JPS60236057A - 二次元電気泳動装置 - Google Patents
二次元電気泳動装置Info
- Publication number
- JPS60236057A JPS60236057A JP59090957A JP9095784A JPS60236057A JP S60236057 A JPS60236057 A JP S60236057A JP 59090957 A JP59090957 A JP 59090957A JP 9095784 A JP9095784 A JP 9095784A JP S60236057 A JPS60236057 A JP S60236057A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gel
- dimensional
- electrophoresis
- groove
- support
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44756—Apparatus specially adapted therefor
- G01N27/44773—Multi-stage electrophoresis, e.g. two-dimensional electrophoresis
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は臨床検査及びバイオテクノロジー分野における
蛋白質の分析法に用いる二次元電気泳動（１） 装置に係わり、特に諸種蛋白質の多成分同時分析法に用
いる二次元電気泳動装置に関する。
蛋白質の分析法に用いる二次元電気泳動（１） 装置に係わり、特に諸種蛋白質の多成分同時分析法に用
いる二次元電気泳動装置に関する。
従来、蛋白質の多成分同時分析法として用いられている
ポリアクリルアミドゲルなどを支持体とする二次元電気
泳動分析法（詳細は例えば「蛋白質・核酸−酵素」、共
立出版、１９７８年９月号２１１頁参照）においては、
まず、両性電解質を ゛含む細長い円筒状のゲルをガラ
ス管内に作成し、ゲル管を垂直に立て、ゲルの両端に電
圧をかけ、ゲルの一端に添加した試料中の成分蛋白質を
その等電点の差により分離する（−次元［１の分離）。
ポリアクリルアミドゲルなどを支持体とする二次元電気
泳動分析法（詳細は例えば「蛋白質・核酸−酵素」、共
立出版、１９７８年９月号２１１頁参照）においては、
まず、両性電解質を ゛含む細長い円筒状のゲルをガラ
ス管内に作成し、ゲル管を垂直に立て、ゲルの両端に電
圧をかけ、ゲルの一端に添加した試料中の成分蛋白質を
その等電点の差により分離する（−次元［１の分離）。
次に、別に、２枚のガラス板の間（ゲル保持用枠内）に
作成しておいたアクリルアミドの濃度勾配を有する平板
状のゲルの低濃度端に、一次元目の分離を終了した円筒
状のゲルをガラス管から押し出して乗せ、ゲル板を垂直
しこ立て、改めて平板ゲルの濃度勾配方向に通電して二
次死目の分子量差による分離を行なう。次に、各分離蛋
白質を定量するために、平板ゲルをはさんでいるガラス
板２（２） 枚をはずし１例えば、コーマツシーブルーなどの染料溶
液にゲルを浸し蛋白質を染色しさらにバックグランドの
脱染色をし、残存している染色蛋白質スポットの吸光度
を測定する。
作成しておいたアクリルアミドの濃度勾配を有する平板
状のゲルの低濃度端に、一次元目の分離を終了した円筒
状のゲルをガラス管から押し出して乗せ、ゲル板を垂直
しこ立て、改めて平板ゲルの濃度勾配方向に通電して二
次死目の分子量差による分離を行なう。次に、各分離蛋
白質を定量するために、平板ゲルをはさんでいるガラス
板２（２） 枚をはずし１例えば、コーマツシーブルーなどの染料溶
液にゲルを浸し蛋白質を染色しさらにバックグランドの
脱染色をし、残存している染色蛋白質スポットの吸光度
を測定する。
しかしながら、一次元目に用いる細長いゲルは柔らかく
、ガラス管から押し出し、平板ゲルの一端にすきまなく
密着させる操作も機械的方法により行なうことは困難で
ある。又、二次元泳動後の柔らかい平板ゲルをガラス板
の間から取り出し、染色、脱染色、吸光度測定など一連
の操作中取扱うのも、ゲルの破損などの問題があり困難
である。
、ガラス管から押し出し、平板ゲルの一端にすきまなく
密着させる操作も機械的方法により行なうことは困難で
ある。又、二次元泳動後の柔らかい平板ゲルをガラス板
の間から取り出し、染色、脱染色、吸光度測定など一連
の操作中取扱うのも、ゲルの破損などの問題があり困難
である。
本発明の目的は上記二次元電気泳動法のもつ優れた分離
性能は損わず、且つ従来法のもつ欠点を改良した二次元
電気泳動装置を提供することにある。
性能は損わず、且つ従来法のもつ欠点を改良した二次元
