下における反応と、別の系統細胞の膜フラクション
の存在下における反応との比較によって計算した。

圧力処理して活性化した細胞を用いて実施した実験はい
ずれも、はぼ同様の結果を示した。

策ｕ人 圧力処理した活性化抗［ＩＰ系統細胞を用いる対ＥＡＥ
ワクチン接種によるラットの処理　　　　　　誘発した
ＥＡＥ発生率　　　　臨床的病状 対照　　　　　　　　　　３０／３０　　　　　中−重
症抗１１Ｐ　　　　　　　　　　　５／３０　　　　０
−軽症活性化し且つ静水圧処理（１１５０ａＬｍ、１５
分）した抗［１１１又は対照系統細胞（５ｘｌＯ’個／
週Ｘ４回）をＬｅｗ　ｉ　ｓラッ）に腹膜組織内接柱し
、１週間後にＩｌｌ’／ＣＦ＾でチャレンジ処理して能
動ＥＡＥを誘発した。

匿又人 チン接種 Ｔリンパ球ワクチン　　Ｔリンパ球の処理　甲状腺炎の
発生率熱　　　　　　　　　　無　　　　　　　　　１
００抗Ｔｇ　　　　　　　　　圧力　　　　　　　　４
５抗Ｔピ　　　　　　　コルヒチン＋　　　　　　５９
サイＩ・カラシン 抗Ｔ８　　　　　　　ポルムアルデヒド　　　３５株Ｃ
３１１／ｅ１１１ｘｃ５７ＢＬ／６Ｊ）Ｆｌのマウス１
０匹からなるグループ数組に、２ｘｌＯ’個の抗チログ
ロブリン（抗Ｔビ）系統Ｔリンパ球を静脈内接種するこ
とによって実験的自己免疫甲状腺炎を誘発した。病気誘
発の前に、第３図の説明に記載のように圧力、コルヒチ
ン＋サイトカラシン又はホルムアルデヒドで処理してお
いた活性化抗Ｔｇ系統Ｔ細胞１０　ｘ　１０’個を１週
間の間隔で３回、マウスの一部に皮下注射した。甲状腺
炎の重さを１週間後の甲状腺の和綴学的検査によって評
価した。

蓋■衣 無　　　　　　無　　　　　　　　１００　　　　　　
　　　５３有　　　　　　無　　　　　　　　１００　
　　　　　　　　５５有　　　　　　有　　　　　　　
　　５０１５１０匹のＬｅｗｉｓラットからなるグルー
プ数組に１．２ｍｇの＾２ｂ２Ｍ股試料を１週間の間隔
で４回任意に皮下接種した。１週間後に、ラットをＭＴ
（油中１ｍｇ）でチャレンジ処理して品を誘発した。病
気にががったラッＩ・の２０日口の臨床スコアを、第３
図の説明に記載のように、０から１００％までの評価段
階で記録する。

分離膜は次のように形成した。３ｘ１０′１個の活性１
ヒ＾２ｂＴ細胞を静水圧処理（１５００バールで１５分
）し、これらの細胞のうち半分を更に架橋剤ホルムアル
デヒド処理（０，３％で１５分）し、且つＰＢＳで６回
洗浄した。膜は、これらの細胞をＮａＣＩ低張溶液（１
／３生理学的浸透圧＋ＰＭＳＦ／１１１−５Ｍ）４　？
　：、！、ｎ１Ｔｋ（ｎ　　ＩＩ’）Ｏ／ｊ　ｔ　ｒｈ
／−Ｓ＊ａ？−＋　２　　％　　し１．Ｌ　−ｆ４ｔｓ
ｆｉ、　　ＴｈＪ。

らの細１１ａをポリトロンホモジナイザーでホモジナイ
ズしく６．５分、４’Ｃ３０秒間２．５単位）、４１％
サツ力ロースグラジカントで膜を分離した（９６，００
０ｇ、２時間、　Ｒｏｔｔｅｒ　５Ｗ２８．４℃）。こ
れらの膜をＰＩＩＳに対して透析しく２時間、４℃）、
［！ｒａｄｆｏｒｄ分析でタンパク質を測定した。膜タ
ンパク質の収率は１．５〜２ＩＩ１ｇであった。

