JPS63106544A - 熱化学ルミネセントシクロデキストリン複合体 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 本発明は熱化学ルミネセン！”　（ｔｈｅｒｍｏｅｈｅ
ｍｉ−１ｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ）シクロデキストリン複
合体、より特定的にはイムノアッセイでの標識として有
用な、アダマンチリデンアダマンタン１，２−ジオキセ
タンとシクロデキストリンとの熱化学ルミネセント複合
体に係わる。

熱化学ルミネセント化合物とは、通常室温以上の温度に
加熱すると化学反応を起こして、ルミネセンスを発する
ような化合物である。一般に、この種の化合物は熱によ
って誘導される分解又は転位（ｒｅａｒｒａｎｇｅｎ＋
ｅｎｔ）を生じ、その結果電子的に励起した状態の生成
物が得られ、この生成物が放射性遷移（ｒａｄｉａｔｉ
ｖｅ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）によって基底状態になり
ルミネセンスを発するのである。

イムノアッセイ分野で有用な熱化学ルミネセント化合物
はアダマンチリデンアダマンタン１，２−ジオキセタン
であり、この化合物は約２４０℃の温度に加熱すると熱
化学ルミネセント内部反応を生じる。熱化学ルミネセン
スを発し得る標識した免疫試薬を製造するためには、ア
ダマンチリデンアダマンタン１．２−ジオキセタンの核
をご゛免疫試薬例えば抗原又は抗体と反応し得る有機基
で置換して、共有結□合した標識付き免疫試薬を形成す
る。この標識付き免疫試薬は通常のイムノアッセイに使
用できる。これを用いれば、熱化学ルミネセント置換基
で標識した免疫試薬が相補的免疫試薬と複合し、標識付
き免疫複合体を形成するような熱化学ルミネセントイム
ノアッセイが可能になる。前記標識付き免疫複合体は例
えば固体支持体への沈澱又は吸着によって試薬から分離
できる。このようにして形成された免疫複合体の量は、
標識の熱化学ルミネセンスを刺激すべく加熱し且つ加熱
された免疫複合体から放出される光の量を測定すること
によって測定できる。

別の方法として、熱化学ルミネセント標識を、表面に免
疫試薬を担持したマイクロカプセル例えばリポソームで
包むこともできる。このマイクロカプセルを水性媒質に
分散し、免疫反応により前記媒質中で相補的免疫試薬と
結合させて、免疫複合体を形成する。この複合体は、遠
心分離、ｒ過等の通常の手段によって媒質から分離する
。次いで、分離した免疫複合体を加熱して熱化学ルミネ
セント化合物を励起し、該ルミネセント複合体から放出
される光の量を測定すれば、存在する免疫複合体の量が
求められる０次いで、未知の標識付き免疫複合体の量又
は濃度を、常法に従い、既知量又は既知濃度の一連の標
準体のルミネセンス強さとの比較から求める。

しかしながら、熱化学ルミネセント標識が免疫試薬に共
有結合していない場合、例えば標識がリポソームのごと
き免疫感受性マイクロカプセルに包まれていると、アダ
マンチリデンアダマンタン１．２−ジオキセタンを使用
する熱化学ルミネセント分析に問題が生じる。アダマン
チリデンアダマンタン１．２−ジオキセタンは、熱化学
ルミネセンスを励起するために使用される比較的高い温
度、例えば２４０℃ではかなりの揮発性を示す。これら
の化合物が非揮発性免疫試薬に共有結合していればこの
揮発は回避されるが、熱化学ルミネセント化合物がマイ
クロカプセル、例えばリポソームに包まれているだけの
場合には、マイクロカプセル自体が加熱によって破壊さ
れると温度の上昇によってこれらの化合物が揮発してし
まうことになる。この現象は、水溶液を含むマイクロカ
プセルを水の沸点より高い温度に加熱した時には明らか
に危険であり、壁が脆弱な脂質膜からなるに過ぎないリ
ポソームの場合には特に問題になる。揮発した化合物は
消失するため、これらの化合物から発せられるルミネセ
ンスが検出できなくなり、測定が不正確になる。

