RU2616906C1 - Способ электрофоретического разделения белков сыворотки крови и молока в полиакриламидном геле - Google Patents
Способ электрофоретического разделения белков сыворотки крови и молока в полиакриламидном геле Download PDFInfo
- Publication number
- RU2616906C1 RU2616906C1 RU2016113451A RU2016113451A RU2616906C1 RU 2616906 C1 RU2616906 C1 RU 2616906C1 RU 2016113451 A RU2016113451 A RU 2016113451A RU 2016113451 A RU2016113451 A RU 2016113451A RU 2616906 C1 RU2616906 C1 RU 2616906C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gel
- blood
- electrophoresis
- milk
- polyacrylamide gel
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/02—Food
- G01N33/04—Dairy products
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биологии, в частности к биохимии и молекулярной биологии, и может найти применение при разделении белков сыворотки крови и молока на фракции в полиакриламидном геле. Задача изобретения - повысить точность проведения электрофореза и сократить время проведения анализа. Для достижения поставленной задачи в способе электрофоретического разделения белков сыворотки крови и молока в полиакриламидном геле, заключающемся в проведении электрофореза в полиакриламидном геле с использованием концентрирующего геля с рН=6,7 и разделяющего геля с рН=8,9 при силе тока 25 мА, с предварительным разведением сыворотки крови и молока, согласно изобретению в качестве концентрирующего геля используют мелкопористый гель, при этом сыворотку крови и молока разводят в физиологическом растворе 1:2. 2 ил.
Description
Изобретение относится к биологии, в частности к биохимии и молекулярной биологии, и может найти применение при разделении белков сыворотки крови и молока на фракции в полиакриламидном геле.
Электрофорез широко применяют в исследовательской и клинико-лабораторной практике. Посредством его выявляют и выделяют белки, липопротеиды, гликопротеиды, нуклеиновые кислоты. Подавляющее большинство исследований с помощью электрофореза позволяет диагностировать состояние белкового обмена биологического организма.
В медико-биологических исследованиях применяют множество вариантов двух главных модификаций электрофореза в свободной жидкости (свободно-проточный электрофорез) и зонального электрофореза (зонный электрофорез, или электрофорез на инертных носителях).
Для разделения белков плазмы крови широкое распространение получил зонный электрофорез на поддерживающих средах-носителях. Зонный электрофорез можно осуществлять с использованием смоченных буферным раствором (рН-8,6) полосок хроматографической бумаги, ацетататцеллюлозной пленки, агарового геля и других носителей.
Известен способ разделения белков на фракции, используя электрофорез в полиакриламидном геле. Этот метод нашел самое широкое применение в биохимических и научных исследованиях. Он используется для изучения белков, липо- и гликопротеинов, пептидов, гормонов, ферментов и нуклеиновых кислот.
Разрешающая способность электрофореза в полиакриламидном геле значительно повышается при использовании в качестве носителя системы гелей (обычно двух - «рабочего», мелкопористого и непосредственно над ним «формирующего», крупнопористого). Кроме степени пористости эти гели резко различаются по величине рН и молярности буферных растворов, в которых они полимеризуются. Такой электрофорез называют ступенчатым или дискэлектрофорезом.
Известна методика проведения электрофореза в полиакриламидном геле с использованием крупнопористого концентрирующего геля (рН=6,7) и мелкопористого разделяющего геля (рН=8,9). Разведение сыворотки крови и молока проводят с использованием раствора сахарозы. Проводят электрофоретическое концентрирование белков сыворотки крови в крупнопористом концентрирующем геле в течение 30 мин при силе тока 25 мА. При использовании этого геля в качестве концентрирующего происходит диффузия белков сыворотки крови и молока, что приводит к частичной потере белков и, следовательно, снижению точности электрофоретического разделения (Малахова А.Г., Кармолиев Р.Х. Применение современных биохимических методов исследования в ветеринарии. М., 1986) [1].
Недостатками данной методики электрофореза являются недостаточно высокая точность проведения электрофореза за счет наличия процесса диффузии в крупнопористом концентрирующем геле и длительность осуществления методики.
Задачей изобретения является повышение точности проведения электрофореза и сокращение времени проведения анализа.
