JPS6315148A - ゲル中の微量成分の回収法 - Google Patents
ゲル中の微量成分の回収法Info
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- JPS6315148A JPS6315148A JP61157817A JP15781786A JPS6315148A JP S6315148 A JPS6315148 A JP S6315148A JP 61157817 A JP61157817 A JP 61157817A JP 15781786 A JP15781786 A JP 15781786A JP S6315148 A JPS6315148 A JP S6315148A
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Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は二次元電気泳動法などゲルを用いる電気泳動法
−によりゲル中に分離された蛋白、核酸などの微量成分
の高純度、高効率な回収法に係る。
−によりゲル中に分離された蛋白、核酸などの微量成分
の高純度、高効率な回収法に係る。
これにより、分離された微量成分の構造決定などが容易
になる。
になる。
従来、二次元電気泳動法に工夛分離された成分を回収す
る手段としては分離スポットを含むゲル部分を手動作で
切り取り、ゲル片をガラス容器に入れ適当な溶媒で分離
成分を抽出する方法が用いられていた。本従来法の詳細
はジャーナル オブクＯｆｆトゲラフイー（Ｊ、 Ｃｈ
ｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ） 。
る手段としては分離スポットを含むゲル部分を手動作で
切り取り、ゲル片をガラス容器に入れ適当な溶媒で分離
成分を抽出する方法が用いられていた。本従来法の詳細
はジャーナル オブクＯｆｆトゲラフイー（Ｊ、 Ｃｈ
ｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ） 。
２４１巻（１９８２年）４３６１頁から３７０頁に記述
されている。この従来法は分離スポットに含まれる成分
量が比較的大きく、抽出の効率がかならずしも高くなく
ても良い場合には、その簡便さの故に有効である。
されている。この従来法は分離スポットに含まれる成分
量が比較的大きく、抽出の効率がかならずしも高くなく
ても良い場合には、その簡便さの故に有効である。
上記従来技術においては、＠量の分離成分を高純度、高
効率で回収することは困難と思われる。
効率で回収することは困難と思われる。
本発明の目的は電気泳動法、特に二次元電気泳動法によ
りゲル状支持体中に高純度に分離された微量成分を高効
率でかつ高純度に回収する方法を提供することにある。
りゲル状支持体中に高純度に分離された微量成分を高効
率でかつ高純度に回収する方法を提供することにある。
ｋ′−
上記目的は、微量成分を含む微小ゲルを真空力を用いて
ゲル本体（泳動パターン）から小室内に吸い取り、小室
内に設けられた通気性の隔壁に保持し、ゲル中に含まれ
る微量成分を戒気泳動力を用いてゲルより溶出させ、隔
壁を隔てた別の小室に回収することにより達成される。
ゲル本体（泳動パターン）から小室内に吸い取り、小室
内に設けられた通気性の隔壁に保持し、ゲル中に含まれ
る微量成分を戒気泳動力を用いてゲルより溶出させ、隔
壁を隔てた別の小室に回収することにより達成される。
本発明における微量成分回収ｉｔの機能及び作用を第２
図にもとづいて説明する。回収したい成分を含むゲル（
電気泳動パターン）の特定部位に回収装置の吸入口１４
を押し当て、通気性フィルタ２（隔壁）及び開口１０を
介して空気ポンプにより前室５を電圧にし、ゲル片１を
フィルター２上に吸着する。開口１１はゲル片の吸入操
作中は勿論閉じておく。このようにして回収装置内に吸
入したゲル片１に含まれる成分は電気泳動法によりゲル
から取り出され回収される。電気泳動的回収装置の作用
を第１図にもとづいて説明する。すなわち、ゲル片１を
吸入した後開口部１４を限外膜１３で覆い、開口１１，
１０，１２．１５よう電解質水溶液（水素イオン濃度は
回収したい成分の等電点よシ低く設定する）を入ｎ、電
気泳動用電圧を設定するための負極８及び正極９間を電
解質水浴液で満たす。両極間に電流を流せば成分は回収
室３に泳動分離されるので開口１０を経由して別の容器
に回収できる。限外膜１３及び４は成分が対流などによ
り回収不能な場所へ拡散したり。
