JPS63119428A

JPS63119428A - エイズの処置のための養子免疫療法の方法

Info

Publication number: JPS63119428A
Application number: JP62234718A
Authority: JP
Inventors: シュー　ロック　フー; ジョイス　ザーリング
Original assignee: Oncogen LP
Current assignee: Oncogen LP
Priority date: 1986-09-19
Filing date: 1987-09-18
Publication date: 1988-05-24
Also published as: JPH08308563A; ATE107861T1; EP0260714A2; EP0260714B1; ES2056054T3; DE3750151T2; EP0260714A3; DE3750151D1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔１）発明の分野本発明はエイズ（ＡＩＤＳ）ウィルスに感染した患者の
処置における養子免疫療法（ａｄｏｐｔｉｖｅｉｍｍｕ
ｎｏｔｈｅｒａｐｙ）の方法を指向し、エイズウィルス
に対する免疫応答を仲介するＴ細胞の試験管内活性化、
これらのＴ細胞の膨張（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）を含み、
それが次いで患者に接種され、エイズウィルス感染細胞
を特異的に指向する細胞仲介免疫応答が患者に移入され
る。本発明は分離、試験管内活性化、免疫特異性の実証
、活性化したリンパ球の膨張および投与に備え、それは
エイズウィルス抗原に対する生体内Ｔ細胞免疫応答の仲
介に使用できる。

本発明の方法は患者または免疫系がエイズウィルス抗原
（類）に暴露された組織適合性供血者からのリンパ球の
分離および該リンパ球のエイズウィルス関連エピトープ
類に対する暴露による試験管内活性化を含む。エイズウ
ィルス抗原類に対し反応性のＴリンパ球の膨張およびエ
イズウィルス関連障害を患う患者中へのＴ細胞の接種が
免疫療法の有用な形態を提供するであろう。

（２）発明の背景（２，１）エイズウィルス後天性免疫不全症候群（エイズ）は主に患者の細胞仲介
免疫応答の損傷に起因する重大な免疫不全により確認さ
れる疾患である〔ゴツトリーブ（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ、　
Ｍ、　）ほか、１９８１、二ニー・イングランド・ジャ
ーナル・オブ・メディシン（Ｎ、　［Ｅｎｇｌ。

ＪｏＭｅｄ、）、３（１５　：　１４２５　；　？スー
ル（Ｍａｓｕｒ、　Ｊ、）ほか、１９８１、二ニー・イ
ングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（Ｎ、Ｅｎ
ｇｌ、　Ｊ９Ｍｅｄ、）、３（１５：１４３１）。疾患
の２つの臨床的現出：（ａ）慢性リンパ節障害、白血球
減少および疾患が進行すると２から０．１またはそれ以
下に移動する正常な末梢ヘルパーとサプレッサーＴ　リ
ンパ球との比（○ＫＴ４　：０ＫＴ８）の逆転を生ずる
末梢血ヘルパー細胞（ＯＫＴ４細胞）の定量的低下によ
り確認されるリンパ節障害症候群といわれる前駆期、並
びに（ｂ）ＯＫＴ４細胞の低下および正常な０ＫＴ４　
：０ＫＴ８比の逆転、絶対リンパ球減少、並ヒに主にニ
ューモジステイス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏ−ｃｙｓｔｉ
ｓ　ｃａｒｎｉｉ）による反復性日和見感染により確認
されるエイズといわれる免疫不全状態、が認められ、こ
の後者の期は多くの場合に遂には死に関連づけられる。

患者の一定の亜集団はリンパ腫およびカボジ肉腫の高い
発生率を有する。現在該疾患に対する治療法がない。

疫学的データ並びに該疾患を得た患者の型に関連する情
報は親密接触により伝達される感染性因子が該疾患の原
因であるかもしれないことを示唆した。その後３つのグ
ループが、エイズの原因因子がヘルパーＴ　リンパ球に
対する指向性を有するレトロウィルスである強固な証拠
を提供した。これらのグループは（ａ）　　ガロウ（Ｒ０Ｃ９Ｇａｌｌｏ）および共同研
究者はナショナル・インスティチニート・オブ・ヘルス
（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｈｅ
ａｌｔｈ）でエイズおよびプレエイズの患者から細胞変
性レトロウィルス（ＨＴＬＶＩＩ［）を分離することが
できた〔ガロウ（Ｇａｌｌｏ、　ＲｌＣ，）ほか、１９
８４、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、２２４　：　
５（１１）　：ポボビック（Ｐｏｐｏｖｉｃ、　Ｍ、）
　　ほか、１９８４、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　
、２２４　：　４９７：］　ｏ彼らはまたエイズの患者
の血清中にＨＴＬＶＩに対する抗体を検出した。

ら）モンタニール（Ｌ、　ＭＯｎｔａｇｎｉｅｒ）およ
び共同研究者はパスツール研究所で頚部リンパ節障害を
示し、ニーズに対するおそれのあった患者からＴリンパ
指向性レトロウィルス（ＬＡＶ）　を分離した〔バレ・
ジノウシ（Ｂａｒｒｅ−Ｓｉｎｏｕｓｓｉ、　Ｆ、）ほ
か、１９８３、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、２２
０　：８６３〕。このグループはまたエイズ患者の血清
中のＬ　Ａ　Ｖに対する抗体を示すことができた〔カリ
サンスラマン（Ｋａｌｙｓａｎｓｒａｍａｎ、　Ｖ、　
Ｓ、）ほか、１９８４、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）
　、２２５　：３２１〕。さらに、彼らはエイズを生じ
た供血者から血液を受けた後でエイズを生じた患者のリ
ンパ球からＬＡＶを分離することができた〔フェオジノ
（Ｆｅｏｒｉｎｏ、　ＰｏＭ、）　　ほか、１９８４、
サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、２２５　：　６９　
〕。

（ｃ）　　レビイ（Ｊ、　Ｌｅｖｙ）および共同研究者
はエイズの患者の末梢単核細胞から感染性レトロウィル
ス（エイズ関連レトロウィルスまたはＡＲＶと称される
）を分離した〔レビイ（Ｌｅｖｙ、　Ｊ、Ａ、）、１９
８４、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、２２５　：８
４０〕。

である。

３つのウィルスはすべて独立に分離されたけれども、そ
れらはすべておそらく同じレトロウィルスサブグループ
に１＠シ〔レビー（Ｌｅｖｙ）ほか、１９８４、サイエ
ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、２２５　：　８４０）　、
ココに一団としてＬＡＶ／ＨＴＬＶＩ［Ｉとして示され
る。

トレロウイルスの一般的構造はウィルスが細胞出芽の過
程中に得る脂質含有エンベロープにより囲まれたリボ核
タンパク質コアの構造である。ウィルスのエンコードす
る糖タンパク質がエンベロープ内に包埋され、外方へ突
出する。これがウィルスの宿主範囲を決定し、感受性細
胞の表面上の特異レセプターと反応する。中和性抗体は
エンベロープ糖タンパク質に結合し、細胞の表面上のし
セプターとのそれらの相互作用を遮断すると思われる〔
「腫瘍ウイルスノ分子生物学（Ｔｈｅ　Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒＢｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｔｕｍｏｒ　Ｖｉｒｕｓｅ
ｓ）　Ｊ　、ジョン−ドーズ（Ｊｏｈｎ　Ｔｏｏｚｅ）
編、１９７３、コールド・スプリング＊　バー　バー　
＊　ラボラトリ−（ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂ
ｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ）　、５３４〜５３５頁；　
ｒＲＮＡ腫瘍ウィルス（ＲＮＡ　Ｔｕｍｏｒ　Ｖｉｒｕ
ｓｅｓ）　Ｊ　、ワイスほか（Ｒ。

Ｗｅｉｓｓ、　Ｎ、　Ｔｅ１ｃｈ、　Ｈ，Ｖａｒｍｕｓ
　ａｎｄ　Ｊ、　Ｃｏｆｆ１ｎ）　ｍ。

１９８２、コールド・スプリング・ハーバ−・ラボラト
リ（ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ）　　、２２６〜２２７頁および２３６〜
２３７頁〕。

ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩＩＩの特定事例においてＴリンパ球
のサブセット上に存在するＴ４抗原がウィルスに対する
レセプターまたはレセプターの一部分である証拠が存在
する〔ダルグライシ、　（Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ。

Ａ、Ｇ、）ほか、１９８４、ネーチ、？　（Ｎａｔｕｒ
ｅ）、３１２ニア６３；クラ７　？　７　（Ｋｌａｔｚ
ｍａｎｎ、　Ｄ、　）　ほか、１９８４、ネーチャ（Ｎ
ａｔｕｒｅ）、３１２ニア６７）。

ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩＩＩのＲＮＡゲノムはｇａｇ遺伝子
を含み、それがウィルスの内部構造タンパク質（コアタ
ンパク質）をコードし、ウィルス群特異性抗原ウィルス
粒子関連逆転写酵素をコードするｐａｌ遺伝子、および
ウィルス糖タンパク質をコードするｅｎｖ遺伝子を規定
する。他の領域例えばｓｏｒおよび３’−ｏｒｆは読取
り枠を含むゲノムの領域を示し、これらの領域の機能は
現在知られていない。

（２，２）レトロウィルス抗原に対する細胞仲介免疫レトロウィルスに対するＴ細胞の抗原特異性に関してほ
とんど知られていない。しかし、フレンド・アンド・モ
ｏ　ニー（Ｆｒｉｅｎｄ　ａｎｄ　Ｍｏ１ｏｎｅｙ）　
？ウス白血病ウィルス（ＭｕＬＶ）のエンベロープ糖タ
ンパク質、ｇｐ７０、はＭｕＬＶ免疫マウスＴ細胞によ
り認識されることが報告された〔マチス（Ｍａｔｉｓ、
　ｌ、＾、〉ほか、１９８５、ジャーナル・オブ・イム
ノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　）、１３５ニア（
１３〜７（１５；フライヤー（Ｆｌｙｅｒ、　Ｄ、Ｃ，
）ほか、１９８３、ネーチャ−（Ｎａｔｕｒｅ）、３（
１５　：　８１５〜８１８）。

プラーク（Ｐｌａｔａ）　　はか〔アブストラクト、コ
ミュニケーション（ｃｏｍｍｕｎ　１ｃａｔｏｎ）、１
６１：５２７ｋ。

エイズに関する国際会議（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
　ＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅＯｎ　Ａｌ（１３）、１９８６
年６月２３〜２５日、バリー、フランス〕はマウスがト
ランスフェクションしたＭｕＬＶ誘導腫瘍上に発現され
たエンベロープまたはｇａｇ抗原に対し細胞毒性Ｔ細胞
を発生できることを示した。ヒトＴリンパ指向性ウィル
ス感染（ＨＴＬＶ−Ｉ）に感染した細胞を指向するＴ　
リンパ球が示された〔ミツヤ（Ｍｉｔｓｕｙａ、　Ｈｌ
）　　ほか、１９８３、ジャーナル・オブ・エクスベリ
メンタル・メディシン（Ｊ、ＥＸＩＴ９Ｍｅｄ、）、１
５８：９９４〜９９９〕が、しかし認識される抗原は報
告されなかった。