電気泳動装置を提供することにある。
本発明は一次元目と二次元口の電気泳動分離に用いる支
持体（アクリルアミドゲル、アガロースゲルなど）の片
面を機械的強度のある基板（ガラ（３） ス、ポリエステルなど）に結合、固定化して用いるもの
であり、二次元展開させる際に一次元ゲルを二次元ゲル
内に設けた溝に回転運動により組みこみ、さらに両者を
一体化するため、隙間に溶液状のアガロースなどを流し
こんで固化して用いることのできる装置である。この装
置により、−９二次元移行がスムーズに行なわれるため
、分離性能も損わず操作性及び再現性の優れた結果が得
られる。
持体（アクリルアミドゲル、アガロースゲルなど）の片
面を機械的強度のある基板（ガラ（３） ス、ポリエステルなど）に結合、固定化して用いるもの
であり、二次元展開させる際に一次元ゲルを二次元ゲル
内に設けた溝に回転運動により組みこみ、さらに両者を
一体化するため、隙間に溶液状のアガロースなどを流し
こんで固化して用いることのできる装置である。この装
置により、−９二次元移行がスムーズに行なわれるため
、分離性能も損わず操作性及び再現性の優れた結果が得
られる。
一９二次元泳動用支持体について以下に説明を加える。
一次元支持体の構造はシランカプリング処理した巾の細
い基板（たとえばガラス、ポリエステル基板）にアクリ
ルアミドのポリマーゲルの片面を結合し、他の片面は開
放状態になっている。ゲルを固定する基板は表面を清浄
に保ったのちアルカリ処理（たとえば６Ｎ−Ｎａ○Ｉ（
溶液中に浸漬。
い基板（たとえばガラス、ポリエステル基板）にアクリ
ルアミドのポリマーゲルの片面を結合し、他の片面は開
放状態になっている。ゲルを固定する基板は表面を清浄
に保ったのちアルカリ処理（たとえば６Ｎ−Ｎａ○Ｉ（
溶液中に浸漬。
水洗、乾燥）で表面を活性化したのち、これをシランカ
プリング剤（ＲＳ ｉＸ ３１ Ｒはたとえばビニル基
、メルカプトプロピル基、メタクリルオキ（４） ジプロピル基、グリシドオキシプロピル基などの有機残
基、Ｘはエトキシ、メトキシ、アセトキシなどに代表さ
れる有機残基からなる化合物）で表面処理して基板上の
水酸基とＸ基の間で脱水縮合を起させる。他方Ｒとアク
リルアミド不飽和二重結合との間で結合が起ることによ
りアクリルアミドが基板に固定化される。
プリング剤（ＲＳ ｉＸ ３１ Ｒはたとえばビニル基
、メルカプトプロピル基、メタクリルオキ（４） ジプロピル基、グリシドオキシプロピル基などの有機残
基、Ｘはエトキシ、メトキシ、アセトキシなどに代表さ
れる有機残基からなる化合物）で表面処理して基板上の
水酸基とＸ基の間で脱水縮合を起させる。他方Ｒとアク
リルアミド不飽和二重結合との間で結合が起ることによ
りアクリルアミドが基板に固定化される。
二次元泳動用支持体である片面固定の濃度勾配平板ゲル
の作成は以下の手順で行なう。たとえば１１ｃ１１１角
の基板をスペーサを介してシランカプリング処理面、未
処理面を交互に向かい合わせ組合わせた形で平板ゲル製
造用の容器内に垂直に挿入する。これにあらかじめ組ま
れたプログラムに従って連続的に濃度変化をつけたアク
リルアミドモノマー、架橋剤、そして重合触媒の混合溶
液を注入して濃度勾配を形成させたのち触媒作用により
重合させポリマーゲルとする。スペーサとプログラムを
変えることにより任意の厚さ、任意の濃度勾配を有する
片面固定平板ゲルが得られる。尚基板上部のアクリルア
ミド低濃度位置に一次元ゲル（５） 埋め込み用の溝を作成するための鋳型を設けておく。
の作成は以下の手順で行なう。たとえば１１ｃ１１１角
の基板をスペーサを介してシランカプリング処理面、未
処理面を交互に向かい合わせ組合わせた形で平板ゲル製
造用の容器内に垂直に挿入する。これにあらかじめ組ま
れたプログラムに従って連続的に濃度変化をつけたアク
リルアミドモノマー、架橋剤、そして重合触媒の混合溶
液を注入して濃度勾配を形成させたのち触媒作用により
重合させポリマーゲルとする。スペーサとプログラムを
変えることにより任意の厚さ、任意の濃度勾配を有する
片面固定平板ゲルが得られる。尚基板上部のアクリルア
ミド低濃度位置に一次元ゲル（５） 埋め込み用の溝を作成するための鋳型を設けておく。
以下、本発明の実施例を第１図により説明する。
実施例１゜
細巾のガラス板第１図１をメタクリルオキシプロピルト
リメトキシシランで処理したのち、この中央部にアクリ
ルアミドポリマーゲル２（組成アクリルアミドモノマー
３．８ ％、ＮＮ’ メチレンビスアクリルアミド０．
２ ％、テトラメチルエチレンジアミン０．０２８％、
過疎法アンモニウム０．０７ ％２両性担体、たとえば
ＬＫＢ社製アンフオラインＰＨ３，５〜９．５．２％）
の薄層を結合させる。これを支持体６の上に固定し水平