図にもとづいて説明する。回収したい成分を含むゲル（
電気泳動パターン）の特定部位に回収装置の吸入口１４
を押し当て、通気性フィルタ２（隔壁）及び開口１０を
介して空気ポンプにより前室５を電圧にし、ゲル片１を
フィルター２上に吸着する。開口１１はゲル片の吸入操
作中は勿論閉じておく。このようにして回収装置内に吸
入したゲル片１に含まれる成分は電気泳動法によりゲル
から取り出され回収される。電気泳動的回収装置の作用
を第１図にもとづいて説明する。すなわち、ゲル片１を
吸入した後開口部１４を限外膜１３で覆い、開口１１，
１０，１２．１５よう電解質水溶液（水素イオン濃度は
回収したい成分の等電点よシ低く設定する）を入ｎ、電
気泳動用電圧を設定するための負極８及び正極９間を電
解質水浴液で満たす。両極間に電流を流せば成分は回収
室３に泳動分離されるので開口１０を経由して別の容器
に回収できる。限外膜１３及び４は成分が対流などによ
り回収不能な場所へ拡散したり。
成極の近傍へ拡散して電極反応にニジ損傷を受けるのを
防ぐ効果がある。勿論、この摸は回収する成分は通過し
ないが、電解質水溶液に含まれる低分子量のイオンは通
過させる性質を持つものである。この限外膜は、又、成
分が存在する空間が不必要に拡大し、成分が回収装置の
器壁などて吸着して消滅してしまうのを防ぐ効果もある
。
防ぐ効果がある。勿論、この摸は回収する成分は通過し
ないが、電解質水溶液に含まれる低分子量のイオンは通
過させる性質を持つものである。この限外膜は、又、成
分が存在する空間が不必要に拡大し、成分が回収装置の
器壁などて吸着して消滅してしまうのを防ぐ効果もある
。
以下１本発明の一実施例を第１図、第２図により説明す
る。ガラス基板をメタクリルオキシプロピルトリメトキ
シシランで処理した後、ポリアクリルアミドポリマーゲ
ル（サイズ４ Ｘ ８０ Ｘ ０．５麿、組成アクリル
アミドモノマ３．８％、Ｎ、Ｎ’−メチレンビスアクリ
ルアミド０．２％、Ｌｆ（Ｂ社製アンフオライン ｐＨ
３，５〜９．５．２Ｌ）の薄層を結合させる。このゲル
に血清３μｔｆ乗せ水平型電気泳動法により３００ｖの
電圧をゲルの両端にかけ４時間電気泳動して等電点差に
よる蛋白質の分離を行なった。
る。ガラス基板をメタクリルオキシプロピルトリメトキ
シシランで処理した後、ポリアクリルアミドポリマーゲ
ル（サイズ４ Ｘ ８０ Ｘ ０．５麿、組成アクリル
アミドモノマ３．８％、Ｎ、Ｎ’−メチレンビスアクリ
ルアミド０．２％、Ｌｆ（Ｂ社製アンフオライン ｐＨ
３，５〜９．５．２Ｌ）の薄層を結合させる。このゲル
に血清３μｔｆ乗せ水平型電気泳動法により３００ｖの
電圧をゲルの両端にかけ４時間電気泳動して等電点差に
よる蛋白質の分離を行なった。
他方、二次元口の分離に用いるａ度勾配ゲル（４〜１７
％のアクリルアミドの濃度勾配）も同僚にシランカップ
リング処理をしたガラス基板（１１０Ｘ１１０ＸＩＨ）
に結合させる。このゲル上には濃度勾配の低濃度端に溝
（５Ｘ８５ＸＩＢ）をあらかじめ設けておき、一次元目
の泳動分を終了したゲルをこの溝にはめ込み、すき間に
はアガロースの１％水溶液を注入し二つのゲルを一体化
させた後、２００ｖで３時間泳動を行ない分子量分離に
行なった。二次元電気泳動分離を終了したゲル上の血１
ｆｆｌ白トランスフェリンの分離位置（分子量９万１等
電点５．７）に第２図の吸入装置の吸入口１４を押し当
て真空ポンプにより開ロ１０全通してトランスフェリン
を陰ひゲル片）をフィルター２上に吸着せしめる。次に
、真空ポンプを作動させつつ開口１１（今迄は閉状態）
を開は第１図の如く限外膜１３（スペクトラボア５゜ス
ペクトラム社製→を吸入口１４に張シ、トリスーグリシ
ンパ’／７７ （２０ｍＭ、 ｐＨ８，４）を前室５
１回収室３１正を極室６に入れる。次に、この回収装置
を負極室７に結合し、負極室７に前記トリス−グリシン
バッファを入れ、正極９及び負極８間に１ｓＶ／ｃｍの
電圧勾配を掛け１時間電気泳動し、トランスフェリンを
回収室３に取り出すことができた。電気泳動後のゲル片
１をクーマツシープルー几−２５０で常法により蛋白染
色した所ゲル片は染色されず、ゲル片に含まれるトラン
スフェリンはは’、’１００％の効率で回収されている
ことが判明した。ゲル片１から蛋白を取り出すだめの電
気泳動が終了した後、′！！極電位を反転し、電極８を
正極とし、同じ電圧勾配で１５秒程度通電すると限外膜
４に吸着していた蛋白を回収室３中に遊離せしめること
が出来、蛋白の回収効率を上昇させることができる。
％のアクリルアミドの濃度勾配）も同僚にシランカップ
リング処理をしたガラス基板（１１０Ｘ１１０ＸＩＨ）
