JPS63156724A - 逆転写酵素阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ピロロキノリンキノン（ＰＱＱ）又はその誘
導体を含有する逆転写酵素阻害剤に関するものであり、
これは、特にレトロウィルスに起因する各種疾病の予防
及び／又は治療に有効な薬剤として利用されるものであ
る。

（従来の技術） 二股に遺伝情報は遺伝子ＤＮＡにある。このＤＮＡを鋳
型にしてｍＲＮＡ　（メツセンジャーＲＮＡ）が合成さ
れＲＮＡに写しかえられる。その遺伝情報に従ってタン
パク質が合成され、遺伝情報が発現される。

この説はセントラルドグマと呼ばれ１９５７年クリック
によって提唱された。そして一般にこの逆、すなわちＲ
ＮＡからＤＮＡという方向に遺伝情報が流れるというこ
とはあり得ないと信じられていた。しかしＲＮＡ型腫瘍
ウィルスに於いてＲＮＡを鋳型としてＤＮＡが合成され
、　ＲＮＡからＤＮＡへも遺伝情報が伝達することがチ
ミンにより明らかにされた。この作用には酵素が関与し
この作用を持つ酵素を逆転写酵素と呼んでいる。最近に
なり多くのＲＮＡ型腫瘍ウィルスでこの酵素の存在が次
々と明らかにされ、逆転写酵素を持ったウィルスをレト
ロウィルスと呼ぶようになった。代表的なレトロウィル
スには、マウス白血病ウィルス（ＭＬＶ）、ラウス肉腫
ウィルス（Ｒ３Ｖ）、トリ骨髄芽球症ウィルス（ＡＭＶ
）、馬伝染性貧血症ウィルス（ＥＩＡ）、ウシ白血病ウ
イルス（ＢＬＶ）、豚し１−ロウィルス、サル乳ガンウ
ィルス（ＭＰＭＶ）、ヒト成人Ｔ細胞白血病ウィルス（
ＨＴＬＶ）などがあり、特ニＨＴＬＶ−ＩＩＩは、エイ
ズ（ＡＩＤＳ）　（７）　原因ウィルスとして注目され
ている。

レトロウィルスは、複製されるにはまずそのゲノムのＲ
ＮＡをＤＮＡに逆転写を行うべく、ＲＮＡウィルスのサ
ブ・グループを形成する。いったんこのＤＮＡが形成さ
れると、ウィルスのゲノムは宿主の細胞ゲノムに組み込
まれ、複製の目的のために宿主細胞の転写／翻訳機構を
全面的に利用するようになる。ウィルスのＤＮＡはいっ
たん組み入れられれば宿主のＤＮＡと実質的に識別され
なくなり、この状態でのウィルスは攻撃に対して安定で
あり、ウィルスはこの状態のまま細胞の寿命が続く限り
生存することができる。そしてそのうち新しい感染をひ
き起こす。予防及び新しい感染をひき起こさせないため
には、ウィルスの遺伝情報の伝達に中心的役割をなす逆
転写酵素を長い期間おそらくは生涯にわたり阻害し続け
ることが必要である。

従って阻害剤は毒性上容認される非常に安全なものでな
ければならない。

□現在逆転写酵素阻害剤としてはｔＲＮＡ　（トランス
ファ　−ＲＮＡ）誘導体（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ
　Ｒｅｓ、　２゜２３１５−２３２８１９７５）、リフ
アンピシリン誘導体（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＋　１
６．７８６−７９Ｌ　１９７７）　、　Ｃａｒｂｏｐｏ
１９３４（ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、　５３．１０−１４．
、１９７５）、ＰｙｒａｎＣｏｐｏｌｙｍｅｒ（Ｐｒｏ
ｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ
。

７１、３６７−３７０．１９７４）、Ｐｈｏｓｐｈｏｎ
ｏａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ（Ｆｅｄ。

Ｐｒｏｃ、　３６．２４３０．１９７７）、β−Ｌａｐ
ａｃｈｏｎｅ　（Ｅｕｒ、　Ｊ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　８４．１９７−２０５．１９７８）
などがあげられるが、逆転写酵素に対する特異性が低か
ったり、高濃度でしか有効でないため、ｉｎ　ｖｉｖｏ
に於ける毒性がしばしば指摘されている。（Ｂｉｏｃｈ
ｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ。

Ａｃｔａ、　４７３．１−３８．１９７７、　Ｔｏｐ、
　Ｃｕｒｒ、　Ｃｈｅｗ、　７２゜２ｌ−４９ｙ　１９
７７、　Ｂｉｏｃｈｉｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔ
ａ、　４５”Ｌ２３０−２４７．１９７６） （発明が解決しようとする問題点） 上述のように、現在逆転写酵素阻害剤として知られてい
る物質は毒性が高く、長期間の投与に適さないという問
題点をかかえている。

−３＝ したがって、特にウィルス、なかでもレトロウィルスの
予防、治療を目的として長期間投与することのできる安
全な薬剤は実質上存在しないといっても過言ではなく、
このようなことが特に抗ウィルス剤の実用化を妨げてい
る一因ともなっている。

