JPS63305247A - ワクチン接種の有効性を測定するアツセイ法及びそれに用いるキツト - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （発明の分野） 本発明は、自己免疫疾患に対するワクチン接種の効果全
モニターする方法（アッセイ方法）及び該モニタ一方法
を実施するための手段に関する。

ワクチン接種については多くの文献及び特許に記載され
ておシ、これらの方法に従って実施することができる。

自己免疫疾患に対するワクチン接種は、通常ある特定の
Ｔセル全使用して行なわれている。特に、圧力処理した
Ｔセル、Ｔセルから流出した表面膜、活性化Ｔセルから
得た架倫化表面蛋白、ある特定の架橋剤で処理したＴセ
ル、あるマイト−ジエンで処理したＴセルなど金円いた
ワクチン接種が有効である。ワクチン接種の効果ｔアッ
セイする本発明の方法は、患者のＴセルの１抗イデイオ
タイプ応答あるいは１抗活性化インディケータ−”応答
のいずれかまたはこれらの両者を、スキンテス１するい
はｉｎ　ｖｉｔｒｏアッセイにより測定するものである
。これらについての詳細な説明は以後に記述する。

ワクチン接種の効果を測定することは、ワクチン接種を
繰ジ返す必要があるか否かを知る上でまた有効なワクチ
ン接種に必要な投与ｔｔ知る上でも非常に′Ｍ要である
。

本発明はこのようなアッセイを実施するための簡便な手
段を提供するものである。

（発明の賛旨） 本発明は、自己免疫疾患に対するワクチン接種の効果を
モニターするためのアッセイ法及びワクチン接種の効果
の量的パラメーターを確立するためのアッセイ法に関す
るものである。更に本発明は、このようなアッセイ法を
実施するための手段及びキットに関するものである。

あるタイプの自己免疫疾患患者に対してワクチン接種を
することが可能である。このようなワクチン接種は各種
のＴセルを用いて実施することができる。なかでもとり
わけ、圧力処理したＴセルが使用でれる。マイト−ジエ
ンあるいは特定の抗原とともにインキエベーションして
活性化されたＴセルを使用することもできる。架橋剤で
処理したＴセルを使用することもできる。圧力処理後、
Ｔセルの表面から流出するある一定の表面蛋白を使用す
ることもできる。架橋化細胞膜上使用することもできる
。

本発明者らは、ある特定の化学的理論に拘束されるの’
ｋｔＩｆｌないが、免疫化に使用される活性化Ｔセルは
２つのタイプの部位、即ち（ａｌ抗原レセプタ一部位（
イディオタイプ）　、（１））活性化インディケータ一
部位會有しているとされている。後者の活性化インディ
ケータ一部位は、活性化Ｔセルのみに存在している。

このような細胞をワクチン接種に使用する場合には、ワ
クチン接種の効果はｉｎ　ｖｊｖｏスキンテストあるい
は１ｎｖｊｔｒｏテストのいずれかによってアッセイす
ることができる。このよりなテストは、上記した（ａｌ
または（１））のいずれかあるいはこの両者に応答する
患者のＴセルの成熟化を測定するものである。上記（ａ
）に対する応答音、以後“抗イデイオタイプ応答”と言
い、（ｂ）に対する応答音１抗活性化部位応答”と言う
。

患者は、（ａ）に対する応答あるいは（ｔ）ｌに対する
応答または両者に対する応答を起こすようになる。

これらいずれかの応答あるいは両者をアッセイすること
ができ、得られる結果によってワクチン接種の効果全判
断することができる。

上記したように、活性化Ｔセル、その膜、あるいはその
膜断片のいずれかによってワクチン接種を行なうことが
できる。同様に、ワクチン接種の効果のアッセイも、こ
れらを用いて行なうことができる。

