JPS63141995A - 新規活性ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はｆｒ蜆な活性ペプチドに関するものであり、詳
しくはアンジオテンシン転換酵素阻害活性を有し、高血
圧症の治療もしくは予防に用いて有用性の期待できる新
規なペプチドに関する。

（従来の技術） 高血圧症の発症にしエン−アンジオテンシン系が深いか
かわりを持っていることはよく知られている。このレニ
ン・アンジオテンシン系には血圧調節に与るアンジオテ
ンシン転１０５１素が存在し、該酵素は、アンジオテン
シン！を強い血管壁平滑筋収縮作用を有するアンジオテ
ンシン■に転換せしめることを通じて血圧上昇に関与し
ている。従って、この酵素活性を；’Ｘ制することによ
って血圧上昇を防ぐこと（降圧）が可能である。

アンジオテンシン転換酵素の活性阻害物質として、既に
種々の物質が見い出されており、例えば合成物について
はＤ−２−メチル−３−メルカプトプロパノイル−し−
プロリン（−船名カブトプリル）がその高い阻害活性か
らして、現に経口降圧剤として実用に供されている。ま
た、天然物あるいは天然物由来の阻害物質としては、蛇
毒ペプチドおよびその類縁体、あるいは牛山来カゼイン
をトリプシン分解して得られるペプチド等が知られてい
る。

それらのうち、天然物あるいは天然物由来の阻害物質は
、合成物が毒性や副作用の点でなお問題を残しているの
に対し、より安全性にすぐれた降圧剤となることが期待
でき、なかでもカゼイン由来の阻害ペプチドは、安全性
、有効性に加えて、コスト面でも有利と見込まれるとこ
ろからその降圧剤としての実用化が検討されている。

チドの有用性に鑑み、その類縁ペプチドないしは部分構
造物の中から、有効なアンジオテンシン転換酵素阻害活
性を有するものを検索し、以て該ペプチド群の降圧剤へ
の適用に際しての選択の巾を拡げ、その実用化可能性を
より高めるべく鋭意研究を行った結果、後述のトリペプ
チドがか＼る目的を満足することを見い出し、本発明を
完成するに至った。

（発明の構成） 即ち、本発明は、新規な活性ペプチドであるし一アラニ
ルーし一バリルーＬ−プロリンおよびその酸付加塩であ
る。

こ−で酸付加塩としては、製薬上許容される塩、例えば
塩酸塩、硫酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩な
どが好ましいものとして挙げられる。

本発明のペプチドは、牛カゼインの部分構造物であり、
該蛋白の酵素加水分解（特にトリプシン消化物のキモト
リプシン処理）によって得ることができるが、より有利
に゛は有機化学的な合成手法を用い、アミノ酸を段階的
に導入する方法によって製造される。また、加水分解酵
素の逆反応を利用したペプチド合成法を用いることもで
きる。

以下に合成法の数例をしめすが、こ−に於いてアミノ酸
はすべて１体を意味し、またアミノ酸の保護基の略号は
それぞれ次の残基を表す。

Ｂｏｃ：ターシャリーーブチルオキシカルボニル（ｔｒ
ｅｔ−Ｂｕｔｙｌｏｘｙ−ｃａｒｂｏｎｙｌ）基Ｂｚｌ
：ベンジル（Ｂｅｎｚｙｌ）基 Ｚ　：ベンジルオキシカルボニル （Ｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）　ｇｌｉｔ　
　ｌ３ｏｃ−Ｖａ　ｌ　−０１ｌとｌｌ−Ｐｒｏ−０１
３ｚｌを縮合反応させてＢｏｃ−Ｖａ　ｌ−Ｐｒｏ−０
Ｂｚｌを合成し、その脱係１１５反応によりＨ−Ｖａ　
ｌ−Ｐｒｏ−０Ｂｚ　ｌを得る。

次に、このＩＩ−Ｖａ　ｌ−Ｐｒｏ−０Ｂｚ　ｌをＺ−
Ａｌａ−ＯＨと縮合反応させてＺ−Ａ　＋ａ−Ｖａ　ｌ
−Ｐｒｏ−０Ｂｚ　ｌを合成し、同じく脱保護基反応に
より目的のＨ−Ａｌａ−Ｖａｔ−Ｐｒｏ−ＯＨを得る。

