JPS59107253A - 二次元電気泳動法 - Google Patents
二次元電気泳動法Info
- Publication number
- JPS59107253A JPS59107253A JP57216831A JP21683182A JPS59107253A JP S59107253 A JPS59107253 A JP S59107253A JP 57216831 A JP57216831 A JP 57216831A JP 21683182 A JP21683182 A JP 21683182A JP S59107253 A JPS59107253 A JP S59107253A
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- Japan
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- gel
- dimensional
- substrate
- concn
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44756—Apparatus specially adapted therefor
- G01N27/44773—Multi-stage electrophoresis, e.g. two-dimensional electrophoresis
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- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は臨床検査を目的とした血液などの体液の分析法
に係り、特に、体液中に含まれる諸種蛋白質の多成分同
時分析法に関するものである。
に係り、特に、体液中に含まれる諸種蛋白質の多成分同
時分析法に関するものである。
従来、血液蛋白質の多成分同時分析法として用いられて
いるポリアクリルアミドゲルなどを支持体とする二次元
電気泳動分析法（詳細は例えば「蛋白質・核酸−酵翠」
、共立出版、１９７８年９月号 ２１１頁参照）におい
ては、まず、両性電解質を含む細長い円筒状のゲルをガ
ラス管内に作成し、ゲル管を垂直に立て、ゲルの両端に
電圧をかけ、ゲルの一端に添加した血−後試料中の成分
蛋白質をその等１点の差によシ分離する（一次元目の分
離）。次に、別に、２枚のガラス板の間（ゲル保持用枠
内）に作成しておいたアクリルアミドの濃度勾配を有す
る平板状のゲルの低濃度端に、一次元目の分離を終了し
た円筒状のゲルをガラス管から押し出して乗せ、ゲル板
を垂直に兜て、改めて平板ゲルの濃度勾配方向に通電し
て二次死目の分子量差による分離を行なう。次に、各分
離蛋白質を定量するために、平板ゲルをはさんでいるガ
ラス板２枚をはずし１１例えば、コーマツシープルーな
どの染料溶液にゲルを浸し１白質を染色しさらにパック
グランドの脱染色をし、残存している染色蛋白質スポッ
トの吸光度を測定する。
いるポリアクリルアミドゲルなどを支持体とする二次元
電気泳動分析法（詳細は例えば「蛋白質・核酸−酵翠」
、共立出版、１９７８年９月号 ２１１頁参照）におい
ては、まず、両性電解質を含む細長い円筒状のゲルをガ
ラス管内に作成し、ゲル管を垂直に立て、ゲルの両端に
電圧をかけ、ゲルの一端に添加した血−後試料中の成分
蛋白質をその等１点の差によシ分離する（一次元目の分
離）。次に、別に、２枚のガラス板の間（ゲル保持用枠
内）に作成しておいたアクリルアミドの濃度勾配を有す
る平板状のゲルの低濃度端に、一次元目の分離を終了し
た円筒状のゲルをガラス管から押し出して乗せ、ゲル板
を垂直に兜て、改めて平板ゲルの濃度勾配方向に通電し
て二次死目の分子量差による分離を行なう。次に、各分
離蛋白質を定量するために、平板ゲルをはさんでいるガ
ラス板２枚をはずし１１例えば、コーマツシープルーな