抗イデイオタイプ応答は、ワクチンに用いたＴセルのイ
デイオタイプｔ−有するＴセル膜あるいは膜分画を用い
て測定することができる。

また抗活性化部位応答は、イディオタイプに関係なく患
者からあるいは他から得られた活性化Ｔセル（その膜ま
たは断片）によってアッセイすることができる。本発明
のこれらのアッセイは、それぞれ異なる方法で実施する
ことができる。

Ｔセルを用いたワクチン接種の効果は、Ｔセルワクチン
あるいはＴセルワクチンの抗原レセプターあるいは他の
膜成分に対して特異的なＴセル応答の増大化を測定する
ことによってモニターすることができる。この応答は、
ワクチン接種に用いたＴセルのユニークなイディオタイ
プに対するものであることから抗イデイオタイプと言う
ことができる。一般に、Ｔ及びＢ　ＩＪンパ球のイデイ
オタイｆは、これらリンパ球の抗原レセプターの性質に
基いて測定できると考えられている。

かかる抗イデイオタイ７’Ｔセル応答の検出に加えて更
に、イディオタイプ（抗活性化細胞）に関係のないＴセ
ルの活性化状態に関連したＴセルマーカーに対するＴセ
ルの応答の増大化を検出することによって、ワクチン接
種が成功したかどうか全知ることができる。ワクチン接
種が成功するためには、ワクチン接種に用いるでセル金
、投与する前にその特異的抗原あるいはコンカナバリン
Ａ（Ｃａｎ　Ａ　）もしくはフィトヘマグルチニン（Ｐ
ＨＡ　）１などのＴセルマイトジェンとともに約４８時
間イン中ユベーションする必要があることが明らかにさ
れている〔例えはＹ、　Ｎａｐａｒｓｔｅｋら、　Ｅｕ
ｒ、　Ｊ。

〜 ＩｍｍｕｎｏＬ　１５　、４１８　Ｗ　４２３　（１９
８３）　〕。

Ｔセルは抗原レセプター即ちイディオタイプを持ってい
るにもかかわらず、抗原あるいはマイトジェンで活性化
されていないＴセルの場合にはワクチン接種に使用する
ことができない。これらの事実から、Ｔセルでワクチン
接種することによって生じる自己免疫疾患に対する耐性
を示すシグナルとして、イディオタイプ（Ｔセル抗原レ
セプター）とＴセル活性化によって誘導されるエレメン
トの両者があると結論することができる。活性化インデ
ィケータ−分子は禾だ同定されていないが、活性化Ｔセ
ル膜を単離しこれをグルタルアルデヒド、ホルムアルデ
ヒド、８−メトキシ−ジン２レン、紫外線Ａなどで化学
的架橋化処理をして得られるＴセル膜をワクチンとして
使用できることから、この活性化インディケータ−はＴ
セル膜に固定されていると推定することができる。ＩＬ
−２レセゾター、主要組織適合性コンプレックス（ＭＭ
Ｃ）、ＣＤ−２コンプレツクスなどのいくつかのＴセル
活性化の膜関連マーカーが同定されている。ワクチン接
種に必要な活性化マーカーはこれらのいずれでもよく、
また他の分子でもよい。いずれの場合においても本発Ｂ
Ａは以下の如き発見に基いている。即ち、ワクチン接種
が成功すると２つの独立しｆｃＴセル応答が生じるとい
う発見である。かかる応答の１つが、テスト試薬として
Ｔセルワクチンのイディオタイプ會有する活性化あるい
は非活性化Ｔセルを用いることによって検出できる抗イ
デイオタイグ応答であり、他の１つが、テスト試薬とし
ていずれのイディオタイプであってもよい活性化Ｔセル
を用いることによって検出できる抗活性化Ｔセル応答で
ある。後者の試薬は、１活性化インディケータ−”（マ
ーカー）に対するＴセル応答全検出するものである。こ
れらの活性化分子は比較的低レベルで存在しており、非
活性化Ｔセルによっては発現されないものである。ｊｎ
ｖｉ　ｔｒｏ増殖テストあるいは遅延型過敏症（Ｄ’Ｉ
’Ｈ）スキンテスト全採用することができる。