以上の理由から、特にマイクロカプセルを免疫試薬とし
て使用する場合に、熱化学ルミネセント免疫分析の精度
を増大させる手段が以前から求められている。

本発明において、上記過剰な揮発性の問題は、アダマン
チリデンアダマンタン１，２−ジオキセタンとシクロデ
キストリンとの新規の複合体を熱化学ルミネセント標識
として使用する熱化学ルミネセント免疫分析方法によっ
て解決されるに至った。

本発明では、シクロデキストリンとアダマンチリデンア
ダマンタン１．２−ジオキセタンとの複合体を、表面に
免疫試薬を有するマイクロカプセルの中に封入する。こ
のように感受性にしたマイクロカプセルを水溶液に懸濁
させ、このマイクロカプセル懸濁液を相補的免疫試薬と
混合して、感受性マイクロカプセルと相補的免疫試薬と
の免疫複合体を形成する０次いでこの免疫複合体を溶液
から分離し、標識の熱化学ルミネセント反応を励起させ
る温度に加熱する。放出される光を定量し、標準値と比
較する従来の方法で、存在する免疫複合体の量を検出す
る。

本発明は、アダマンチリデンアダマンタン１，２−ジオ
キセタンと＼シクロデキストリンとの熱化学ルミネセン
ト複合体及び該複合体の製造方法に係わる。

本発明はまた、この複合体を用いる免疫分析法にも係わ
る。

本発明は更に、マイクロカプセルに包まれた熱化学ルミ
ネセント化合物を用いるイムノアッセイ法にも係わる。

本発明の熱化学ルミネセント化合物は、アダマンチリデ
ンアダマンタン１，２−ジオキセタン（ａｄａｍａｎｔ
ｙｌｉｄｅｎｅａｄａｍａｎｔａｎｅ　１．２−ｄｉｏ
ｘｅｔａｎｅ）とシクロデキストリンとの複合体である
。シクロデキストリンはＢａｃｉｌｌｕｓ　ｍａｃｅｒ
ａｎｓを澱粉に作用させて均質環状α−（１−４）結合
Ｄ−グルコビラノース単位を形成することによって得ら
れる環状オリゴ糖である。シクロデキストリンは主なも
のが３つ知られており、これらは夫々α−１β−及びγ
−シクロデキストリンと称され、グルコース残基を夫々
６個、７個及び８個含む環を有する。本発明において使
用する好ましいシクロデキストリンはβ−及びγ−シク
ロデキストリンであり、特にγ−シクロデキストリンは
最も好ましい。

本明細書中、シクロデキストリンとは、化学的に修飾さ
れたシクロデキストリン、又はｐ−）ルエン、スルホニ
ル、アジド、ハロゲン、メシチレンスルホニル、バーベ
ンゾイル、アミノ、アルキル又はアルコキシのような官
能基を含むシクロデキストリンを急味する。シクロデキ
ストリンは、例えばシクロデキストリン−（ＯＣＪ−Ｎ
Ｏ３）ｎ、（ＮＨｚ）ｎもしくは−（ＮＣＨ３（ＣＨＯ
））ｎにアミノ化するか、例えばシクロデキストリン−
（ＯＮＯ２）ｎ、（ＯＳＯＪ）ｎ、　　（ＯＰＯＪｚ）
ｎ、−（ＯＣＯＣ，ＢＳ）ｎもしくは−（ＯＣＯＣＨ−
）ｎにエステル化するか、例えばシクロデキストリン−
（ＯＣＨ３）ｎ、−（ＯＣＲ２ＣＯ２Ｎａ）ｎもしくは
−（ＯＣＨ２ＣＨＯＨＣＨｚＯＨ）ｎにエーテル化する
が、又はメチル化し得る。

前記式中、ｎは１がら、前述の基によって置換できるシ
クロデキストリン分子中の基の数に至るまでの範囲で変
化し得る。これらの化学的に修飾したシクロデキストリ
ン、又は官能基を含むシクロデキストリンは当業者には
公知であり、それ自体は本発明の範囲に含まれない。