Для достижения поставленной задачи в способе электрофоретического разделения белков сыворотки крови и молока в полиакриламидном геле, заключающемся в проведении электрофореза в полиакриламидном геле с использованием концентрирующего геля с рН=6,7 и разделяющего геля с рН=8,9 при силе тока 25 мА, с предварительным разведением сыворотки крови и молока, согласно изобретению в качестве концентрирующего геля используют мелкопористый гель, при этом сыворотку крови и молока разводят в физиологическом растворе 1:2.
Мелкопористый гель выполняет также функции концентрирующего благодаря тому, что в предлагаемой методике сохраняется прерывистость системы буферов, что обеспечивает концентрирование белков пробы и образование тонкой стартовой зоны на границе концентрирующего и разделяющего гелей из-за возникающего электрохимического эффекта.
Использование в качестве концентрирующего геля мелкопористого (7,5%-ного) геля с рН=6,7 приводит к снижению процесса диффузии разделяемых белков, что позволяет избежать потери белков и повысить точность анализа. Кроме того, полимеризация в мелкопористом геле проходит быстрее. Электрофоретическое концентрирование белков сыворотки крови в мелкопористом концентрирующем геле осуществляется в течение 10 мин при силе тока 25 мА. Это позволяет сократить время проведения анализа.
Использование физиологического раствора для разведения проб сыворотки крови и молока является наиболее физиологичным для этих биологических жидкостей. Кроме того, хлорид-ионы из физиологического раствора, дополнительно введенные к хлорид-ионам концентрирующего буфера, устремляющиеся под действием электрического поля в сторону анода и оставляющие за собой бедное ионами пространство, приводят к резкому падению напряжения. Это вызывает ускорение медленных ионов глицината и следующих за ними белковых молекул.
Пример выполнения.
1. В блок для полиакриламидных гелей заливают разделяющий (7,5%-ный) мелкопористый гель с рН=8,9. Осторожно наслаивают на поверхность гелевого раствора дистиллированную воду или раствор триса. Через 30-60 минут полимеризация заканчивается, что отмечается появлением границы раздела между поверхностью геля и водой.
2. Сливают воду, поверхность разделяющего геля 2-3 раза промывают раствором акриламида, не содержащим рибофлавин, и заливают затем в кассету 7,5%-ный раствор акриламида с рH=6,7 почти до верхнего края, вставляют сверху гребенку из оргстекла для формирования лунок. Полимеризация длится 15 минут. Затем вынимают гребенку и вносят в лунки по 0,01 мл проб сыворотки крови (молока), разведенной физраствором в соотношении 1:2. В крайние лунки вносят по одной капле раствора 12 (бромфенолового синего), который является индикатором передвижения белка в геле.
3. Помещают кассету в нижний электродный сосуд с платиновым электродом и сверху, по месту щели, прижимают верхним электродным сосудом с платиновым электродом. В нижний электродный сосуд заливают 1000 мл буферного раствора 10, с рН 8,3, в верхний электродный сосуд осторожно, чтобы не вымыть пробы из лунок, заливают 500 мл того же буферного раствора. Камеру деления подключают к источнику питания.
4. Проводят электрофоретическое концентрирование белков сыворотки крови (молока) в течение 10 мин при силе тока 25 мА. После прохождения фронта индикатора границы раздела двух гелей силу тока увеличивают до 50 мА. Электрофорез заканчивается по достижении первой зоны красителя нижнего края кассеты. По окончании электрофореза отсасывают буферный раствор из верхнего электродного сосуда и отделяют его от кассеты. Осторожно отслаивают пластину геля от стенок кассеты и гель отмывают в 7%-ном растворе уксусной кислоты.
5. Отмытый гель фотографируют. На фиг. 1 представлена электрофореграмма белков сыворотки крови. На фиг. 2 представлена электрофореграмма белков молока. Полученные электрофореграммы свидетельствуют о высокой разделяющей способности заявляемого способа.
Таким образом, заявляемый способ позволят повысить точность проведения электрофореза, сократить длительность процесса проведения анализа.