に置き血清３μΩをゲル上のサンプル孔（第１図の３）
に注入する。ゲルの左右両端はそれぞれ０．０１Ｍリン
酸（陽極）と０．０４ Ｍ水酸化ナトリウム溶液（陰極
）に濾紙で液絡させ、３００ｖで４時間電気泳動して等
電点差による蛋白質の分離を行なう。
リメトキシシランで処理したのち、この中央部にアクリ
ルアミドポリマーゲル２（組成アクリルアミドモノマー
３．８ ％、ＮＮ’ メチレンビスアクリルアミド０．
２ ％、テトラメチルエチレンジアミン０．０２８％、
過疎法アンモニウム０．０７ ％２両性担体、たとえば
ＬＫＢ社製アンフオラインＰＨ３，５〜９．５．２％）
の薄層を結合させる。これを支持体６の上に固定し水平
に置き血清３μΩをゲル上のサンプル孔（第１図の３）
に注入する。ゲルの左右両端はそれぞれ０．０１Ｍリン
酸（陽極）と０．０４ Ｍ水酸化ナトリウム溶液（陰極
）に濾紙で液絡させ、３００ｖで４時間電気泳動して等
電点差による蛋白質の分離を行なう。
（６）
他方二次元口に用いる濃度勾配ゲル（４〜１７％、第１
図４）も同様にシランカプリング処理をしたガラス基板
５ （１１０Ｘ２３０Ｘ１１Ｉｆｌ）に結合させ、その
中に一次元ゲル埋め込み用の溝７をゲルの低濃度端に設
けておく。二次死目の電気泳動は基板５を冷却板上に水
平にのせ、ゲルの濃度勾配方向の両端を１−リス−グリ
シン緩衝液（ＰＨ８，６）にか紙を経由して液絡させる
。−次元ゲルは泳動終了後直ちに、駆動装置９を矢印の
ように動作し、回転軸８のまわりに１８０度回転させ、
ガラス基板ｌを上にして溝７に移行させる。−次元ゲル
２と溝７の間隙は低融点アガロースによりうめて両者を
一体化させたのち、２００Ｖで３時間泳動を行ない分子
量分離を行なう。二次死目の電気泳動終了後ゲル４は基
板５ごとニーマツシーブルーＲ２５０染色液（メタノー
ル５０％、酢酸７％を含む）で染色したのち、バックグ
ランドの脱染を７％酢酸水溶液中で行なう。以上の操作
で１００種類位の蛋白質の分離スポット像が得られる。
図４）も同様にシランカプリング処理をしたガラス基板
５ （１１０Ｘ２３０Ｘ１１Ｉｆｌ）に結合させ、その
中に一次元ゲル埋め込み用の溝７をゲルの低濃度端に設
けておく。二次死目の電気泳動は基板５を冷却板上に水
平にのせ、ゲルの濃度勾配方向の両端を１−リス−グリ
シン緩衝液（ＰＨ８，６）にか紙を経由して液絡させる
。−次元ゲルは泳動終了後直ちに、駆動装置９を矢印の
ように動作し、回転軸８のまわりに１８０度回転させ、
ガラス基板ｌを上にして溝７に移行させる。−次元ゲル
２と溝７の間隙は低融点アガロースによりうめて両者を
一体化させたのち、２００Ｖで３時間泳動を行ない分子
量分離を行なう。二次死目の電気泳動終了後ゲル４は基
板５ごとニーマツシーブルーＲ２５０染色液（メタノー
ル５０％、酢酸７％を含む）で染色したのち、バックグ
ランドの脱染を７％酢酸水溶液中で行なう。以上の操作
で１００種類位の蛋白質の分離スポット像が得られる。
（７）
本実施例では２枚の泳動像を同時に作る装置について記
述したが、勿論、回転軸８に、多数の二次元ゲルを固定
しておけば多数の泳動分離像を同時に手間を省いて再現
的に作ることができる。
述したが、勿論、回転軸８に、多数の二次元ゲルを固定
しておけば多数の泳動分離像を同時に手間を省いて再現
的に作ることができる。
第１図において、支持棒６及び回転軸８は電気泳動電流
の短絡を防ぐため絶縁性の材料で作成することが望まし
い。
の短絡を防ぐため絶縁性の材料で作成することが望まし
い。
なお、第３図２に示すごとく、−次元泳動用ゲルとして
、その断面を台形に成型したものを用い、このゲルを受
け入れる二次死目のゲル上の溝７の断面を逆台形状に成
型しておけば、二つのゲルのはめ合いが正確に行なわれ
、より良い結果が得られる。
、その断面を台形に成型したものを用い、このゲルを受
け入れる二次死目のゲル上の溝７の断面を逆台形状に成
型しておけば、二つのゲルのはめ合いが正確に行なわれ
、より良い結果が得られる。
本発明の装置を用いれば一次元目と二次死目の各々機械
的強度の低いゲル状の泳動用支持体を直接取扱う必要が
なくなり、固い基板ごと取扱えるため操作が簡略化され
る。特に、一次元目のゲルの二次死目ゲルへの移行を人
手を介さずもつとも簡単な回転運動により行なうことが
できるため多（８） 数の試料を再現性良く分析することが可能になった。本
発明は二次元電気泳動法の自動化に有効である。
的強度の低いゲル状の泳動用支持体を直接取扱う必要が
なくなり、固い基板ごと取扱えるため操作が簡略化され
る。特に、一次元目のゲルの二次死目ゲルへの移行を人
手を介さずもつとも簡単な回転運動により行なうことが
できるため多（８） 数の試料を再現性良く分析することが可能になった。本
発明は二次元電気泳動法の自動化に有効である。