（以下仝白） Ｘｌ」ＬＬ Ｃ５７ＢＬ／ＫＳマウスは５日分の用！（−日５０ｍｇ
／ｋｇ）のストレプトゾｌ−シン（ｓｔｒｅｐＬｏｚｏ
Ｌｏｃｉｎｅ）毒素（ＳＴＺ）に暴露すると自己免疫糖
尿病を起こす（２１）。

この用量ではＳＴＺが、通常はインシュリンを産生ずる
膵臓ベータ細胞を軽（破壊して糖尿病を誘発する。その
結果、ＳＴｚにａＮされたマウスのＴリンパ球が不明（
ｕｎｄｅｆ　１ｎｅｄ）ベータ細胞抗原を識別し且つ攻
撃して、マウスのベータ細胞臨床的糖尿病の自己免疫破
壊を生じさせる。

糖尿病に対するワクチン接種を行うべく、ｓ’ｒｚ暴露
したマウスの牌臓Ｔリンパ球を用いて実験を行った。牌
臓リンパ球は、脛臓内に存在してベータ細胞を攻撃する
自己免疫Ｔ細胞を活性化すべく、ＴＩ胞マイトジェンコ
ン′カナバリンＡと共に２日間インキュベートした。次
いで、これらの活性化したリンパ球を、リン酸緩衝溶液
中濃度０．３％の架橋剤グルタルアルデヒドと共に１５
分間インキュベーション処理した。グルタルアルデヒド
処理したＴ細胞を新しいリン酸緩衝溶液で６回洗浄し、
Ｃ５７ＢＬ／ＫＳマウス２０匹からなるグループ数組に
、２ｘｌＯ’個の活性化グルタルアルデヒド処理Ｔ細胞
を皮下接種した。２週間後、マウスを５０分の薬量のＳ
ＴＺに暴露して糖尿病を誘発した。結果を表Ｖｌｌに示
す。

チン接種による自己免疫糖尿病の予防 ＴＩ胞接種°　　　　　糖尿病５発生重態　　　　　　
　　１００％ 有　　　　　　　　　　　　　　４０％ａ　：　Ｃ５７
１１Ｌ／ＫＳマウス２０匹からなるグループ数組に、Ｓ
ＴＺ、％露した糖尿病マウスの牌臓から得たＴ細胞をグ
ルタルアルデヒド（０，３％）処理して活性化したもの
２ｘ　１０’個を任意に一回注射した。

ｂ：マウスを１クールのＳＴＺ（５０ｍｇ／ｋｇ／日で
５日分）でチャレンジ処理し、糖尿、高血糖（＞５００
ｍｇ）及びインシュリンの組織学的形跡による測定で糖
尿病の発生を調べた。

ワクチン接種したマウスの自己免疫糖尿病に対する相対
的耐性は：ａ）グルタルアルデヒド処理したＴ　Ｉ　Ｉ
ａワクチンの効果；ｂ＞ｇ尿病の予防；並びにＣ）精製
系統及び明確な（ｄｅｆ　１ｎｅｄ）抗原を便用ぜずに
、糖尿病マウスから直接得たマイＩ・ジエン活性（ヒ牌
臓を用いてワクチン接種できる可能性を示している。

従って、顕似のＴ、ｆ（ｌＩ胞集団を糖尿病その他の患
者の血液から得て、Ｔ細胞ワクチンの製造に使用し得る
。

一ンでル、シｆ−Ｔ＋ワクニ乙 ２０匹のＬｅｗｉｓラットからなるグループ数組に１０
７個の活性化Ｔ細胞ワクチンを１週間間隔で３回皮下接
種した。Ｔ細胞ワクチンは、静水圧（１２５０バールで
１５分）及びグルタルアルデヒド（０，３％で１５分）
で順次処理した抗ＢＰ又は抗ＭＴクローンであった。ｎ
終接種から１週間後に、ラットをアジュバン１〜中ＢＰ
（ミニリン塩基性タンパク質：　２５ｕｇ）でチャレン
ジ処理してＥへＥ（実験的自己免疫脳を製炭）を誘発す
るか、又はオイル中ＭＴ（結核菌；　１■）によりチャ
レンジ処理して＾＾（アジュバン１〜Ｉ！１節炎）を誘
発させた。