＋２１　　Ｚ−Ａｌａ−ＯＨとＨ−Ｖａ、ｌ−０Ｂｚ１
−ＴｓＯＨを縮合反応させてＺ−Ａｌａ−Ｖａ　ｌ−０
Ｂｚ　Ｉを合成し、その脱係１１基反応により、Ｚ−Ａ
ｌａ−Ｖａ　ｌ−０Ｂｚ　１を経てＺ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｖ
ａ　Ｉ　−ＯＨを得る。

次に、このＺ−Ａ　ｌ　ａ−Ｖａ　ｌ　−ＯＨとＨ−Ｐ
ｒｏ−ＯＢｚ　Ｉ　・ＨＣｌとを縮合反応させてＺ−Ａ
ｌａ−Ｖａ　ｌ−Ｐｒｏ−０Ｂｚ　ｌを合成し、同じく
脱保護基反応により目的の■１−Ａｌａ−Ｖａ　１−Ｐ
ｒｏ−ＯＨを得る。

＋３１　　Ｂ　ｏ　ｃ　−Ａ　ｌ　ａ　−ＯＨとＨ−Ｖ
ａｌ　−０Ｂｚ　Ｉ　・ＴｓＯＨを縮合反応させて３ｏ
ｃ−ＡＩａ−Ｖａ　ｌ−０Ｂｚ　Ｉを合成し、その脱保
護基反応によりＲｏｅ−Ａｌａ−Ｖａ　Ｉ　−０■１を
得る０次に、このＢｏｃ−Ａｌａ−Ｖａｌ−ＯＨとＨ−
Ｐｒｏ−ＯＢｚ　１　１１ＣＩとを縮合反応させて１３
ｏｃ−Ａｌａ−Ｖａ　Ｉ　−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌを合成し
、同じく脱保護基反応によりＨ−Ａｌａ−Ｖａ　１−Ｐ
ｒｏ−０Ｂｚｌをｔｉｔ、ｔｊ的のＨ−Ａｌａ−Ｖａｌ
−Ｐｌｏ−０１（を得る。

以上のいずれの方法の場合も、縮合反応および脱保護基
反応は、通常のペプチド合成に於けると同様の条件下に
これを行うことができる。

本発明のペプチドは、アンジオテンシン転換酵素に対す
る強い活性阻害作用とそれに基づく有効な血圧降下作用
を有し、また低毒性であって、血圧降下を目的として医
薬あるいは健康食品等に適用して有用性が期待できる。

以下に、本発明のペプチドの有用性を示す生理活性試験
の結果を挙げる。

１、アンジオテンシン転換酵素阻害活性（イ）供試々料 （ｉ）後記の実施例１で得られた本発明ペプチド（ｉｉ
　）カプトプリル（対照） （ロ）試験方法 （１）アンジオテンシン転換酵素液（ＡＣＥ液）の調製 ５ｇのラビソトラングアセトンパウダー（シグマ社製）
を５０ｍ１の″：ＣＪニーＩ　Ｍホウ酸Ｍｉｌｉ液（ｐ
Ｈ８，３）に溶解し、；４０．ＯＯＯｘｇ、４０分の条
件下で遠心処理し、その上清液をさらに、上記緩衝液で
５倍に希釈し、アンジオテンシン転換酵素液を得た。

（１１）活性の測定 試料を試験管に０．０３ｍ１入れ、上記酵素液を０．１
　ｍ　ｌ添加し、３７℃で１０分間保温後、これに基質
として、２５０μｍのヒプリルーし一ヒスチジルーし一
ロイシン〔アルドリッヒ　ケミカル社（＾１ｄｒｉｃｈ
　Ｃｈｅｍ、Ｃｏ、）製０．最終濃度５ｍＭ、ＮａＣｌ
３００ｍＭを含む、〕を添加し、３７℃で３０分間反応
させた。その後、ＩＮ塩Ｍ０．２５ｍ１を添加して反応
を停止させた後、１．５　ｍ　ｌの酢酸エチルを加え、
１５秒間激しく撹拌した。その後、３、５００ｒρ園で
１５分間遠心して、酢酸エチル層１ｍｌを採取した。そ
の酢酸エチル層を１２０℃で３０分間加熱し、溶媒を除
去した。溶媒除去後、蒸溜水２ｍｌを添加し、抽光度）
を測定し、これを酵素活性とした。なお、この条件で阻
害剤を含まない場合の２２８ｎｍの吸光度は、０．５０
０である。