（問題点を解決するための手段） 本発明は、上記欠点を解決するためになされたものであ
って、特に、長期間投与が可能であり毒性発現がきわめ
て低い物質を開発する必要があり、該目的に適合した物
質を得るには、人工的に合成された物質よりも自然界に
広く存在する天然物をスクリーニングするのが最適であ
るとの観点にたった。そしてその起源を広く自然界に求
め、自然界に広く分布する数多くの物質の中から逆転写
酵素阻害作用を有する物質について、鋭意研究を行った
。その結果、式（１）で示されるピロロキノリンキノン
（ＰＱＱ）及びその誘導体が強力な逆転写酵素阻害作用
を有し、しかも毒性的にも何ら問題がないという新知見
を得、本発明を完成するに至った。

（式中Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３は同一でも異ってもよく、水素
、アルキル基、アルカリ金属又は１／２アルカリ土類金
属を表わす。） 一般にＰＱＱは、従来の酸化−還元の補酵素ＮＡＤ（Ｐ
）やフラビン類とは異なって全く新しいタイプの補酵素
であり、最初Ａｃ１ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ属のグルコー
ス脱水素酵素の補酵素として発見されたものである。

ＰＱＱは、生体内でのアルコール、アルデヒド、グルコ
ースおよびアミン類の酸化反応に関与している。又ある
種の微生物、動物細胞、植物細胞に対する生育促進作用
も報告されている。更にＰＱＱは、　゛哺乳動物の血液
中にも含まれておりビタミン様の生理活性が期待されて
いるが、生体系における役割の詳細はまだ不明である。

しかし、ＰＱＱは生体成分であり安定且つ毒性のない物
質ということができ、それは以下のマウス及びラットに
対する急性毒性試験の結果からも明らかである。

表１ ＰＱＱには、キノン体である酸化型の言ゎゆるＰＱＱと
キノール体である還元型ＰＱＱが存在する。ＰＱＱの還
元型は、更にＰＱＱセミキノン（ＰＱＱＨ”　）、ＰＱ
Ｑキノール（ＰＱＱＨ２’）及びＰＱＱジハイドロキノ
ール（ＰＱＱＨ４）に分けられる。キノン体は酸化剤と
して働いて、自身はキノール体へと還元される。又、キ
ノール体は適当な酸化剤があれば再びキノン体となる。

本発明においては、これらいずれのＰＱＱも自由に使用
でき、すべて有効である。原料としてのＰＱｄは、大腸
菌等の微生物による発酵生産及び有機化学的な合成のい
ずれの方法によっても得られ、且つまた市販もされてい
るので供給の面で問題はない。

ＰＱＱは水に極めて易溶であり、ｐＨ４〜８の間、では
特に保存、安定性にすぐれている。したがって、後述す
るように、固体の形態にもまた液剤の形態にも自由に製
剤することができる。

本発明に係る逆転写酵素阻害剤は、経口及び非経口投与
のいずれの投与形態も可能である。経口投与の場合には
、軟・硬カプセル剤、又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤
、粉剤等として投与することができ、又非経口投与の場
合には、注射剤、点滴剤、座薬、液剤等として投与でき
る。又徐放剤も効果的である。

本発明に係る阻害剤の投与量は、その種類、投与方法、
患者の症状、年令等によって異なるが、約０　、１〜３
００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．２−２００ｍｇ／
ｋｇ１日であり、１日１〜４回、好ましくは１〜２回に
分けて、通常、投与する。

本発明の有効成分を製剤化するには常法に従い、界面活
性剤、賦形剤、滑沢剤、矯味剤、矯臭剤、着色料、着香
料、保存料、懸濁剤、湿潤剤、皮膜形成物質、コーティ
ング助剤、その他佐薬を適宜使用する。また、他の阻害
剤、抗ウィルス剤その他の薬剤との併用も、自由に行う
ことができる。

以下に本発明に係る化合物の逆転写酵素に対する阻害効
果を示した試験例及び実施例を示す。

試験例　ＰＯＱの白血病ブタレトロウィルスの逆転写酵
素阻害作用 白血病ブタレトロウィルスの逆転写酵素を０．２％　Ｎ
Ｐ４０．０．０５Ｍ　Ｔｒｉｓ　ＨＣｌ２（ｐＨ８，０
）　０．１５Ｍ　ＮａＣＱを含む溶液で４℃、１時間処
理することにより可溶化し、酵素源とした。酵素活性は
、ＨＯＦＦＭＡＮら（■ｉｒｏｌｏｇｙ　１４７．３２
６−３３５．１９８５）の方法に従い、ｐＯｌｙ（ｒＡ
）　’　０１１ｇ０（ｄＴ）１ｚ−１１１をテンプレー
トプライマーとして、３１（−ＴＴＰの酸不溶性画分へ
の取り込み量で測定した。種々の濃度の阻害剤を反応溶
液中に添加し、阻害剤無添加時の酵素活性に対する阻害
率を求めた。Ｃ表２） 表２　　ＰＱＱ誘導体の逆転写酵素阻害効果１０−６１
５．６　　　　１０．６　　　　　７．７１０−”　　
　　　２８．０　　　　１３．２　　　　２１．８１０
−’　　　　　４１．６　　　　６３，０　　　　７０
．１１０−３７６．６　　　　９４，５　　　　８６．
１１ｌｌＣ５０（２，２Ｘ１０−’　　　７．３Ｘ１０
−’　　　５．８Ｘ１０−”ＰＱＱ・２に、　ＰＱＱ・
２Ｍｅ−Ｅｔ、　ＰＱＱ・３Ｍｅは、それぞれ、２．２
　Ｘ　１０−４．７．３　Ｘ　１０−’、５．８Ｘ１０
−’　Ｍ／反応液という濃度で逆転写酵素の活性を５０
％阻害し、１０−３Ｍ／反応液に於いてはそれぞれ７６
．６．９４．５．８６．１％という強い阻害効果を示し
、ＰＱＱ及びその誘導体に強力な逆転写酵素阻害作用の
あることが判明した。　この作用はｉｎ　ｖｉｖｏでも
同様に奏されるものである。