本発明で有用なアダマンチリデンアダマンタン１．２−
ジオキセタンは式、 〔式中Ｒ’ｇｉＨ，ＣＩ、Ｂｒ、　Ｆ、■、０１１、Ｎ
ｌ１２、ＯＲ”及びＮＨＲ２の中から選択され、Ｒ２は
２０個以下の炭素原子を含む脂肪族有機基である〕 で示されるｆヒ合物を含む、当業者には明らがなように
、これらの分子の熱化学ルミネセンスは分子中のアダマ
ンチリデンアダマンタン１，２−ジオキセタン部分に起
因するため、置換基Ｒ１の本質的な性質は余り重要では
ない、この置換基Ｒ１は当該分子の熱化学ルミネセント
特性を妨害してはならないが、熱化学ルミネセント中心
は置換基Ｒ１がら幾らか離れているため、この条件を満
たすことは難しくない、従って、置換基Ｒ１は広い範囲
で選択できる　ｇ　ｌがＨである未置換分子の他に、Ｒ
’はハロ、ヒドロキシ又はアミノのごとき置換基であり
得る。

Ｒ’はまた、アルコキシであるが又は、式−ＯＲ２もし
くは−ＮＨＲ２［式中、Ｒ２は炭素原子を０１〜ｃ２゜
含む直鎖又は分枝鎖を持つ脂肪族有機基である］で示さ
れる置換アミノ基でもよい　Ｒｌは更に、式−０Ｒ２又
は−ＮＨＲ２［式中８２は炭素原子を２０個以下含むア
シル基である］で示されるエステル又はアミド基でもよ
い、官能置換基Ｒ２を含む置換基Ｒ’ｔ、、鎖中の１つ
以上の炭素が酸素又は窒素で置換された置換基Ｒ′も同
様に有用である。特に、その末端部位にタンパク質と反
応できる官能基を有するオメガ置換された基は有用であ
る。このような基としては、混合無水物、活性エステル
、活性カルボニル基及び、タンパク質のアミノ基と反応
できる類似の基が挙げられる。従って、置換基Ｒ２はＣ
Ｉ〜Ｃ２゜の脂肪族炭化水素基、例えばメチル、エチル
、ヘキシル、デシル、ステアリル及びアラキシル（ａｒ
ａｃｈｉ−ｄｙｌ）　、脂肪族酸性残基、例えばアセチ
ル、プロパノイル、ヘキサノイル、ラウロイル、ステア
ロイル等；官能基を有する脂肪族酸性基、例えば３−ヒ
ドロキシ−プロパノイル、２−しドロキシプロパノイル
等を含み得る。置換基Ｒ′はその立体性その他の特性に
よって、アダマンチリデンアダマンタン１．２−ジオキ
セタンとシクロデキストリンとの複合体の形成を妨害す
るようなものであってはならない、特に、例えばタンパ
ク質分子等のごとき極めて大きな基は前記複合体の形成
を妨害するため、このような基を置換基Ｒ１として使用
するのは好ましくない、また、置換基Ｒ１が比較的小さ
い基である置換アダマンチリデンアダマンタン１，２−
ジオキセタンは、β−シクロデキストリンとの複合体の
形成により適しており、より大きい炉を有する化合物は
γ−シクロデキストリンを用いた場合にしか有用な複合
体を形成しないことが判明した。一般に、γ−シクロデ
キストリンとの複合体が好ましい。

特に好ましい置換アダマンチリデンアダマンタン１，２
−ジオキセタンは式、 で示されるものである。

本発明の熱化学ルミネセント複合体の製造に使用される
任意に置換したアダマンチリデンアダマンタン１．２−
ジオキセタンそのものの一般的製法は従来方法に従うも
のであり、本発明の範囲には含まれない。置換アダマン
チリデンアダマンタンの製造はＭｅｉｊｅｒ、ＥＪ、他
、Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、　４７．２００５（１９８２
）に開示されている。アダマンチリデンアダマンタン１
．２−ジオキセタンの一般的製法は、Ｗｉｅｒｉｎｇａ
、Ｊ、）１．他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅ
ｒｓ　１９７２゜１６９ページに記載されている。