ｉｎ　ｖｉｖｏスキンテストは、ワクチン接種約７ｆ１
０日後から一定の間隔を置いて実施するのが有利である
。Ｔセルあるいはその膜あるいは適当な型の分子を生理
食塩水に懸濁して１００．０００　ｉｌ　０’　ｃｅｌ
ｌｓ　／　ｔｕの濃度とし、得られる懸濁液０．２　ｊ
ｌｌＡ　’に皮下注射し、２４．ｌ’４８時間後時間比
と赤色化とｔ測定する。赤色化領域が３４５　龍以上の
直径を有する場合にはワクチン接種が有効であったこと
を示している。細胞の膜、あるいは同数の細胞から得た
断片を用いて、同様の方法を実施することもできる。こ
のよりなテストには、ワクチン接稀に用いたタイプの膜
蛋白１０４５００μｙ／叡欠用いることができる。

本発明の他の１つの態様はｉｎ　ｖｉｔｒｏアッセイで
あり、このアッセイ法は、末梢血を採取し、通常の方法
により白血球ケ分離し、分離した白血球？照射したステ
イムレイターセルとともに白血球と該セルとの比が１：
１から１０：１の間になるように５％ヒトＡＢ血清と抗
生物質全台む適当なＲＰＭＩ培地に懸濁せしめてその濃
度を約５００．０００１／　Ｉ　Ｑ７ｃｅｌ’ｌ　／　
ｒｕｂとする工程からなるものである。

Ｔセルワクチンのイデイオタイプｋ有する非活性化ステ
イムレイターセルケ使用することによって、抗活性化セ
ル応答がなくとも、抗イデイオタイプ応答それ自体全測
定することができる。Ｔセルワクチンのイデイオタイ７
”ｋｎするステイムレイターセルが抗原あるいはマイト
ジェンで活性化された場合には、抗イデイオタイプ応答
と抗活性化セル応答の両者が測定される。ステイムレイ
ターセルがＴセルワクチンのイデイオタイ７″′を有し
ておらず、かつ活性化されている場合には抗活性化セル
応答のみが検出される。これらのことが、以後に記述す
る表１に示されている。

ステイムレイターセルは、グルタルアルデヒド。

ホルムアルデヒド、８−メトキシープソラレン。

紫外線Ａなどの化学架橋剤によって固定することができ
る。またこれら細胞の膜断片金用いてもよい。約５−７
日間培養後に調べることができ、通常の方法に従ってト
リチル化チミジンの取り込みを測定する。コントロール
及びバックグランドとして、何も添加していない患者の
非活性化末梢血細胞の培養液を用いる。コントロール細
胞のチミジン取り込みの２倍もしくはそれ以上の取り込
みｒ示す場合には、測定値はポジイティブと判断される
。

本発明においては、このようなアッセイを実施するため
のキットであって、長期間保存するのに適当な形態の有
効成分と希釈手段及び測定結果全評価するための手段か
らなるキットが提供される。

以下に、実験動物を用いて得られた結果を参照して本発
明を説明する。これらの結果は、ヒトの自己免疫疾患の
アッセイにも適用できることを証明するものである。

以下の実施例は本発明を限定するものと解すべきではな
い。

ワクチン接種したラットの抗Ｔセル応答アジュバント関
節炎（ＡＡ）あるいは実験的自己免疫疾患脳を髄炎（Ｅ
ＡＥ　）のラツｌｔ−適当なＴセルでワクチン接種する
と、ワクチンＴセルの抗原レセプターを認識するＴセル
応答（抗イデイオタイ２″Ｔセル免疫）、及びワクチン
Ｔセルの特定のイデイオタイ−ｊ′を有しない活性化Ｔ
セルを認識するＴセル応答（抗活性化インディケーター
免疫）が生じる。

