JPS63118660A - 免疫学的定量装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は電気泳動を用いる免疫学的定量装置に係る。

〔従来の技術〕

膜状の担体に抗体を固定化し、この膜の面に実質的に垂
直に電位勾配をかけることにより、この方向に被測定試
料中の抗原を電気泳動により移動せしめ、上記固定化さ
れた抗体と抗原抗体反応を起こさせて固定化させ、試料
中の抗原の濃度を測定する方法が提案されている（特開
昭６Ｏ−５７２５７）。

〔発明が解決しようとする問題点〕

上記従来技術は、被測定試料中に含まれる巨大分子及び
沈殿物が電気泳動用担体表面で捕捉され測定誤差を与え
る点についての配慮がされておらず、測定精度を低下さ
せる問題があった。

本発明の目的は、これを改善することにある。

〔問題点を解決するための手段〕

上記目的は、抗体を固定化させた電気泳動用担体の試料
導入側（通常は陰極側）に抗体を含まない電気泳動用担
体を設けることにより達成される。

〔作用〕

抗体を固定化させた電気泳動用担体の試料導入側に設け
た抗体を含まない電気泳動用担体は、被測定試料中に含
まれる巨大分子及び沈殿物を捕捉する。それによって試
料中に含まれ測定誤差を与える成分が、抗体を固定化さ
せた電気泳動用担体に到達するのを妨げられるので、測
定の精度を向上させることができる。また、抗体を含ま
ない電気泳動用担体は、抗体を固定させた電気泳動用担
体と容易に着脱が可能にすることで、巨大分子及び沈殿
物の影響を受けることなしに精度の高い測定を行うこと
ができる。

なお固定化された抗体と反応した試料中の抗原の濃度の
測定は、従来技術と同じように、標識された抗体を上記
の反応した抗原とさらに反応させるか又は標識された抗
原を上記固定化された抗体のうちの未反応部と反応させ
るかして、その後標識された抗体又は抗原の量を知るこ
とによって。

測定することができる。

〔実施例〕

以下、本発明の実施例を第１図及び第２図により説明す
る。

リング状に加工したガラス板は、あらかじめシランカッ
プリング処理して用いた。２５　ｍ　Ｑのエタノールに
７５μＱのメタアクリル酸−３−トリメトキシシリルプ
ロピルエステルと７５０μ２の１０％酢酸を加え、攪拌
した後、この中に上記ガラス製リングを数分間浸す。ガ
ラス製リングを液中より取り出し、乾燥させた後、エタ
ノールで洗浄する。さらに１１０℃にて１時間熱処理を
行なった。

抗体を固定化したポリアクリルアミドゲル（以下固定化
抗体膜という）はつどのように作製した。

抗ヒトアルファフェトプロティン（ＡＦＰ）抗血清のＩ
ｇＧフラクション（５ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｑ　）　０　、
５ｍＱに０．２５％アクロレイン水溶液を２５μＱ加え
て氷冷下で３０分間反応させたあと、１０≦Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７，２）でよく透析する。

これに、０．３２ｇ／ｍＱのアクリルアミド溶液１．５
ｍＱ、０．０１６ｇ／ｍＱのＮ、Ｎ’−メチレンビスア
クリルアミド溶液を１．５ｍＱ、４．６μＱ　／　ｍ　
ＱのＮ、Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’−テトラメチルエチレンジア
ミン水溶液を１　、２５　ｍ　Ｑ、及び１　、２　ｍ　
ｇ　／　ｍ　Ｑの過硫酸アンモニウム溶液５　、７５　
ｍ　Ｑを加え、攪拌して重合液とする。

アクリル樹脂板上に、上記シランカップリング処理した
ガラス製リングをのせ、上から重合液をすみやかに分注
し、さらにアクリル樹脂板で、ガラス製リングをはさみ
込むようにのせて押さえた。

尚、この際、気泡が入らないように注意した。そのまま
静置してゲル化させた後、アクリル樹脂板をはずして固
定化抗体膜を得た。

抗体を含まない電気泳動用担体は、アクロレインと反応
させた抗体のかわりに、１０≦Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７
，２）０．５ｍＱを用いて、上記の方法と同様に、ガラ
ス製リングに結合させて、作製した。