阻害率は、次式より算出した。

阻害率−Ａ−［３／八へ１００％ Ａ：阻害剤を含まない場合の２２８　ｎｍの吸光度（０
，５００） Ｂ：阻害剤添加の場合の２２８ｒｚｎの吸光度そして、
阻害率５０％の時の阻害濃度をＩＤ５０とする。

（ハ）試験結果 試験結果を第１表に示す。

第１表 ２、ラット投与時の降圧作用 （イ）供試々料 後記の実施例１で得られた１ｍ明ペプチド、。、よ、、
、、よ　　　　；ゝ゛ １２ｉ１！Ｉ１２ｉ１！Ｉ齢雄圧ラット（日本チャール
ズ・リバー社）１５匹を、温度２３±２℃、湿度５５±
５％の動物室に収容し、水および飼料（オリエンタル酵
母社製、ＭＦ）を自由に摂食させた。ラットは、週に一
度血圧を測定しながら２週間にわたって馴化飼育したの
ち、高血圧を発症したところで実験に供した。

ラットを３群（１群５匹）に分け、２群は腹腔内投与（
投与量２ｇ／ｋｇ体重）し、他の１群は強制経口投与（
投与ｆｆ１３ｇ／ｋｇ体重）した、試料は投与直前に蒸
溜水に溶解して用いた。

血圧測定は、投与前と投与３時間後に、それぞれ無加温
・非観血的う・ノド血圧計（トーイデン製、ＤＳ＋？８
０１Ａ　　）を用い、ｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法で各ラット
の最高血圧値を連続１０回測定し、その平均値を求める
ことにより行った。結果は１群１５゛０匹の平均値で示
した。

（ハ）試験結果 結果を第２表に示す。

第２表 以上の試験の結果、本発明のペプチドがアンジオテンシ
ン転換酵素に対して阻害活性を有し、ｉｎ　ｖｉｖｏに
於いて有、αの血圧降下作用を示すことが確認された。

また、本発明のペプチドは、そのマウス経口投与時の急
性毒性値（ＬＤ５０）が３　ｇ　／　ｋｇ以上と極めて
低毒性であり、さらにカゼインのｒ、１７８分解物の一
つであるところから生体異物となりにくいことが予想さ
れ、安全性の市でも極めてすぐれている。従って、本発
明のペプチドは高血圧用柱が期待でき、さらに経口投与
で有効であることから高血圧予防あるいは高血圧症状の
緩和を目的とした健康食品としても使用できる。

本発明のペプチドを高血圧症の治療あるいは予防のため
の医薬として用いる場合、該ペプチドは、薬学的に許容
される担体（賦形剤、滑沢剤、結合剤、着色剤、矯味剤
、賦香剤等）と共に常法に従って、経口投与用の製剤の
形態、例えば錠剤、カプセル剤、トローチ剤、粉末剤、
細粒剤、顆粒剤等とした上経口投与されるか、もしくは
注射剤の形で静脈内投与される。

一方、健康食品として用いる場合には、上記と同様の経
口投与用製剤の形態とするか、もしくは固型あるいは液
状の食品ないしは嗜好品（例えば菓子類、粉末茶、アル
コール飲料、スポーツ飲料等）の形態とすればよい。

用！１（ｔＷ食りは、一般に成人男子１日当りＩ　９ｍ
ｇ〜５ｇ、；ｚｐ７１．体重の範囲であり、か−る範囲
から投与イｔＨ食）目的に応じて適宜の量が選択される
。

次に、実施例によって本発明を説明する。

実施例１ ＋１ｌＢｏｃ−Ｖａ　１−Ｐｒｏ−ＯＢｚ　１の合成り
ｏｃ−Ｖａ　Ｉ　−ＯＨ２，８６ｇ　（１３，２ｍ５ｏ
ｌ　）をテトラヒドロフラン２０ｍ１とｎ−メチルモル
フォリン（ＮＭＭ）１．３２ｍ１　　（１２−−ｏｆ）
の混合液に溶解した。この溶液に、−５℃撹拌下、エチ
ルクロロホルメート３．０ｇ（１２ａ＋ｍｏｌ）を加え
、さらに１０分後、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２
０ｍ　ｌに溶解した！１−Ｐｒｏ−ＯＢｚ　ｌ　−ＨＣ
ｌ　　３．０ｇ　（１２ｎ＋ｍｏｌ）とＮＭＭ　１．３
２　ｍ　ｌ　　（１２ｍ＋ｗｏｌ）を加えた。