ＥＡＥのラットの後足のフットパットにワクチンとして
Ｚｉａクローンの活性化細胞１０４全用いてワクチン接
種した時のラットの増殖応答が第１図に示されている。

ワクチン接種後のクローンＺ１ａｉるいはクローンＺ　
２　ｂ（ＥＡＲとは関係のないＺ１ａイディオタイプに
ネガティブなコントロールクローン）に対する応答を、
ワクチン接種部位全ドレーンする腰高リンパ節（ＰＬＮ
　）及び頚部リンパ節（ＣＬＮ　：全身性免疫を示す）
で測定した。ワクチン接種後５日目で、Ｚ１ａワクチン
に対する特異的（抗イデイオタイ２′）増殖応答がＰＬ
Ｎにおいて見られた。９日目まで、抗イデイオタイプ応
答は、ＰＬＮ及びＣＬＨの両者で全身性のものであった
。抗イデイオタイプ応答は衰えたが、１７日目でも未だ
ポジイティブであった。

クローンＡ２’ｂ（Ｚｌａイディオタイプに対してネガ
ティブ）に対する一活性化インデイケーター応答に９日
目と１１日目に観察された。これらの応答は、Ｚｌａに
対する抗イデイオタイプ応答よりも低くかったが、コン
トロールである非ワクチン接種うツ）Ｔセルが示すバッ
クグランド応答（０８目）よりも有意に高かった。非活
性化クローンＡ２ｂに対する９日目及び１１日目の応答
は、コントロールと同じであった（記述されていない）
。

しかして、イディオタイプ−ネガティブＡ２１）に対す
る応答にはＡ２ｂが活性化されることが必散であること
が判る。かかる応答を抗活性化Ｔセル応答と定義するこ
とができる。

ＡＡのラツ＋ｔ−低投与蓋のＡ２ｂでワクチン接種した
所、非活性化クローンＡ２ｂに対して特異的抗イデイオ
タイプ応答を示し、非油性化クロ−ンＺｌａに対しては
応答を示さなかった（記述されていない）。従って、抗
イデイオタイプ応答はワクチン接種の特異性に関連して
いると言える。

活性化Ａ２ｍ）クローンでワクチン接種した所、活性化
Ｚｉａに対して抗活性化Ｔセル応答を示した（下記参照
）。

ワクチン接種に対する抗イデイオタイプ応答に関与する
細胞成分を分析するために、ｚｌａでワクチン接種した
ラットのＰＬＮから抗イデイオタイ７″Ｔセルをクロー
ン化し、その特性を調べた。２つのタイプの抗イデイオ
タイプクローン、即ちＣＤ４”８−ヘルパーＴセル及び
ＣＤ４−８＋サプレツサーＴセルが検出された。これら
の細胞のクローンＺ１ａに対する効果ケ調べるために、
抗イデイオタイプクローンを照射し、それらｋＺｌａと
ともに培養した。ヘルパークローンＴＲ１はクローンＺ
ｌａの増殖を促進し、サグレッサークローンＴＲ８は、
その抗原に対するＺｌａの応答音抑制したことが表２に
示されている。ＴＲ１及びＴＥ０１ハ、コントロールク
ローンＡ２ｂ’ｒ促進せず′！た抑制もしなかった。

ルの関与 抗活性化セル応答に関与する成分を分析するために、ラ
ットの後足の７ツトパツトにクローンＡ２ｂｋ”）ｌ＋
７接種し、６日後にｉｎ　ｖｉｔｒｏで膝窩リンパ節細
胞會活性化クローンＤ９で塘殖促進させた。このクロー
ンＤ９は、Ａ２ｂのイディオタイプを有しないＺｉａの
サブクローンである。