実施例１　錠剤 １、　　ＰＱＱ　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　５０ｇ２．乳糖　　　　　　　　　　　　　　　９
０ｇ３、トウモロコシ澱粉　　　　　　　　　　　２９
ｇ４、　ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　１ｇ
１．２および１７ｇのトウモロコシ澱粉を混和し、７ｇ
のトウモロコシ澱粉から作ったペーストとともに顆粒化
する。この顆粒に５ｇのトウモロコシ澱粉と４を加え混
合物を圧縮錠剤機で圧縮して、１錠あたり５０ｍｇの１
を含有する錠剤１　、０００個を製造する。

実施例２　注射剤 １、　ＰＱＱ・２Ｋ　　　・　　　　　　　　　　５ｇ
２、塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　　９ｇ３、
クロロブタノール　　　　　　　　　　５ｇ４、炭酸水
素ナトリウム　　　　　　　　　１ｇ全成分を蒸留水１
．ＯＯＯｍＱに溶解し、アンプルに１ｍＱずつ分注し注
射剤１　、０００本を製造する。

実施例３　カプセル剤 １、ＰＱＱ・２Ｍｅ−Ｅｔ２００ｇ ２、乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　１５０ｇ３
、トウモロコシ澱粉　　　　　　　　　　１００ｇ４、
結晶セルロース　　　　　　　　　　　　４０ｇ５、軽
質無水ケイ酸　　　　　　　　　　　　５ｇ６、ステア
リン酸マグネシウム　　　　　　　５ｇ常法に従って上
記各成分を混和し、顆粒状としたものをカプセル１ｏｏ
ｏ個に充てんし、１個あたり２００ｍｇの１を含有する
カプセル剤１　、０００個を調製する。

実施例４　錠剤 １、　ＰＱＱ・３Ｍｅ　　　　　　　　　　　　２００
ｇ２、乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　１００ｇ
３、トウモロコシ澱粉　　　　　　　　　　　８０ｇ４
、結晶セルロース　　　　　　　　　　　１００ｇ５、
ポリビニルピロリドン　　　　　　　　　］、５５ｇ６
ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　５ｇ常法に従
って上記各成分を混和し、顆粒状とし圧縮成形して、１
錠あたり２００ｍｇの１を含有する錠剤１　、０００錠
を調製する。

（発明の効果） 本発明に係るＰＱＱは、前記したようにきわめてすぐれ
た逆転写酵素阻害作用を示すのみでなく、天然に存在す
るものでありしかもきわめて安全性が高いために、長期
間に亘ってしかも大量に投与することができ、逆転写酵
素が関与する各種の疾病の予防及び／又は治療１こ有効
に且つ広範に使用することができる。

このように、本発明に係る薬剤は、特にウィルス、なか
でもレトロウィルスに起因する各種疾病の予防及び／又
は治療に特に有効である。したがって本発明に係る薬剤
は、ヒトのみでなくその他の動物、鳥類に対しても広く
適用することができる。

そのうえ、エイズ（ＡＩＤＳ）の原因ウィルス及びヒト
成人Ｔ細胞白血病ウィルスもレトロウィルスに属するも
のであるから、本発明は、現在その治療はおろか予防法
すら確立していないエイズ及び成人工細胞白血病の予防
、治療薬としても大いに期待できるものである。

また本発明に係る薬剤は、卓越した逆転写酵素阻害作用
を有するものであるから、組換えＤＮＡ技術におけるｍ
ＲＮＡを鋳型としてそれに相補的な一本鎖ＤＮＡ　（ｃ
ＤＮＡ）をつくる工程をコントロールするのに使用する
こともでき、したがって本発明は、バイオテクノロジー
の技術分野においても著効を奏するものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 式〔１〕で示されるピロロキノリンキノン（ＰＱＱ）又
   はその誘導体を有効成分とする逆転写酵素阻害剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 （式中Ｒ＿１、Ｒ＿２、Ｒ＿３は同一でも異ってもよく
   、水素、アルキル基、アルカリ金属又は１／２アルカリ
   土類金属を表わす。）