本発明の熱化学ルミネセント複合体を製造するためには
、アダマンチリデンアダマンタン１．２−ジオキセタン
を適当な溶媒中でシクロデキストリンと接触させる。シ
クロデキストリンは水溶性であるが、式■の化合物は水
に比較的少ししか溶解しないため、前記複合体は通常、
式■の化合物を水と混和し得る有機溶媒に溶解し、この
溶液をシクロデキストリン水溶液と混合することによっ
て製造する。水と混和し得る適切な有機溶媒としては、
ジオキサン、低級脂肪族アルコール、例えばエタノール
、アセトン及び１，２−ジメトキシエタンが挙げられる
。アダマンチリデンアダマンタン１，２−ジオキセタン
の好ましい水混和性溶媒はジオキサンである。

熱化学ルミネセント化合物及びシクロデキストリンの濃
度は、シクロデキストリンのモルが大幅に過剰になるよ
うに選択するのが好ましい、前記複合体は通常、水混和
性溶媒中の熱化学ルミネセント化合物溶液とシクロデキ
ストリン水溶液とを混合することによって製造するが、
熱化学ルミネセント化合物をシクロデキストリン水溶液
に溶解する方法もある。原料溶液の混合によって複合体
を製造する場合には、使用相対呈を極めて広い範囲で変
化させ得る。−例として、水混和性溶媒中の熱化学ルミ
ネセント化合物溶液とシクロデキストリン水溶液とをほ
ぼ同量ずつ混合して前記複合体を製造してもよい。別の
方法として、熱化学ルミネセント化合物を比較的少量の
水混和性溶媒に溶解し、この溶液を比較的多量のシクロ
デキストリン水溶液と混合することもできる。これらの
溶液の濃度は、少なくとも等モル量のシクロデキストリ
ン及び熱化学ルミネセント化合物が提供できるように選
択する。しかし、形成される熱化学ルミネセント複合体
の量を最大にするためには、シクロデキストリンのモル
量が実質的に過剰になるように、例えばシクロデキスト
リン対アダマンチリデンアダマンタン１，２−ジオキセ
タンのモル比が１０：１以上、より好ましくは２０：１
以上になるようにするのが好ましい、水混和性有機溶媒
中のアダマンチリデンアダマンタン１，２−ジオキセタ
ン濃度は極めて広い範囲で変えることができ、例えば０
．００１ｍｇ／ｍｌ〜１００＋＋＋ｇ／階ｌ又はそれ以
上の範囲で変化させ得る。熱化学ルミネセント化合物溶
液の量がシクロデキストリン水溶液の容量と同じか又は
やや少ない場合には前記濃度を低くし、比較的少量の熱
化学ルミネセント化合物溶液をそれよりがなり多い量の
シクロデキストリン水溶液と混合する場合には前記濃度
を高くする。複合体形成溶液中のシクロデキストリンの
モル濃度は、熱化学ルミネセント化合物のモル濃度より
実質的に多くするのが望ましい、１ｍｇ／１ｍｌの水中
シクロデキストリン濃度は適切な濃度であり、これは更
に高くして飽和水溶液が得られるまで増加し得る０通常
は、アダマンチリデンアダマンタン１，２−ジオキセタ
ンを濃度１０ｍｇ／ｍ　ｌ　（２０ｍｍｏ　ｌ　、　）
のジオキサン溶液として用意し、これを温度約２６Ｂ／
＋＋　ｌ　（２０ｍｍｏ　Ｉ　、　）のシクロデキスト
リン水溶液２０倍容量と混合して前記複合体を形成する
。

本発明の複合体は、免疫感受性にしたマイクロカプセル
、例えばリポソームを免疫試薬として用いるイムノアッ
セイで、リポータ−分子（ｒｅｐｏｒｔｅｒａｅｏｌｅ
ｃｕｌｅ）として使用するのが好ましい。このようなイ
ムノアッセイは既に知られており、例えばＵｅｍｕｒａ
、に、他、Ｂｉｏｃｈｅｍｉ−ｓｔｒｙ　ＩＩ、　４０
８５〜４０９４（１９７２）、Ｋａｔａｏｋａ、Ｔ、他
、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏ−ｐｈｙｓｉｃ
ａ　Ａｃｔａ　２９８，１５１３−１７９（１９７３）
、Ｃｏ！ｅの米国特許第４，３４２，８２６号明細書及
びＫａｋｉｍｉ他の米国特許第４　、３４２　、７３９
号明細書に記載されている０本発明では、熱化学ルミネ
センス・複合体を免疫感受性にしたマイクロカプセルで
包み、これ３通常の方法で使用して、例えば相補的免疫
試薬との反応により沈澱免疫複合体を形成し、この沈澱
物を分離し且つ分離した免疫複合体を定量することによ
って、イムノアッセイを行う、感受性にしたマイクロカ
プセルが本発明の熱化学ルミネセント複合体を収容する
場合、分離した沈澱リポソーム免疫複合体を通常の熱化
学ルミネセンス分析器の加熱チャンバ内に配置し、これ
を加熱して熱化学ルミネセンスを励起し且つ発光ルミネ
センスを測定して免疫複合体の量を測定する。