第１図は本発明における二次元泳動装置の平面図、第２
．第３図は同装置の断面図である。 ■・・・−次元泳動用ゲルの基板、２・・・−次元泳動
用ゲル、３・・・試料添加用孔、４・・・二次元泳動用
ゲル、５・・・二次元泳動用ゲルの基板、６・・・支持
棒、７・・・−次元泳動用ゲルを入れる溝、８・・・回
転軸、９・・・（９） 第 ２ 口 伯 ３ 口 て−＼ ７ ｄ再 −２−−４
．第３図は同装置の断面図である。 ■・・・−次元泳動用ゲルの基板、２・・・−次元泳動
用ゲル、３・・・試料添加用孔、４・・・二次元泳動用
ゲル、５・・・二次元泳動用ゲルの基板、６・・・支持
棒、７・・・−次元泳動用ゲルを入れる溝、８・・・回
転軸、９・・・（９） 第 ２ 口 伯 ３ 口 て−＼ ７ ｄ再 −２−−４
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、回転軸に固定した支持台、該支持台上に配置された
一次元目の電気泳動用支持体、他の支持台上に配置され
た二次死目の電気泳動用支持体よりなり、上記回転軸を
回転せした際、上記一次元目の電気泳動用支持体が上記
二次死目の電気泳動用支持体上又は支持体中の所定の位
置に到達するように両者を配置したことを特徴とする二
次元電気泳動装置。 ２、一次元目の電気泳動用支持体の断面が台形であり、
二次死目の電気泳動用支持体上の所定の位置にその断面
が逆台形である溝を有することを特徴とする特許請求の
範囲第１項記載の二次元電気泳動装置。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59090957A JPS60236057A (ja) | 1984-05-09 | 1984-05-09 | 二次元電気泳動装置 |
| US06/728,234 US4666581A (en) | 1984-05-09 | 1985-04-29 | Apparatus for two-dimensional electrophoresis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59090957A JPS60236057A (ja) | 1984-05-09 | 1984-05-09 | 二次元電気泳動装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60236057A true JPS60236057A (ja) | 1985-11-22 |
Family
ID=14012965
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59090957A Pending JPS60236057A (ja) | 1984-05-09 | 1984-05-09 | 二次元電気泳動装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60236057A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02309249A (ja) * | 1989-05-24 | 1990-12-25 | Shimadzu Corp | 二次元電気泳動装置用ゲル支持体および二次元電気泳動方法 |
| JPH0317560U (ja) * | 1989-06-30 | 1991-02-21 | ||
| JPH04303756A (ja) * | 1991-03-29 | 1992-10-27 | Shimadzu Corp | 二次元電気泳動装置 |
| JP2003315312A (ja) * | 2002-04-12 | 2003-11-06 | Tecan Trading Ag | 分子分離用カセット、システム、および２ｄゲル電気泳動方法 |
| US8221604B2 (en) | 2002-10-28 | 2012-07-17 | Katayanagi Institute | Method for controlling substance transfer |
-
1984
- 1984-05-09 JP JP59090957A patent/JPS60236057A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02309249A (ja) * | 1989-05-24 | 1990-12-25 | Shimadzu Corp | 二次元電気泳動装置用ゲル支持体および二次元電気泳動方法 |
| JPH0317560U (ja) * | 1989-06-30 | 1991-02-21 | ||
| JPH04303756A (ja) * | 1991-03-29 | 1992-10-27 | Shimadzu Corp | 二次元電気泳動装置 |
