JPS6317181B2 - - Google Patents

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JPS6317181B2
JPS6317181B2 JP55139606A JP13960680A JPS6317181B2 JP S6317181 B2 JPS6317181 B2 JP S6317181B2 JP 55139606 A JP55139606 A JP 55139606A JP 13960680 A JP13960680 A JP 13960680A JP S6317181 B2 JPS6317181 B2 JP S6317181B2
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JP
Japan
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measured
liquid
urea
chamber
bro
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Application number
JP55139606A
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English (en)
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JPS5764160A (en
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Hisayuki Ikeda
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YOKOKAWA DENKI KK
Original Assignee
YOKOKAWA DENKI KK
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Publication date
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/58Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving urea or urease

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  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
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  • Biotechnology (AREA)
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  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、尿素測定装置に関し、更に詳しく
は、血液等に含まれる尿素の濃度を次亜臭素酸イ
オンの濃度変化から間接的に測定する尿素の測定
方法および測定装置に関するものである。
近年、生医学的測定法の発展により体温、胃腸
内の圧力、血圧、呼吸の速度、および生物学的ポ
テンシヤルのような生理学的変数を連続的に遠隔
測定したり、生体内におけるpO2、pCO3、血液
のPHおよび電解質、並びに胃のPHを連続的に測定
したりする測定方法や測定装置が開発されるよう
になつた。
上記生医学的測定法の一つとして、被測定液中
の尿素に尿素分解酵素であるウリアーゼ酵素を作
用させて下式(1)の酵素反応を生じさせ、生成した
NH3をNH3ガス電極若しくはNH4 +カチオン電極
にて検出することにより間接的に被測定液中の尿
素を測定する方法がある。
然しながら、上記尿素測定方法においては、上
記電極からの出力信号とNH3濃度との関係は下
式(2)のようなネルンストの式に従つて指数関数的
関係にあり、比較電極の液間電位差の微少変化が
NH3濃度の測定に際して大きな誤差要因になる
といつた欠点があつた。
E=Eo+2.303RT/F(log[NH3]+log a) ………(2) 〔log[NH3]+log a=log([NH3]xa)=log
[OH-] ∵[OH-]/[NH3]=a E:平衡電極電位、Eo:標準電極電位、R:
ガス定数、T:絶体温度、F:フアラデー定数、