（２，３）ウィルスを指向するＴ細胞の試験管内活性化抗体に加えて、Ｔ細胞仲介免疫が多く種々の外被ウィル
スにより起される疾患に対する耐性またはそれからの回
復に重要な役割を果たすことが示された。ウィルス感染
細胞を特異的に認識できるＴリンパ球はウィルス感染し
たかまたは免疫処置した動物のリンパ球をウィルス、ウ
ィルスタンパク質、またはウィルスペプチトで刺激する
ことにより試験管内で生成させることができることを示
す若干の研究があった。マウスにおける例にはインフル
エンザウィルス〔ツビーリンク（２ｗｅｅｒｉｎｋ。

ＨｏＪ、）ほか、１９８０、ネーチャー　（Ｎａｔｕｒ
ｅ）、２６７：３’５１）、単純ヘルヘスウイルス（Ｈ
８ｖ）〔ローマン（Ｌａｗｍａｎ、　Ｍ、Ｊ、　Ｐ、）
’ほか、１９８０、インフェクション・アンド・イミ二
ニティー（Ｉｎｆｅｃ。

Ｉｍｍｕｎ、）　、３０：４５１］、またはマウス白血
病／肉腫ウィルス〔フェルナンデズークルッ（Ｆｅｒｎ
ａｎｄｅｚ−Ｃｒｕｚ、ε、）ほか、１９７９、シアー
ナル・オブ・イムノロジー（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、
１２３：１７７２：］に感染した細胞を特異的に認識す
る１９７８球が含まれる。そのような感作Ｔ細胞は、ウ
ィルスまたはウィルス抗原による刺激に応答して増殖お
よびリンフォカインの生成を生ずるＴ細胞の能力により
測定して細抱陣害活性（または細胞毒性Ｔ　リンパ球、
ＣＴＬ、として示される）および（または）Ｔヘルパー
細胞活性を有することが示された。試験管内活性化Ｔ細
胞を実験動物に接種したときに免疫療法に有用であるこ
とができる証拠はウィルス活性化したマウスＴ細胞また
はＴｉ１ｌｌ胞クローンを、インフルエンザ〔ルカチャ
（Ｌｕｋａｃｈｅｒ、八、巳、）ほか、１９３４、ジャ
ーナル・・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ
。

ＥＸｌｌ、λ１ｅｄ）、１６０：８１４）、リンパ球性
脈絡骨髄膵炎ウィルス〔ビルネほか（Ｂｙｒｎｅ、　Ｊ
、　Ｒ，ａｎｄｏｌｄｓｔｏｎｅ、　Ｍ、Ｂ、Ａ、）　
、１９８４、ジャーナル・オブ・ピロロジー（Ｊ、Ｖｉ
ｒｏｌ）、５１：６８２）、単純ヘルペスウィルス（Ｈ
ＳＶ）Ｃチーセン（Ｌａｒｓｅｎ、　Ｈ，Ｌ、）　　ほ
か、１９８４、ジャーナル・オブ・ビｏロジー（Ｊ、Ｖ
ｉｒｏｌ、）　、５０　：　５６　；セチ（Ｓｅｔｈｉ
、　Ｋ、　Ｋ、）ほか、１９８３、ジャーナル・オブ・
ピロロジー（Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、）　、６４　：　４４
３）またはマウス白血病ウィルス〔チーバー（ｃｈｅｅ
ｖｅｒ。

Ｍ、＾、）ほか、１９８６、ジャーナル・オブ・、エク
スペリメンタル・メディシン（Ｊ、巳ｘｐ、　、　Ｍｅ
ｄ、　）、１６３：１１（１１））のようなウィルスに
より起される戻患または死に対する耐性を養子移入でき
る所見に基く。さらに、インターロイキン２　　（ＩＬ
−２）で非特異的に活性化され、リンフォカイン活性化
キラー（ＬＡＫ）細胞として示されるマウスリンパ球は
種々のマウス腫瘍からの転移の除去に免疫療法的に有用
であることが示された〔ローゼンヘルグ（Ｒｏｓｅｎｂ
ｅｒｇ、　Ｓ、　Ａ、）、１９８５、Ｊ。

Ｎａｔｌ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｄｉｓｔ；、　　７５　：
　５９５　：マズンダーほか（Ｍａｚｕｍｄｅｒ、　Ａ
、ａｎｄ　Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ、　ｌ　９３４、ジャー
ナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシ：／（Ｊ、
　　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、）、１５９：２２５：］。

ウィルスまたはウィルス抗原で末梢血リンパ球（ＰＢＬ
）を刺激することによりヒトのＴヘルパーおよび（また
は）細胞毒性Ｔ細胞を活性化することもまた可能であっ
た。例えば、ＨＳＶ　（セチ（Ｓｅｔｈｉ、　Ｋ、　Ｋ
、）ほか、１９８０、ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２
７０：５２９；ヤスカワほか（Ｙａｓｕｋａｗａ。

Ｍ、　ａｎｄ　２ａｒｌｉｎｇ、　Ｊ、）　、１９８４
、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ、）　、１３３　：４２２〕またはインフルエンザ
ウィルス〔ビディ７ン（Ｂｉｄｄｉｓｏｎ、　Ｂ、Ｗ、
）　ほか、１９８１、ジャーナル・オブ・イＡ１０ジー
（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　、１２２：６６０；マクマ
イクルほか（ＭｃＭｉｃｈａｅｌ、　Ａ、　Ｊ、　ａｎ
ｄＡｓｋｏｎａｓ、　Ｂ、八、）、１９７９、ユーロビ
アン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（巳ｕｒ、Ｊ、
［ｍｍｕｎｏｌ）、５ニア（１５）を特異的に認識する
ヒ）Ｔ細胞が試験管内で生成された。Ｈ３Ｖ系において
精製ＨＳＶ　。

クローン化し哺乳動物中に発現されたＨ３Ｖａタンパク
質、および個々のＨ５ＶペプチトがＨ５Ｖ特異性と）Ｔ
細胞を活性化することが報告された〔ザーリング（Ｚａ
ｒｌｉｎｇ、　Ｊ、　Ｍ、）ほか、１９８６、ジャーナ
ル・オブ・イムノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、
１３６：４６６９；デフレイタス（ＤｅＦｒｉｔａｓ、
　Ｅ。

Ｃ，）ほか、１９８５、プロシーディングズ・オブ・ザ
・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏ
ｃ、　　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、）　
　［ＩＳＡ　　、　　８２　　：３４２５：］　　。

試験管内感作ウウィルス活性化Ｔ細胞の使用は報告され
なかったけれども、最近、ヒトＬＡＫ細胞が癌患者にＩ
Ｌ−２とともに接種された浸種々の腫瘍の退行を生ずる
ことができることが報告された〔ローセ°ンベルグ（Ｒ
ｏｓｅｎｂｅｒｇ、　Ｓ、八、）ほか、１９８５、ニュ
ー・イングランド・ジャーナル・オブ・メデイシン−（
Ｎ、Ｅｎｇ、Ｊ、　Ｍｅｄ、）　、３１３：１４８５）
。しかしＬＡＫ細胞はまた宿主病に対する移植片に関連
すると同様の副作用を生ずることができる。これらの副
作用は部分的には正常リンパ球が、癌細胞に加えて、Ｌ
ＡＫ細胞により殺されることができる最近の観察により
説明することができる〔タンデル（Ｓｏｎｄｅｌ、　Ｐ
ｏＭ、）　ほか、１９８５、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ）、２２８：１１８５〕。

（２，３，１）組換え体ワクシニアウィルスによる研究異質ウィルスの抗原を発現する組換え体ツクシニアウイ
ルスが実験動物中で異質ウィルスによる攻撃に対する耐
性を誘導することが認められた。

例にはＨ３Ｖ糖タンパク質〔フレマー（ｃｒｅｍｅｒ。

Ｋ、Ｊ、）ほか、１９８５、サイエンｘ　（Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ）、２２８：１９８５Ｌ狂犬病ウィルス表面抗原〔
ブランコラ（Ｂｌａｎｃｏｕ、　Ｊ、）　　ほか、１９
８６、ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、３２２：３７３）
、およびインフルエンザウィルス核タンパク質〔スミス
（Ｓｍｉｔｈ。

Ｇ、Ｌ、）ほか、プロシーディングズ・オブ・ザ°ナシ
ョナル・アカデミ−・オブサイエンス）ＵＳＡ。

８０ニア１５５；ニーデル（Ｙｅｗｄｅｌｌ、　Ｊ、　
Ｗ、）ほか、１９８５、プロシーディングズ・オブ・ザ
・ナショナノいアカデミ−・オブサイエンス（Ｐｒｏｃ
、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、）　、ＵＳＡ、　８２　：　１７
８５）が含まれる。インフルエンザウィルス核タンパク
質を発現する組換え体ワクシニアウィルスは免疫処置マ
ウス中でインフルエンザウィルスに特異的なＴ細胞仲介
免疫を誘導することが報告された〔ベニンク（Ｂｅｎｎ
ｉｎｋ、　Ｊ、Ｒ，）ほか、１９８４、ネーチャー（Ｎ
ａｔｕｒｅ）、３１１：５７８Ｌさらに、インフルエン
ザウィルス核タンパク質を発現する組換え体ワクシニア
ウィルスで感染した標的細胞を用いてインフルエンザウ
ィルス核タンパク質がインフルエンザ血清反応陽性供血
者からの細胞毒性Ｔｉ１ｌｌ胞によりＨＪされることが
示された〔マクマイクル（１，ｌｃ！Ｊｉｃｈａｅｌ、
　Ａ、Ｊ、）ほか、１９８６、ジャーナル・オブ・ゼネ
ラル・ビｏｏジー（Ｊ、　Ｇｅｎ、Ｖｉｒｏｌ、）。