Ｚｌａの油性化セルマーカーに対して応答したリンパ球
集団ハ、ＣＤ４＋ヘルパーＴセルマーカー（６５％）と
ＣＤ８＋サプレツサーＴセルマーカー（６５％）と會有
することが示された。従って、抗イデイオタイｆＴセル
と同様に、抗活性化Ｔセル応答にもヘルパーＴセルとサ
プレッサーＴセルの両者が関与していることが判る。

抗イデイオタイプスキンテスト ｉｎ　ｖｊｔｒｏでの抗イデイオタイ７″′Ｔセル増殖
に加えて、ワクチン接種したラットは、Ｔセルを用いた
ワクチン接種に対する抗イデイオタイプスキンテストに
対しても反応を示す。抗ＢＰクローン（Ｚ　１　ａ　）
　１０’でワクチン接種したラットが遅延型過敏症（Ｄ
ＴＨ）テストでＺｌａに対して応答し、コントロール抗
オボアルプミン（ＯＡ）クローンに対して応答しないこ
とが第２図に示されている。

圧力処理したクローンＡ２ｂでワクチン接種したラット
がＤＴＨスキンテストでクローンＡ２ｂに対して応答し
、クローンＺ１ａに対して応答しないことが第６図に示
されている。

しかして、圧力処理したＴセルも抗イディオタイプ応答
ｔ−誘導することが判る。

不十分なワクチン接種後の抗イデイオタイプＤＴＨ 第６表には、十分なワクチン接種のみで抗イデイオタイ
プ応答が誘導さｔＬることか示されている。

γ線照射したクローンＡ２ｂ（有効でないワクチン）あ
るいはグルタルアルデヒドで処理したクローンＡ２ｂ（
有効なワクチン）でラットをワクチン接種した。次いで
、クローンＡ２ｂに対するＤＴＨ反応性をテストした。

グルタルアルデヒドで処理したクローンＡ２ｂでワクチ
ン接種した場合のみ、抗Ａ　２ｂ　ＤＴＨテストに対し
て反応を示した。

γ線照射したＡ２ｋ）ではなくグルタルアルデヒドで処
理したＡ２ｂクローンを用いて、ＡＡに対して有効にワ
クチン接ａｔ’を行なうことができることから、抗イデ
イオタイｆＵＩ’Ｈ応答は有効なワクチン接種に関係し
ていると結論することができる。

強度の応答を誘導するために、グルタルアルデヒドで処
理したコンカナバリンＡ活性化Ａ２ｂセル（Ｌｊｄｅｒ
　Ｏ，ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓ
ｃｊ、。

Ｕ、Ｓ、Ａ、、８４　４５７７Ｉ１４５８０（１９８７
））２Ｘ１０’で毎週６週間Ｌｅｗｉｓラットにワクチ
ン接種した。１週間後、ラットの活性化あるいは非活性
化クローンＡ２ｂ（特異的イディオタイプ）あるいはク
ローンＤ９（Ａ２１）イディオメイ７″ヲ有しないＺｌ
ａのサブクローン）に対するＤＴＨ応答をアッセイした
。

非活性化Ｔセルクローンは特異的抗イデイオタイプ応答
全誘導したことが表４から判る。非活性化Ａ２ｂに対す
る応答は、非活性化Ｄ９に対する応答よ９４倍高かった
。これに対して、両者の活性化クローンは、統ｉｔ学的
には異ならない強い応答を誘導した。しかして、活性化
Ｔセルは一活性化インデイケーター応答全誘導し、他方
、非活性化Ｔセルは抗イデイオタイプ応答を誘導した。

表４に１とめて示した結果から、一活性化インデイケー
ター応答は抗イデイオタイプ応答よりも比較的高がかっ
たことが判る。このことは、ゎＬイディオタイプ応答が
一活性化インデイケーター応答よりも高かいという第１
図及び第２図に示された結果と対照的である。表４の実
験と他の実験との結果の相違は、第１図及び第２図に示
したワクチン接種法は活性化Ｔセル１０４ｆ：１回接種
する方法であり、表４に示した接種法はグルタルアルデ
ヒド処理Ｔセル全多数（２Ｘ１０’個を６回）接種する
方法であるという相違に依るものである。