表ｖｒｒｉのデータは、活性化Ｔ細胞のクローンを圧力
及び架橋剤で処理し、特異的ワクチンとして使用し得る
ことを示している。

表Ｖｒｌｌ 静水圧及びグルタルアルデヒドで処理した活性化Ｔｌ胞
を用いる特異的ワクチン接種 Ｔ細胞　　　誘発　　　発生率　　病状ワクチン　　疾
患 ＾＾　　　　１００％　　重症 抗Ｂｌ’　　　　　ＥＡＥ　　　　　２０％　　軽症＾
＾　　　　１００％　　重症 抗ＭＴ　　　　　ＥＡＥ　　　　　１００％　　致死＾
＾　　　　　０ これらの結果は、ａ）Ｔ細胞ワクチンの製造における静
水圧及び架橋剤処理の効果；ｂ）これらのワクチンの免
疫的特異性（各ワクチンは、そのワクチンに免疫的に対
応する疾患に対して耐性を誘発した）；及びｃ　）　Ｔ
ｌ１ｌｌ胞ワクチン接種によるＴ細胞の対抗原反応の阻
害を示している。

別の実験では、ガンマ−線照射した、又は静水圧及び架
橋剤を組合わせて処理した抗ＭＴクローン細胞をＬｅｗ
ｉｓラットに任意に接種した。特定的には、１０匹のＬ
ｅｗｉｓラッＩ・からなるグループ数組に、１０７個の
＾２ｂ（抗体ＭＴ）クローン細胞を１週間の間隔で３回
接種した。前記Δ２ｂクローン細胞は、照射（１５００
Ｒ）するか又は静水圧（１２５０バールで１５分）及び
グルタルアルデヒド（０，３％で１５分）で順次処理し
ておいた。次いで１週間後に、後足の内証に油中ＭＴ（
１ｍｇ）を接種してラッ１〜を免疫処理した。９０後に
流出リンパ節を除去し、ｉｖ　ｖｉＬｒｏの酊に対する
増殖反応（ｐｒｏｌ　１ｆｅｒａｔｉｖｅ　ｒｅｓｐｏ
ｎｓｅｓ）を、ＤＮＡへの３１１−チミジンの組込みに
より測定した。結果を表ＩＸに示す。

人−」１ 性を抑止する。

クローン　　　　　　　　　　　　　（ｃｐｓ）無　　
　　　　　　ｍ　　　　　　　　　　　　　　　３１，
５８６＋：２００八２ｂ　　　　　照射　　　　　　　
　２７，７６２±３００＾２ｂ　　　　　　静水圧＋　
　　　　　６，５００土１５０グルタルアルデヒド これらの結果は、静水圧処理及び□グルタルアルデヒド
処理を組合わせて処理した細胞を用いるＴ細胞ワクチン
接種が、抗原に対するＴ細胞の反応性を抑止する上で効
果的であることを示している。

ヒＩ〜自己免疫疾患に対するＴ細胞ワクチン接種の臨床
的使用は、ｌ）疾患の予防ではなく、特定の自己免疫疾
患に既にかかつている個体の治療に使用し得；２）健康
な個体ではなく病気の個体から得た自己免疫Ｔ　ｑａ胞
のワクチンとして使用し得；且つ３）長期細胞系又はク
ローンからワクチンを製造するのではなく、個体から直
接採取した細胞集団からワクチン分製造する場合に使用
し得る。

下記の実験は、アジュバント関節炎モデルにおいてこれ
らの条件が満たされることを示す。

Ｌｅｗｉｓラット３０匹からなるグループ数組の各ラッ
トを、油中結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕ
ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（ＩＩ３７Ｒａ）　１　ｍｇで
免疫してアジュバント関節炎を誘発した。１５日口重総
てのラットが明白に関節炎にかかった時点で、１０匹の
ラットのグループ３組に、やはり重度のアジュバント関
節炎にかがった別のラットグループから得たリンパ節細
胞（５０ｘｌＯ’）を任意に皮下接種した。ドナーリン
パ節細胞はＴ細胞マイトジェンコンカナバリンＡ　（１
，５ｕｇ／ｍ１テ４８時間）と共にインキュベーション
にかけて活性化した。ドナー細胞の一部は照射（２５０
０Ｒ）のみで処理し、一部は架橋剤グルタルアルデヒド
（０，３％）で１５分間化学的に処理し、次いでサリー
ン（ｓａｌｉｎｅ）で十分に洗浄した。対照グループの
１０匹のラッＩ−は未処理のままにした。