この反応混合物を水浴中で１時間撹拌し、−晩室温で反
応させた０次に、反応混合物を濃縮乾固し、残渣を酢酸
エチル２０ｍ１に溶解した後、この溶液を、４％クエン
酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液および水で順
次洗浄し、ｏｃ＝Ｖａ　１−Ｐｒｏ−ＯＢｚ　ｌを油状
物質として得た（収量４．９０ｇ） （２１＋（−Ｖａｔ−Ｐｒｏ−ＯＩ３ｚｌ−ｔｌｃｌの
合成りｏｃ−Ｖａｔ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ　　４．８９ｇ
　（ｌ　１．８ｍａｏｌ）をジオキサン１０ｍ１に溶解
した溶液に、ジオキサンを溶媒とする３、５Ｎ塩酸溶液
４０ｍ１を加え、室温に１時間放置した後、真空乾燥し
て、Ｈ−Ｖａ　ｌ−Ｐｒｏ−０Ｂｚｌ　・ＭＣＩを油状
物質として得た（収量３．６１ｇ＞ ＋３）Ｚ−Ａｌａ−Ｖａ　ｌ−Ｐｒｏ−０Ｂｚ　ｌの合
成Ｈ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ・ＨＣｌ　　３゜６１
　ｇ　（１１，５ｇｍｏｌ）　、　　Ｚ−Ａ　Ｉ　ａ　
−０Ｈ２，２３ｇ　（ｌ　０ｖｓｏｌ）　、　　ＮＭＭ
ｌ、２７ｍ　ｌ　　（１１，５ｍ＋ｍｏ　ｌ　）および
ｌ−ハイドロキシベンゾトリアゾール（ｆ（ＯＢ　Ｔ）
　１．６２　ｇ　（１２ｍ＊ｏｌ）をＤＭＦ２０ｍｌに
溶解し、この溶液に、冷却撹拌下、シンクロへキシルカ
ーポジイミド（ＤＣＣ）２゜置した。

生成した、Ｎ、Ｎ’　　−ジシクロへキシルウレア（Ｄ
Ｃａｒｅａ）を濾別し、濾液を濃縮乾固した後、残渣を
酢酸エチルに溶解した。

この酢酸エチル溶液を、０．５Ｎ塩酸、４％炭酸水素ナ
トリウム水溶液、次いで水で充分に洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで脱水乾燥した。無水硫酸ナトリウムを濾別後
、濾液を真空乾燥し、Ｚ−Ａｌａ−Ｖａ　ｌ−Ｐｒｏ−
０Ｂｚ　Ｉを油状物質として得た（収量２．１ｇ） ＋４）ＩＩ−Ａ　ｌ　ａ−Ｖａ　ｌ−Ｐ　ｒ　ｏ　−０
！（の合成Ｚ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ　　
２゜０８　ｇ　（４ｍｏｌ）をメタノール４ｍｌと酢酸
４ｍｌの混合液に溶解し、パラジウムブラックの存在下
で２４時間還元した。触蝶を濾別した後、濾液から溶媒
を除去し、生成した油接残渣を酢酸エチルにより結晶化
した。このｔ■結晶をメタノール−エーテルから再結晶
して、目的のＨ−Ａｌａ−Ｖａ　１−Ｐｒｏ−ＯＨを針
状結晶とし：ｌ・。

て得た（収１１０．８５５ｇ）、’ こ＼に得られた結晶の物性値および分析結果は以下の通
りであり、この分析結果から生成物が目的のトリペプチ
ドであることが６１！認された。