６７：７１９：］。同様に我々は最近Ｈ３Ｖ糖タンパク
質を発現する組換え体ワクシニアウィルスで感染したヒ
ト標的細胞がＥ（ＳＶに特異的なヒトＣＴＬクローンに
より１７１ｍされることを認めた〔ジーリング（Ｚａｒ
ｌｉｎｇ、　Ｊ、　Ｍ、）ほか、１９８６、ジャーナル
・オブ・ピロロジー（Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、）、５９：５０
６）。我々はまたＨ３Ｖ糖タンパク質を発現する組換え
体ワクシニアウィルスで、Ｈ８ｖに感染したヒトのＢＰ
Ｌを刺激することによりＨ３Ｖ感染細胞に特異的なヒ）
Ｔｉ［１胞クローンを生成させることができた〔ジーリ
ング（Ｚａｒｌｉｎｇ）ほか、ジャーナル・オブ・ピロ
ロジー（Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、）前掲〕。

（３）発明の概要本発明はエイズ関連障害の養子免疫療法においてＴ　＋
Ｊンバ球の試験管内活性化を用いる方法を指向する。本
発明のリンパ球はエイズまたはエイズ関連コンプレック
ス（ＡＲＣ）患者自体および、エイズウィルスによる自
然暴露によるかまたはエイズウィルス関連エピトープ類
による接種により免疫されたＨＬＡ適合性供血者を含み
、それらに限定されないエイズウィルス抗原に免疫系が
暴露された個体から分離することができる。該リン／（
球はエイズウィルスのエピトープ（類）に関連するペプ
チトまたはタンパク質に暴露することにより試験内で１
ｌｉ１１激される。これらのエピトープは組換え体ベク
ター例えばウィルスを含む組成物中に、あるいは天然、
組換えまたは合成のいずれでも精製したタンパク質また
はペプチト中に含まれることができる。

本発明は患者に接種する前に活性化したＴ　リンパ球、
および細胞培養中の活性化したリンノく球の膨張により
エイズウィルスエピトープ類に対する反応性の実証に備
える。エイズウィルス反応性Ｔ細胞による患者の接種は
他の治療規制例えばＩＬ−２、インターフェロン、抗Ｌ
ＡＶ／ＨＴＬＶＩＩＩ抗体、抗ウィルス薬、骨髄移植な
どを伴うことができ、または伴わないことができる。

非常に最近には、細胞毒性Ｔ細胞（ｃＴＬ）およびリン
フォカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞によるＬＡＶ／
ＨＴＬＶＩＩＩ感染リン／−，８球の溶解す記載された
〔ケーニッヒ（Ｋｏｅｎｉｇ、　Ｓ、）ほか、アブスト
ラクト、コミュニケーション（ｃｏｍｍｕｎ　１ｃａｔ
　１ｏｎ）、２６：Ｕ３ａ、エイズに関する国際会１（
Ｉｎｔｅｒ−ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ
　ｏｎ　Ａ１［ＩＳ）、１９８６年６月２３〜２５日、
バリー、フランス〕。エイズウィルス血清反応陽性固体
中のＬＡＶ／ＨＴＬＶＩ感染標的に対する細胞毒性の存
在に対する証拠が見出された。さらにクロウ力（Ｋｒｏ
ｗｋａ）はか〔アブストラクト、コミ３ニケーシヨン（
ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）　　３　Ｑ：Ｓ３ｅ、ｚ
イズに関する国際会１％（Ｉｎｔｅｒｎａ’ｔｉｏｎａ
ｌＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ　ＡＩＤＳ）、１９８６
年６月２３〜２５日、バリー、フランス〕は若干のエイ
ズウィルス血清反応陽性供血者末梢血リンパ球が組換え
体エイズウィルス抗原に応答して堆層および（または）
ＩＬ−２の放出を生ずる証拠を提供した。

本発明によるエイズウィルス感染の免疫療法に対するエ
イズウィルス特異性Ｔ細胞の使用の利点は、これらのＴ
細胞がウィルス感染細胞を認識するがしかし正常細胞を
認識しないことであろう。

ＩＬ−２中のヒ）Ｔｉ胞の連続成長を含め、浦乳動物細
胞の大規模培養に対する工学の最近の進歩〔フェダーほ
か（Ｆｅｄｅｒ、　Ｊ、ａｎｄ　Ｔｏｌｂｅｒｔ、　Ｉ
Ｑ、）、１９８３、サイエンティフィック・アメリカン
（Ｓｃｉ、　Ａｍｅｒｉｃａｎ）　、２４８　：　３６
　；アルトシニラ−（Ａｒｔｓｃｈｕｌｌｅｒ、　Ｇ、
　Ｌ、）ほか、１９８６、バイオテクノロジー・アンド
・バイオエンジニアリング（Ｂｉｏｔｅｃｈ、　ａｎｄ
　Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）、２８：６４６）は
エイズウィルスに感染した固体を治療するための養子免
疫治療法の研究を可能にする。

本発明の特定態様において、エイズウィルスエンベロー
プ決定基を発現する組換え体ウィルスで免疫処冒したマ
カクおよびチンパンジーから分離したリンパ球、並びに
エイズウィルスに対し血清反応陽性である患者から得ら
れたヒ）　リンパ球を試験管内でエイズウィルスエンベ
ロープエピトープ類および（または）エイズウィルスエ
ンベロープエピトープ類を発現する組換え体ワクシニア
ウィルスにａ露して増殖を誘導した。刺激されたマカク
リンパ球は刺激後ＩＬ−２を生ずるＴ細胞であると示さ
れた。さらにヘルパーまたは細胞障害活性のＴ細胞がチ
ンパンジー中に生成された。

（４）発明の詳細な説明本発明は患者に接種する前のリンパ球のエイズウィルス
関連エピトープ（類）による試験管内活性化を含む、エ
イズウィルス感染患者の免疫療法処置方法を指向する。

活性化したＴ細胞を細胞培養中で膨張させ、養子免疫療
法の形態として単独または他の治療規制と組合せてエイ
ズウィルスに感染した患者に接種する。末梢血リンパ球
（ＰＢＬ）がエイズウィルス感染細胞を特異的に認識す
ることができ、該ウィルスまたはウィルス感染細胞の除
去に寄与することができるがしかし正常細胞を除去しな
いようにそれを特異的に活性化する方法が記載される。

そのように活性化したＰＢＬはそれらの効果を、ウィル
ス感染細胞に対する直接的殺作用により、あるいは感染
性ウィルスの生成を抑制でき、また（または）他の細胞
をウィルス感染細胞に対する役作用に対して活性化でき
るリンフォカインの生成により仲介することができる。

本発明の方法は単に説明のために次の段階：（ａ）Ｔリ
ンパ球の分離、試験管内活性化、および膨張、ら）特異
的細胞仲介免疫の誘導の実証、並びに（ｃ）活性化した
Ｔ細胞の患者中への接種、に分けることができる。

論議を平明にするために、方法は主にエイズウィルスエ
ンベロープ糖タンパク質を発現する組換え体ワクシニア
ウィルスの使用に関して論議される。しかし、同一方法
は異なるエイズウィルス関連エピトープ類例えばｇａｇ
タンパク質を発現する他の組換え体ウィルスの使用、あ
るいは他の組換えＤＮＡ工学によるかまたは化学合成に
より生成したかあるいはウィルス粒子、患者の血液また
は血？青などから精製したペプチトまたはタンパク質の
使用のために類似の方法で適用することができる。

（４，１）！Ｊンパ球の分離、活性化、および膨張試験
管内活性化に用いるリンパ球はエイズウィルスエピトー
プ類を指向するＴライ２球である。これらのＴ細胞はエ
イズウィルス関連エピトープ類に暴露された、かつヒト
白血球抗原（類”）（ＨＬＡ）に対し適合性である個体
から末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を分離することにより得
ることができる。そのような適当な個体には患者自身（
エイズまたはエイズ関連コンプレックス、ＡＲＣ，を有
することができる）、あるいはエイズウィルスに対する
自然暴露により、またはエイズウィルス関連エピトープ
類による接種によりエイズウィルス関連エピトープ類に
暴露されたＨＬＡ適合供血者が含まれる。

本発明はＴリンパ球の試験管内刺激におけるエイズウィ
ルスのエピトープ（類）に関連するペプチトまたはタン
パク質の使用を指向する。

これらのペプチトまたはタンパク質には公知の種々の技
術によりエイズウィルスウィルス粒子、患者血液、血清
などから精製できる天然由来分子が含まれる。例えば、
ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩＩＩエンベロープ糖タンパク質は破
壊ＬＡＶ／ＨＴＬＶ■からレンチル（ｌｅｎｔｉｌ）レ
クチンクロマトグラフィーにより精製することができる
。他の可能な精製には他の型のクロマトグラフィー（例
えばイオン交換、アフィニティー、サイジングカラム）
、遠心分離、示差溶解度（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｓ
ｏｌｕｂｉｌｉｔｙ）　、免疫沈降および分取用電気泳
動、またはタンパク質の精製のための他の標準技術が含
まれるが、しかしそれらに限定されない。

刺激に用いるペプチトまたはタンパク質はまた組換え体
ウィルスまたは組換えＤＮＡ技術の他の生成物から精製
することができる。本発明に用いるエイズウィルスエピ
トープ（類）に関連するペプチトまたはタンパク質を宿
主細胞発現ベクター系中に生成させ、それから分離する
ことができ、これらの系には例えば適当な組換え体ウィ
ルスで感染した動物または昆虫細胞培養−組換えプラス
ミド、コスミドまたはファージでトランスフェクトした
微生物例えば細菌；および組換え体プラスミドで形質転
換した酵母が含まれる。さらに、エイズ関連エピトープ
類を含む組換え体微生物自体を用いることができる。

これらの微生物はエピトープを含み、その通常の状態で
、あるいは他の細胞例えばマクロファージによるかまた
はエイズ関連エピトープを裸にするような処理（例えば
変性剤、界面活性剤など）による抗原処理後にそれがＴ
　Ｕンバ球に暴露されるであろう。あるいはエイズウィ
ルス関連エピトープ類を含むペプチトおよびタンパク質
を化学的に合成し、リンパ球の刺激に用いることができ
る。本発明により使用できるエイズウィルス関連エピト
ープ類の例には、同時係属米国特許出願第７７９．９０
９号（１９８５年９月２５日提出）、第８４２．９８４
号（１９８６年３月２７日提出）および１９８６年９月
９日提出の代理人整理番号５６２’４−０２６に相当す
る米国出願に開示されたものが含まれるが、しかしそれ
らに限定されず、前記出願はここに参照される。

刺激したＴ細胞の増殖を増強する種々の公知の方法を用
いることができ、それは本発明の範囲にある。例えばＴ
細胞上のＴｐ６７またはＴｐ４４抗原を認識する抗体ま
たはそれらの誘導分子は活性化したＴ細胞の増殖を増大
することが示され〔レドベタ−（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ、
　Ｊ、　Ａ、）ほか、１９８５、ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　）、１３５：２
３３１３、試験管内活性化中に増殖の増大に用いること
ができる。インターフェロンは細胞障害性Ｔ細胞の生成
を増大することが認められ〔ジーリング（Ｚａｒｌｉｎ
ｇ）　ほか、１９７８、イムノロジー（Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ）、１２１：２（１１）２）、試験管内活性化中
にエイズウィルス感染細胞に対する細胞障害性Ｔ細胞の
生成の増大に用いることができる。