１７日口、これらのグル−プのラットに、前述のごとく
照射又はグルタルアルデヒド処理した５０ｘ１０６個の
ドナー細胞をブースター接種した。２４日口までに、グ
ルタルアルデヒド処理ドナー細胞を接種した総てのラッ
Ｉ・が完全に持続的な寛解状態を示し、未処理の対照ラ
ット及び照射ドナー細胞で処理したラットではてアジュ
バン１〜関節炎が依然として進行していた。結果を表Ｘ
に示す。

表−Δ− これらの結果は、１）ワクチンを病気にががった個体か
ら直接製造できる；２）細胞をグルタルアルデヒＩ’（
架橋剤）で処理すると細胞が照射では得られない有効な
ワクチンになる；３）樹立した疾病の治療が可能である
ことを示している。

Ｔリンパ球は、自己免疫疾患以外に、外来の薬物、例え
ばオキサシロン（ＤＸ）又はジニ）・ロフルオロベニゼ
ン（ＤＨＦＢ）に対する遅延型過敏症（ＤＴＩＩ）も引
き起こす。ＤＴＨ阻害における効果を示すことによって
’「ａ　ｕａワクチン接種の一般的適用性を示すべ（、
ＢＡＬＢ／ｃマウス１０匹のグループ数組の皮膚に適当
なベヒクル中の特定薬剤を塗ることによって、Ｏｘ又は
ＤＮＦＢに対する感作処理をした。５日後、マウスの耳
に薬剤を適用し、２４時間後の耳の厚みを測定すること
によって薬剤に対するＤＴ１１アレルギーを調べた。ド
ナーマウマウスから得たリンパ節細胞２０ｘｌＯ’個を
感作処理したものを、薬剤より５０？くマウスに皮下接
種した。ドナーリンパ節細胞は、ワクチンとして使用す
る前に、コンカナバリンＡと共に４８時間インキュベー
トすることによって活性化し、次いで照射（２５００Ｒ
＞又はグルタルアルデヒド（０，３％）で１５分処理し
た。典型的結果を表Ｘｔに示す。

点−」１ 対ＯＸ　ＤＴＩＩに対するマウスのワクチン接種ルデヒ
ド処理した細胞であれば、ＯＸに対して感作したドナー
マウスリンパ節細胞はｏｘに対するＤＴＩ＋反応に対し
て被検マウスをワクチン接種するのには使用できるが、
０ＮＦＢに対するＩＩＴＩＩ反応に対しては使用できな
いことを示している。照射処理したドナー細胞はワクチ
ンとして作用なかった。

これらの結果は下記のことを示唆する。

１）化学的に架橋した活性化リンパ節細胞はＤＴＨ反応
性に対して免疫学的に特異的なワクチンを構成する。

２〉照射したドナー細胞はワクチンとして作用しない。

３　）　＃ｊｔｌ胞を用いるワクチン接種は外来抗原に
対しても自己抗原及び自己免疫に対しても効果的である
。

・ｌ）トナー細胞はワクチンとして使用するために特異
的抗原によって活性化する必要はないが、コンカナバリ
ンＡのごときマイＩ・ジエンで活性化できる。

５）リンパ節細胞はＴ細胞系及びクローンと同様に効果
的に使用できる。

（以下余白） 升囲じＧ【 １、　　Ｂａｎ−Ｎｕｎ、　　Ａ、、　　Ｗｅｋｅｒｌ
ｅ、　　Ｈ，ａｎｄ　　Ｃｏｈｅｎ、　　１．Ｒ。

（１９８１）、Ｅｕｒ、Ｊ、　　工ｍｍｕｎ、１１：　
　１９５−１９９゜２、　　Ｂｅｎ−Ｎｕｎ、　　Ａ、
　　ａｎｄ　　Ｃｏｈｅｎ、　　工、Ｒ，（１９８２）
、　　Ｊ。

工ｍｍｕｎｏ１．１２Ｂ＝１４５０−１４５７゜３、　
　Ｂｅｎ−Ｎｕｎ、　　Ａ、　　ａｎｄ　　Ｃｏｈｅｎ
、　　■、Ｒ，（１９８２）　、　　Ｊ。

工ｍｍｕｎｏ１．１２９：３０３−３０８゜４、　　Ｂ
ｅｎ−Ｎｕｎ、　　ハ、、Ｅｉｓｅｎｓｔｅｉｎ、Ｓ、
ａｎｄ　Ｃｏｈｅｎ、　　■、Ｒ１（１９８２）、Ｊ、
Ｉｍｍｕｎｏｌ、１２９：９１８．。