本発明の熱化学ルミネセント化合物をマイクロカプセル
に封入して使用すると、リポソーム中の熱化学ルミネセ
ント化合物及びシフロブキスＩ・リンの濃度を比較的高
くしておくことができるため、複合体を会合形態に維持
できるという利点が得られる。該複合体の会合定数は約
１０４〜１０５であるため、これらの複合体はイムノア
ッセイで使用される著しい希釈率では肝煎し易いのであ
るが、試薬をマイクロカプセルに封入すれば、熱化学ル
ミネセント試薬及びシクロデキストリンの濃度を、それ
らの大部分が複合体形状に維持されるように十分高くす
ることができる。

本発明の熱化学ルミネセント化合物を封入するマイクロ
カプセルは、コアセルベーション、界面重合等のごとき
従来公知の操作によって製造し得る。マイクロカプセル
の形成は例えばＭｉｃｒｏ−ｅｎｅａｐｓｕｌａｔｉｏ
ｎ　Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉ
ｏｎｓ。

Ｊａｎ　Ｅ、Ｖａｎｃｌｅｇｇｅｒ編、　Ｐｌｅｎｕｍ
　Ｐｒｅｓｓ、　１９７４に開示されている。免疫試薬
、例えば抗原又は抗体をマイクロカプセルの表面に結合
させる方法は、例えばＫａｋｉｍｉ他の米国特許第４，
３４２，７３９号明細書に開示されている。

以下、非限定的実施例に基づき本発明をより詳細に説明
する。

及１九り この実施例ではγ−シクロデキストリンとアダマンチリ
デンアダマンタン１．２−ジオキセタンとからなる本発
明の複合体の製法を説明する。

ジオキサン５０μｍに式ＩＩの化合物５Ｂを溶解した溶
液を、シクロデキストリン２Ｂを含む２０ｍＭホウ酸塩
緩衝水溶液（ｐＨ８，５）１ｍｌ中に滴下した。従って
式ＩＩの化合物対γ−シクロデキストリンのモル比は約
５：１であった。この複合体を、２０＋＋Ｍホウ酸塩緩
衝液（ｐＨ８，５）を用いて、長さ２０ｃｍ　ｘ直径２
．５ｃｍの架橋結合デキストラン（Ｓｅｐｈａｄｅｘ　
ＬＨ６０）カラムでのカラムクロマトグラフィにより試
薬から分離した。得られたクロマトグラムを第１図に示
す。この場合、回収した各溶離液フラクション中の物質
の量をその化学的性質に適した特性に基づいて検出した
。第１図Ａは複合体のクロマトグラムを示し、第１図Ｂ
は式ＩＩの熱化学ルミネセント化合物のみを含む溶液の
クロマトグラムを示す。これらの物質はその熱化学ルミ
ネセンスに基づいて検出した。第１図Ａ及び第１図Ｂで
は、＾１□０．薄層クロマトグラフィシート（Ｍｅｒｃ
ｋ）上で実施した測定を実線で示し、Ｅ、１．　ｄｕ　
Ｐｏｎｔ　ｄｅ　Ｎｅｍｏｕｒｓ　＆　Ｃｏ、製造のＫ
ａｐｔｏｎ　５００Ｍ”’上で実施した測定を点線で示
した。第１図Ｃはγ−シクロデキストリン（γ−ＣＤ）
のみを含む溶液のクロマトグラムを示す、これは、回収
した各フラクション中のγ−シクロデキストリン量をＶ
ｉｋｍａｎの方法（Ｖｉｋｍａｎ、Ｍ、、Ｉ、　Ｉｎｔ
、　Ｓｙｍｐ。