〔NH3〕:NH3濃度、〔OH-〕:OH-濃度、a:定
数〕 本発明は、かかる欠点に鑑みてなされたもので
あり、その目的は、臨床検査時の尿素測定等のよ
うに正常時と異常時における尿素の濃度変化が少
ない場合でも、被測定液中の尿素を正確に測定で
きる尿素の測定方法および測定装置を提供するに
ある。
本発明の特徴は、被測定液中の尿素を測定する
方法および装置において、Br-とPHが8.5付近のPH
緩衝液とを含む電解液に所定の電流を通じて電解
酸化させることによりBrO-を生成させる第1の
手段と、尿素を含む被測定液にウリアーゼ酵素を
作用させ酵素反応によつてNH3を生成させる第
2の手段と、前記被測定液が流れる流通路から前
記NH3を隔膜透過させて前記電解液が流れる流
通路に至らしめ該NH3と前記BrO-とを接触反応
せしめる第3の手段と、前記電解液が流れる流通
路において前記第3の手段を構ずる前後のBrO-
の濃度変化をポーラログラフイツクに検出する第
4の手段と、該第4の手段により検出された
BrO-の濃度変化から所定の演算等により被測定
液中の尿素濃度を算出し且つ表示する手段とを構
じて被測定液中の尿素を測定することにある。
以下、本発明について図を用いて詳細に説明す
る。第1図は、本発明の原理説明図であり、図
中、1は試料採取弁、1aはキヤリア流体流入
口、1bは被測定液流入口、1cは被測定液流出
口、2は尿素の分解酵素であるウリアーゼが固定
化された固定化酵素、3はNaOH等の試薬流入
口、4はフローセル、4a,4bはフローセル内
の第1室および第2室、4cは高分子膜、4d,
4e,4fは夫々参照電極、対極電極、指示極電
極、4g,4iは第1室4aの流入口と流出口、
4h,4jは第2室4bの流入口と流出口、5は
ポテンシオスタツト、6は表示器、7はBrO-
試薬発生装置、8は電解液用容器である。同図に
おいて、被測定液は流入口1bから導入され通常
流出口1cから流出されているが、試料採取弁1
の駆動に伴ない流入口1aから導入されているキ
ヤリア流体によつて被測定液の所定量が固定化酵
素2へ運ばれる。而して、被測定液中の尿素は固
定化酵素2を通過する間にウリアーゼ酵素の作用
によつて下式(3)のような加水分解をうける。
上式(3)の加水分解反応は、PHが6〜9のとき安
定となるが、NH3はPHが8以下になると殆んど
NH4 +イオンとなる。このため、試薬流入口3か
らNaOHが供給され、被測定液をアルカリ性に
してガス状NH3の生成効率を高めている。而し
て、流入口4gから上記第1室4aに達した被測
定液は、その中に含まれているNH3ガスが高分
子膜4cを透過して上記第2室4bに達し、他の
成分やイオンは流出口4iからフローセル4の外
部へ流出される。一方、電解液用容器8から供給
されBr-とPH8.5付近のPH緩衝液とを含む電解液
は、試薬発生装置7において下式(4)のように電解
酸化されてBrO-を発生し、流入口4hからフロ
ーセル4内の第2室4bに達し、その後流出口4
jから流出する。また、第2室4bにおいては、
上記PH緩衝液によつてNH3とBrO-とが反応する
最適のPHであるPH=8.5にされるとともに、高分
子膜4cを透過して第1室4aから到達した
NH3と流入口4hから流入した電解液の中の
BrO-とが下式(5)のように反応してBrO-の濃度を
変化させる。
2Br-−2e→Br2 Br2+2OH→BrO-+Br-+H2O ………(4) 2NH3+3BrO-→3Br-+N2+3H2O ………(5) 而して、ポテンシオスタツト5から定電圧が供
給されている電極4d,4e,4fによりポーラ
ログラフイツクにBrO-濃度が検出され、該BrO-
濃度の変化量から所定の信号処理を経て被測定液
中の尿素濃度が表示器6に表示される。尚、上記
固定化酵素2は上記一実施例に限定されるもので
はなく、酵素を被測定液に供給し被測定液中の尿
素に酵素反応を生ぜしめる構成の範囲内で種々の
変形は可能であり、例えば酵素を担体に固定化し
クロマトグラフ用カラムに充填したもの若しくは
毛管型カラムの管壁に結合したもの、又は酵素を
固定させた酵素固定膜を前記高分子膜と貼合わせ
た構造のものであつてもよい。また、前記流出口
4jからフローセル4の外部へ流出される電解液
を活性炭層等に通し電解液中のBrO-をBr-に還
元したのち電解液用容器8に戻し、Br-とPH緩衝
液を含む電解液を循環使用することも可能であ
る。更に、試料採取弁1も上記一実施例に限定さ