次いで活性化したＴ細胞を細胞培養中で膨張させること
ができる。この膨張はエイズウィルス関連エピトープ類
でＩＬ−２とともにまたはそれなしでＴ細胞を繰返し刺
激することにより、またはＩＬ−２単独を含む培地中の
成長により達成することができる。Ｔ細胞培養の他の方
法（例えば他のリンフォカイン、成長因子、または他の
生物活性分子とともに）もまた本発明の範囲内にある。

試験管内でＴ細胞の成長および維持を助成することがで
きるＴ細胞抗原例えばＴｐ６７またはＴｐ４４抗原を規
定する抗体または抗体フラグメント〔レドベター（Ｌｅ
ｄｂｅｔｔｅｒ。

Ｊ、Ａ、）ほか、１９８５、ジャーナル・オブ・イムノ
ロジー（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、１３５：２３：Ｈ〕
の使用もまた本発明の範囲内にある。

次にＰＢＬの分離、活性化右よび膨張の一般法を主にエ
イズウィルスエンベロープエビ）−プ顛を含む組換え体
ワクシニアウィルスの使用に関して詳記する。しかし本
発明は前記のように種々の形態におけるエイズウィルス
関連エピトープ類の使用に備え、これらの変動並びに公
知の種々の操作を適合させるための方法の変更および適
応は本発明の範囲内にある。

ヘパリン化静脈血約２（１１）−を静脈穿刺により抜出
し、ＰＢＬをフィコール・ハイパツク勾配遠心分離によ
り分離し、供血者のリンパ球数に依存し約１〜５Ｘ１０
’　ＰＢＬを得る。

ＰＢＬをリン酸塩ａｔ食塩水中で洗浄し、エイズ血清反
応陰性供血者からのプールした熱不活性化正常ヒト血清
１０％を含むＲＰＭ１１６４０培地中１．：約２　Ｘ　
１０’　／ｄに懸濁させる、この培地は「完全培地」と
して示される。細胞を７５０ｍ１！組織培養フラスコに
入れ、それにエイズウィルスエピトープを発現する紫外
（ＵＶ）線不活性化組換え体ウィルス例えばエイズエピ
トープを発現する組換え体ワクシニアウィルス（ＵＶ線
不活性化前ｌＸｌ０６〜ｌＸｌ０’プラーク形成単位／
ｒｎＩり、あるいは一般に１〜１０μｇ／−の範囲のエ
イズウィルスエピトープ関連タンパク質またはペプチト
を加える。６〜７日後、再び同濃度の組換え体ウィルス
、タンパク質またはペプチトを用いてリンパ球を刺激す
る。３日後遠心分離し、再に新鮮な完全培地中に懸濁さ
せ、それにエンドトキシンを含まない組換え体ヒトＩＬ
−２（約１（１１）単位のＩＬ−２毎−）を加える。次
いで細胞を回転瓶に約２Ｘ１．０’細抱／ｒｎ１に播種
し、回転瓶を０．５〜１回転毎分で連続的に回転する。

細胞が約ｌＸｌ０６／ａｌｌ！の密度に達したとき再び
細胞を２Ｘ１０’細胞／ｍｌに播種する。あるいは完全
培地中の約１〜３Ｘ１０８細胞をＩＬ−２とともに中空
ファイバー細胞培養系例えばアクシス）　（Ａｃｕｓｙ
ｓｔ）　　Ｐ〔エンドトロニクス（［Ｅｎｄｏｔｒｏｎ
ｉｃｓ、　Ｃｏｏｎ　Ｒａｐｉｄｓ。

Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）　ＷＡ：ｌ中に播種し、その中テ
リンパ球を、［、−２を有する新鮮培地中に連続的に浸
す。

回転瓶または中空ファイバー細胞培養系中の細胞の全数
が約１×１０Ｉ０細胞に達するとそれをコニカルボトル
中で遠心分離し、ペレットを、カルシウム、マグネシウ
ムまたはフェノールレッドを含まないハンクス均衡塩類
溶液で２回洗浄する。次いで細胞を再び５％正常ヒト血
清アルブミンおよび７５．（１１）０単位の組換え体ヒ
）ＩＬ−２を含む０．９％塩化ナトリウム２（１１）ｍ
１からなるインフュージョン培地中に懸濁させる。次い
で細胞懸濁液を無菌１１０メツシニを通して濾過し、フ
ェンウオル（Ｆｅｎｗａｌｌ）　　トランスファーバッ
クに入れる。細胞の試料を、真菌、好気性および嫌気性
菌、並びにマイコプラズマを含めて微生物の存在につい
て試験する。細胞の試料を、特異的免疫の透導を実証す
るため、下記のように免疫学的試験のために保持する。

４．２〉　エイズウィルス関連エピトープ類に対する特
異的細胞仲介免疫の実証免疫療法に用いる前に、ＦＪ　激したリンパ球をエイズ
ウィルス感染細胞に対する細胞仲介免疫反応性について
試験する。ＰＢＬを、エイズウィルス関連エピトープ（
類）を発現する組換え体ベクターあるいはそのようなエ
ピトープ（類）を含むタンパク質またはペプチトによる
刺激後フルオレセインを結合したＴおよびＢ細胞抗原に
対する単クローン性抗体を用いて免疫蛍光分析によりＴ
およびＢ細胞マーカーの細胞表面発現に関して試験する
ことができる。そのような検定の例は後に（５，２）に
記載される。公知Ｔ細胞マーカー例えばＣＤ４およびＣ
Ｄ８抗原の発現が活性化したリンパ球のアイデンティテ
ィ−をＴ細胞として確認させる。

次いで活性化したＴ細胞をエイズウィルスエピトープ類
に対する反応性について試験する。

これは特異的細胞仲介免疫の検定に対する技術に知られ
た若干の方法のいずれかにより達成することができた。

例えば、試験管内で患者の自己エイズウィルス感染細胞
を殺す刺激したＴ細胞の能力を測定する細胞毒性検定は
、ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩ、エイズ関連エピトープ類発現組
換え体ワクシニアウィルス、親ワクシニアウィルスで感
染した”Ｃｒ標識細胞例えばフィトヘムダルチニン活性
化Ｔ１１１胞、および非感染標識細胞とともにリンパ球
をインキュベートし、溶解による”Ｃｒ放出を測定する
ことにより達成ることができる。そのような検定は既に
記載された〔例えばデーリング（Ｚａｒｌｉｎｇ、　Ｊ
、　Ｍ、）ほか、１９８６、ジャーナル・オブ・イムノ
ロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｍｕｎｏｌ、）　１３６　：　４
６６９参照〕。活性化したＰＢＬはまた刺激後３Ｈチミ
ジン取込みにより示されるその増殖能力の測定により、
および（または）外因性ＩＬ−２の非存在下刺激したと
きのリンフォカイン例えばＩＬ−２またはインターフェ
ロンを生ずる能力の測定によりＴヘルパー細胞活性につ
いて試験することができた。そのような検定の例は後に
（５，１）、（５，３）、（６）および（７）中の本発
明の特定態様中に記載される。公知の特異細胞仲介免疫
の他の検定例えば白血球付着抑制検定〔トング７　ン（
Ｔｈｏｍｐｓｏｎ、　　Ｄ、　　Ｍ、Ｐ、）　　（編）
、１９８２、「白血球付着抑制試験による免疫状態の評
価（Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｅ　５ｔ
ａｔｕｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｌｅｕｋｏ−ｃｙｔｏ　八ｄ
ｈｅｒｅｎｃｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　Ｔｅ５ｔ）　
Ｊ　、アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒ
ｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）〕もまた使用することが
できる。

（４，３）活性化したＴ細胞の患者中への接種下記操作
は本発明の方法の部分の一般化した説明である。技術的
に知られた種々の操作を適合させる変更および適用は本
発明の範囲内にある。

活性化したＴ細胞の接種は好ましぐは全身投与による。

Ｔ細胞は静脈内に中心静脈カテーテルを通してまたは大
末梢静脈中へ投与することができる。投与の他の方法（
例えば動脈中−１の直接注入）は本発明の範囲内である
。約１×１０６細胞を初めに注入し、残部を次の数時間
にわたり注入する。若干の患者において、組換え体ヒ）
ＩＬ−２を用いることができ、Ｔ細胞注入のときに始め
て８時間毎に静脈内に注入されよう。ＩＬ−２の注入は
好ましくは、前に癌患者に用いられたように１０．（１
１）０〜１（１１）．（１１）０車位／ｋｇ体重の用量
であろう〔ロゼンベルグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ、Ｓ、　
Ａ、）ほか、１９８５、ニュー・イングランド・ジャー
ナル・オブ・メディシン（Ｎ、　Ｂｎｇｌ、　Ｊ、　！
、！ｅｄ、）、３１３；１４８５〕。

ＩＬ−２の注入は患者に許容されれば、活性化したＴ細
胞の注入後数日間続けられよう。

活性化したＴ細胞の接種による治療は単独で、あるいは
ＩＬ−２（前記のように）、インターフェロン、エイズ
ウィルス複製を抑制する薬剤またはエイズウィルスに対
する単クローン性抗体の投与、あるいは健康ＨＬＡ適合
供与者からの骨髄移植の投与を含み、しかしそれらに限
定されない他の治療規制とともに用いることができる。

患者は血液およびリンパ節中のライスル抗原発現単核リ
ンパの除去の証拠についてモニターすることができ、リ
ンパ節障害、日和見感染の発生、カポジ肉腫並びに他の
ＡＲＣおよびエイズ関連障害に対する長期臨床効果を追
求することができる。

次の実施例において、エイズライスルに暴露されたヒト
またはここに参照される同時係属親出願簗７７９．９０
９号（１９８５年９月２５日提出）；第８４２．９８４
号（１９８６年３月２７日提出）；代理人整理番号５６
２４−０２６に相当する米国出願（１９８６年９月９日
提出）中に一層完全に記載された組成物で免疫処置した
非ヒト霊長動物から得られたＰＢＬを用いてＴ細胞の試
験管内活性化が実証された。