５、　　　Ｈｏ１ｏｓｈｉｔｚ、　　　Ｊ、、　　Ｎａ
ｐａｒｓ七ｅｋ、　　Ｙ、、　　Ｂａｎ−Ｎｕｎ、　　
Ａ、。

ａｎｄ　Ｃｏｈｅｎ、　工、Ｒ，（１９８３）、　５ｃ
ｉｅｎｃｅ　２１９：５６−５８゜６、　　Ｂｅｎ−Ｎ
ｕｎ、　　Ａ、、　　Ｗｅｋｅｒｌｅ、　　Ｈ，ａｎｄ
　　Ｃｏｈｅｎ、　　工、Ｒ８（１９８１）、Ｎａｔｕ
ｒｅ　２９２＝６０−６１゜７、　　Ｂｅｎ−Ｎｕｎ、
Ａ、ａｎｄ　Ｃｏｈｅｎ、　　工、Ｒ，（１９８１）、
Ｅｕｒ、Ｊ。

工ｍｍｕｎｏ１．　１１：９４９−９５２゜８、　　Ｍ
ａｒｏｎ、　　Ｒ，、Ｚｅｕｂａｖｅｌ、　　Ｒ，、Ｆ
ｒｉｅｄｍａｎ、　　Ａ、　　ａｎｄＣｏｈｅｎ、　　
工、Ｒ，（１９８３）、　　Ｊ、　　工ｍｍｕｎｏ１．
　１３１：２３１６−２３２０゜ ９、　　Ｈｏ１ｏｓｈｉｔｚ、　　Ｊ、、　　Ｆｒｅｎ
）ｃａｌ、　　Ａ、、　　Ｂｅｎ−Ｎｕｎ、　　Ａ、　
　ａｎｄＣｏｈｅｎ、　　工、Ｒ，（１９８３）、　　
Ｊ、　　工ｍｍｕｎｏ１．　　Ｔ３１：２８１０−２８
１３゜ １０、Ｐａｔｅｒｓｏｎ、　　　Ｐ、Ｙ、　　　（１９
７６）　　　工ｎ：　　Ｔｅｘｔｂｏｏｋ　　ｏｆ工ｍ
ｍｕｎｏｌｏ　ａｔｈｏｌｏ　　、　　（Ｍｅｉｓｃｈ
ｅｒ、　Ｐ、　ａｎｄ　Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒ
ｄ、　　Ｈ，Ｊ、　　Ｅｄｓ）　　２ｎｄ　　Ｅｄ、、
　　ｐｐ、　　１７９−２１３゜Ｇｒｕｎｅ　＆　５ｔ
ｒａｔｔｏｎ、　Ｎ、Ｙ。

１１、　Ｒｏｓｅ、　　Ｎ、Ｒ，、Ｔｗａｒｏｇ、　　
Ｆ、Ｊ、　　ａｎｄ　　Ｃｒｏｗｌｅ、　　Ａ、Ｊ。

（１９７１）、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１０６：６９８−
７０８゜１２、　Ｐｅａｒｓｏｎ、　Ｃ，Ｍ、　　（１
９６３）　、　Ｊ、　Ｃｈｒｏｎｉｃ　Ｄｉｓ、　１６
：８６３−８７４゜ １３、　Ｔｒｅｎｔｈａｙｎ、　　Ｄ、Ｅ、　　ＭｃＣ
ｕｎｒ、　　Ｗ、Ｊ、　　Ｓｕｓｍａｎ、　　Ｐ、　　
ａｎｄＤａｖｉｄ、Ｊ、Ｒ，（１９８０）、Ｊ、Ｃ１１
ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、６６：１１０９−１１１７゜ １４、工１ｚｕｋａ、　Ｙ、　ａｎｄ　Ｃｈａｎｇ、　
Ｙ、Ｈ，（１９５２）　、　ＡｒｔｈｒｉｔｉｃＲｈｅ
ｕｍ、２５＝１３２５−１３３２゜１５、　Ｈｏ１ｏｓ
ｈｉｔｚ、　　Ｊ、、　　Ｍａｔｉｔｉａｕ、　　Ａ、
　　ａｎｄ　Ｃｏｈｅｎ、　　工、Ｒ０（１９８４）、
Ｊ、Ｃ１１ｎ、　　工ｎｖｅｓｔ、７３：２１１−２１
５゜１６、　Ｄｕｓｋｉｎ、　ｅｔ　ａｌ、、　　（１
９８５）　、　Ｃｅ１ｌ　５：８３−８６゜１７、　Ｔ
ｒｅｎｔｈａｍ、　　Ｄ、Ｅ、、　　ａｔ　ａｌ、　　
（１９７７）、　Ｊ−１１ｉ１ｉｐ、　Ｍｅｄ。