れるものではなく、試料流体を間欠的に所定量採
取できる構成の範囲内で種々の変形は可能であ
り、ロータリバルブやマイクロシリンジで代用さ
せてもよい。
第2図は、本発明に係るフローセルの分解構成
図であり、図中、11はブロツクであつて11
a,11bはフローセル内の第1室の流入口と流
出口、12はガスケツトであつて13は第1室を
形成する空洞部、14はNH3ガスを透過させイ
オンを透過させない高分子膜、15はガスケツト
であつて16は第2室を形成する空洞部、17は
ブロツクであつて17a,17bはフローセル内
の第2室の流入口と流出口、18a,18bは白
金等でなる指示極電極と対極電極、18cは銀一
臭化銀等でなる参照電極である。また、第3図
は、第2図のフローセルを組立てたときの構成斜
視図であり、図中、第2図と同一記号は同一意味
をもたせて使用している。
第2図および第3図において、キヤリア流体に
運ばれながら酵素反応によりNH3を発生した被
測定液は、流入口11aからフローセル内へ導入
されフローセル内の第1室を形成する空洞部13
を通り流出口11bからフローセル外へ流出され
る。この間、空洞部13を流れる被測定液のうち
NH3は高分子膜14を隔膜透過して、フローセ
ル内の第2室を形成する空洞部16へ至る。一
方、試薬発生装置における電解酸化によりBrO-
を発生した電解液は、流入口17aからフローセ
ル内へ導入され、フローセル内の第2室を形成す
る空洞部16を通り流出口17bから流出され
る。而して、上記空洞部16を電解液が流れる間
に前記(5)式のような反応が起るとともに電極18
a,18b,18cによつて電解液中のBrO-
濃度変化がポーラログラフイツクに検出される。
尚、上記電極は指示極電極18a、対極電極1
8b、および参照電極18cからなる三電極構成
をとつているが、本発明はこれに限定されるもの
ではなく指示極電極と対極電極からなる二電極構
成の電極であつてもよい。
第4図は、尿素と共存するNH3を含む被測定
液を測定する場合に用いて好適な本発明の他の実
施例を示す原理説明図であり、図中、9はフロー
セル、9a,9bはフローセル内の第1室および
第2室、9cは高分子膜、9d,9e,9fは
夫々参照電極、対極電極、指示極電極、9g,9
iは第1室9aの流入口と流出口、9h,9jは
第2室9bの流入口と流出口、10はポテンシオ
スタツト、11は演算器、12はNaOH等の試
薬流入口、13a,13bは流路開閉弁である。
尚、第4図において、第1図と同一記号は同一意
味をもたせて使用し、ここでの説明は省略する。
ところで、尿中の尿素を測定する場合等において
は、被測定液中に尿素とNH3が共存することが
多いが、このような被測定液を測定する場合につ
いて、以下第4図を用いて説明する。第4図にお
いて、通常、被測定液は流入口1bから試料採取
弁1内に導入され流出口1cから外部へ流出され
ているが、試料採取弁1の駆動に伴ない被測定液
の所定量が流入口1aから導入されているキヤリ
ア流体に運ばれる。而して、初め、流路開閉弁1
3aが閉で流路開閉弁13bが開のとき、前記キ
ヤリア流体に運ばれた被測定液は流入口9gから
フローセル9内の第1室9aに至る。また、フロ
ーセル9に至る間に、試薬流入口12から
NaOHが供給され、被測定液をアルカリ性にし
てガス状NH3の生成効率を高めている。更に、
第1室9aにおいては、被測定液中のNH3が高
分子膜9cを隔膜透過して第2室9bに至り、他
の成分やイオンは流出口9iからフローセル9の
流出される。次に、流路開閉弁13aが開き流路
開閉弁13bが閉となるとともに試料採取弁1に
よつて再度被測定体が採取されると、前記キヤリ
ア流体に運ばれた被測定液は固定化酵素2を経由
して流入口4gからフローセル4に至る。このと
き、被測定液中の尿素は、固定化酵素2を通過す
る間に被測定液と接触するウリアーゼ酵素によつ
て前記(3)式のような加水分解をうけてNH3を生
成する。また、試薬流入口3からはNaOHが供
給され、被測定液をアルカリ性にしてガス状
NH3の生成効率を高めている。而して、流入口
4gからフローセル4内の第1室4aに達した被
測定液は、その中に含まれているNH3ガスのみ
が高分子膜4cを隔膜透過して第2室4bに至
り、他の成分やイオンは流出口4iからフローセ
ル4の外部へ流出される。一方、電解液用容器8
から供給されBr-とPH緩衝液とを含む電解液は、
試薬発生装置7において前記(4)式のように電解酸
化されてBrO-を発生し、該電解液の一部は流入