■融　点　２４０°〜２４３℃（分解）◎比旋光度　〔
α〕。１フー９７．４°　＜Ｃ＝０．７８　　Ｈｔｏ） ■元素分析 実測値（％）　Ｃ：　５４．４（ｉ、　）ｌ　：　８．
２３．　Ｎ　：　１４．４５計測値（％）　Ｃ：　５４
．３８．　Ｈ：　８．１４．　Ｎ　：　１４．６３◎ア
ミノ酸分析（６ＮｌｌＣＩにて２４時間加水分解） Ｐ　ｒ　ｏ　　１．００＋１１．　Ａ　Ｉ　ａ　　１．
００（１１゜Ｖ　ａ　Ｉ　　１．０１（１１ ◎薄層クロマトグラフィー（セルロースプレート使用、
ｎ−ブタノール：酢酸；水−４：ｌ：５およびｎ−ブタ
ノール：酢酸：水；ピリジン＝１５：３：１２：１０に
て２次元展開し、展開後、ニンヒドリン発色）で単一ス
ポットを示２．６μＩ（２，６ｇｇ）、カラム：ヌクレ
オシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）５Ｃ１Ｂ　（１５０ｍｓ
ｘ４φ）、溶出液：　１０　ｍ　Ｍ　ＪｊＪＪＨ街液（
ｐＨ２゜６）と５０ｍＭ＆Ｍｌｌナトリウム水溶液との
混液を使用し、アセトニトリルを０％から４５％までグ
ラディエンド、流速：１ｍｌ／ｓ＋ｉｎ、圧カニ　ｌ　
２９ｋｇ／ｎｆ、検出：Ａ、。レジン１．２８）にてシ
ングルピークを示した。

実施例２ ＋１１２−Ａ　ｌ　ａ−Ｖａ　Ｉ　−ＯＢ　ｚ　Ｉの合
成Ｚ−Ａｌａ−０１１２，２３ｇ　（１０ｇｍｏｌ）　
、　Ｈ−Ｖａ　１−ＯＢｚ　Ｉ　−ＴｓＯＩＩ４．４５
ｇ　（１１゜５ｍ５ｏｌ）　　、　　ＮＭＭｌ、２　７
ｍ　　ｌ　　　（ｌ　　１．５ｍ＋＊ｏｌ）　　および
ｌ−ハイドロキシベンゾトリアゾール１．６２　ｇ　（
１２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ　２０ｍ　ｌに？８解した液に
、冷却撹拌下、ジシクロへキシルカーポジイミド　２．
４８　ｇ　（１２＋ｕ＋ｏｌ）を加えた。この反応混合
物を０℃で３時間撹拌し、冷蔵庫に一晩静置した。

生成した、ＤＣｕｒｓａを濾別し、濾液を濃縮乾固した
後、残渣を酢酸エチルに溶解した。この酢酸エチル溶液
を、０．５Ｎ塩酸、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、次
いで水で充分に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水乾燥
した。無水硫酸ナトリウムを濾別後、濾液を真空乾燥し
、２−Ａｌａ−Ｖａ　ｌ−０Ｂｚ　１を油接物質として
得た（収量４．２７ｇ） ｉ２１Ｚ−Ａｌａ−Ｖａ　１−ＯＨの合成Ｚ−Ａｌａ−
Ｖａｔ−ＯＢｚｌ　　１１．８４ｇ（２０ａｕｓｏｌ）
をメタノール２０ｍ１に溶解し、これに２ＮＮａＯＨ１
１ｍｌを添加した。この混合液を室温で一時間放置した
汲水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。水相を６ＮＨＣ
１で酸性にして酢酸エチルで抽出し、有機相を水洗した
後無水硫酸ナトリウムで一晩脱水乾燥した。

無水硫酸ナトリウムを濾別後、濾液の溶媒を除去し、Ｚ
−Ａｌａ−Ｖａｌ　　ＯＨを油状物質として得た（収量
５．１２ｇ）。

＋３１２−Ａｌ　ａ−Ｖａ　１．”’Ｐｒｏ−０Ｂｚ　
ｌの合成、ｒ゛ Ｚ−Ａ　ｌ　ａ−Ｖａ層−０Ｈ５，０２ｇ　（１０ｗａ
ｍｏｌ）、　　　Ｈ−Ｐｒｏ−ＯＢｚ　　ｌ　　・　Ｈ
Ｃｌ２．９ｇ　　（１１，５ｍｍｏｌ）、　　ＮＭＭｌ
、２７ｍ　ｌ　　（ｌ　　１．５ｍｍｏｌ）およびｌ−
ハイドロキシベンゾトリ７ゾールｌ。