１４６：８５７゜ １Ｂ、　Ｐｅａｒｓｏｎ、　　Ｃ，Ｍ、　　（１９５６
）、　　Ｐｒｏｃ、　　Ｓｏｃ、　　Ｅｘｐ、　　Ｂｉ
ｏ。

Ｍｅｄ、９１：９５゜ １９、　Ｈｏ１ｏｓｈｉｔｚ、　　Ｊ、、　　ｅｔ　ａ
ｌ、、　　（１９８３）、　　５ｃｉｅｎｃｅ　２１９
−５６゜ ２０、　Ｌｉｅｄｅｒ、　　Ｏ，、ａｔ　ａｌ、、　　
（１９８６）、　Ａｎｎ、　Ｎ、Ｙ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、４７５：　　２６７゜ ２１　、　Ｌｉｋｅ、　Ａ、Ａ、　ａｎｄ　Ｒｏｓｓｉ
ｎｉ、　Ａ、Ａ、　５ｃｉｅｎｃｅ　１９３：４１５−
４１７　　（１９８６）。

（以下余白）

【図面の簡単な説明】

第１図は、系統細胞による進行中関節炎の治療に係わる
： ２０匹のＬｅｗｉｓラットにＣＦ＾を接種して能動アジ
ュバント関節炎を誘発した。臨床的関節炎の発病から５
０後（矢印、１６日目）、１０匹のラットからなるグル
ープ１組を活性北枕Ｔｂ系統細胞の単一静脈内接種によ
って処理した（閉鎖円）、１０匹のラツｌ〜からなる別
のグループを無関係な対照系で処理した（開放円）。関
節炎平均スコアを（５）の方法で求めた。 第２図は、膜フラクションの投与によるＥＡＥの緩和に
係わる： ラットに１週間間隔でＺｌａ系統細胞の膜フラクション
（圧力法により得たＯ、ｈｇ）を２同棲種し、２週間後
に起脳炎量のＥＡＥでチャレンジ処理した。 被検ラッ１〜の臨床スコアを開放円で示し、対照ラット
のスコアを閉鎖円で示す、臨床スコア：１−軽；２−中
；３−重。 第３図は、Ｔリンパ球ワクチンによるアジュバント関節
炎の阻害に係わる： Ｌｅｕ＋ｉｓラット１０匹からなるグループ数組を、尾
のベースに油中結核ｆ：ｉｊ　（ＭｙｃｏｂａｃＬｅｒ
ｕｉｍ　Ｌｕｂｃｒ−ｃｕｌｏｓｉｓ）（ＭＴ）Ｈ３７
Ｒ＾（Ｉｇ＋＋＋）を皮肉接種することによって免疫処
理し、アジュバント関節炎を誘発した。病状を足の腫れ
、赤み、変形及び機能欠失に基づいてＯから１００％ま
での評価段階に分けた。グループの種類は下記の通りで
ある。 Ｃ一対照、ワクチン接種無し。 Ａ−Ｔ細胞マイＩ・ジエンコンカナバリンＡ（１，５μ
ｇ／ｍｌ）と共に３０間インキュベーション処理して活
性化しておいたクローンＡ２ｂの細胞２０ｘ１０６個を
、関節炎の５１発前に、１週間間隔で３凹皮下接行した
。 Ｎ−活性化しない、但しホルムアルデヒド（０，３％）
で処理した（１５分）＾２ｂ、ｌＩＩ胞を接種した。 Ｆ−ホルムアルデヒドで処理した活性化＾２ｂ細胞を接
種した。 Ｐ−静水圧処理（１２５０バール、１５分）した活性化
＾２ｂ則胞を接種した。 Ｘ−９初に圧力処理し、次いでホルムアルデヒド処理し
た活性化Ａ２Ｌ＋細胞と接種した。 第４図はＴリンパ球ワクチンによるアジュバント関節炎
の阻害に係わる： この実験も第３図の場合と同様に実施した。グループも
Ｆ以外は同じである。Ｆはここでは、圧力処理（１５０
０バール）後の＾２ｂ＋！Ｉｌｌ胞のホルムアルデヒド
（０，３％）処理を表し、Ｇは圧力処理後の＾２１ＪＭ
！Ａ胞のグルタルアルデヒド（０，３％）処理を表す。 第５図は細胞骨格破壊物質（ｃｙｔｏｓｋｅｌｅＬａｌ
ｄｉｓｒｕｐＬｏｒｓ）を用いて製造したＴリンパ球ワ
クチンによるアジュバンＩ・関節炎の阻害に係わる：こ
の実験も第３図の場合と同様に実施した。Ｙは、ワクチ
ン接種の前に、コルしチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｒｉｅ）
（１０Ｈｏ１．）とサイＩ・カラシン（ｃｙｔｏｃｈａ
ｌａｓｉｎ）（０，５μｇ１０＋　ｌ　）とで１５分処
理した＾２ｂ、１ｕｌｌ胞を表す。