口9hからフローセル9内の第2室9bに達し、
その後流出口9jからフローセル9の外部へ流出
し、前記電解液の残りは流入口4hからフローセ
ル4内の第2室4bに達して流出口4jからフロ
ーセル4の外部へ流出する。また、上記第2室4
b,9bにおいては、高分子膜4c,9cを隔膜
透過して第1室4a,9aから到達したNH3
流入口4h,9hから導入された電解液の中の
BrO-とが前記(5)式のように反応してBrO-の濃度
が変化する。而して、ポテンシオスタツト5,1
0から定電圧が供給されている電極4d,4e,
4f並びに電極9d,9c,9fによりポーラロ
グラフイツクにBrO-濃度が検出され、演算器1
1によつて減算等の所定の演算がなされ被測定液
中に共存するNH3に相当する値がとり除かれて
から表示器6で被測定液中の尿素濃度として表示
される。尚、流路開閉弁13a,13bは上記実
施例に限定されるものではなく、2つの流路を交
互に開閉できる構成の範囲内で種々の変形は可能
であり、例えば、ロータリー方式の流路切換バル
ブであつてもよい。
以上、詳しく説明したような本発明の実施例に
よれば、血液や尿等の中に含まれている尿素を、
前記従来例に比して短時間により正確に測定する
ことができるという利点を有している。また、本
発明の他の実施例によれば、尿中の尿素測定等に
見られるように尿素とNH3が共存する場合でも、
尿素とNH3を別々に検出することができるため、
共存するNH3の干渉を受けることなく被測定液
中の尿素を正確に測定できるという利点を有して
いる。
【図面の簡単な説明】
第1図は、本発明の原理説明図、第2図は、フ
ローセルの分解構成図、第3図は、第2図の組立
構成斜視図、第4図は、本発明の他の実施例を示
す原理説明図である。 1…試料採取弁、2…固定化酵素、3,12…
試薬流入口、4,9…フローセル、4a,9a…
第1室、4b,9b…第2室、4c,9c…高分
子膜、4d,4e,4f,9d,9e,9f…電
極、1a,1b,4g,4h,9g,9h…流入
口、1c,4i,4j,9i,9j…流出口、
5,10…ポテンシオスタツト、6…表示器、7
…試薬発生装置、8…電解液用容器、11…演算
器、13a,13b…流路開閉弁。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 Br-とPHが8.5付近のPH緩衝液とを含む電解液
    に一定の電流を通じて電解酸化させることにより
    BrO-を生成させると共に、尿素を含む被測定液
    にウリアーゼ酵素を作用させ酵素反応によつて
    NH3を生成させ、前記被測定液が流れる流通路
    から前記NH3を隔膜透過させて前記電解液が流
    れる流通路に至らしめ該NH3と前記BrO-とを接
    触反応せしめ、前記電解液が流れる流通路におい
    て前記接触反応をおこなわせる前後のBrO-の濃
    度変化をポーラログラフイツクに検出し、該
    BrO-の濃度変化から演算により被測定液中の尿
    素の濃度を算出することを特徴とする尿素の測定
    方法。 2 被測定液を間接的に一定量採取する試料採取
    弁と、被測定液に作用して酵素反応を生じしめる
    ウリアーゼ酵素が固定化された固定化酵素と、該
    固定化酵素を経由した流体にNaOH等の試薬を
    添加する流入口と、Br-とPH緩衝液とを含む電解
    液に一定の電流を通じて電解酸化させることによ
    りBrO-を生成させる試薬発生装置と、前記試料
    採取弁と前記固定化酵素とを経由した後に
    NaOH等の試薬が添加された流体が導入されフ
    ローセル内の−側の流路を構成する第1室と、前
    記試薬発生装置を経由した電解液が導入されフロ
    ーセル内の他側の流路を構成するともに白金等で
    なる電極が装着された第2室と、該第2室と前記
    第1室の共通する壁を構成する共にNH3を透過
    しイオンを透過させない高分子膜と、前記フロー
    セルに電気的に接続され前記電極へ定電圧を供給
    すると共に前記電極で検出された電解電流等の電
    気信号を処理するポテンシオスタツトと、該ポテ
    ンシオスタツトからの信号により被測定液中の尿
    素濃度を表示する表示器とを具備し被測定液中の
    尿素を測定することを特徴とする尿素測定装置。
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