６２　ｇ　　（１２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ２０ｍｌに溶解
し、これに、冷却撹拌下、ジシクロへキシルカーポジイ
ミド２．４８ｇ　（１２ｍｍｏｌ）をカロえた。この反
応混合物を０℃で３時間ｔｍ拌し、冷蔵庫に一晩静置し
た。

生成したＤＣｕｒｅａを濾別し、濾液を濃縮乾固した後
、残渣を酢酸エチルに溶解した。この溶液を、０．５　
Ｎ　ＩＩ　Ｃｌ　、　　４％炭酸水素す）　ＩＪウム水
溶液、次いで水で充分に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで
脱水乾燥した。無水硫酸ナトリウムを濾別後、濾液を真
空乾燥し、Ｚ−Ａｌａ−Ｖａ　ｌ−Ｐｒｏ−０１３ｚ　
Ｉを油状物性として得た（収量２．２７ｇ）。

＋４１１１−Ａｌａ−Ｖａ　１−Ｐｒｏ、−〇！１の合
成Ｚ−八１ａ−Ｖａｔ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ　　２゜布下
で２４時間還元した。触媒を濾別後、濾液の溶媒を除去
し、生成した油状残渣を酢酸エチルにより結晶化した。

この粗結晶をメタノール−エーテルから再結晶して、目
的のＨ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−０１１を針状結晶と
して得た（収１０．７９８ｇ）。

こ＼に得られたペプチドは実施例１のそれと同じ物性値
ならびに分析結果を示した。

実施例３ （ｌｌＢｏｃ−Ａｌａ−Ｖａ　ｌ−０Ｂｚ　Ｉの合成り
　　ｏ　　ｃ−Ａ　　Ｉ　　ａ−Ｏｆ（２，５ｇ　　（
１３，２ｍ５ｏｌ）をテトラヒドロフラン２０ｍ１とＮ
ＭＭｌ、３２ｍ　Ｉ　　（１２ｓｓｏｌ）に溶解した。

コノ溶液に、−５℃攪拌下、エチルクロロホルメー）１
．２ｍ１（１２ｓｓｏｌ）を加え、さらに１０分後、Ｄ
ＭＦ２Ｑｍｌに溶解したＨ−Ｖａ　１−ＯＢｚ　Ｉ　−
ＴｓＯＨ４，６５ｇ　　（１２ｇｍｏｌ）　　とＮＭＭ
ｌ、３２ｍ１　　（１２＠５ｏｌ）を加えた。

乾固し、残渣を酢酸エチル２０ｍ１に溶解した後、この
溶液を、４％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム
水溶液および水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱
水乾燥した。無水硫酸ナトリウムを濾別後、濾液を真空
乾燥して、Ｂｏｃ−Ａｌ　ａ−Ｖａ　ｌ−０Ｂｚ　Ｉを
油状物質として得た（収量３．２４ｇ）。

（２１Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｖａ　Ｉ　−ＯＨの合成りｏｃ
−Ａｌａ−Ｖａｌ−ＯＢｚｌ　　７゜７２ｇ　（２０１
１−０１）をメタノール２０ｍ１に溶解し、これに２Ｎ
ＮａＯＨ１１ｍｌを添加した。コノ混合液を室温で一時
間放置した汲水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。水相
を６ＮＨＣ１で酸性にして酢酸エチルで抽出し、有機相
を水洗した後無水硫酸ナトリウムで一晩脱水乾燥した。