に結合させる。このゲル上には濃度勾配の低濃度端に溝
（５Ｘ８５ＸＩＢ）をあらかじめ設けておき、一次元目
の泳動分を終了したゲルをこの溝にはめ込み、すき間に
はアガロースの１％水溶液を注入し二つのゲルを一体化
させた後、２００ｖで３時間泳動を行ない分子量分離に
行なった。二次元電気泳動分離を終了したゲル上の血１
ｆｆｌ白トランスフェリンの分離位置（分子量９万１等
電点５．７）に第２図の吸入装置の吸入口１４を押し当
て真空ポンプにより開ロ１０全通してトランスフェリン
を陰ひゲル片）をフィルター２上に吸着せしめる。次に
、真空ポンプを作動させつつ開口１１（今迄は閉状態）
を開は第１図の如く限外膜１３（スペクトラボア５゜ス
ペクトラム社製→を吸入口１４に張シ、トリスーグリシ
ンパ’／７７ （２０ｍＭ、 ｐＨ８，４）を前室５
１回収室３１正を極室６に入れる。次に、この回収装置
を負極室７に結合し、負極室７に前記トリス−グリシン
バッファを入れ、正極９及び負極８間に１ｓＶ／ｃｍの
電圧勾配を掛け１時間電気泳動し、トランスフェリンを
回収室３に取り出すことができた。電気泳動後のゲル片
１をクーマツシープルー几−２５０で常法により蛋白染
色した所ゲル片は染色されず、ゲル片に含まれるトラン
スフェリンはは’、’１００％の効率で回収されている
ことが判明した。ゲル片１から蛋白を取り出すだめの電
気泳動が終了した後、′！！極電位を反転し、電極８を
正極とし、同じ電圧勾配で１５秒程度通電すると限外膜
４に吸着していた蛋白を回収室３中に遊離せしめること
が出来、蛋白の回収効率を上昇させることができる。
尚、開口１２及び１５は、それぞれ、醒極室６及び７に
成極液を入れるためのものである。吸入口１４の直径は
回収すべき成分が存在するゲル上のスポットの直径に合
致させておけば微量成分が周囲の成分と混合することな
く純砕に回収できる。
成極液を入れるためのものである。吸入口１４の直径は
回収すべき成分が存在するゲル上のスポットの直径に合
致させておけば微量成分が周囲の成分と混合することな
く純砕に回収できる。
スポットのサイズは成分毎に一般には異なるので、目的
に合せた吸入口１４を有する前室５と共通の回収室３と
を切シ放せる構造にしておけば、各種成分の回収に当っ
て装置全体を交換する必要がなくなり好都合である。こ
のよう々装置を用いた場合、回収された成分を再度二次
元電気泳動法で分析してもスポットは単一であり高純度
の回収が行なえることが確認できた。父、本実施例にお
いては基板に固だしたゲル中に電気泳ｉｔｈ分離された
成分の回収法を詳細に示したが、本発明の回収法は非固
定のゲルに含まれる成分に対してさらに有効であること
は言うまでもない。
に合せた吸入口１４を有する前室５と共通の回収室３と
を切シ放せる構造にしておけば、各種成分の回収に当っ
て装置全体を交換する必要がなくなり好都合である。こ
のよう々装置を用いた場合、回収された成分を再度二次
元電気泳動法で分析してもスポットは単一であり高純度
の回収が行なえることが確認できた。父、本実施例にお
いては基板に固だしたゲル中に電気泳ｉｔｈ分離された
成分の回収法を詳細に示したが、本発明の回収法は非固
定のゲルに含まれる成分に対してさらに有効であること
は言うまでもない。
本発明によれば、従来手動作により切シ出されていたゲ
ル片を真空力を用いて機械により取扱うことができるた
め、より小さなゲル片を容易に取扱う事が可能となった
。このため、二次元電気泳動パターン上のより微量の分
離成分を高純度かつ高効率に回収出来るようになった。
ル片を真空力を用いて機械により取扱うことができるた
め、より小さなゲル片を容易に取扱う事が可能となった
。このため、二次元電気泳動パターン上のより微量の分
離成分を高純度かつ高効率に回収出来るようになった。
また、本発明による回収装置を利用すれば、二次元電気
泳動パターンからの微凌分離成分の回収の全プロセスの
自動化、すなわち、回収したい成分を含む支持体ゲル上
の特定位置への回収装置の移動、ゲルへの回収装置の押
し付け、ゲル片の回収装置内への吸入、ゲル片の電気泳
動による成分の回収などの諸プロセスの自動化が可能に
なることは明らかである。
泳動パターンからの微凌分離成分の回収の全プロセスの
自動化、すなわち、回収したい成分を含む支持体ゲル上
の特定位置への回収装置の移動、ゲルへの回収装置の押
し付け、ゲル片の回収装置内への吸入、ゲル片の電気泳
動による成分の回収などの諸プロセスの自動化が可能に
なることは明らかである。
第１図は本発明の一実兎例のゲル状支持体中に電気泳動
分離された成分の回収−Ｊｆｃｎの断面図である。第２