架橋化Ｔセルを多くの回数投与して強いワクチン接種を
行なうと、一活性化インデイケーター応答がよＶ＝＜現
われる。圧力処理したＡ２ｂ’ｒセルによって抗イデイ
オタイプ応答がより尚く現われることが第６図に示され
ている。

抗イデイオタイプ応答の臨床用途 患者におけるＴセルワクチン接種の効果は、ワクチンに
対する患者の抗イディオタイプＴセル応答あるいは活性
化Ｔセルに対する患者の抗活性化セル応答２テストする
ことによってモニターすることかでさる。

例えば、Ｕ、Ｓ、　Ｐａｔｅｎｔ　４４＋６３４＊５９
０　ｅ欧州特許出ＩｊＩｉ４８７１１３８５６　、　Ｌ
ｊｄｅｒＯ，、Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　ＵＳＡ　、　ｖ
ｏｔ８４　＊　ｐｐ−４５７７ｙ　４５８０　、　Ｊｕ
ｌｙ　１９８７に記載さｎ７（方法に従って調製したワ
クチンを用いて、タイｆ１の糖尿病、リウマチ性関節炎
、多発性硬化症あるいは他の自己免疫疾患に対してワク
チン接種することができる。ワクチン接種１０日後及び
その後一定間隔ごとに末梢血の白血球について、ワクチ
ン接種に用いた患者のセルに対する増殖効果をアッセイ
して抗イディオタイプ応答金満べるか、あるいはワクチ
ンのイディオタイプではない抗宿性化Ｔセルに対する増
殖効果をアッセイして抗活性化セル応答ケ調べることが
できる。あるいはワクチンを用いたスキンテストで調べ
ることもできる。応答の程腿が患者がワクチン接種に対
して反応した程度を示している。弱い応答の場合には、
患者は更にワクチン接種上受ける必要がある。ワクチン
接種後、ワクチンによる法論作用が衰えたがあるいはワ
クチン接種が更に必要であるかどうかを確認するために
、患者についてテストヲ行なう仁とができる。

抗イディオタイプ増殖あるいはＤＴＩ（応答は、Ｔセル
全体、あるいはＣｏｈｓｎ−８ｈ　ｉ　ｎｊ　ｔｚｙ％
許／％許出願／同公報に記載された方法に従って流体静
力学的圧力により調製されｆｃ”！たは他の方法で調製
されたＴセルレセプターを含むＴセルの膜断片を用いて
行なうことができる。膜断片／活性化Ｔセル成分會用い
て抗活性化セル応答をアッセイすることができる。

同様にして、化学的架橋剤で処理したＴセルの膜あるい
はＴセルの断片ｔワクチン接種あるいはアッセイに使用
することかでき、同様の結果が得られる。

以下に、図面に基いて本発明ヶ説明する。第１図は、抗
イデイオタイプ応答及び抗活性化部位Ｔセル応答を示す
ものであり、第２図は、ＥＡＥに対してＴセルでワクチ
ン接種後、抗イデイオタイプスキンテストの反応性の結
果を示すものであり、第３図は、ＡＡに対してＴセルで
ワクチン接種後、抗イデイオタイプスキンテストの反応
性の結果を示すものである。