Claims (1)
- Способ электрофоретического разделения белков сыворотки крови и молока в полиакриламидном геле, заключающийся в проведении электрофореза в полиакриламидном геле с использованием концентрирующего геля с рН=6,7 и разделяющего геля с рН=8,9 при силе тока 25 мА, с предварительным разведением сыворотки крови и молока, отличающийся тем, что в качестве концентрирующего геля используют мелкопористый гель, при этом сыворотку крови и молока разводят в физиологическом растворе 1:2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016113451A RU2616906C1 (ru) | 2016-04-07 | 2016-04-07 | Способ электрофоретического разделения белков сыворотки крови и молока в полиакриламидном геле |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016113451A RU2616906C1 (ru) | 2016-04-07 | 2016-04-07 | Способ электрофоретического разделения белков сыворотки крови и молока в полиакриламидном геле |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2616906C1 true RU2616906C1 (ru) | 2017-04-18 |
Family
ID=58642776
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016113451A RU2616906C1 (ru) | 2016-04-07 | 2016-04-07 | Способ электрофоретического разделения белков сыворотки крови и молока в полиакриламидном геле |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2616906C1 (ru) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040121488A1 (en) * | 2002-09-11 | 2004-06-24 | Chang Frank N. | System and methods for electrophoretic separation of proteins on protein binding membranes |
-
2016
- 2016-04-07 RU RU2016113451A patent/RU2616906C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040121488A1 (en) * | 2002-09-11 | 2004-06-24 | Chang Frank N. | System and methods for electrophoretic separation of proteins on protein binding membranes |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| А.Г.Малахова. Применение современных биохимических методов исследования в ветеринарии / Москва, 1986, стр. 23-27. И.В.Стручкова и др. Теоретические и практические основы проведения электрофореза белков в полиакриламидном геле. Электронное учебно-методическое пособие / Нижний Новгород, 2012. А.Ю.Просеков и др. Использование денатурирующего электрофореза для определения качества питьевого молока / Достижения науки и техники АПК,N02, 2010, стр. 70-72. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Johansson | Agarose gel electrophoresis | |
| JP4754759B2 (ja) | 化合物の電気泳動分離 | |
| US4971670A (en) | Isoelectric focusing process and a means for carrying out said process | |
| JP5551092B2 (ja) | 電気泳動を用いた試料の分析方法及びその利用 | |
| JP5221529B2 (ja) | 電気泳動を利用してある種のタンパク質および粒子を分離して枯渇させる方法および装置 | |
| Lestourgeon et al. | The Rapid Isolation, High-Resolution Electrophoretic Characterzation, and Purification of Nuclear Proteins | |
| CN111971112A (zh) | 用于样品表征的装置、方法和试剂盒 | |
| Kumar et al. | Cellulose acetate electrophoresis of hemoglobin | |
| CA2936097A1 (en) | Simultaneous extraction and separation of rna and dna from single cells using electrophoretic techniques | |
| US7250100B2 (en) | Two dimensional electrophoresis cassette | |
| US20130140182A1 (en) | PROTEIN FRACTIONATION BASED ON pI | |
| RU2616906C1 (ru) | Способ электрофоретического разделения белков сыворотки крови и молока в полиакриламидном геле | |
| KR20140026400A (ko) | 핵산 전기 영동 방법, 핵산 농축 정제 방법, 핵산 전기 영동용 카트리지 및 핵산 전기 영동용 카트리지의 제조 방법 | |
| Angellis et al. | Isoelectric Focusing of Alkaline Phosphatase Isoenzymes in Polyacrylamide Gels: Use of Triton X-100 and Improved Staining Technic | |
| JPS5853745A (ja) | ２次元電気泳動装置 | |
| Westwood et al. | Group-specific component: A review of the isoelectric focusing methods and auxiliary methods available for the separation of its phenotypes | |
| Westwood et al. | Analysis of the common genetic variants of the human Gc system in plasma and bloodstains by isoelectric focusing in immobilized pH gradients | |
| Vergani | Crossover electrophoresis for the rapid detection of serum hepatitis (Australia) antigen and antibody. | |
| Liang-Bo et al. | Separation and detection of urinary proteins by microfluidic chip integrated with contactless conductivity detector | |
| JPS58140634A (ja) | 簡易二次元電気泳動法 | |
| JP2004132952A (ja) | 分析方法の向上 | |
| US7794576B2 (en) | Protein resolution enhancement by using matrix containing DMSO | |
| Capote et al. | On‐line preparation of microsamples prior to CE | |
| US20090314639A1 (en) | Means and devices for electro-filtration of molecules | |
| SU951121A1 (ru) | Способ вы влени белков |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180408 |