（５）　　Ｌ　Ａ　Ｖ　／　ＨＴ　Ｌ　Ｖ　ＩＩ［に特
異的なマカクＴ細胞の試験管内活性化本発明のこの実施態様において、ＬＡＶ／１（ＴＬＶＩ
ＩＩのエンベロープ糖タンパク質を発現する組換え体ウ
ィルスで免疫処置したカニクイザル０．１ａｃａｃａｆ
ａｓｉｃｕｌａｒｉｓ）　（７カク）中のＬＡＶ／ＨＴ
ＬＶに特異的なＴ細胞の試験管中白活性化が記載される
。

（５，１）接種したマヵクの末梢血リンパ球はＬＡＶ／
ＨＴＬＶＩＩＩによる刺激に応答しして増殖する８匹ノマカクを、Ｌ　Ａ　Ｖ　／　ＨＴ　Ｌ　Ｖ　ｍ　
（１）　ｘ　ンベロープ糖タンパクｔｇｐ４１およヒｇ
ｐ１１゜を発現する組換え体ワクシニアウィルス（ｖ−
ｅｎＶ５　）または単純ヘルペス糖タンパク質Ｄ−１を
発現するワクシニア組換え体ウィルス（ｖ−ＨＳＶｇＤ
ｌ）で免疫処置した；前記組換え体ウィルスはともにワ
クシニアウィルスのｗＲ株で構築した。免疫処置は背の
正中線上の局所乱切により組換え体ウィルス２　Ｘ　１
０’　ｔタハ２　Ｘ　１０’ｐｆｕ（プラーク形成単位
）で皮肉に達成し、次に１２２週後匹のマヵクに第２皮
内免疫処置した。

第２免疫処置の４週後に免疫処置マヵクのヘパリン化血
液からフィコール・ハイパツク遠心分離により末梢血リ
ンパ球（ＰＢＬ）を分離した。

ＰＢＬはまた非免疫処置マカク、およびｖ　−ｅｎｖ５
で１回のみ接種したマカク８１から分離した。

ＰＢＬを１０％熱不活性化正常ヒト血清補足ＲＰ　Ｍ　
Ｉ　１６４０培地〔キブ：Ｉ　（Ｇ　Ｉ　ＢＣＯ，Ｇｒ
ａｎｄＩｓｌｅ、　ＮＹ）製〕中に懸濁させた。最終容
積０．１艷の培地中ｌＸ１０’ＰＢＬを丸底９６ウエル
プレートのウェルに入れた。各ウェルに、紫外（ＵＶ）
線不活性化ｖ−ｅｎｖ５を含む０．１ｍ１ｌ！培地（Ｕ
Ｖ不活性化前Ｉ　Ｘ　１０’　ｐｆｕ　／ｉｆりまたは
ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩ感染ＣＥＭｍ胞、ＨＬＡＤＲ陰性Ｔ
細胞白血病系、の上澄みからスクロース勾配遠心分離２
サイクルにより精製した非破壊ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩＩＩ
　’（１μｇ／ｍｌ、約１×１０’ＴＣＩＤｓ。、５０
％組織培養感染量）を加えた。刺激の６日後、各ウェル
のＰＢＬを１μＣ１コＨ−ＴｄＲ（’Ｈチミジン、二ニ
ー、・イングランド・エコクリア（Ｎｅｖ　Ｅｎｇｌａ
ｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ。

Ｂｏｓｔｏｎ、　ＭＡ）製〕で６時間標識し、細胞を回
収し、取込まれた’Ｈ−Ｔ’ｄＲｃｐｍを液体シンチレ
ーションカウンティングにより測定した。結果は表■に
示される。取込まれた”Ｈ−ＴｄＲｃｅｍについて示し
た値は４反復ウェルの平均値である。刺激指数は刺激さ
れた細胞に取込まれた’Ｈ−ＴｄＲｃｐｍを非刺激細胞
中に取込まれたｃｐｍにより除することにより計算した
。

表　　　ＩＬＡＶ　／　ＨＴＬＶ　ＩＩＩエンベロープ糖タンパク
質発現ワクシニア組換え体ウィルスによる免疫処置後の
７カクのＰＢＬのＬＡＶ／ＨＴＬＶ　Ｉ［［誘導増殖応
答６７　　ｖ−ｅｎｖ５　１，５８６　７．４６５　４
．７　６０．４１５　３ｇ、１６８　　ｖ−ｅｎｖ５　
２，２４５　９．０７５　４．０　２８，６３８　１２
．８７４　　ｖ−ｅｎｖ５　１，５Ｂ５　４．７３２　
３．０　２１．４８７　１３．６７５　　ｖ−ｅｎｖ５
　　５ｇ１　　Ｂ、６４５　１４．９　３７．８４７　
１４．１７６　　ｖ−ｅｎｖ５　２．４７９　５．９８
７　２．５　３６，６５７．　１４．８８０　　ｖ−ｅ
ｎｖ５　１．０？？　　１３．９２２　１２．９　２４
．７５２　２３，０８１　　ｖ−ｅｎｖ５　　９６５　
３．９８５　４．１　４０．５７２　４２．０８２　　
ｖ−ｅｎｖ５　２，５８１　８．５８０　３．３　４６
．８４７　１８．１７３　　Ｖ−Ｈ３ＶｇＤｌ　　６１
２　　　５５３　１．０−　５６．２１７　９１．９２
６　　　なし　　２．９１１　１．８２２　１．０−　
２．２４０　　１．０−２７　　　なし　　１．２２８
　１．０？２　１．０−　２．５３２　　２．０末　取
込まれた３Ｈ−ＴｄＲ，ｃｐｍ零本　刺激指数表Ｉに示されるように、ｖ−ｅｎｖ５で免疫処置した８
匹のマカクすべてのＰＢＬはＬＡＶ／ＨＴＬＶ■による
刺激の６日後に非刺ＩＰＢＬより２．５〜１４．９倍も
多い３Ｈチミジンを取込んだ。これらのすべてのマカク
およびＶ　−Ｈ３ＶｇＤ１組換え体ウィルスで免疫処置
したマカク７３のＰＢＬはｖ　−ｅｎｖ５　（表■）ま
タハ親ワクシニアウィルスによる刺激後に非刺激ＰＢＬ
より１２．８〜９１．９倍も多い３Ｈチミジンを取込ん
だ。しかし、非免疫処置マカク２６および２７またはｖ
−Ｈ３ＶｇＤ１免疫処ｉマカク７３のＰＢＬは種々の濃
度のＬＡＶ／ＨＴＬＶＩ［Ｉによる刺激後第６日（表Ｉ
）あるいは第５日または第７日においてＬＡＶ／ＨＴＬ
Ｖ■による刺激に応答して増殖をしなかった。従って、
ｖ−ｅｎｖ５による免疫処置はＬＡＶ／ＨＴＬＶＩ［Ｉ
に応答して増殖するＴ細胞を特異的に誘導する。

（５，２）　ｖ−ｅｎｖ５またはＬＡＶ／ＨＴＬＶＩＩ
Ｉにより活性化された末梢血リンパ球はＴ細胞であるｖ−ｅｎｖ５またはＬＡＶ／ＨＴＬＶＩ［Ｉにより活性
化されたＰＢＬがＴリンパ球を含むことを確認するため
に、ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩ［ＩまたはＶ−ｅｎｖ５で６日
間刺激した免疫処置マカクのＰＢＬを二色免疫螢光法に
よりＩＬ−２レセプター（活性化したＴ細胞および活性
化したＢ細胞上に存在する）、ＣＤ４およびＣＤ８抗原
（Ｔ細胞上に存在する）、およびＣＤ２０　（Ｂｐ　３
５）抗原（Ｂ細胞上に存在する）について試験した。

これは次の操作により達成された：組換え体ワクシニアウィルスｖ　−ｅｎｖ５で免疫処置
し、追加刺激した後マカク４７および８０から分離した
ＰＢＬを培地単独中で培養するかあるいは前記（５，１
）に記載したようにＶ　−ｅｎｖ５またはＬＡＶ／ＨＴ
ＬＶＩ［［で６日間制激した。次いでＰＢＬを二色免疫
螢光法により、°先にマカクＰＢＬと反応することが認
められた単クローン性抗体〔クラーク（ｃ１ａｒｋ、　
Ｂ、　Ａ、）ほか、１９８３、イムノシネティックス（
Ｉｍｍｕｎｏ−ｇｅｎｅｔｉｃｓ）　、１８　：　５９
９〜６１５〕を用いてインターロイキンレセプター（Ｉ
Ｌ−２Ｒ）、Ｔ細胞関連ＣＤ４およびＣＤ８抗原、およ
びＢ細胞関連ＣＤ２０　（Ｂｐ　３５）抗原の発現につ
いて試験した。ＰＢＬは、インターロイキン２レセプタ
ー（ＩＬ−２Ｒ）に対するフィコエリトリン結合単りロ
ーン性抗体２Ａ３〔ベクトン・ディキンタン社（Ｂｅｃ
ｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｉ＋、　　Ｉｎｃ、。

Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｖｉｅｗ、　ＣＡ）製〕およびＣＤ
２０に対するフルオレセイン結合単りローン性抗体ＩＦ
５〔クラーク　（ｃ１ａｒｋ、ε、Ａ。）ほか、１９８
５、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミ−・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、）　　ＵＳ　Ａ、　８２　：　１
７６６〜１７７０）〔シネティック・システムズ社（Ｇ
ｅｎｅｔｉｃＳｙｓｔｅｍｓ　Ｃｏｒｐ、、　５ｅａｔ
ｔｌｅ、　ＷＡ）製コ、ＣＤ８に対する　Ｇ１０−１〔
レドベター（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ。

Ｊ、Ａ、）ほか、１９８５、ジャーナル・オブ・イＡ１
０ジー（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、１３４：４２５０〜
４２５４）［：シネティック・システムズ社（Ｇｅｎｅ
ｔｉｃ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　Ｃａｒｐ、、　　５ｅａｔｔ
ｌｅ、　　ＷＡ）製〕、またはＣＤ４に対するＴ４ａ［
オルト・ジアグノスティクス（Ｏｒｔｈｏ　Ｄｉａｇｎ
ｏｓｔｉｃｓ、　Ｒａｒｉｔａｎ。

