JPS6314729A - 生ワクチン用改良安定剤、その製造法およびそれを含有するワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 灸明灼女−顆 本発明は、生ワクチン、例えば、生水痘−帯状庖疹つイ
ルスワクチン用改良安定剤、その製造法およびそれを含
有するワクチンに関する。ワクチンの必要条件として、
実用的貯蔵条件下にて商業的に許容される期間、それら
が安定かつ有効に存在し続（Ｊるということが要求され
る。この問題は、該活性成分が、通常、製造および／ま
たは輸送の間可能性のある分解に対して非常に敏感であ
るので重要である。そのため、通常、２〜４℃の間の温
度にて、あるいは、水痘ワクチンについては一２０°Ｃ
においてさえワクチンを貯蔵することが推奨されている
。この脆弱性は、生ワクチンにおいて特に顕著である。

したがって、市販のワクチンは、通常、単一製品または
、より頻繁には、むしろ複合体組成物のいずれかである
成分を含有しており、それらは両方北本明細書において
「安定剤」と称しており、その特性は、該活性成分の性
質により変化する。

水痘−帯状庖疹ウィルスは、後記の分解条件に特に敏感
な熱に不安定なウィルスである。細胞培養において、水
痘感染は、主に、細胞結合性であり、ワクチン製造の凍
結乾燥工程後の感染粒子の回収が不十分であり、かつ、
室温における該凍結乾燥ウィルスの短期貯蔵の間の感染
力の減少が著しい。

発明の背景 多くの安定剤が種々のワクチンに対して提案されでいる
。

さらに詳しくは、つぎの参考文献が特許文献中に見出さ
れている。

弱毒化ウィルス（例えば、水痘ウィルス）ならびに部分
氷解ゼラチン、単糖類また（」三糖類、１ｎｖｉｔｒｏ
における細胞培養培地、■、−グルタミン酸、１７−ア
ルギニンおよび６．０〜６．５のｐｌＩに維持するのに
有効な量の生理学的に許容される緩衝液を含有する安定
剤からなることを特徴とする液体ウィルスワクチンを開
示したヨーロッパ特許第００２８５６３号、リン酸アニ
オン、カリウムカチオン、乳糖、アルブミンおよびグル
タミン酸を含有する風疹ウィルスの凍結乾燥用安定剤を
開示したフランス特許第２０７６７８７号、ウィルス感
染細胞の破壊前にポリビニルピロリドンを含有する緩衝
液で感染細胞を処理することによって調製した安定ウィ
ルス（例えば水痘ウィルス）懸濁液を開示したドイツ特
許第２４０６＋６７号、タンパク質、特に、アルブミン
またはカゼインおよび／または澱粉誘導体を含有するヘ
ルペス群Ｂ、ディンド（Ｄｉｎｄｅ）ヘルペスまたはマ
レン（Ｍａｒｅｋ’　ｓ）病ウィルス用安定化組成物を
開示した米国特許第３７８３０９８号、ウィルス感染細
胞をショ糖、アルブミン、グルタミンおよびリン酸塩含
有安定剤の存在下に超音波処理に付した細胞不含水痘ワ
クチンの安定化方法を例示した米国特許第４０００２５
６号、ショ糖、リン酸塩緩衝液、Ｉ７−グルタミン酸モ
ノナトリウムおよびウシアルブミンを含有する種々のウ
ィルス（特に、水痘−帯状庖疹ウィルス）用安定化組成
物を開示したヨーロッパ特許第０００８２５５号、ｐＨ
６〜６５にて氷解ゼラチン、ソルビトール、培養培地お
よび緩衝液を含有する安定剤を開示した米国特許第４１
４７７７２号、リン酸塩緩衝液ならびにショ糖、グルタ
ミン酸モノナトリウムおよびウシアルブミンまたは氷解
ゼラチンおよびソルビトールのいずれかの存在下でのウ
ィルス組成物水溶液凍結乾燥方法に言及したヨーロッパ
特許第００３０１９９号、弱毒化ウィルスを含有し、か
つ、カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンを含有
するリン酸塩緩衝液、乳糖、ソルビトールおよび少なく
とも１種のアミノ酸からなることを特徴とするワクチン
用安定剤を開示したヨーロッパ特許第００６５９０５号
、トリス−ヒドロキシメチル−アミノ−メタン、Ｌ−シ
スチンおよび、所望により、氷解ゼラチンを用いた弱毒
化ポリオワクヂンの安定化に言及したベルギー特許第８
６１２６５号、ショ糖、デキストランおよびグルタミン
酸モノナトリウムの混合物を用いたＢＣＧワクチンの安
定化を開示したベルギー特許第６［’１４４２９号。