Claims (38)

【特許請求の範囲】
1. （１）特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有用な圧力
   処理した活性化Ｔリンパ球細胞。
2. （２）特異的自己免疫疾患が多発性硬化症、甲状腺炎、
   I 型糖尿病、強直性脊椎炎、慢性関節リウマチ又は重
   症筋無力症である特許請求の範囲第１項に記載の圧力処
   理した活性化Ｔリンパ球細胞。
3. （３）化学的架橋剤で更に処理した特許請求の範囲第１
   項に記載の圧力処理した活性化Ｔリンパ球細胞。
4. （４）圧力で処理した後に化学的架橋剤で処理した特許
   請求の範囲第３項に記載の圧力処理した活性化Ｔリンパ
   球細胞。
5. （５）圧力で処理する前に化学的架橋剤で処理した特許
   請求の範囲第３項に記載の圧力処理した活性化Ｔリンパ
   球細胞。
6. （６）破壊剤で更に処理した特許請求の範囲第１項に記
   載の圧力処理した活性化Ｔリンパ球細胞。
7. （７）圧力で処理した後に破壊剤で処理した特許請求の
   範囲第６項に記載の圧力処理した活性化Ｔリンパ球細胞
   。
8. （８）圧力で処理する前に破壊剤で処理した特許請求の
   範囲第６項に記載の圧力処理した活性化Ｔリンパ球細胞
   。
9. （９）化学的架橋剤で更に処理した特許請求の範囲第６
   項に記載の圧力処理した活性化Ｔリンパ球細胞。
10. （１０）特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有用な、
    化学的架橋剤で処理した活性化Ｔリンパ球細胞。
11. （１１）特異的自己免疫疾患が多発性硬化症、甲状腺炎
    、 I 型糖尿病、強直性脊椎炎、慢性関節リウマチ又は
    重症筋無力症である特許請求の範囲第１０項に記載の化
    学的架橋剤で処理した活性化Ｔリンパ球細胞。
12. （１２）特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有用な、
    破壊剤で処理した活性化Ｔリンパ球細胞。
13. （１３）特異的自己免疫疾患が多発性硬化症、甲状腺炎
    、 I 型糖尿病、強直性脊椎炎、慢性関節リウマチ又は
    重症筋無力症である特許請求の範囲第１２項に記載の破
    壊剤で処理した活性化Ｔリンパ球細胞。
14. （１４）化学的架橋剤で更に処理した特許請求の範囲第
    １２項に記載の破壊剤で処理した活性化Ｔリンパ球細胞
    。
15. （１５）特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有用な、
    圧力処理した活性化Ｔリンパ球の産生方法であって、 ａ）自己免疫疾患に特異的な活性化Ｔリンパ球細胞を緩
    衝液に懸濁させ、 ｂ）懸濁した細胞を適当な時間好適な静水圧下におき、 ｃ）懸濁した細胞に加えられる圧力を適当な割合で解放
    し、細胞から膜タンパクを実質的に損失することなく圧
    力処理した活性化Ｔリンパ球細胞を産生させる ことから成る方法。
16. （１６）好適な圧力が５００〜約１５００気圧である特
    許請求の範囲第１５項に記載の方法。
17. （１７）段階ｂ）に先立って、懸濁した細胞を化学的架
    橋剤で処理する特許請求の範囲第１５項に記載の方法。
18. （１８）細胞を破壊剤で更に処理する特許請求の範囲第
    １７項に記載の方法。
19. （１９）段階ｃ）の後で、懸濁した細胞を化学的架橋剤
    で処理する特許請求の範囲第１５項に記載の方法。
20. （２０）細胞を破壊剤で更に処理する特許請求の範囲第
    １９項に記載の方法。
21. （２１）段階ｂ）に先立って、懸濁した細胞を破壊剤で
    処理する特許請求の範囲第１５項に記載の方法。
22. （２２）段階ｃ）の後に、懸濁した細胞を破壊剤で処理
    する特許請求の範囲第１５項に記載の方法。