ＮＪ）製〕で同時に染色した。抗体は、改良ＦＡｃＳ■
ソーター〔ベクトン・ディキンタン（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄ
ｉｃｋｉｎｓｏｎ、　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｖｉｅｗ、　
ＣＡ）製〕で流動微小螢光測定より分析したリンパ球上
の滴定により予約決定した飽和濃度で用いた。定量二色
分析は先に詳記されたように行なった〔レドベター−（
Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ、　Ｊ、　Ａ、）ほか、１９８４、
「免疫遺伝学および組織適合性の展望（Ｐｅｒｓｐｅｃ
ｔｉｖｅｓｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎ
ｄ　Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ）　Ｊ、６
巻、リンパ球表面抗原（Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　５ｕｒ
ｆａｃｅ＾ｎｔ１ｇｅｎｓ〔ヘイドル（Ｅ、Ｈｅ１ｄｌ
）　編）　、アメリカン・ソサイエティー・オブ・ヒス
トコンパティビリティ−・アンド・イムノシネティクス
（Ａｍｅｒｉｃａｎ　５ｏｃｉｅｔｙ　ｏｆ　Ｈｉｓｔ
ｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ［ｍｍｕｎｏｇ
ｅｎｅｔｉｃｓ、　　Ｎｅｗ　　Ｙｏｒｋ）　　、　　
１　１　９〜　Ｌ　　２　９頁〕。フォワードおよびラ
イトアングルスキャターゲートはリンパ芽球および実質
数の小リンパ球を含むようにセットした。結果は表■に
示され、表示した値はＩＬ−２Ｒ＋全パーセントおよび
ＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ２０（Ｂｌ）３５）共発現（
ｃｏｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ）　Ｉ　Ｌ　−２Ｒ″″細胞
パーセントに対するものである。

表■ ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩ［［まりＩｔ　Ｌ　Ａ　Ｖ　／　Ｈ
Ｔ　Ｌ　Ｖ　ｍ　ｘンヘローブ糖タンパク質発現組換え
体ワクシニアウィルス（ｖ−ｅｎｖ５）による刺激後の
接種マカクからのＰＢＬ上のＩＬ−２レセプターおよび
ＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ２０　　（Ｂｐ　３５）抗原
マカク　　ＰＢＬ　　　　ＩＬ−２Ｒ”　　共発現ＩＬ
−２Ｒ＋細胞％細胞　　　　Ｃ［］２０８０　　　Ｖ−ｅｎｖ５　　　２５．６　６２．４　４
０．ＯＮＴ７４　　ＬＡｖ／Ｈｎ、ｖｍ　　　１４，７
　５０．０　５９．６　　１．９８ＯＬＡＶ／ＨＴＬＶ
ＩＩ［１２，（１５８，（１３８，０１，５８０ウィル
スなし　　ＯＪ　　　０．３−　０．３−　０．３−表
■の結果はＩＬ−２レセプターを発現するウィルス刺ｍ
ＰＢＬのほとんどすべてがＣＤ４またはＣＤ８抗原を共
発現するが、単に１．５〜２％がＣＤ２０　（Ｂｐ　３
５）抗原を共発現することを示し、ｖ　−ｅｎｖ　５ま
たはＬＡＶ−ＨＴＬＶＩＩＩ活性化したＰＢＬがＴ細胞
であることを示す。

（５，３）免疫処置マカクのＴ細胞＋；！　Ｌ　Ａ　Ｖ
　／）ＩＴＬＶ■またはｖ　−ｅｎｖ　　５による刺激
後にＩＬ−２を生ずるＴ細胞は抗原刺激後ＴおよびＢ細胞の分化および（また
は）増殖を促進することができるＩＬ−２含有リンフオ
カインを生成し、またエイズウィルスを含む種々のウィ
ルスに感染した細胞を溶解できるナチュラルキラー細胞
を活性化できる〔サントリ（Ｓａｎｔｏｌｉ、　　Ｄ、
）　　ほか、１９７８、ジャーナル・オブ・イムノロジ
ー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　、１２１　：５２６；
ヤスカワほか（Ｙａｓｕｋａｗａ、　Ｍ、ａｎｄ　２ａ
ｒｌｉｎｇ。

Ｊ９Ｍ、）、１９８３、ジャーナル・オブ・イムノロジ
ー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　、１３１　：　　２０
１１　；ルセッチ（Ｒｕｓｃｅｔｔｉ、　Ｆ、Ｗ、）　
　ほか、１９８６、ジャーナル・オブ・イムノロジー）
、１３６：３６１９）。

従って我々は免疫処置マカクのＴ細胞がＬＡＶ／′ＨＴ
ＬＶＩＩＩによる刺激後にＩＬ−２を生ずるかどうかを
求めた。

ともにワクシエアウィルスのＷＰ株で構築したｖ　−ｅ
ｎｖ　５またはｖ−Ｈ５ＶｇＤ１による第２皮内免疫処
置の４週後にマカクのヘパリン化血液からＰＢＬを分離
した（試験１）。試験２のためにＶ−ｅｎｖ　５、ｖ−
Ｈ３ＶｇＤ１まタハ二ｘ　　ａ　−ｙ　市衛生局（Ｎｅ
ｗ　Ｙｏｒｋ　Ｃ１ｔｙ　Ｂｏａｒｄ　ｏｆ　Ｈｅａｌ
ｔｈ）　　ワクチン株のウィルスで構築したｖ　−ｅｎ
ｖ　５組換え体ウィルス（ｖ−ｅｎｖ５　ＮＹ）　　２
　Ｘ　１０”　ｐｆｕによる一次皮肉免疫処置の４週後
にマカクからＰＢＬを分離した。ＰＢＬを１０％熱不活
性化正常ヒト血ａ補足ＲＰＭ１１６４０培地中に懸濁さ
せ、２Ｘ１０’ＰＢＬを丸底９６ウエルプレートのウェ
ルに入れ、次にＵＶ線不活性化したｖ−ｅｎｖ５（ＵＶ
線不活性化前Ｉ　Ｘ　１０６ｐｆｕ／ｉ）またはＭ製Ｌ
ＡＶ／ＨＴＬＶＩＩＩ　（１μｇ／雁）をウェルに加え
た。刺激の２日後に反復ウェルから上澄みを回収し、検
定前に２４時間洗浄し、ＩＬ−２を含まないＩＬ−２依
存性ＣＴＬＬ−２細胞〔ギリス（Ｏｒ、　Ｓ、　Ｇ１１
ｌｉｓ。

Ｉｍｍｕｎｅｘ　Ｃａｒｐ、、　５ｅａｔｔｌｅ、　Ｗ
Ａ）　により提供された〕の増殖を支持するそれらの能
力について試験した。

上澄みとのインキュベーションの最後の６時間中に細胞
を’　Ｈ−Ｔｄ　Ｒで標識し、細胞中への３８−ＴｄＲ
で取込みを測定した。上澄み中に存在するＩＬ−２活性
の単位は、前に記載されたように（ギリス（Ｇｉｌｌｉ
ｓ、　Ｓ、　）ほか、１９７８、ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、）　、１２０：　２
０７７）　、ＣＴＬＬ−２細胞の堆層に対する組換え体
と）ＩＬ−２の効果の試験から得られた標準曲線〔ギリ
ス（Ｏｒ、　Ｇ１１ｌｉｓ）により提供された〕から計
算した。結果は表■に示される。

表■ Ｌ　Ａ　Ｖ／ＨＴ　Ｌ　Ｖ　ｍマタはエイズウィルスエ
ンベロープ糖タンパク質発現組換え体ワクシニアウィル
スによる刺激後の接種マカクのＰＢＬによるＩＬ−２の
生成ＴＬ−２Ｃ”　ｉ”／ｍｉ）マカク　　　　　　　　　刺激ＰＢＬの上澄み互−号免
及児１　ウィルスなしＬＡＶ／ＨＴＬＶ　ｍ　　ｖ−ｅ
ｎｖ５試験　１：６７　　　ｖ−ｅｎｖ５　　　　０　　　　　２８．０
　　　９６．０６８　　　ｖ−ｅｎｖ５　　　　０　　
　　　１６．０　　　１２４．０７４　　　ｖ−ｅｎｖ
５　　　　０　　　　　９．０　　　５２．０？３　　
　ｖ−ＨＳＶｇＤｌ　　　　０　　　　　　０　　　１
０Ｂ、０２６　　　な　　し　　　　　　　　ＯＱ　　
　　　　　　　　□試験　２：（１３　　　ｖ−ｅｎｖ５　　　　　０　　　　　１４
．４　　　５５．８（１５　　　ｖ−ｅｎｖ５ＮＹ　　
　　０　　　　　１６．８　　　３３．３４９　　　ｖ
−ｅｎｖ５ＮＹ　　　　０　　　　　７．１　　　２６
．７５２、　　ｖ−ｅｎｖ５ＮＹ　　　　０　　　　　
　２．４　　　２７．６５９　　　ｖ−ＨＳＶｇＤｌ　
　　　０　　　　　　　０　　　２７．６２６　　　　
な　　し　　　　　　　　ＯＯ。

２７　　　な　　し　　　　　　　　ＯＱ　　　　　　
　　　　Ｑ表■中の試験１の結果はｖ−ｅｎｖ５で２回
免疫処置したマカクからのｖ　−ｅｎｖ　５またはＬＡ
Ｖ／ＨＴＬＶＩ［刺激したＰＢＬの上澄みが、それらの
ＣＴＬＬ−２細胞、（ＩＬ−２依存性細胞系）の増殖を
誘導する能力により示されるようにＩＬ−２を含有した
。同様に表■の試験２に示されるように、ＩＬ−２は、
ｖ　−ｅｎＶ　５で１回免疫処置したマカク（１３から
、およびヒトにおけるｉｆワクチンとして使用された〔
ネフ（Ｎｅｆｆ、　Ｊ、　１４．）、１９８５、ワクチ
ン抗原のためのベクターとしてのワクシニアウィルス（
Ｖａｃｃｉｎｉａ　Ｖｉｒｕｓｅｓ　ａｓ　Ｖｅｃｔａ
ｒｓ　ｆｏｒ　Ｖａｃｃｉｎｅ　Ａｎｔｉｇｅｎｓ）　
（キナン（Ｇ、　Ｖ。

Ｑｕｉｎｎａｎ、　　Ｊｒ、）　編〕、エルスフィール
（ｔＥｌｓｅｖ　ｉｅｒ。

Ｎｅｖ　Ｙｒｋ）、　６９〜７６頁〕ニューヨーク市衛
生局株のワクシニアウィルスを用いて構築した類似の組
換え体　（ｖ　−ｅｎｖ　５ＮＹ）で１回免疫処置した
３７カクのすべてからのＬＡＶ／ＨＴＬＶＩまたはｖ−
ｅｎｖ５刺激したＰＢＬの上澄み中に検出された。対照
的に、ワタシニアＨ３ＶｇＤ１組換え体ウィルスで免疫
処置したマカク７３および５９のＰＢＬはｖ　−ｅｎｖ
　５で刺激した後にのみＩＬ−２を生じ、ＬＡＶ／ＨＴ
ＬＶＩＩＩで刺激した後には　。

生じなかった〈表■）。非刺激マカク２６および２７は
ＬＡｖ／ＨＴＬＶＩＩＩまたはｖ　−ｅｎｖ　　５によ
る刺激後に検出可能なＩＬ−２を生じなかった。主にヘ
ルパー／インデューサー活性を有するＴ細胞が抗原刺激
後ＩＬ−２を生ずる〔モラー（Ｍｏｌｌｅｒ。