無水硫酸ナトリウムを濾別後、濾液の溶媒を除去し、Ｂ
ｏｃ−Ａｌ　ａ−Ｖａ　Ｉ　−ＯＨを油状物質として得
た（収１４７２ｇ）。

＋３１Ｂｏｃ−Ａｌａ−′’Ｑ”ａＩ−Ｐｒｏ−ＯＢｚ
ｌの二Ｉ 合成 りｏｃ−Ａｌａ−Ｖａｌ−ＯＨ３，９ｇ　（１３゜２　
＠１１０１）をテトラヒドロフラン２０ｍ１とｎ−メチ
ルモルフォリン（ＮＭＭ）　１．３２ｍ　ｌ　　（１２
＋ｍｏｌ）の混合液に溶解した。この溶液に、−５℃撹
拌下、エチルクロロホルメートｌ、　’ｌ　ｍ　１（１
２ｓｍｏｌ）を加え、さらに１０分後、ジメチルホルム
アミド（ＤＭＦ）２０ｍ　ｌに溶解したＨ−Ｐｒｏ−Ｏ
Ｂｚ　１−ＨＣｌ　　３．０ｇ　（１２ｇｍｏｌ）、、
とＮＭＭｌ、３２ｍ　ｌ　　（１２ｓｓｏｌ）　　を力
■えた。

この反応混合物を水浴中で１時間撹拌し、−晩室温で反
応させた０次に、反応混合物を濃縮乾固し、残渣を酢酸
エチルに溶解した後、この？８液を、４９４クエン酸水
溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液および水で順次洗
浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水乾燥した。無水硫酸ナ
トリウムを濾別後、濾液を真空乾燥して、Ｂｏｃ−Ａｌ
ａ−Ｖａｌ−ＯＢｚｌを油状物質として得■の合成 りｏｃ−Ａｌａ−Ｖａ　ｌ−Ｐｒｏ−０Ｂｚ　１５、８
１　ｇ　（１１，８ｓｓｏｌ）をジオキサン１０ｍ１に
溶解した溶液に、ジオキサンを溶媒とする３゜５Ｎ塩酸
溶液４０ｍ１を加え、室温に１時間放置した後、真空乾
燥して、Ｈ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚ　１−Ｈ
ＣＩを油状物質として得た（収１３．２４ｇ）。

（５■１−八Ｉａ−Ｖａ　１−Ｐｒｏ−Ｏｌｌの合成Ｈ
−Ａｌａ−Ｖａ　１−Ｐｒｏ−ＯＢｚ　ｌ　・ＩＩＣ１
１，５７ｇ　　（４ｍｓ＋ｏＩ）をメタノ−Ｊし４ｍｌ
と酢酸４ｍｌの混合液に溶解し、パラジウムブラ、りの
存在下で２４時間還元した０Ｍ媒を濾別した後、濾液の
溶媒を除去し、生成した油状残渣を酢酸エチルにより結
晶化した。この粗結晶をメタノール−エーテルから再結
晶して、目的のＨ−Ａ　ｌ　ａ−Ｖａ　ｌ−Ｐ　ｒ　ｏ
　−０１ｌを針状結晶として得た（収１０．８２１ｇ）
。

実施例４ １１１Ｂｏｃ−Ｖａ　ｌ−Ｐｒｏ−０ＢＺ　＋の合成Ｈ
−Ｐｒｏ−Ｏｔ３ｚｌ−１１Ｃ４２，４２ｇ（１０ａ＋
ｍｏｌ）　　、　　　Ｂ　　ｏ　　ｃ−Ｖａ　　Ｉ　　
−０夏（２，１７ｇ（ＩＱ　５ｅａｌ）およびｌ−ハイ
ドロキシベンゾトリアゾール（ＩＩＯＢ　ｔ）　１．３
５　ｇ　（１０ｇｍｏｌ）をＤＭＦｌｏｍｌに溶解し、
この溶液に、０℃水冷下、トリエチルアミン１．４　ｍ
　ｌとジシクロヘキシルカーポジイミド２．０６　ｇ　
　（１０＋＋ｎｏｌ）を加え、次いで５℃に保持しつ一
一夜撹拌した。

生成した、ＤＣｕｒｅａを濾別し、濾液を濃縮乾固した
後、残渣を酢酸エチルに溶解した。この酢酸エチル溶液
を、１０％クエン酸水溶液、水、４％炭酸水素ナトリウ
ム水溶液、次いで水で充分に洗浄し、無水硫酸ナトリウ
ムで脱水乾燥した。無水硫酸ナトリウムを濾別後、濾液
を減圧濃縮し、Ｂｏｃ−Ｖａ　ｌ−Ｐｒｏ−０Ｂｚｌを
油状物質として得た（収量２．７０２ｇ）。