抗体を固定化させてないポリアクリルアミド膜が試料側
になるように、抗体を含まない電気泳動用担体２と固定
化抗体膜３を重ねる（第１図）。

これを反応膜保持具４により上部電解槽５の底部に取り
付け、下部電解槽６に、電解液７を電解液注入口８より
注入し、続いて上部電解槽に電解液９を電解液注入ノズ
ル１０により注入する。測定試料液に１５％ショＭ溶液
となるようにショ糖を加え、溶解させた後、試料注入ノ
ズル１１の先端を電気泳動用担体２の近傍に移動し、こ
れより２０μＱを電気泳動用担体上に静かに注入する。

電極１２が陰極、電極１３が陽極となるように直流電源
１４を用いて電圧を印加する。印加電圧は５０ｖ、印加
時間は２０分であった。

続いて、Ｇ　ｏｌｄｍａｎの方法に準じて作製したＦＩ
ＴＣ結合抗体に、１５％ショ糖溶液となるようにショ糖
を加え溶解した後、標識抗体注入ノズル１５により２０
μ２を電気泳動用担体２上に静かに注入し、試料の場合
と同様に電圧を印加した。

印加電圧は５０Ｖ、印加時間は２０分である。

上部電解槽及び下部電解槽の電解液を、電解液排出ノズ
ル１６及び電解液排出口１７を用いて除去し１次いで、
固定化抗体膜３をガラス製リング１と共に取りはずし、
１０≦Ｍリン酸緩衝液中で、簡単に洗浄する。

膜中に固定化されたＦＩＴＣ量を蛍光強度により測定し
た。励起波長は４８５ｎｍ、蛍光波長は５２０ｎｍとし
た。各種濃度のＡＦＰ試料を測定し検量線を求めた結果
を第３図に示す。２０ｎｇ／　ｍ　Ｑの濃度のＡＦＰ標
準試料に対する測定の平均値は１９．８ｎｇ／ｍＱ、標
準偏差は３．０　ｎ　ｇ／　ｍ　Ｑであった。

一方、従来法のように、抗体を含まない電気泳動担体に
より試料あるいは標識抗体を濾過することなく、固定化
抗体膜のみを用いて同様の測定を行ったところ、２０　
ｎ　ｇ　／　ｍ　Ｑの濃度のＡＦＰ標準試料に対する測
定の平均値は１９．５ｎｇ／ｍＱ、ｆＭ＄偏差は５．５
ｎｇ／ｍ１２であった。

以上のように、抗体を固定化させてない電気泳動用担体
を固定化抗体膜の試料導入側に配置し、試料又は標識抗
体中の巨大分子あるいは沈殿物をフィルターのように除
去することにより、測定の精度を大幅に向上させること
ができる。

尚、試料中に沈殿物あるいは巨大分子が多量に含まれる
場合には、試料を電気泳動させ反応させる工程と、標識
抗体を電気泳動させ反応させる工程において、それぞれ
別の抗体を含まない電気法ｖＪ膜を準備し、取り替えて
用いることが望ましい。

〔発明の効果〕

以上で説明したように、本発明により、測定の精度を約
２倍向上させることができる効果がある。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の実施例の反応膜部分の正面図及び縦断
面図、第２図は本発明の実施例に用いた反応装置の概略
を示す断面図、第３図は実施例により得た検量線図であ
る。 ■・・・ガラス製リング、２・・・抗体を含まない電気
泳動用担体、３・・・固定化抗体膜、４・・・反応膜保
持具、５・・・上部電解槽、６・・・下部電解槽、７・
・・電解液、８・・・電解液注入口、９・・・電解液、
１０・・・電解液注入ノズル、１１・・・試料注入ノズ
ル、１２・・・電極、１３・・・電極、１４・・・直流
電源、１５・・・標識抗体注入ノズル、１６・・・電解
液排出ノズル、１７・・・電解液排出口。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、実質的に全域に抗体を固定化した膜状の電気泳動用
   担体と、該膜状の電気泳動用担体の膜面に実質的に垂直
   方向に電場を印加し被測定試料中の抗原の電気泳動を行
   なう手段とよりなる免疫学的定量装置において、上記電
   気泳動用担体の試料導入側に抗体を固定化しない電気泳
   動用担体を配置したことを特徴とする免疫学的定量装置
   。