発明の要約 本発明は、新規な生ワクチン用安定化組成物ならびにそ
の製造法および該安定剤を含有する一価または多価ウィ
ルスワクチンのいずれかを提供するものである。

公知の安定剤と比較して、本発明の新規な組成物は、該
ウィルス物質の凍結乾燥および貯蔵の間改良された安定
化特性を示す。例えば、−２０℃の代りに＋４℃での水
痘ワクチンの貯蔵を可能とする。

発明の詳説 前記のごとく、水痘−帯状庖疹ウィルス（本明細書は、
水痘ウィルスとも称す）は熱に不安定なウィルスであり
、凍結乾燥後感染性粒子の回収は少ない。　これらの特
性は、安定剤有効性の研究用試験ウィルスとしてそれを
特に貴重なものにする。

本明細書では、水痘ウィルスは、決して水痘ウィルスの
みに制限されることはない本発明に関して行なわれる比
較試験に用いられている。

したがって、本発明は、新規なウィルスワクチン、さら
に詳しくは、生ウイルスワクチン用安定剤を提供するも
のであり、かつ、他の具体例によれば、本発明は、また
、そのような安定剤を含有する一価または多価ウィルス
、さらに詳しくは生ウイルスワクチンに関する。

本発明の安定剤は、実質的に、乳糖（３０〜５０ｇ）、
単糖類、例えばソルビトール（１５〜３５ｇ）、デキス
トラン（好ましくは、＋００００の分子量を有する）（
１５〜４０ｇ）、カゼイン水解物（ｌ−７＝ ０〜３０ｇ）、Ｌ−グルタミン酸またはそのアルカリ金
属塩、例えばグルタミン酸モノナトリウム（１〜３ｇ）
、エチレンジアミン四酢酸またはそのアルカリ金属塩、
例えばそのナトリウム塩（０，２〜１９）および６．７
〜７．２のｐｉ−１に錐持するのに有効な量の医薬上許
容される緩衝液、例えばリン酸塩緩衝液、酢酸塩緩衝液
またはクエン酸塩緩衝液、好ましくはリン酸塩緩衝液、
例えば二塩基性リン酸ナトリウム（０，５〜２ｇ）およ
び−塩基性リン酸カリウム（０，３〜１ｇ）の水溶液か
らなり、全ての量は、パイロゼン不含蒸留水！ρ当りに
ついてのものである。

前記のごとく、該安定剤は、弱毒化ウィルスワクチン、
例えば麻疹、耳下腺炎、風疹および水痘ワクチンの単独
またはそのいずれもの組合せのいずれかについて用いる
ことができろ。

さらに本発明の他の具体例によれば、該安定剤は、種々
の成分をパイロゼン不含蒸留水中に溶解することによっ
て調製し、該溶液を好ましくはその濃縮、吸着、超音波
処理または凍結乾燥のいずれもの前にウィルス増殖の最
後に該ウィルス調製物に加える。例えば、水痘ウィルス
ワクチンについては、細胞培養におけるウィルス感染は
、主に、細胞結合性であり、繰返し凍結および解凍また
は超音波処理することにより、ついで該ウィルスを該感
染細胞から試験する安定剤中に遊離させる。

実施例 つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが
これらに限定されるものではない。

実施例！ （ａ）水痘ウィルス増殖の一般的方法 公知のごとく、水痘ウィルスは、−次ヒト細胞、ヒト二
倍体細胞およびサル細胞のような適当な種類の細胞を用
いて臨床的事例の水痘の小胞から細胞培養中に単離でき
、該ウィルスは、種々の細胞培地中に連続通過させるこ
とにより弱毒化できる。

ついで、該弱毒化ウィルスの増殖は、細胞培養基質（例
えば、ＭＲＣ５細胞系細胞において）において行なわれ
る。３４℃〜３７℃の間からなる温度にてインキコベー
ション後、顕著な細胞変性効果が感染の進行１．た状態
を示した時、培養を停止１−する。