どの染料溶液にゲルを浸し１白質を染色しさらにパック
グランドの脱染色をし、残存している染色蛋白質スポッ
トの吸光度を測定する。
しかしながら、一次元目に用いる細長いゲルは柔らかく
、ガラス管から押し出し、平板ゲルの一端にすきまなく
密着させる操作も機械的方法によシ行なうことは困難で
ある。又、二次元泳動後の柔らかい平板ゲルをガラス板
の間から取り出し、染色、脱染色、吸光度測定など一連
の操作中セ扱うのも、ゲルの破損などの問題があり困難
である。
、ガラス管から押し出し、平板ゲルの一端にすきまなく
密着させる操作も機械的方法によシ行なうことは困難で
ある。又、二次元泳動後の柔らかい平板ゲルをガラス板
の間から取り出し、染色、脱染色、吸光度測定など一連
の操作中セ扱うのも、ゲルの破損などの問題があり困難
である。
本発明の目的は上記二次元電気泳動法のもつ優れた分離
性能は損わず、且つ従来法のもつ欠点を改良した操作性
のよい簡易な二次元ｌ気泳動法を提供することにある。
性能は損わず、且つ従来法のもつ欠点を改良した操作性
のよい簡易な二次元ｌ気泳動法を提供することにある。
本発明は一次元目と二次丸目の電気泳動分離に用いる支
持体（アクリルアミドゲル、アガロースゲルなど）の片
面を機械的強度のある基板（ガラス、ポリエステルなど
）に結合、固定化して用いるものであり、二次元展開さ
せる際に一次元ゲルを二次元ゲル内に設けた溝に組みこ
み、さらに両者を一体化するため、隙間に溶液状のアガ
ロースなどを流しこんで固化して用いるものである。こ
れにより−、二次元移行がスムースに行なわれるため、
分離性能も損わず操作性の優れた゛１気泳動法となる。
持体（アクリルアミドゲル、アガロースゲルなど）の片
面を機械的強度のある基板（ガラス、ポリエステルなど
）に結合、固定化して用いるものであり、二次元展開さ
せる際に一次元ゲルを二次元ゲル内に設けた溝に組みこ
み、さらに両者を一体化するため、隙間に溶液状のアガ
ロースなどを流しこんで固化して用いるものである。こ
れにより−、二次元移行がスムースに行なわれるため、
分離性能も損わず操作性の優れた゛１気泳動法となる。
一９二次元泳動用支持体について以下に説明を加える。
一次元支持体の構造はシランカプリング処理しり巾の細
い基板（たとえばガラス、ポリエステル基板）にアクリ
ルアミドのポリマーゲルの片面を結合し、他の片面は開
放状態になっている。ゲルを固定する基板は表面を清浄
に保ったのちアルカリ処理（たとえば６Ｎ−ＮａＯＨ溶
液中に浸漬、水洗、乾燥）で表面を活性化したのち、こ
れをシランカプリング剤（Ｒ８ｉＸｓ、Ｒはたとえばビ
ニル基、メルカプトグロビル基、メタクリルオキシグロ
ビル基、グリシドオキシグロビル基などの有機残基、Ｘ
はエトキシ、メトキシ、アセトキシなどに代表される有
機残基からなる化合物）で表面処理して基板上の水酸基
とＸ基の間で脱水縮合を起させる。能力Ｒとアクリルア
ミド不飽和二重結合との間で結合が起ることによジアク
リルアミドが基板に固定化される。
い基板（たとえばガラス、ポリエステル基板）にアクリ
ルアミドのポリマーゲルの片面を結合し、他の片面は開
放状態になっている。ゲルを固定する基板は表面を清浄
に保ったのちアルカリ処理（たとえば６Ｎ−ＮａＯＨ溶
液中に浸漬、水洗、乾燥）で表面を活性化したのち、こ
れをシランカプリング剤（Ｒ８ｉＸｓ、Ｒはたとえばビ
ニル基、メルカプトグロビル基、メタクリルオキシグロ
ビル基、グリシドオキシグロビル基などの有機残基、Ｘ
はエトキシ、メトキシ、アセトキシなどに代表される有
機残基からなる化合物）で表面処理して基板上の水酸基
とＸ基の間で脱水縮合を起させる。能力Ｒとアクリルア
ミド不飽和二重結合との間で結合が起ることによジアク
リルアミドが基板に固定化される。
二次元泳動用支持体である片面固定の濃度勾配平板ゲル
の作成は以下の手順で行なう。たとえば１１Ｃｒｙ＋角