| JP2003315312A (ja) * | 2002-04-12 | 2003-11-06 | Tecan Trading Ag | 分子分離用カセット、システム、および２ｄゲル電気泳動方法 |
| US8221604B2 (en) | 2002-10-28 | 2012-07-17 | Katayanagi Institute | Method for controlling substance transfer |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4865707A (en) | Capillary gel electrophoresis columns | |
| US4865706A (en) | High performance microcapillary gel electrophoresis | |
| Görg et al. | Gel gradient electrophoresis, isoelectric focusing and two-dimensional techniques in horizontal, ultrathin polycrylamide layers | |
| Ansorge | Fast and sensitive detection of protein and DNA bands by treatment with potassium permanganate | |
| EP0155977B1 (en) | Method and device for electrophoresis | |
| US4088561A (en) | Apparatus for electrophoresis separation | |
| US4997537A (en) | High performance microcapillary gel electrophoresis | |
| US5112460A (en) | High performance microcapillary gel electrophoresis | |
| US5407546A (en) | Method for high-resolution two-dimensional electrophoresis and device for carrying out the same | |
| US4666581A (en) | Apparatus for two-dimensional electrophoresis | |
| US5228971A (en) | Horizontal gel electrophoresis apparatus | |
| US5137613A (en) | Horizontal gel electrophoresis apparatus | |
| US5989403A (en) | Electrophoresis assembly with filling means | |
| US6139709A (en) | Apparatus for producing electrophoresis gels | |
| US20060275917A1 (en) | Method for staining and destaining gel, electrophoresis destaining device for gel, and kit for staining and destaining gel | |
| US5324412A (en) | Electrophoresis plates with grooves | |
| JPS60236057A (ja) | 二次元電気泳動装置 | |
| US7250100B2 (en) | Two dimensional electrophoresis cassette | |
| EP0417925A2 (en) | High performance microcapillary gel electrophoresis | |
| JPH0424658B2 (ja) | ||
| US5759375A (en) | Miniaturized disposable gels for DNA analysis | |
| JPS58193446A (ja) | 簡易２次元電気泳動法 | |
| JPS59107253A (ja) | 二次元電気泳動法 | |
| Görg et al. | Two-dimensional electrophoresis with immobilized pH gradients | |
| JPH07128285A (ja) | 電気泳動用支持体の作製法 |