（Ｅ））安定剤の調製 安定剤は、パイロゼン不合蒸留水中に以下の成分を溶解
することによって調製する。全ての量は、パイロゼン不
含蒸留水１ρに対して計算したものである。

乳糖　　　　　　　　　　　　　　　９０ｇソルビトー
ル　　　　　　　　　　　５０ｇデキストラン１０００
０　　　　　　５６９カゼイン水解物　　　　　　　　
　　　４２ｇグルタミン酸モノナトリウム　　　　　４
ｑＮ　ａ２　ｒｔ　Ｐ　Ｏ４２ｇ ＫＩＩ２ＰＯ，ＩＩ？ （ｃ）安定化ワクチンの調製 実施例１　（ａ）の最後に得られた細胞培養培地を廃棄
し、回収した感染細胞を３回洗浄して該培養培地のいず
れもの成分を除去する。洗浄は、実施例１（ｂ）の安定
剤調製物で行う。ＥＤＴＡナトリウム塩の水（０，４ｇ
／＆）中溶液を用いて該細胞を容器壁から取り除き、最
終濃度が５０％になるように実施例＋　（ｂ）の安定剤
中に懸濁する。超音波処理（ブランラン１〕３０細胞破
砕器の出力の５０％にて９０分間）に３１ニリ該ウイル
スを該感染細胞から遊離ざ什、そうして得られたウィル
ス懸濁液を一７０℃にて貯蔵する。−７０℃にて貯蔵し
た該ウィルス懸′／ＩＡ液の一部をグラスバイアル中で
解凍し、凍結乾燥し、その後、しっかりと栓をずろ。

（ｄ）安定性試験 前記のごとく調製したワクチンパッチの種々の量を３７
℃にて７０間また（」＋４°（：にて１年間のいずれか
で貯蔵して、感染力の減少を測定１刀こ。

結果を以下の第１表に示す。

第１表 実施例２ 実施例１（ａ）の最後に得られたもの上置様の水痘ウィ
ルス細胞培養を該細胞培養培地から分離し、採集した感
染細胞を、実施例１　（ｂ）に示した安定剤の代りにパ
イロゼン不含蒸留水１ρ当りショ糖７４．５９、グルタ
ミン酸モノカリウム０　、８９、リン酸二ナトリウム１
ｇ、リン酸モノカリウム０．５２ｇ、ＥＤＴＡｏ、２ｇ
およびポリビニルピロリドン（Ｋ　Ｉ　５）Ｉ　Ｏｇの
水溶液を含有する安定剤を１００％で用いる以外実施例
１（ｃ）に示したように処理する。

１２一 ついで、安定性について、最後に得られたワクチンを実
施例１　（ｄ）に示したような条件でテストした。

結果をっぎの第２表に示す。

第２表 実施例３ 実施例１（ａ）の最後に得られたものと同様の水痘ウィ
ルス細胞培養を該細胞培養培地から分離し、採集した感
染細胞を、実施例＋　（ｂ）に示した安定剤の代りにパ
イロゼン不含蒸留水１ｉ！当り乳糖４０ｇ、ソルビトー
ル３５９、デキストランａｏｇ、カゼイン水解物２１９
およびヒトアルブミン２ｇの水溶液を含有する安定剤を
１００％で用いる以外実施例＋　（ｃ）に示したように
処理する。

ついで、安定性について、最後に得られたワクヂンを実
施例１　（＋１）に示Ｌ／こような条件でテス］・し　
ノこ。

結果をっぎの第３表に示す。

第３表 実施例４ 弱毒化耳下腺炎ウィルス（［ＪＲＡＲＥ−ＡＭ９株）採
収物、弱毒化風疹ウィルス（ｆｌＡ　２７／３株）採収
物および弱毒化麻疹ウィルス（シコｒノルツ（Ｓｃｌ＋
ｗａｒｔｓ）株）採収物を、それぞれ、ヒナ胎児練絹”
非細胞、ＭＲＣ５細胞およびヒナ胎県線維芽細胞−１−
公知の方法により別々に調製した。

それぞれの採収物にパイ「ｌセン不含蒸留水１ρ当り乳
糖９０ｇ、ソルビト−ル７０ｇおよびデギスＩ・ランフ
０９を含有する安定剤を補足し、それぞれの安定剤／採
収物化を５０　／　５０　（ｖ／　ｖ）と１２．３種の
組成物を一４５°（：にて貯蔵１．た。