上記したように、第１図は抗イデイオタイプ応答と抗活
性化Ｔセル応答を示すものである。クローンｚ１ａ１０
４１で後足のフットパラ）ｋ免疫化することによって、
ＥＡＥのＬｅｗｉｓラット？ワクテン接種した。所定の
日数経過後、ドレーンする腰高リンパ節（ＰＬＮ　）と
それから離れた頚部リンパ節（ＣＬＮ　）　ｔ−除去し
、細胞５　Ｘ　１０５についてｊｎｖｉ　ｔｒｏで、照
射したＺｌａクローン（イデイオタイデボゾテイデ）１
０６あるいは活性化されたＡ２ｂクローン（イディオタ
イプネガティブ）１０６に対するＴセル増殖応答音テス
トした。増殖はＤＮＡへのトリチル化チミジンの取り込
みによって測定した。

第２図は、ＥＡＥに対するＴセルワクチン接極後の抗イ
デイオタイプスキンテストの反応性を示している。ＥＡ
ＥのＬｅＷｉｓラット全１抗ＢＰクローンＺ１ａセル１
０４でワクチン接種した。コントロールラットハ、外来
抗原オプアルデミンに対して反応性のＴセル（抗ＯＡ　
）　１０’でワクチン接種した。９日後に、ラットの耳
に、照射した抗ＢＰクローンセルあるいは抗ＯＡクロー
ンセルｔチャレンジし遅延型過敏症についてテストした
。４８時間後に耳の膨らみ全測定した。ボジテイデな耳
の組城学的調食によってＤＴＨ反応が起こったことが証
明された。

第６図は、ＡＡに対するＴセルワクチン接種後の抗イデ
イオタイプスキンテストの反応性を示している。流体静
力学的圧力（１２５０バール。

１５分）で処理したＡ２ｂクローン２Ｘ１０７で免役化
することによって、ＡＡのＬｅｗｉｓラット全ワクチン
接種した。２週間後、ラット會ＭＴでチャレンジしＡＡ
を誘導させた。４週間後、ラットの耳を照射したクロー
ンＡ２ｂあるいはコントロールＺ１ａでチャレンジし、
４８時間後に、膨らみの程度音測定してＤＴＨ反応性を
調べた。

表　　１ Ｙｅｓ　　　　Ｎｏ　　　　抗イデイオタイプＮｏ　　
　　　Ｙｅ　ｓ　　　抗活性化ＹｅＳＹｅｓ　　　抗イ
デイオタイプと抗活性化の両者 Ｎｏ　　　　　Ｎｏ　　　　不ガテイデコントロール（
バックグランド） クローンＴＲ１及びＴＲ８は、Ｚ１ａクローン１０′で
ＥＡＥ　Ｋ対してワクチン接種しｆｃＬｅｗｉｓラット
の腰痛リンパ節から単離した。ＴＲ１はヘルパーＴセル
（Ｗ３／２５”　、０Ｘ８−　）であり、ＴＲ８はサプ
レッサーＴセル（Ｗ３／２５−。

ｏｘＢ”　）であることが判った。そ几ぞれのクローン
ｉｏ’ｉｍ射してその増殖全阻止しく１５００Ｒ）、そ
ＩＬぞれｗ％％異的クロりンＺ　１　ａ　２．５　Ｘ１
０４あるいはコントロールクローンＡ２ｂに、あるいは
これらのクローンとともにそれぞれの抗原、即ちミニリ
ン塩基性タンパク買、　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅ−ｒｊｕｍ
　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｊｓ　（Ｍ　Ｔ　）が−緒に存
在するクローンに加えた。照射（１５００Ｒ）後に、胸
腺に１ｌｔｎ　ｆｆｔ！ｌ　ｋ与えるための抗原（１０
”）ｔ−加えた。