Ｇ、＞　（４Ｊｉ）　、１９８０、イムノロジカル・レ
ビューズ（Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｒｅｖ、）　、５１巻；モ
レツタ（ｉＪｏｒｅｔｔａ。

Ｌ、）ほか、１９８２、セミナーズ・イン・ヘマトロジ
ー（Ｓｅｍｉｎ、Ｈｅｍａｔｏｌ、）、１９：２？３〜
２８４；レインヘルツほか（Ｒｅｉｎｈｅｒｚ、　ε、
Ｌ、　ａｎｄＳｃｈｌｏｓｓｍａｎ、Ｓ、　Ｆ、）　、
１９８０、セル（ｃｅｌｌ）、１９：８２１〜８２７；
モレツタ（！、Ｉｏｒｅｔｔａ、＾、）、１９８５、ユ
ーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー　（Ｂｕ
ｒ、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、１５：１４８〜１５５
〕ので、これらの結果は従って、組換え体ウィルスで免
疫処置したマカク中のＬＡＶ／ＨＴＬＶＩＩＩを認識す
るヘルパーＴ細胞の存在を示す。

ＬＡＶ／　　ＨＴＬＶＩ［Ｉエンベロープ抗原に対する
抗体を生ずるそれらのＢ細胞の分化における可能な役割
に加えて、これらのＩＬ−２を生ずるＴ細胞が、エフェ
クター細胞例えばウィルス感染細胞を殺すことができる
細胞毒性Ｔリンパ球またはナチュラルキラー細胞の分化
および（または）膨張に関係することができる。

表■、■および■に示された結果をまとめると、ＬＡＶ
／ＨＴＬＶＩＩＩエンベローフ糖タンハク質ヲ発現する
組換え体ワクシニアウィルスによるマカクの免疫処置が
ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩＩＩに対するＴ細胞仲介免疫応答を
生じ、（ａ）　Ｌ　Ａ　Ｖ　／　ＨＴ　Ｌ　Ｖ　！ＩＩ
による刺激に応答したＴ細胞の増殖、およびら）ＬＡＴ
／ＨＴＬＶＩＩＩによる刺激に応答したＴ細胞によるＩ
Ｌ−２の生成により示されるように、試験管内で活性化
できるＴ細胞を生ずることが示される。

エンベロープ抗原が免疫処置に用いた組換え体ワクシニ
アウィルスによりエンコードされた唯一のＬＡＶ／ＨＴ
ＬＶＩＩ［抗原であるので、この特定態様においてＬＡ
Ｖ／ＨＴＬＶＩ［［による刺激後増殖し、ＩＬ−２を生
ずるＴ細胞がＬＡＶ／ＨＴＬＶ■エンベロープ抗原（頚
）を認識することが明らかである。組換え体ウィルスに
より発現されたエンベロープ抗原およびＬＡＶ／ＨＴＬ
ＶＩＩＩにより発現されたものが免疫学的に交差反応性
であることもまた明らかである。

（６）実施例：　ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩ［［に特異的なチ
ンパンジーＴ細胞の試験管内活性化下記の試験はｖ　−ｅｎｖ　５ＮＹ接種チンパンジー（
７）ＰＢＬが試験管内でＬＡＶ／ＨＴＬＶＩまたはＬＡ
Ｖ／ＨＴＬＶＩＩＩエンベロープ糖タンパク質による刺
激に応答して増殖することを示す。

ｖ　−ｅｎｖ　　５ＮＹまたは単純ヘルペスウィルスＩ
型糖タンパク質を発現する組換え体ワクシニアウィルス
（ｖ）ＩＳＶｇＤｌ）による二次皮肉接種の４週後にヘ
ハリン化血液からフィコール・ハイパツク遠心分離によ
りＰＢＬを分離した。ＰＢＬを１０％熱不活性化正常ヒ
ト血清およびペニシリン／ストレプトマイシン補足ＲＰ
Ｍ１１６４０中で、９６ウエルプレートに１×１０ｓ細
胞／ウエルに播種した。次いで非破壊ＬＡＶ／ＨＴＬＶ
ＩＩＩ　（５μｇ／ｒｒｆり、精製ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩ
Ｉ［からレンチルレクチンクロマトグラフィーにより分
離したＬＡＶ／ＨＴＬＶＩＩＩエンベロープ糖タンパク
ｊｌｔ（１μｇ／ｄ）、ＵＶ不活性化Ｈ３Ｖ−１（ＵＶ
不活性化前Ｉ　ＸＩＯ’　ｐｆｕ／−）　、またはＵＶ
不活性化ｖ　−ｅｎｖ５ＮＹ（ＵＶ不活性化前Ｉ　Ｘ　
１０６ｐｆｕ　／ｍりを反復ウェルに加えた。５日後細
胞中の３Ｈチミジン取込みを液体シンチレーションカウ
ンティングにより測定した。結果は表■に示される。

すべてのチンパンジーからのＰＢＬはＶ−ｅｎｖ５ＮＹ
による刺激後高水準の３Ｈチミジン取込みを取込んだ（
ワクシニアウィルスに対するＴ細胞応答に基く）。表■
に示されるように、Ｖ−ｅｎｖ５ＮＹで免疫処置したす
べてのチンパンジーのＰＢＬは、ｖ−Ｈ３ＶｇＤ１免疫
処置チンパンジーのＰＢＬ（ＦＪα１３４およびＮα６
４）とは対照的１：ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩＩＩおよびＬＡ
Ｖ／ＨＴＬＶＩエンベロープ糖タンパク賃（ｅｎｖ）に
対し著しい増殖応答を示した。

（７）実施例：　ＬＡＶ／ＨＴＬＶＩＩＩｚンベｏ−プ
抗原を指向する増殖および細胞障害活性を有するチンパンジーＴ細胞クローンの試験管内生成下記試験はｖ−ｅｎｖ５で刺激した後増着するが親ワク
シニアウィルスでは増殖せず、ｖ　−ｅｎｖ５で感染し
た”Ｃｒ標識自己標的細胞を溶解するが親ワクシニアウ
ィルスでは溶解しないＴ細胞クローンをｖ−ｅｎｖ５で
免疫処置したチンパンジーのＰＢＬから試験管内で生成
できることを示す。ＰＢＬを精製エイズウィルスエンベ
ロープ抗原、（ｅｎｖ。

１μｇ／ｍｌ）で週間隔で２回刺激した。３日後、刺激
した細胞を９６ウエルプレートのウェルに限界希釈法に
よりクローン化し、それに１０％脱レクしンＩＬ−２（
セルラー・ブロダク７　（ｃｅｌｌｕｌａｒＰｒｏｄｕ
ｃｔｓ、Ｂｕｆｆａｌｏ、　ＮＹ）製〕含有完全培地中
の５Ｘ１０’Ｘ線照射（２５０ＯＲ）自己ＰＢＬ　（お
よびＵＶ不活性化）を加えた。クローンをＶ−ｅｎｖ５
およびＩＬ−２含有培地中のＸ線照射ＰＢＬによる毎遅
フィーディングにより膨張させた。Ｖ−ｅｎｖ５および
ワクシニアウィルスに対する増殖応答について試験する
ために、クローン化Ｔ細胞を洗浄してＩＬ−２を除き、
ｌＸｌ０’　クローン化Ｔ細胞を、ＩＬ−２を含まない
培地中に５Ｘ１０’のＸ線照射自己ＰＢＬおよびｖ−ｅ
ｎｖ５またはワクシニアウィルス（ＵＶ不活性化前１　
×１０　”ｐｆｕ／ｍｌ）を含む反復ウェルに入れた。

３日後に３Ｈチミジンをウェルに加え、６時間中に取込
まれた３Ｈチミジンを液体シンチレーションカウンティ
ングにより測定した。表Ｖ中の結果は４クローンのすべ
てがｖ−ｅｎｖ５に応答して増殖するが、親ワクシニア
ウィルスに応答しないことを示す。

クローン化細胞はまたｖ−ｅｎｖ５、ワクシニアウィル
スで感染したか、またはウィルスに感染しない！＋（ｒ
標識自己リンパ芽球様標的細胞を溶解するそれらの能力
について、２５：１のクローン化エフェクター細胞：標
的細胞比を用いて６時間％＋　Ｃｒ放出検定で試験した
。結果は表Ｖに示される。クローン化細胞はｖ−ｅｎｖ
５感染細胞を溶解したが、しかし親ワクシニア感染また
は非感染細胞を溶解せず、従ってそれらのエイズウィル
スエンベロープ抗原（頚）に対する特異性を示す。

表　　　Ｖｖ−ｅｎｖ５免疫処置チンパンジー＃１２４からのクロ
ーン化Ｔ細胞の増殖および細胞障害活性１　　　　５．３１？　　　３３．９０７　　　８，２
７２２　　　　４．９９７　　１５，２２５　　　６，
３４２３　　　　１．０９０　　９．０８０　　　２．
９１（１４　　　　４．６０７　　１３，（１５０　　
　５，３９２Ｌ　　　　　−２，４２０，２−０，１２
−０，７７，０−１，３３−０，０１１，０１，０（８）実施例：ｖ−ｅｎｖ５によるヒトＴ細胞の試験管
内活性化下記試験はエイズウィルス血清反応陽性個体のＰＢＬが
試験管内でｖ−ｅｎｖ５による刺激に応答して増殖する
ことを示す。ＰＢＬをフィコール・ハイバック遠心分離
により分離し、１０％熱不活性化プール化正常ヒト血清
を含むＲＰＭ１１６４０培地中に再びｇ濁させた。次い
で０．１ｍ１ＰＢＬ（ＩＸＩＯ’細胞）を４反復ウェル
のそれぞれに加え、次に０．１−培地（抗原なし）、０
．１−紫外線（ＵＶ）不活性化ｖ　−ｅｎｖ５　（ＵＶ
不活性化前１０８ｐｆｕ／ｍｆ）または１×１０％Ｘ線
照射（２５０ＯＲ’）同種ＰＢＬを加えた。６日後に３
Ｈチミジン（３Ｈ７ｄＲ）をウェルに加え（０，５μＣ
ｉ　／ウェル）、６時間後に細胞をマルチウェル回収装
置により回収した。３Ｈ−ＴｄＲ取込みを液体シンチレ
ーションカウンティングにより測定した。刺激した細胞
中に取込まれたｆｆＨ−ＴｄＲｃｐｍを非刺激細胞中に
取込まれたｃｐｍで除することにより刺激指数（ＳＩ）
を計算した。結果は表■に示される。