解凍後、３種のウィルス採収物を実施例１（ｃ）に示し
たごとく調製した水痘ウィルス採収物と混合（７、実施
例１　（ｔ））の安定剤の濃縮Ｕｔ、Ｉ　！Ｊ物と混合
して、それぞれワクチン使用−１−許容されろ各成分の
槍および割合、すなわち、１０％の麻疹１ノイルス、２
０％の耳下腺炎ウィルス、２０％の風疹ウィルスおよび
５０％の水痘ウィルスとし、該安定剤の成分の最終調度
、−４゛なわら、４　ｆ１１１ｉワクヂンＩＱ当り乳糖
４５９、ソルビト−ル２５９、デギストラン２８９、カ
セイン水解物２１！／、グルタミン酸モノナトリウｉ、
　２　ｆ／、エヂレンジアミン四酢酸すトリウム塩０２
９、二塩基性リン酸すトリウムＩ９および一塩基性すン
酸カリウｌ−，０、５ｇとずろ。

実施例５ 実施例４の方法により調製１．た２種の４価ワクヂンバ
ッヂを凍結乾燥し、ついで３７℃にて７日間貯蔵し、そ
の期間後、各ウィルスについて感染力力価の減少を測定
した。

各ウィルス成分の感染力の特に少ない減少を示１刀こ結
果を第４表に示す。

第４表 ＮＤ・未測定 特許出願人　スミス・クライン−アール・アイ・ティ

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）パイロゼン不含蒸留水中６．７〜７．２の間のｐ
   Ｈの乳糖、ソルビトール、デキストラン、カゼイン水解
   物、Ｌ−グルタミン酸またはそのアルカリ金属塩、エチ
   レンジアミン四酢酸またはそのアルカリ金属塩および医
   薬上許容される緩衝液からなることを特徴とする弱毒化
   ウィルスを含有するワクチン用安定剤。
2. （２）パイロゼン不含蒸留水１ｌ当り、それぞれ、３０
   〜５０ｇ、１５〜３５ｇ、１５〜４０ｇ、１０〜３０ｇ
   、１〜３ｇ、０．２〜１ｇ、０．５〜２ｇおよび０．３
   〜１ｇの濃度の乳糖、ソルビトール、デキストラン、カ
   ゼイン水解物、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム、エチレン
   ジアミン四酢酸ナトリウム塩、二塩基性リン酸ナトリウ
   ムおよび一塩基性リン酸カリウムからなるリン酸塩緩衝
   液を含有する前記第（１）項のワクチン用安定剤。
3. （３）実質的に凍結乾燥形態の前記第（１）項および第
   （２）項のいずれかの安定剤中の弱毒化ウィルスの懸濁
   液からなる弱毒化ウィルスを含有する安定化ワクチン。
4. （４）弱毒化水痘帯状−庖疹ウィルスを含有する前記第
   （３）項の安定化ワクチン。
5. （５）弱毒化麻疹ウィルスを含有する前記第（３）項の
   安定化ワクチン。
6. （６）弱毒化耳下腺炎ウィルスを含有する前記第（３）
   項の安定化ワクチン。
7. （７）弱毒化風疹ウィルスを含有する前記第（３）項の
   安定化ワクチン。
8. （８）パイロゼン不含蒸留水中６．７〜７．２の間のｐ
   Ｈの乳糖、ソルビトール、デキストラン、カゼイン水解
   物、Ｌ−グルタミン酸またはそのアルカリ金属塩、エチ
   レンジアミン四酢酸またはそのアルカリ金属塩および医
   薬上許容される緩衝液からなる安定剤中に適当量の該ウ
   ィルスを懸濁させてなることを特徴とする前記第（３）
   〜（７）項のいずれか１つの安定化ワクチンの製造法。
9. （９）該安定剤がパイロゼン不含蒸留水１ｌ当り、それ
   ぞれ、３０〜５０ｇ、１５〜３５ｇ、１５〜４０ｇ、１
   ０〜３０ｇ、１〜３ｇ、０．２〜１ｇ、０．５〜２ｇお
   よび０．３〜１ｇの濃度の乳糖、ソルビトール、デキス
   トラン、カゼイン水解物、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム
   、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム塩、二塩基性リン
   酸ナトリウムおよび一塩基性リン酸カリウムからなるリ
   ン酸塩緩衝液を含有する前記第（８）項の安定化ワクチ
   ンの製造法。