ｏｎ　ＣｙｃｌｏｄｅｘＬｒｉｎｓ、ブダペスト　１９
８１．　Ｊ、５ｚｅｊｔｌｉ編、６９〜７４ページ）に
従いγ−シクロデキストリン活性の測定によって調べた
ものである。第１図りは式ＩＩの化合物の加水分解生成
物であるＮ−ヒドロキシスクシンイミドのクロマトグラ
ムを示す。この場合、回収した各フラクションのＮ−ヒ
ドロキシスクシンイミド量を、波長２８（ｌｎｍ（Ｅ２
ａ。）で水溶液の吸光率を測定することにより調べた。

及１１Ｌ この実施例では、本発明の熱化学ルミネセント化合物に
よって得られる優れた直線性及び再現性を明らかにし、
本発明の化合物がルミネセンス励起に使用される温度で
揮発しないことを示す。

実施例１の方法で熱化学ルミネセンス（ＴＣＬ）複合体
を形成し、これを架橋結合デキストランゲル（Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ　ＬＨ６０，４０〜１２０ミクロン）カラムで
のクロマトグラフィにより精製した。これら複合体の解
離を回避すべ（，１５ｍｍｏｌγ−シクロデキストリン
溶液を希釈剤として用いて、前記複合体の一連の希釈物
を形成した。各希釈物の試料を通常の熱化学ルミネセン
ス法により分析した。各試料を一滴ずつポリイミド樹脂
（Ｅ、１．ｄｕＰｏｎｔ　ｄｅ　Ｎｅｍｏｕｒｓ＆Ｃｏ
、製Ｋａｐｔｏｎ　５００Ｍ”’）の薄いディスク上ニ
落トし、このようにして用意した試料を通常の熱化学ル
ミネセンス分析器のオープン内に配置して２４０℃に加
熱した。加熱した試料から発せられるルミネセンスの強
さを光検出器、例えばマルチプライヤ−ホトチューブ（
ｍｕｌｔｉｐｌｉｅｒ　ｐｈｏｔｏｔｕｂｅ）でモニタ
ーし、そのルミネセンスの強さに比例する電気信号を発
生させる。この信号を加熱時間に対して積分し、積分信
号によって試料から発光されるルミネセンスの合計量を
表すようにする。結果を第２図に示した。これは、放出
光子の全カウント数（ＴＣＬカウント／試料）を試料中
の式ＩＩの化合物のモル数に対してプロットしたもので
ある。各点は６つの測定の平均を表す、各点の変動係数
は１．４％〜３．１％であった。（この変動係数は統計
量を求めらかなように、直線性は極めて優れている（賽
巷回帰の相関係数ｒ＝０．９９９８＞。これは、揮発し
て消失した熱化学ルミネセント化合物がないことを意味
する。

笈１昨１ この実施例では、アダマンチリデンアダマンタン１．２
−ジオキセタンとγ−シクロデキストリンとの複合体を
包むリポソームの製造を説明する。

実施例１の溶液を従来公知の超音波処理によってリポソ
ーム中に封入した。３３ｐｍｏｌのコレステロールと３
３１Ｊｍｏ　Ｉのレシチンとを、クロロホルムとメタノ
ール（容量比１：１）との混合溶媒２ｍｌに溶解し、こ
の溶液を５０１Ｍ１円底フラスコ内に導入して溶媒が完
全に蒸発し終えるまで回転蒸発処理にかけ、フラスコの
壁に溶質のコーティングが残るようにした。実施例１で
形成した溶液１１１１１を前記フラスコに加え、これを
水浴中６０℃で１時間超音波振動にかけた。その結果得
られたリポソーム懸濁液をポリアクリルアミドゲルビー
ズ（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ　５３００）のカラムで排除カ
ラムクロマトグラフィにかけて、カプセル化されなかっ
た試薬を含む溶液からリポソームを分離した。