＋２１１１−Ｖａ　１−Ｐｒ　ｏ−０Ｂｚ　ｌ：、；：
”：ＨＣＩの合成りｏｃ−Ｖａｔ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ　
　　４．１４ｇ（１０−纒ｏ１）をトリフルオロ酢酸２
５ｍ１にとアニソール３ｍｌの混液に溶解し、室温に２
０分間放置した０次に反応混合液を減圧濃縮し、残渣を
エーテルで２回洗浄した後、エーテルを留去し、Ｈ−Ｖ
ａ　ｌ−Ｐｒｏ−０Ｂｚ　ｌをトリフルオロ酢酸塩とし
て得た〔収１ｔ２．２０ｇ（７鰯−ｏｌ）　、性状；白
色粉末、〕 〕＋３１２−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−０Ｂｚ　Ｉの合
成ＩＩ−Ｖａ　１−Ｐｒｏ−Ｏｒ３ｚ　Ｉ　・）リフル
オロ酪酸塩１．５７　ｇ　　（５＋＋＋ｓ＋ｏｌ）　、
Ｚ−Ａ　ｌ　ａ　−０１１１、１２ｇ　　（５ｍａｏｌ
）およびＩＩＯ［３ｔＯ，６８ｇ（５ｖｗｏ＋）をＤＭ
Ｆ５ｍｌに溶解し、この溶液に、０℃水冷下、トリエチ
ルアミン０．７　ｍ　ｌとジシクロへキシルカーポジイ
ミド１．０３　ｇを加え、次いで５℃に保持しっ一一夜
撹拌した。生成したＤＣｕｒｅａを濾別し、濾液を濃縮
乾固した後、残渣を酢酸エチルに溶解した。この溶液を
、１０％クエン酸水溶液、水、４％炭酸水素ナトリウム
水溶液→７１次いで水で充分に洗浄し、１□、□１１．
ウー４え。、７．１□わすトリウムを濾別後、濾液を減
圧ｔｉ　ｌｉ　Ｌ、、Ｚ−Ａｌａ−Ｖａ　ｌ−Ｐｒｏ−
０Ｂｚ　Ｉを油状物質として得た〔収！ｉ１．６９ｇ）
。

＋４１２−Ａｌａ−Ｖａ　Ｉ−Ｐｒｏ−ＯＨの合成Ｚ−
Ａｌａ−Ｖａ　　ｌ−Ｐｒｏ−０Ｂｚ　　１２．６０　
ｇ　（５ｍｍｏｌ）を、メタノール４８ｍ１．ジオキサ
ン２４ｍ皿およびｌＮＮａＯＨ４ｍ１の混合液に溶解し
、この溶液を室温に５時間放置した後、水を加えてエー
テルで洗浄した。

次に、陽イオン交換樹脂（ＢＩＯ−ＲＡＤＡＧ５０Ｗ−
Ｘ８）を用いて中和した後減圧乾固し、Ｚ−Ａｌａ−Ｖ
ａ　１−Ｐｒｏ−ＯＨを白色粉末として得た〔収１１．
１１ｇ　（２，７５ｆ＃５ｏｌ）、融点１９２〜１９５
℃〕。

＋５）Ｈ−Ａｌａ−Ｖａ　Ｉ−Ｐｒｏ−ＯＨの合成（４
）で得たＺ−Ａｌａ−Ｖａ　１−Ｐｒｏ−０ＨＯ，４０
２ｇ　（１＋＋ｎｏｌ）を、臭化水素を飽和した酢酸０
．５　ｍ　ｌに溶解し、この溶液を室温に一時得られた
残渣ｔ−セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｌ　Ｈ２
Ｇを用いたカラムクロマトグラフィー（溶出液：蒸溜水
）に付し、溶出液を４縮した後、得られた残渣をメタノ
ール−エーテルから結晶化シテ、目的（７）Ｈ−Ａｌａ
−Ｖａ　１−Ｐｒｏ　−０１１を針伏結晶として得た〔
収１０．０２８５ｇ（０，１ｍ＋＋＋ｏｌ）　）　。

こ−に得られたトリペプチドは、実施例１のそれと同じ
物性値ならびに分析結果を示した。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリンおよびその酸
   付加塩。