図は第１図の部分図であり、本発明の回収装置の内、ゲ
ル片の吸入過程の理解を助けるための図である。
分離された成分の回収−Ｊｆｃｎの断面図である。第２
図は第１図の部分図であり、本発明の回収装置の内、ゲ
ル片の吸入過程の理解を助けるための図である。
Claims (1)
- １、電気泳動法によりゲル状支持体中に分離された成分
を回収する方法において、回収したい成分が含まれてい
るゲル部分を真空力により支持体ゲルから吸い取り、こ
のゲル片に電場を掛け、含まれる成分を電気泳動法によ
り回収することを特徴とするゲル中の微量成分の回収法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61157817A JPS6315148A (ja) | 1986-07-07 | 1986-07-07 | ゲル中の微量成分の回収法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61157817A JPS6315148A (ja) | 1986-07-07 | 1986-07-07 | ゲル中の微量成分の回収法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6315148A true JPS6315148A (ja) | 1988-01-22 |
Family
ID=15657948
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61157817A Pending JPS6315148A (ja) | 1986-07-07 | 1986-07-07 | ゲル中の微量成分の回収法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6315148A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0588296U (ja) * | 1992-04-28 | 1993-12-03 | 明治乳業株式会社 | 電気泳動ゲルからの核酸若しくは蛋白質の回収装置 |
| JP2003534547A (ja) * | 2000-05-25 | 2003-11-18 | ジーン、バイオ‐アプリケーション、リミテッド | ピペットアクセスのための開口を有する処理チャンバ |
| JP2007003359A (ja) * | 2005-06-24 | 2007-01-11 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 電気泳動装置 |
| US7964074B1 (en) * | 2008-02-25 | 2011-06-21 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Electroelution of oligonucleotides from gel matrices |
-
1986
- 1986-07-07 JP JP61157817A patent/JPS6315148A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0588296U (ja) * | 1992-04-28 | 1993-12-03 | 明治乳業株式会社 | 電気泳動ゲルからの核酸若しくは蛋白質の回収装置 |
| JP2003534547A (ja) * | 2000-05-25 | 2003-11-18 | ジーン、バイオ‐アプリケーション、リミテッド | ピペットアクセスのための開口を有する処理チャンバ |
| JP2007003359A (ja) * | 2005-06-24 | 2007-01-11 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 電気泳動装置 |
| JP4632876B2 (ja) * | 2005-06-24 | 2011-02-16 | パナソニック株式会社 | 電気泳動装置 |
| US7964074B1 (en) * | 2008-02-25 | 2011-06-21 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Electroelution of oligonucleotides from gel matrices |
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