23. （２３）特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有用な、
    化学的架橋剤で処理した活性化Ｔリンパ球の産生方法で
    あって、 ａ）自己免疫疾患に特異的な活性化Ｔリンパ球細胞を緩
    衝液に懸濁させ、 ｂ）懸濁した細胞を化学的架橋剤で処理することから成
    る方法。
24. （２４）特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有用な、
    破壊剤で処理した活性化Ｔリンパ球細胞の産生方法であ
    って、 ａ）自己免疫疾患に特異的な活性化Ｔリンパ球細胞を緩
    衝液に懸濁させ、 ｂ）懸濁した細胞を破壊剤で処理し、解離した細胞骨格
    を有する活性化リンパ球細胞を産生させることから成る
    方法。
25. （２５）段階ｂ）の後に、解離した細胞骨格を有する活
    性化Ｔリンパ球細胞を化学的架橋剤で処理する特許請求
    の範囲第２４項に記載の方法。
26. （２６）特許請求の範囲第１項に記載の圧力処理した活
    性化Ｔリンパ球細胞及び医薬上許容可能なキャリアから
    構成される特異的自己免疫疾患の予防又は治療用組成物
    。
27. （２７）特許請求の範囲第１０項に記載の化学的架橋剤
    で処理した活性化Ｔリンパ球細胞及び医薬上許容可能な
    キャリアから構成される特異的自己免疫疾患の予防又は
    治療用組成物。
28. （２８）特許請求の範囲第１２項に記載の破壊剤で処理
    した活性化Ｔリンパ球細胞膜フラグメント及び医薬上許
    容可能なキャリアから構成される特異的自己免疫疾患の
    予防又は治療用組成物。
29. （２９）被験体における特異的自己免疫疾患の予防又は
    治療方法であって、特許請求の範囲第２６項に記載の有
    効量の組成物を適当な経路で被験体に投与し、自己免疫
    疾患を予防又は治療する方法。
30. （３０）被験体における特異的自己免疫疾患の予防又は
    治療方法であって、特許請求の範囲第２７項に記載の有
    効量の組成物を適当な経路で被験体に投与し、自己免疫
    疾患を予防又は治療する方法。
31. （３１）被験体における特異的自己免疫疾患の予防又は
    治療方法であって、特許請求の範囲第２８項に記載の有
    効量の組成物を適当な経路で被験体に投与し、自己免疫
    疾患を予防又は治療する方法。
32. （３２）特異的自己免疫疾患の予防又は治療に有用な活
    性化Ｔリンパ球細胞から精製膜タンパクを回収するため
    の方法であって、 ａ）自己免疫疾患に特異的な活性化Ｔリンパ球細胞を緩
    衝液に懸濁させ、 ｂ）懸濁した細胞を適当な時間好適な静水圧下において
    膜タンパクを放出させ、 ｃ）懸濁した細胞に加えられる圧力を適当な割合で解放
    し、 ｄ）減圧した懸濁液を遠心分離し、細胞フラグメントを
    除去すると共に膜タンパクを含む上清を形成し、 ｅ）超遠心分離により上清を処理し、精製膜タンパクを
    回収する ことから成る方法。
33. （３３）段階ｂ）に先立って、懸濁した細胞を化学的架
    橋剤で処理する特許請求の範囲第３２項に記載の方法。
34. （３４）段階ｃ）の後に、懸濁した細胞を化学的架橋剤
    で処理する特許請求の範囲第３２項に記載の方法。
35. （３５）段階ｂ）に先立って、懸濁した細胞を破壊剤で
    処理する特許請求の範囲第３２項に記載の方法。
36. （３６）段階ｃ）の後に、懸濁した細胞を破壊剤で処理
    する特許請求の範囲第３２項に記載の方法。
37. （３７）好適な静水圧が５００〜約１５００気圧である
    特許請求の範囲第３２項に記載の方法。
38. （３８）段階ｅ）に先立って、放出された膜タンパクを
    化学的架橋剤で処理する特許請求の範囲第３２項に記載
    の方法。