の基板をスペーサを介してシランカプリング処理面、未
処理面を交互に向かい合わせ組合わせた形で平板ゲル製
造用の容器内に垂直に挿入する。これにあらかじめ組ま
れたプログラムに従って連続的に濃度変化をつけたアク
リルアミドモノマー、架橋剤、そして重合触媒の混合溶
液を注入して濃度勾配を形成させたのち触媒作用により
重合させポリマーゲルとする。スペーサとプログラムを
変えることによシ任意の厚さ、任意の濃度勾配を有する
片面固定平板ゲルが得られる。尚基板上部のアクリルア
ミド低濃度位置に一次元ゲル埋め込み用の溝を作成する
ための鋳型を設けておく。
の作成は以下の手順で行なう。たとえば１１Ｃｒｙ＋角
の基板をスペーサを介してシランカプリング処理面、未
処理面を交互に向かい合わせ組合わせた形で平板ゲル製
造用の容器内に垂直に挿入する。これにあらかじめ組ま
れたプログラムに従って連続的に濃度変化をつけたアク
リルアミドモノマー、架橋剤、そして重合触媒の混合溶
液を注入して濃度勾配を形成させたのち触媒作用により
重合させポリマーゲルとする。スペーサとプログラムを
変えることによシ任意の厚さ、任意の濃度勾配を有する
片面固定平板ゲルが得られる。尚基板上部のアクリルア
ミド低濃度位置に一次元ゲル埋め込み用の溝を作成する
ための鋳型を設けておく。
を
以下本発明の一実施例を第１〜ＩＮＫより説明する。
実施例１
細巾のガラス板ｆ！４１図１ （４Ｘ１００Ｘ１ｇ）を
メタクリルオキシグロビルトリメトキシシランで処理し
たのち、この中央部にアクリルアミドポリマーゲル２（
サイズ４ Ｘ ’８０ Ｘ ０．５ ｒｒａｎ、組成ア
クリルアミドモノマ３．８％、ＮＮ′メチレンビスアク
リルアミド０．２％、テトラメチルエチレンジ７ミｙ０
．０２８％、過硫酸アンモニウム０．０７％、両性担体
、たとえばＬＫＢ社製アンフオラインＰ Ｈ３，５〜９
．５．２％）の薄層を結合させる。これを水平型電気泳
動装置第４図の冷却板上に水平に置き血清３μｔをゲル
上のサンプル孔（第１図の３）に注入する。ゲルの両端
はそれぞれｏ、ｏｉＭリン酸（陽極）と０．０４Ｍ水酸
化ナトリウム溶液（陰極）にｐ紙で液絡させ、３ｏｏ■
で４時間電気泳動して等電点差による蛋白質の分離を行
なう。
メタクリルオキシグロビルトリメトキシシランで処理し
たのち、この中央部にアクリルアミドポリマーゲル２（
サイズ４ Ｘ ’８０ Ｘ ０．５ ｒｒａｎ、組成ア
クリルアミドモノマ３．８％、ＮＮ′メチレンビスアク
リルアミド０．２％、テトラメチルエチレンジ７ミｙ０
．０２８％、過硫酸アンモニウム０．０７％、両性担体
、たとえばＬＫＢ社製アンフオラインＰ Ｈ３，５〜９
．５．２％）の薄層を結合させる。これを水平型電気泳
動装置第４図の冷却板上に水平に置き血清３μｔをゲル
上のサンプル孔（第１図の３）に注入する。ゲルの両端
はそれぞれｏ、ｏｉＭリン酸（陽極）と０．０４Ｍ水酸
化ナトリウム溶液（陰極）にｐ紙で液絡させ、３ｏｏ■
で４時間電気泳動して等電点差による蛋白質の分離を行
なう。
他方二次死目に用いる濃度勾配ゲル（４〜１７％）第２
図４も同様にシランカプリング処理をしたガラス基板５
（１１０Ｘ１１０Ｘ１＋＋ｎｎ）に結合させる。作成
する際低濃度側先端に４％の均−濃度帯（１０ｗｍ）を
作シ、その中に一次元ゲル埋め込ミ用のスペース７（５
Ｘ８５Ｘ１ｍｍ）を設ケておく。二次丸目の電気泳動は
基板５を水平型電気泳動装置第４図の冷却板上に水平に
のせ、ゲル両端をトリス−グリシン緩衝液（ｐ Ｈ８，
６）に濾紙で液絡させる。−次元ゲルは泳動終了後直ち
に基板を上にして濃度勾配ゲル上の所定の位置に組み込
み第３図ａ１両者の間隙に低融点アガロース６０１％溶
液を注入一体化させたのち２００ｖで３時間泳動を行な
い分子量分離を行なう。心気泳動終了ゲルは基板ごとゴ
ーマツシープルーＲ２５０染色液（メタノール５０％、
酢酸７％）で染色したの一バックグランドの脱染を７％
酢酸溶液中で行なう。