支１１先 この実施例では、本発明のリポソーム封入複合体の熱化
学ルミネセンスを明らかにする。

実施例３で形成した一連のホウ酸塩緩衝液（２０ｍｍｏ
ｌ　、ｐＨ８，５）中リポソーム希釈物を用意した。

各希釈物の少量のアリコートをＫａｐｔｏｎ”’ディス
ク上に配置し、実施例２と同様に熱化学ルミネセンスを
分析し、同様の方法でデータを引き出して各点の変動係
数は０．９％〜２．６％であり、を辻回帰の相関係数ｒ
は０．９９６であった。これらの結果も、本発明のシク
ロデキストリン複合体を使用した場合に優れた再現性及
び直線性が得られることを示している。

【図面の簡単な説明】

第１図Ａは本発明の熱化学ルミネセント複合体のクロマ
トグラム、第１図Ｂは式Ｉの熱化学ルミネセント化合物
のみを含む溶液のクロマ１−ダラム、第１図Ｃはγ−シ
クロデキストリンのみを含む溶液のクロマトグラム、第
１図りはＮ−ヒドロキシスクシンイミドのクロマトグラ
ムである。 第２図は本発明の熱化学ルミネセント複合体の熱化学ル
ミネセンスを量に対してプロットしたグラフ（二重対数
目盛り）である。 第３図はリポソームで包んだ本発明の熱化学ルミネセン
ト複合体の熱化学ルミネセンスを量に対してプロットし
たグラフ（二重対数目盛り）である。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）アダマンチリデンアダマンタン１，２−ジオキセ
   タンとシクロデキストリンとの熱化学ルミネセント複合
   体。
2. （２）前記シクロデキストリンがγ−シクロデキストリ
   ンである特許請求の範囲第１項に記載の熱化学ルミネセ
   ント複合体。
3. （３）前記アダマンチリデンアダマンタン１，２−ジオ
   キセタンが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｒ＾−＾１はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ＯＨ、Ｎ
   Ｈ＿２、ＯＲ＾−＾２及びＮＨＲ＾−＾２の中から選択
   され、Ｒ＾２は２０個以下の炭素原子を含む脂肪族有機
   基である〕 で示される特許請求の範囲第１項又は第２項に記載の熱
   化学ルミネセント複合体。
4. （４）前記アダマンチリデンアダマンタン１，２−ジオ
   キセタンが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第１項から第３項のいずれか
   に記載の熱化学ルミネセント複合体。
5. （５）前記アダマンチリデンアダマンタン１，２−ジオ
   キセタンが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示され、前記シクロデキストリンがγ−シクロデキス
   トリンである特許請求の範囲第１項から第４項のいずれ
   かに記載の熱化学ルミネセント複合体。
6. （６）アダマンチリデンアダマンタン１，２−ジオキセ
   タンとシクロデキストリンとの熱化学ルミネセント複合
   体の水溶液を、免疫試薬を担持する外側表面を有するマ
   イクロカプセルで包み、 水に懸濁させた前記マイクロカプセルを前 記外側表面上の免疫試薬に対して相補的な免疫試薬と接
   触させて免疫複合体を形成し、 前記免疫複合体を前記懸濁水から分離し、 分離した免疫複合体を、該複合体が熱化学 ルミネセント反応を起こして光を発することになるよう
   な温度に加熱し、 前記熱化学ルミネセント反応において放出 される光の量を測定する ことからなる免疫分析法。
7. （７）前記シクロデキストリンがγ−シクロデキストリ
   ンである特許請求の範囲第６項に記載の方法。
8. （８）前記熱化学ルミネセントアダマンチリデンアダマ
   ンタン１，２−ジオキセタンが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｒ＾−＾１はＨ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ＯＨ、Ｎ
   Ｈ＿２、ＯＲ＿２及びＮＨＲ＾−＾２の中から選択され
   、Ｒ＾２は２０個以下の炭素原子を含む脂肪族有機基で
   ある〕 で示される特許請求の範囲第６項又は第７項に記載の方
   法。
9. （９）前記熱化学ルミネセントアダマンチリデンアダマ
   ンタン１，２−ジオキセタンが式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される特許請求の範囲第６項から第８項のいずれか
   に記載の方法。
10. （１０）ジオキセタン化合物とシクロデキストリンとを
    適当な溶媒中で互いに接触させることからなる、アダマ
    ンチリデンアダマンタン１，２−ジオキセタンとシクロ
    デキストリンとの熱化学ルミネセント複合体の製造方法
    。