表Ｖから見られるように、血清反応陽性および血清反応
陰性供血者のＰＢＬはともにｖ　−ｅｎｖ５に応答して
増殖を示した。一般に血清反応陽性供血者からのＰＢＬ
は血清反応陰性供血者より低い応答を示した。しかし、
血清反応陽性供血者のＰＢＬはかなりの応答を示し、活
性化Ｔ細胞はＩＬ−２含有細胞培養中で膨張することが
できる。

（９）微生物の寄託次の組換え体ウィルスはアメリカン・タイプ・カルチャ
ー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ
１ｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、　Ｒｏｃｋｖｉｌｌ
ｅ、　ＭＯ）に寄託され、表示受託番号を指定された：組換え体ウィルス　　　受　託　番　号ｖ−ｅｎｖ２Ａ
ＴＣＣＶＲ２１１４ｖ　−ｅｎｖ５　　　　　　ＡＴＣＣＶＲ２１１３ｖ　
−ｅｎｖ７　　　　　　　　　　　　ＡＴＣＣＶＲ２１
４８ｖ　−ｅｎｖ５ＮＹ　　　　　ＡＴＣＣＶＲ２１４
９ｖ　−ｇａｇ１ＮＹ　　　　　ＡＴＣＣＶＲ２１５０
Ａｃ−ｇ、ａｇｌ　　　　　　ＡＴＣＣＶＲ２１４７Ａ
ｃ−ｅｎｖ５　　　　　　ＡＴＣＣＶＲ２１５１寄託態
様は本発明の１観点の単なる例示として意図され、機能
的に等しい任意の組換え体が本発明の範囲内で使用でき
るので本発明は寄託した組換え体ウィルスにより範囲を
限定すべきではない。

実際にここに示し、記載したものに加えて、本発明の種
々の変更が前記記載から当業者に明らかになろう。その
ような変更は特許請求の範囲内に属するものとする。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）エイズウィルスに感染した患者を処置するための
免疫療法の方法であって、（ａ）活性化したＴリンパ球がエイズウィルスのエピト
ープに特異的でかつ患者と組織適合性であり、（ｂ）活性化したＴリンパ球が次の検定法、（ｉ）活性
化したＴリンパ球をエイズウィルスに感染した患者の放
射性標識した標的細胞とともにインキュベートし、放射性標識の放出が感染標的細胞の溶解の指標である細胞障害検定、および（ｉｉ）試験管内でエイズウィルスのエピトープによる
刺激に応答して増殖および（または）リンフォカインの
生成を生ずる活性化したＴリンパ球の能力を測定する刺激検定、のいずれかにより測定してエイズウィルス特異性Ｔ細胞
免疫を仲介できる、活性化したＴリンパ球を、生体内でエイズウィルス感染
細胞に対する細胞仲介免疫の移入に有効な用量で患者に
投与することを含む方法。
（２）活性化したＴリンパ球がエイズウィルスのエピト
ープに対する暴露により試験内で活性化された、特許請
求の範囲第（１）項記載の方法。
（３）エイズウィルスのエピトープがエンベロープエピ
トープを含む、特許請求の範囲第（２）項記載の方法。
（４）エイズウィルスのエピトープがｇａｇエピトープ
を含む、特許請求の範囲第（２）項記載の方法。
（５）活性化したＴリンパ球がエイズウィルスのエピト
ープに関連するペプチトに対する暴露により試験管内で
活性化された、特許請求の範囲第（１）項記載の方法。
（６）エイズウィルスのエピトープがエンベロープエピ
トープを含む、特許請求の範囲第（５）項記載の方法。
（７）エイズウィルスのエピトープがｇａｇエピトープ
を含む、特許請求の範囲第（５）項記載の方法。
（８）活性化したＴリンパ球がエイズウィルスのエピト
ープを発現する組換え体微生物に対する暴露により試験
管内で活性化された、特許請求の範囲第（１）項記載の
方法。
（９）エイズウィルスのエピトープがエンベロープエピ
トープを含む、特許請求の範囲第（８）項記載の方法。
（１０）エイズウィルスのエピトープがｇａｇエピトー
プを含む、特許請求の範囲第（８）項記載の方法。
（１１）組換え体微生物が組換え体ウィルスを含む、特
許請求の範囲第（８）項、第（９）項または第（１０）
項記載の方法。
（１２）組換え体ウィルスが動物ウィルスを含む、特許
請求の範囲第（１１）項記載の方法。
（１３）動物ウィルスがワクシニアウィルスを含む、特
許請求の範囲第（１２）項記載の方法。
（１４）組換え体ウィルスが昆虫ウィルスを含む、特許
請求の範囲第（１１）項記載の方法。
（１５）昆虫ウィルスがバクロウィルスを含む、特許請
求の範囲第（１４）項記載の方法。
（１６）活性化したＴリンパ球が、ＡＴＣＣに寄託され
て受託番号ＡＴＣＣＶＲ２１１３を指定されたｖ−ｅｎ
ｖ５に対する暴露により活性化された、特許請求の範囲
第（１）項記載の方法。
（１７）活性化したＴリンパ球が、ＡＴＣＣに寄託され
て受託番号ＡＴＣＣＶＲ２１４９を指定されたｖ−ｅｎ
ｖ５ＮＹに対する暴露により活性化された、特許請求の
範囲第（１）項記載の方法。
（１８）活性化したＴリンパ球が、ＡＴＣＣに寄託され
て受託番号ＡＴＣＣＶＲ２１５０を指定されたｖ−ｇａ
ｇ１ＮＹに対する暴露により活性化された、特許請求の
範囲第（１）項記載の方法。
（１９）活性化したＴリンパ球が、ＡＴＣＣに寄託され
て受託番号ＡＴＣＣＶＲ２１５１を指定されたＡｃ−ｅ
ｎｖ５に対する暴露により活性化された、特許請求の範
囲第（１）項記載の方法。
（２０）活性化したＴリンパ球が、ＡＴＣＣに寄託され
て受託番号ＡＴＣＣＶＲ２１４７を指定されたＡｃ−ｇ
ａｇ１に対する暴露により活性化された、特許請求の範
囲第（１）項記載の方法。
（２１）エイズウィルスに感染した患者を免疫療法的に
処置する方法であって、（ａ）患者またはエイズウィルスエピトープに暴露され
た組織適合性供血者からリンパ球を分離し、（ｂ）段階（ａ）のリンパ球を試験管内でエイズウィル
スエピトープに暴露してエイズウィルスに特異性のＴリ
ンパ球を活性化し、（ｃ）次の検定法、（ｉ）活性化したＴリンパ球をエイズウィルスに感染し
た患者の放射性標識した標的細胞とともにインキュベートし、放射性標識の放出が感染標的細胞の溶解の指標である細胞障害検定、および（ｉｉ）試験管内でエイズウィルスのエピトープによる
刺激に応答して増殖および（または）リンフォカインの
生成を生ずる活性化したＴリンパ球の能力を測定する刺激検定、のいずれかにより測定されるエイズウィルス特異性Ｔ細
胞免疫を仲介できる段階（ｂ）の活性化したＴリンパ球
を選び、（ｄ）段階（ｃ）の活性化したＴリンパ球の有効量を患
者に注射し、エイズウィルスに感染した細胞を指向する
Ｔ細胞仲介免疫を移入させる、ことを含む方法。
（２２）活性化したＴリンパ球がエイズウィルスのエピ
トープに対する暴露により試験管内で活性化された、特
許請求の範囲第（２１）項記載の方法。
（２３）エイズウィルスのエピトープがエンベロープエ
ピトープを含む、特許請求の範囲第（２２）項記載の方
法。
（２４）エイズウィルスのエピトープがｇａｇエピトー
プを含む、特許請求の範囲第（２２）項記載の方法。
（２５）活性化したＴリンパ球がエイズウィルスのエピ
トープに関連するペプチトに対する暴露により試験管内
で活性化された、特許請求の範囲第（２１）項記載の方
法。
（２６）エイズウィルスのエピトープがエンベロープエ
ピトープを含む、特許請求の範囲第（２５）項記載の方
法。
（２７）エイズウィルスのエピトープがｇａｇエピトー
プを含む、特許請求の範囲第（２５）項記載の方法。
（２８）活性化したＴリンパ球がエイズウィルスのエピ
トープを発現する組換え体微生物に対する暴露により試
験管内で活性化された、特許請求の範囲第（２１）項記
載の方法。
（２９）エイズウィルスのエピトープがエンベロープエ
ピトープを含む、特許請求の範囲第（２８）項記載の方
法。
（３０）エイズウィルスのエピトープがｇａｇエピトー
プを含む、特許請求の範囲第（２８）項記載の方法。
（３１）組換え体微生物が組換え体ウィルスを含む、特
許請求の範囲第（２８）項、第（２９）項または第（３
０）項記載の方法。
（３２）組換え体ウィルスが動物ウィルスを含む、特許
請求の範囲第（３１）項記載の方法。
（３３）動物ウィルスがワクシニアウィルスを含む、特
許請求の範囲第（３２）項記載の方法。
（３４）組換え体ウィルスが昆虫ウィルスを含む、特許
請求の範囲第（３１）項記載の方法。
（３５）昆虫ウィルスがバクロウィルスを含む、特許請
求の範囲第（３４）項記載の方法。
（３６）活性化したＴリンパ球が、ＡＴＣＣに寄託され
て受託番号ＡＴＣＣＶＲ２１１３を指定されたｖ−ｅｎ
ｖ５に対する暴露により活性化された、特許請求の範囲
第（２１）項記載の方法。
（３７）活性化したＴリンパ球が、ＡＴＣＣに寄託され
て受託番号ＡＴＣＣＶＲ２１４９を指定されたｖ−ｅｎ
ｖ５ＮＹに対する暴露により活性化された、特許請求の
範囲第（２１）項記載の方法。
（３８）活性化したＴリンパ球が、ＡＴＣＣに寄託され
て受託番号ＡＴＣＣＶＲ２１５０を指定されたｖ−ｇａ
ｇ１ＮＹに対する暴露により活性化された、特許請求の
範囲第（２１）項記載の方法。
（３９）活性化したＴリンパ球が、ＡＴＣＣに寄託され
て受託番号ＡＴＣＣＶＲ２１５１を指定されたＡｃ−ｅ
ｎｖ５に対する暴露により活性化された、特許請求の範
囲第（２１）項記載の方法。
（４０）活性化したＴリンパ球が、ＡＴＣＣに寄託され
て受託番号ＡＴＣＣＶＲ２１４７を指定されたＡｃ−ｇ
ａｇ１に対する暴露により活性化された、特許請求の範
囲第（２１）項記載の方法。