図４も同様にシランカプリング処理をしたガラス基板５
（１１０Ｘ１１０Ｘ１＋＋ｎｎ）に結合させる。作成
する際低濃度側先端に４％の均−濃度帯（１０ｗｍ）を
作シ、その中に一次元ゲル埋め込ミ用のスペース７（５
Ｘ８５Ｘ１ｍｍ）を設ケておく。二次丸目の電気泳動は
基板５を水平型電気泳動装置第４図の冷却板上に水平に
のせ、ゲル両端をトリス−グリシン緩衝液（ｐ Ｈ８，
６）に濾紙で液絡させる。−次元ゲルは泳動終了後直ち
に基板を上にして濃度勾配ゲル上の所定の位置に組み込
み第３図ａ１両者の間隙に低融点アガロース６０１％溶
液を注入一体化させたのち２００ｖで３時間泳動を行な
い分子量分離を行なう。心気泳動終了ゲルは基板ごとゴ
ーマツシープルーＲ２５０染色液（メタノール５０％、
酢酸７％）で染色したの一バックグランドの脱染を７％
酢酸溶液中で行なう。
以上の操作で１００種以上の蛋白質の分離パターンが得
られる。
られる。
本発明において、一次元目の泳動分、蝋を行なうための
支持体はポリアクリルアミドゲルに限る必要はなく、他
の例えばアガロースゲルでも良い。
支持体はポリアクリルアミドゲルに限る必要はなく、他
の例えばアガロースゲルでも良い。
すなわち、１％の濃度のアガロースゲルをガラス板上、
第１図１の支持体として用いて、二次元泳動を行なった
ところ、ポリアクリルアミドゲルを支持体２として用い
た鳴合と同様の結果を得た。
第１図１の支持体として用いて、二次元泳動を行なった
ところ、ポリアクリルアミドゲルを支持体２として用い
た鳴合と同様の結果を得た。
なお本発明はアガロースが一次元ゲルの周辺をカバーす
るため、−９二次元移行時の試料の自由拡散を押える効
果がある。特に低融点アガロース使用は熱による蛋白質
の変性や一次元泳動分離成分の拡散を無視できると云う
メリットをもたらす。
るため、−９二次元移行時の試料の自由拡散を押える効
果がある。特に低融点アガロース使用は熱による蛋白質
の変性や一次元泳動分離成分の拡散を無視できると云う
メリットをもたらす。
本発明によれば一次元目と二次死目の各々機械的強度の
低いゲル状支持体を直接取扱かう必要がなくなり、固い
基板ごと取扱えるため操作が簡略化され、更に−、二次
元の移行を定位１ｆ、に固定化したため二次元泳動像の
再現性、分離畦端の性能向上をもたらした。
低いゲル状支持体を直接取扱かう必要がなくなり、固い
基板ごと取扱えるため操作が簡略化され、更に−、二次
元の移行を定位１ｆ、に固定化したため二次元泳動像の
再現性、分離畦端の性能向上をもたらした。
第１図ａ及びｂは基板固定型−次元用支持体の正面図及
び側面図、第２図は基板固定型濃度勾配ゲルの正面図、
第３図ａ及びｂは、上記濃度勾配ゲルに一次元ゲルを一
体化したものの側面図及びａの丸印中の部分拡大図、第
４図は水平型１．気泳動装置の側面図である。 ｌ・・・−次元泳動支持体の基板、２・・・−次元泳動
用ゲル、３・・・試料充填用の孔、４・・・二次元泳動
用濃度勾配ゲル、５・・・濃度勾配ゲル基板、６・・・
アガロース、７・・・−次元ゲル埋め込み用スペース、
８・・・スポンジ、９・・・緩衝液液絡用濾紙、１０・
・・電俺、第 １ 図 石 ２ 口 第 ３ 図 ■ ４ 図
び側面図、第２図は基板固定型濃度勾配ゲルの正面図、
第３図ａ及びｂは、上記濃度勾配ゲルに一次元ゲルを一
体化したものの側面図及びａの丸印中の部分拡大図、第
４図は水平型１．気泳動装置の側面図である。 ｌ・・・−次元泳動支持体の基板、２・・・−次元泳動
用ゲル、３・・・試料充填用の孔、４・・・二次元泳動
用濃度勾配ゲル、５・・・濃度勾配ゲル基板、６・・・
アガロース、７・・・−次元ゲル埋め込み用スペース、
８・・・スポンジ、９・・・緩衝液液絡用濾紙、１０・
・・電俺、第 １ 図 石 ２ 口 第 ３ 図 ■ ４ 図
Claims (1)
- １、二次元ｉ「気泳動法において、濃度勾配ゲルの体化
させるため隙間にアガロース溶液を注入固化して二次死