３日後に、　ＤＮＡへのトリチル化チミジンの取り込み
により、ＺｌａあるいはＡ２ｂの増殖応答を測定した。

表　　６ −−―曇−−−−優−−−曇−−−――■−―−−１曇
−−−−峠−――・陽−一一陽響−−１膳伽−Ｉｌ−ｕ
１譬雫１−一響曇譬一−Ｎｏｎｅ　　Ｎｏｎｅ　　　Ｂ
±１ 照射処理　　　Ｎｏｎｅ　　　　　　１０±１グルタル
アルデ　Ｙｅｓ　　　　　　２５±２ヒト処理 ・−−一一―−−―＋−−陽−−−―−−−嘘・−一−
−−曇−−−−―−−―−１譬−曇し−琴−−譬―嗜陽
憎−−曇一譬−−譬−優−−照射（１５００Ｒ）処理し
たあるいはグルタルアルデヒド ーンＡ２ｂ（２Ｘ１　０））　ｆ　Ｌｅｗｉｓラットに
接種した。グルタルアルデヒドで処理したクローンでワ
クチン接種した場合のみＡＡ（対する抵抗性が訪導され
た。２週間後に、照射したＡ２１）セルに対するＤＴＨ
反応反応性ステスト。

表　　４ 非活性化Ｔセルクローンは抗イデイオタする 非活性化斧会蕃　　　　　　　　　　　　　２．５±１
活性化Ａ２ｂ　　　　　　　　　　　　　　　　３３±
６活性化Ｄ９　　　　　　　　　　　　　　　　２７±
７

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗イデイオタイプ応答と抗活性化Ｔセル応答
を示し、第２図は、ＥＡＥに対するＴセルワクチン接種
後の抗イデイオタイプスキンテストの結果全示し、第３
図は、ＡＡに対するＴセルワクチン接種後の抗イデイオ
タイプスキンテストの結果を示す。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）適当に処理したＴセル、その膜あるいはその断片
   からなるワクチンの形態で患者に投与する自己免疫疾患
   に対するワクチン接種の有効性を測定するアツセイ法で
   あって、 ワクチン接種に用いたタイプの物質によってｉｎ　ｖｉ
   ｖｏで患者のスキンテストを実施する；あるいは 患者の末梢血細胞を採取して増殖アツセイを実施して、
   その応答の程度がワクチン接種の有効性を示す、末梢血
   細胞の抗イデイオタイプＴセル応答あるいは末梢血細胞
   の活性化Ｔセルに対する抗活性化インデイケーターセル
   応答のいずれかまたは両者を測定する； ことからなる上記アツセイ法。
2. （２）ワクチン接種に適当なＴセル、その膜、あるいは
   膜の断片によってｉｎ　ｖｉｖｏスキンテストを行なう
   請求項１記載のアツセイ法。
3. （３）約１００，０００〜約１０＾７セル／ｍｌの濃度
   の懸濁液約０．２ｍｌをスキンテストに用いる請求項２
   記載のアツセイ法。
4. （４）抗イデイオタイプ応答を測定するｉｎ　ｖｉｔｒ
   ｏ増殖テストを行なう請求項１記載のアツセイ法。
5. （５）一活性化インデイケーター応答を測定するｉｎ　
   ｖｉｔｒｏ増殖テストを行なう請求項１記載のアツセイ
   法。
6. （６）ワクチン接種前の患者あるいは他から得た活性化
   Ｔセル、Ｔセル膜あるいはＴセル膜断片を用いて末梢血
   細胞のアツセイを行なう請求項４または５記載のアツセ
   イ法。
7. （７）患者以外から得た活性化Ｔセル、Ｔセル膜あるい
   はＴセル膜断片を用いて末梢血細胞のアツセイを行なう
   請求項４または５記載のアツセイ法。
8. （８）以後に記載する事項あるいは実施例と実質的に同
   一の、ワクチン接種に用いた物質に対するｉｎ　ｖｉｖ
   ｏスキンテストあるいはｉｎ　ｖｉｔｒｏ増殖テストに
   よって自己免疫疾患に対するワクチン接種の有効性を測
   定するアツセイ法。
9. （９）長期間保存するのに適当な形態の必要成分からな
   る、請求項１記載のアツセイ法を実施するためのキット
   。
10. （１０）成分が単位投与形態で用意されている請求項９
    記載のキット。