目の電気泳動を行なうことを特徴とする二次元電気泳動
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57216831A JPS59107253A (ja) | 1982-12-13 | 1982-12-13 | 二次元電気泳動法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57216831A JPS59107253A (ja) | 1982-12-13 | 1982-12-13 | 二次元電気泳動法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59107253A true JPS59107253A (ja) | 1984-06-21 |
Family
ID=16694573
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57216831A Pending JPS59107253A (ja) | 1982-12-13 | 1982-12-13 | 二次元電気泳動法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59107253A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0162049U (ja) * | 1987-10-15 | 1989-04-20 | ||
| JPH01163138U (ja) * | 1988-05-06 | 1989-11-14 | ||
| JP2007064848A (ja) * | 2005-08-31 | 2007-03-15 | Sharp Corp | 自動化２次元電気泳動装置および装置構成器具 |
| WO2010008008A1 (ja) * | 2008-07-15 | 2010-01-21 | 凸版印刷株式会社 | 電気泳動器具および電気泳動方法 |
-
1982
- 1982-12-13 JP JP57216831A patent/JPS59107253A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0162049U (ja) * | 1987-10-15 | 1989-04-20 | ||
| JPH01163138U (ja) * | 1988-05-06 | 1989-11-14 | ||
| JP2007064848A (ja) * | 2005-08-31 | 2007-03-15 | Sharp Corp | 自動化２次元電気泳動装置および装置構成器具 |
| US7964077B2 (en) | 2005-08-31 | 2011-06-21 | Sharp Kabushiki Kaisha | Automated two-dimensional electrophoresis apparatus and instrument constituting the apparatus |
| WO2010008008A1 (ja) * | 2008-07-15 | 2010-01-21 | 凸版印刷株式会社 | 電気泳動器具および電気泳動方法 |
| JP2010025584A (ja) * | 2008-07-15 | 2010-02-04 | Toppan Printing Co Ltd | 電気泳動器具および電気泳動方法 |
| US8500981B2 (en) | 2008-07-15 | 2013-08-06 | Toppan Printing Co., Ltd. | Electrophoresis apparatus and electrophoresis method |
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